一種粗多糖的測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明提出了一種粗多糖的測(cè)定方法，包括以下步驟：提取樣品，水解并過(guò)濾得到濾液用于沉淀粗多糖；濾液離心后用乙醇洗滌殘?jiān)⒂盟芙獾玫饺芤?，加入氫氧化鈉溶液和銅試劑溶液，沸水浴后冷卻離心，洗滌殘?jiān)罅蛩崛芤喝芙獠⒍ㄈ荩晃∑暇厶菢?biāo)準(zhǔn)使用液在分光光度計(jì)上測(cè)定吸光度，以試劑空白溶液為參比繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；吸取樣品測(cè)定液吸取樣品測(cè)定液在分光光度計(jì)上測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡聚糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量。本發(fā)明相比較傳統(tǒng)的方法，水解時(shí)間縮短1h，更利于大批量檢測(cè)，節(jié)省了時(shí)間和能源消耗。
【專利說(shuō)明】一種粗多糖的測(cè)定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種測(cè)定方法，特別是指一種粗多糖的測(cè)定方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 粗多糖是從大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的總稱，大豆中的寡糖屬于a -半乳 糖苷類，包括棉籽糖、水蘇糖和Vabascose.具有促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，抑制病原菌，防止便 秘、腹脹，促進(jìn)消化，調(diào)節(jié)胃腸功能，增強(qiáng)免疫功能。
[0003] 《保健食品功效成分檢測(cè)方法》利用高分子物質(zhì)在80%乙醇溶液中沉淀，用堿性二 價(jià)銅試劑選擇性地沉淀具有葡聚糖結(jié)構(gòu)的多糖，用苯酚一硫酸反應(yīng)以碳水化合物形式比色 測(cè)定其含量。水解時(shí)間長(zhǎng)達(dá)2h，時(shí)間長(zhǎng)，不利于大批量檢測(cè)，成本高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明提出一種粗多糖的測(cè)定方法，可以縮短水解時(shí)間，有利于大批量 檢測(cè)，節(jié)省了時(shí)間和能源消耗。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)采用以下技術(shù)方案： 一種粗多糖的測(cè)定方法，包括以下步驟： 1)樣品提?。喝∧z囊內(nèi)容物2. 0g混勻，置于100mL容量瓶中，加水78-82mL，于沸水浴 上加熱1-1. 5h，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后過(guò)濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉 淀多糖；樣品本來(lái)為液體的直接待用即可； (2) 沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取步驟（1)中終濾液或液體樣品5. OmL以3000r/min離心 5min，棄去上清液；殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液5毫升洗滌，離心后棄上清液，洗滌 3-4次；然后殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?. OmL，混勻后，供沉淀葡聚糖； (3) 沉淀葡聚糖：準(zhǔn)確吸取步驟（2)中終溶液2mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧 化鈉溶液2. OmL以及銅試劑溶液2. OmL，沸水浴中煮沸2min，冷卻，以3000r/min離心5min， 棄去上清液；殘?jiān)孟礈煲?毫升洗滌，離心后棄去上清液，洗滌3次，殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為 10%的硫酸溶液2. OmL溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，得到樣品測(cè)定 液； (4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0. 10、0. 20、0.40、0.60、0.80、 1. 00mL (相當(dāng)于葡聚糖 0、0. 01、0. 02、0. 04、0. 06、0. 08、0. 10mg)分別置于 25mL 比色管中， 準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2. OmL，加入50g/L苯酚溶液1. OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸 5mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻后用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng) 處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值；以葡聚糖為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (5) 樣品測(cè)定：準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)定液2. OmL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液 1. OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸5mL于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中 煮沸2min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處，以試劑空白為參比，lcm比色皿測(cè)定 吸光度值；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡聚糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量；同時(shí)做以純水代替樣 品測(cè)定液，同樣品測(cè)定做空白對(duì)照試驗(yàn)。
[0006] 進(jìn)一步地，所述步驟（1)中沸水浴上加熱時(shí)間為lh。
[0007] 進(jìn)一步地，所述步驟（3)中銅試劑溶液制備步驟如下，（1)銅試劑儲(chǔ)備液：稱取 3. 0gCuS04 ·5Η20和30. 0g檸檬酸鈉，加水溶解并稀釋至1L，混勻備用；（2)銅試劑溶液：取 銅試劑儲(chǔ)備液50mL，加水50mL，混勻后加入固體無(wú)水硫酸鈉12. 5g，并使其溶解即可。
[0008] 進(jìn)一步地，所述步驟（3)中洗滌劑的配置步驟為：取水50mL，加入10mL銅試劑溶液 和10mL氫氧化鈉溶液，混勻即可。 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的有益效果為：本發(fā)明相比較傳統(tǒng)的方法，水解時(shí)間縮短 lh，更利于大批量檢測(cè)，節(jié)省了時(shí)間和能源消耗。

【具體實(shí)施方式】
[0009] 為讓本領(lǐng)域的技術(shù)人員更加清晰直觀的了解本發(fā)明，下面將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的 說(shuō)明。
[0010] 實(shí)施例1 一種粗多糖的測(cè)定方法，包括以下步驟： (1) 樣品提?。喝∧z囊內(nèi)容物2. 0g混勻，置于100mL容量瓶中，加水78-82mL，于沸水浴 上加熱lh，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后過(guò)濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多 糖； (2) 沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取步驟（1)中終濾液5. OmL以3000r/min離心5min，棄去上清 液；殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液5毫升洗滌，離心后棄上清液，洗滌3-4次；然后殘?jiān)?用水溶解并定容至5. OmL,混勻后，供沉淀葡聚糖； (3) 沉淀葡聚糖：準(zhǔn)確吸取步驟（2)中終溶液2mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧 化鈉溶液2. OmL以及銅試劑溶液2. OmL，沸水浴中煮沸2min，冷卻，以3000r/min離心5min， 棄去上清液；殘?jiān)孟礈煲?毫升洗滌，離心后棄去上清液，洗滌3次，殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為 10%的硫酸溶液2. OmL溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，得到樣品測(cè)定 液； (4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0. 10、0. 20、0.40、0.60、0.80、 1. 00mL (相當(dāng)于葡聚糖 0、0. 01、0. 02、0. 04、0. 06、0. 08、0. 10mg)分別置于 25mL 比色管中， 準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2. OmL，加入50g/L苯酚溶液1. OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸 5mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻后用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng) 處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值；以葡聚糖為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (5) 樣品測(cè)定：準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)定液2. OmL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液 1. OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸5mL于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中 煮沸2min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處，以試劑空白為參比，lcm比色皿測(cè)定 吸光度值；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡聚糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量；同時(shí)以純水代替樣品 測(cè)定液做空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
[0011] 最后得到如下測(cè)定結(jié)果：

【權(quán)利要求】
1. 一種粗多糖的測(cè)定方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 樣品提?。喝∧z囊內(nèi)容物2. Og混勻，置于lOOmL容量瓶中，加水78-82mL，于沸水浴 上加熱1-1. 5h，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后過(guò)濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉 淀多糖；樣品本來(lái)為液體的直接待用即可； (2) 沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取步驟（1)中終濾液或液體樣品5. OmL以3000r/min離心 5min，棄去上清液；殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇溶液5毫升洗滌，離心后棄上清液，洗滌 3-4次；然后殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?. OmL，混勻后，供沉淀葡聚糖； (3) 沉淀葡聚糖：準(zhǔn)確吸取步驟（2)中終溶液2mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧 化鈉溶液2. OmL以及銅試劑溶液2. OmL，沸水浴中煮沸2min，冷卻，以3000r/min離心5min， 棄去上清液；殘?jiān)孟礈煲?毫升洗滌，離心后棄去上清液，洗滌3次，殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為 10%的硫酸溶液2. OmL溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，得到樣品測(cè)定 液； (4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0. 10、0. 20、0.40、0.60、0.80、 1. OOmL (相當(dāng)于葡聚糖 0、0. 01、0. 02、0. 04、0. 06、0. 08、0. 10mg)分別置于 25mL 比色管中， 準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2. OmL，加入50g/L苯酚溶液1. OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸 5mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻后用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng) 處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值；以葡聚糖為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (5) 樣品測(cè)定：準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)定液2. OmL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液 1. OmL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸5mL于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中 煮沸2min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處，以試劑空白為參比，lcm比色皿測(cè)定 吸光度值；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡聚糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量；同時(shí)做以純水代替樣 品測(cè)定液，同樣品測(cè)定做空白對(duì)照試驗(yàn)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的粗多糖的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（1)中沸水浴上加 熱時(shí)間為lh。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的粗多糖的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（3)中銅試劑溶液 制備步驟如下，（1)銅試劑儲(chǔ)備液：稱取3. 0gCuS04 · 5H20和30. Og檸檬酸鈉，加水溶解并 稀釋至1L，混勻備用；（2)銅試劑溶液：取銅試劑儲(chǔ)備液50mL，加水50mL，混勻后加入固體 無(wú)水硫酸鈉12. 5g，并使其溶解即可。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的粗多糖的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（3沖洗滌劑的配 置步驟為：取水50mL，加入10mL銅試劑溶液和10mL氫氧化鈉溶液，混勻即可。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK104155250SQ201410403324
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月15日
【發(fā)明者】張玉良, 陳凱松 申請(qǐng)人:廣州衡創(chuàng)測(cè)試技術(shù)服務(wù)有限公司