動物源基體藥物及其代謝物殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種動物源基體藥物及其代謝物殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，包括以下步驟：對實驗動物進行藥物飼養(yǎng)，藥物飼養(yǎng)方式為飼喂、注射或藥浴一種或多種藥物，控制養(yǎng)殖時間，經(jīng)動物體代謝，獲得含有原藥和/或代謝物的樣品材料，加維生素C溶液攪碎勻漿制成肉糜、真空冷凍干燥、粉碎過篩、充氮氣包裝后真空封裝，根據(jù)動物基質(zhì)脂肪含量在粉碎過篩后含或不含脫脂重新混勻過篩步驟。本發(fā)明得到的標(biāo)準(zhǔn)樣品可以在常溫下運輸，保質(zhì)期長，目標(biāo)物和基體結(jié)合情形與真實檢測樣品一致，可用于相關(guān)檢測分析的質(zhì)量控制，樣品均勻穩(wěn)定，運輸方便，使用可靠，產(chǎn)品具有顯著的經(jīng)濟價值和市場競爭力。
【專利說明】動物源基體藥物及其代謝物殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物殘留檢測的動物源基體標(biāo)準(zhǔn)樣品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是以常見的獸藥 對動物進行養(yǎng)殖，獲得相當(dāng)藥物濃度的動物基體，真空冷凍干燥成凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 典型的獸藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。但是，隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的 開展，一些化學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些功效的動物保健品或飼料添加劑，也 屬于獸藥的范疇。獸藥的主要用途有防病治病、促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動物性食品 的品質(zhì)等。獸藥殘留是指獸藥的原形化合物及其代謝物在動物的細(xì)胞、組織、器官或可食性 產(chǎn)品（如奶、蛋）中的蓄積、貯存，除獸藥外還包括非法使用違禁藥物如克倫特羅、己烯雌酚、 蘇丹紅、三聚氰胺等在動物體內(nèi)的殘留，以及通過食物鏈進入動物體內(nèi)的農(nóng)藥(如殺蟲劑、 除草劑等)和環(huán)境污染物（如重金屬、霉菌毒素等）。常見的獸藥殘留種類有抗生素類藥物 、磺胺類藥物、硝基呋喃類藥物、氯霉素類藥物、三苯甲烷類染料、砷制劑如硝苯砷酸和洛克 沙砷、抗寄生蟲類藥物如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等、激素類藥物如孕酮、睪酮、 雌二醇等。
[0003] 在國際上，一種獸藥殘留量的分析方法需要經(jīng)3種類型的樣品測試：受控組織或 液體、用藥物強化至或接近最大容許水平（MRL)的樣品和本身具有藥物殘留的組織樣品， 從而保證分析方法能具有一定的樣品基質(zhì)適用范圍和重復(fù)性。目前國內(nèi)殘留分析實驗室由 于常常無法獲得實際污染樣品，往往以添加獸藥標(biāo)準(zhǔn)溶液至分析樣品中進行質(zhì)控，這樣不 能真實地重現(xiàn)藥物經(jīng)過自然代謝后在動物體內(nèi)的提取效率，無法反映方法的準(zhǔn)確性，得到 的檢測結(jié)果也就不足以令人信服。歐盟對獸藥殘留分析方法與結(jié)果表達的法規(guī)2002/657/ EC中明確指出了需要采用標(biāo)準(zhǔn)樣品進行過程控制，國外殘留分析實驗室已普遍使用標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)樣品進行實驗室質(zhì)量控制和結(jié)果評判，主要由歐共體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和測量研究所（IRMM)、英 國弗帕斯檢測技術(shù)研究所（FAPAS)等提供，相關(guān)樣品也已產(chǎn)業(yè)化，但由于國外標(biāo)準(zhǔn)樣品或 質(zhì)控樣品價格非常昂貴，且存在運輸問題，國內(nèi)的殘留分析實驗室無法定期使用其進行質(zhì) 控。本發(fā)明可以成功研制我國的動物源基體殘留標(biāo)準(zhǔn)樣品，應(yīng)用到殘留分析的質(zhì)控過程中， 將會普遍降低檢測成本，是提高我國殘留分析實驗室的檢測水平、實現(xiàn)檢測的等效性、與國 際同領(lǐng)域接軌的有效手段之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種動物源基體藥物及其代謝物殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制 備方法。對實驗動物進行藥物飼養(yǎng)，藥物飼養(yǎng)方式為飼喂、注射或藥浴一種或多種藥物，控 制養(yǎng)殖時間，經(jīng)動物體代謝，獲得含有原藥及代謝物(如果有）的樣品材料，加維生素 C溶 液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥，粉碎過篩，根據(jù)基質(zhì)中脂肪含量含或不含脫脂重新混勻步 驟，在厭氧工作站中充氮氣裝瓶，真空封裝，制備成一種均勻性好、穩(wěn)定性好、易保存且目標(biāo) 物和基體結(jié)合情形與真實檢測樣品一致的標(biāo)準(zhǔn)樣品。
[0005] 所述動物基體標(biāo)準(zhǔn)樣品中的獸藥濃度約0-100ug/kg，同一標(biāo)準(zhǔn)樣品有多殘留時將 藥物濃度保持在同一數(shù)量級。
[0006] 所述動物基體包括豬、牛、雞、魚、蟲下。
[0007] 所述藥物飼養(yǎng)包括飼喂(將藥物拌在料中喂食，如豬、牛、雞)、藥浴(將藥放入水 中，如魚、蝦)、注射(將藥物進行肌肉注射，如豬、牛、雞)。
[0008] 所選包裝方式為充氮包裝后真空封裝。將厭氧工作站內(nèi)滅菌、氮氣濃度調(diào)整到99% 備用。先將包裝瓶放入無菌室用紫外燈滅菌，在無菌室內(nèi)將干粉準(zhǔn)確稱量到瓶中，扣上蓋子 不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分批移入?yún)捬豕ぷ髡局?，重新將厭氧工作站氮氣濃?調(diào)整至99%，在厭氧工作站內(nèi)擰緊包裝瓶的蓋子，完成充氮包裝取出。再用鋁箔袋將包裝瓶 進行真空封裝。
[0009] 所述獸藥包括：a.磺胺類藥物：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噁 唑、磺胺吡啶、磺胺噻唑等；b.喹諾酮類藥物：諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、培 氟沙星、二氟沙星、達諾沙星、馬波沙星、氟甲喹等；c.硝基呋喃類藥物：呋喃唑酮、呋喃它 酮、呋喃西林、呋喃妥因等；d.氯霉素類藥物：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等；e.三苯甲烷 類染料：結(jié)晶紫、孔雀石綠等；f.砷制劑：阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷等；g.抗寄生蟲類藥 物：甲硝唑、苯并咪唑、左旋咪唑、伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素、克球酚、吡喹酮、地克珠 利、妥曲珠利、氯羥吡啶等；h. β興奮劑藥物：克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、噴布特 羅、特布它林、齊帕特羅等；i激素類藥物：孕酮、睪酮、雌二醇等；j.四環(huán)素族藥物：土霉 素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素。
[0010] 動物源基體藥物及其代謝物殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征在于包括以 下步驟： (1) 選中目標(biāo)獸藥或違禁添加物對動物進行養(yǎng)殖添加，經(jīng)代謝后控制時間使動物體內(nèi) 含有藥物濃度保持在一定程度； (2) 將動物宰殺，取肌肉部分去皮浙血，加維生素 C溶液(或其他穩(wěn)定劑)勻漿制成肉糜， 真空冷凍干燥； (3) 粉碎過篩，根據(jù)基質(zhì)中脂肪含量含或不含脫脂重新混勻步驟、重新混勻過篩； (4) 在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進行真空封裝，制備得 到凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。
[0011] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點是：模擬養(yǎng)殖條件下對動物添加藥物后選擇適當(dāng)時機，將動物 宰殺，取肌肉部分加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，冷凍干燥，粉碎過篩，充氮氣封裝，均勻性 檢驗、穩(wěn)定性研究和協(xié)同定值檢測，獲得預(yù)期含量的目標(biāo)物結(jié)合狀態(tài)與實際檢測樣品一致 的含有目標(biāo)藥物及其代謝物的動物基體陽性材料。采用攪碎和勻化介質(zhì)相結(jié)合的工藝可以 保證材料的均勻性，基質(zhì)中加入維生素 C、真空冷凍干燥、充氮氣包裝后真空封裝，可以保證 樣品中藥物不降解、穩(wěn)定。本發(fā)明的產(chǎn)品可以在常溫下運輸，保質(zhì)期長，目標(biāo)物和基體結(jié)合 情形與真實檢測樣品一致，可用于相關(guān)檢測分析的質(zhì)量控制，樣品均勻穩(wěn)定，運輸方便，使 用可靠，產(chǎn)品具有顯著的經(jīng)濟價值和市場競爭力。

【具體實施方式】
[0012] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)的說明。
[0013] 實施例1，一種雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制 備方法，本實施例以控制目標(biāo)含量水平20-100ug/kg為例，其具體步驟如下： (1)實驗動物的選擇：市購肉雞，要求個體大小均一、均重2. 2-2. 7 kg，先確認(rèn)肉雞未被 飼喂過妥曲珠利，隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性樣品后進行喂養(yǎng)。正常飼養(yǎng)5天后，剔除受傷 不健康的雞。
[0014] (2)藥物飼養(yǎng)：將妥曲珠利藥粉準(zhǔn)確稱量0. 2mg，裝入膠囊中，每只雞每天喂1顆膠 囊，連喂2天，第2天停藥后10小時宰殺，取胸肌肉檢測，此時妥曲珠利及其代謝物妥曲珠 利砜在雞體內(nèi)濃度相差不大，均為10-20 ug/kg之間。妥曲珠利砜在雞體內(nèi)代謝很快，時間 掌握不準(zhǔn)，兩種藥物的濃度上就會有很大差異，達不到預(yù)期理想的濃度。從標(biāo)準(zhǔn)樣品在實驗 室應(yīng)用的角度來看，兩種藥物的水平最好是控制在同一數(shù)量級，才更具實用性，因此藥物的 添加量和時間的控制至關(guān)重要。
[0015] (3)攪碎勻漿：將雞肉混合攪勻，每5 kg攪碎雞肉中加 1 kg維生素 C溶液(濃度 為500mg/kg)混勻制成肉糜。維生素 C溶液具有抗氧化作用，有利于樣品的長期保存。
[0016] (4)冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速 凍成厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊 干燥。
[0017] (5)粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻。
[0018] (6)過篩：勻質(zhì)后的雞肉粉過0.5 mm孔篩，棄去篩余粗粉。
[0019] (7)包裝：將厭氧工作站內(nèi)滅菌、氮氣濃度調(diào)整到99%備用。先將包裝瓶放入無菌 室用紫外燈滅菌，在無菌室內(nèi)將干粉準(zhǔn)確稱量到瓶中，每個瓶內(nèi)雞肉粉重量5±0. 5g，扣上 蓋子不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分批移入?yún)捬豕ぷ髡局?，重新將厭氧工作站氮?濃度調(diào)整至99%，在厭氧工作站內(nèi)擰緊包裝瓶的蓋子，完成充氮包裝取出。再用鋁箔袋將包 裝瓶進行真空封裝。
[0020] 所制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品經(jīng)均勻性檢驗、穩(wěn)定性檢驗、協(xié)同定值實驗及不確定度合成后， 獲得最終成品。
[0021] 本產(chǎn)品最終定值妥曲珠利：64. 52±0. 89ug/kg，其代謝物妥曲珠利砜： 84. 65±0. 99ug/kg，最終包裝數(shù)為779瓶，每瓶約5±0. 5g，室溫保存。
[0022] 以下是本發(fā)明的具體實施實驗和效果數(shù)據(jù)，以進一步說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不 僅限于此。
[0023] 1、均勻性檢驗 采用單因素方差分析進行均勻性檢驗，隨機抽取15個樣品，每個樣品平行測定3次， 所有的樣品以隨機次序在重復(fù)性條件下測試，按照上述檢測方法對樣品進行均勻性檢測。 標(biāo)準(zhǔn)樣品的特性應(yīng)當(dāng)均勻，即在規(guī)定的細(xì)分范圍內(nèi)保證其特性不變。在均勻性檢驗過程中， 一般需同時考察組間均勻性及組內(nèi)均勻性，用方差分析法通過對兩者的比較來判斷各組測 量值之間有無系統(tǒng)性差異，如果兩者的比小于統(tǒng)計檢驗的臨界值，則認(rèn)為樣品是均勻的。
[0024] 稱取lg樣品，加 4. 0ml水還原60min以上，按SN/T 2318-2009《動物源食品中地 克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亞砜和妥曲珠利砜殘留量的檢測高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜 法》方法進行檢測，結(jié)果如下： (1)妥曲珠利均勻性檢驗數(shù)據(jù)（ug/kg)

【權(quán)利要求】
1. 動物源基體藥物及其代謝物殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品制備方法，其特征在于包括以下步 驟：對實驗動物進行藥物飼養(yǎng)，藥物飼養(yǎng)方式為飼喂、注射或藥浴一種或多種藥物，控制養(yǎng) 殖時間，經(jīng)動物體代謝，獲得含有原藥和/或代謝物的樣品材料，加維生素 C溶液攪碎勻漿 制成肉糜、真空冷凍干燥、粉碎過篩、充氮氣包裝后真空封裝，根據(jù)動物基質(zhì)脂肪含量在粉 碎過篩后含或不含脫脂重新混勻過篩步驟。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的獸藥濃度 0-100ug/kg，同一標(biāo)準(zhǔn)樣品有多殘留時將藥物濃度保持在同一數(shù)量級。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述實驗動物包括豬、牛、雞、魚、蝦。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述包裝為充氮包裝、真空封裝，將 厭氧工作站內(nèi)滅菌、氮氣濃度調(diào)整到99%備用，先將包裝瓶放入無菌室用紫外燈滅菌，在無 菌室內(nèi)將干粉準(zhǔn)確稱量到瓶中，扣上蓋子不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分批移入?yún)?氧工作站中，去掉蓋子，重新將厭氧工作站氮氣濃度調(diào)整至99%，在厭氧工作站內(nèi)擰緊包裝 瓶的蓋子，完成充氮包裝取出，再用鋁箔袋將包裝瓶進行真空封裝。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述冷凍干燥是將肉漿放入真空冷 凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥 倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干燥，所述脫脂是將干粉浸于石油醚或乙醚 中，靜置30分鐘，濾去醚層，40-50°C烘干。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的制備方法，其特征在于：所述藥物為磺胺嘧啶、磺 胺二甲嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺吡啶、磺胺噻唑；諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙 星、氧氟沙星、培氟沙星、二氟沙星、達諾沙星、馬波沙星、氟甲喹；呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃 西林、呋喃妥因；氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考；結(jié)晶紫、孔雀石綠；阿散酸、硝苯砷酸、洛克 沙砷；甲硝唑、苯并咪唑、左旋咪唑、伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素、克球酚、吡喹酮、地克珠 利、妥曲珠利、氯羥吡啶；克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、噴布特羅、特布它林、齊帕特羅； 孕酮、睪酮、雌二醇；土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素中的一種或幾種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于蝦肉中氟苯尼考?xì)埩魞龈煞蹣?biāo)準(zhǔn)樣品 的制備，目標(biāo)含量水平l-l〇〇ug/kg具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：市購活南美白蝦，要求個體大小均一、均重20-30 g，先確認(rèn)活蝦 未被飼喂過氟苯尼考，隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性樣品，正常養(yǎng)殖2天后，剔除受傷不健康 的蝦； (2) 藥物飼養(yǎng)：將氟苯尼考藥粉準(zhǔn)確稱量，按池水0. 5mg/L的濃度加藥，全池潑灑式藥 浴給藥，每天換一次水，第2天用藥后8小時將蝦全部撈出，用清水洗凈，去皮取蝦肉； (3) 攪碎勻漿：將蝦肉混合攪勻，每5 kg攪碎蝦肉中加 1 kg維生素 C溶液，濃度為 500mg/kg，混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的奸粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：蝦粉分裝于聚乙烯瓶內(nèi)，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將 聚乙烯瓶進行真空封裝。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于牛肉中三種β-興奮劑殘留凍干粉標(biāo) 準(zhǔn)樣品的制備，控制目標(biāo)含量水平l-l〇ug/kg其具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：選取健康牛，體重60-100kg，注射前7天需對牛飼喂進行控制，禁 止使用其他藥物，使牛體內(nèi)可能殘留的藥物完全代謝出體外； (2) 藥物飼養(yǎng)：克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺注射液濃度均為5mg/5ml，可配成混 合溶液注射，也可分別配制單獨注射，連續(xù)2天對牛進行注射，選取不同的部位6點注射，每 天注射一次，第2天注射后6小時宰殺； (3) 攪碎勻漿：宰殺后取牛肌肉，須室溫存放2小時，浙凈血水，將牛肉混合攪勻，每5 kg攪碎牛肉中加 lkg維生素 C溶液，濃度為500mg/kg，混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的牛肉粉過0. 5 _孔篩，棄去篩余粗粉；用石油醚對干粉進行脫脂， 重新混勻過篩； (7) 包裝：牛肉粉分裝于聚乙烯瓶內(nèi)，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋 將聚乙烯瓶進行真空封裝。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于魚肉中磺胺甲噁唑殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣 品的制備，控制目標(biāo)含量水平20-100ug/kg，其具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：從市場上購買活鯉魚，要求個體大小均一、每條重1. 2-1. 5 kg，從 中隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性后進行飼養(yǎng)； (2) 藥物飼養(yǎng)：養(yǎng)殖3天使其適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境，剔除不健康的魚，根據(jù)預(yù)先設(shè)定的藥物濃 度，向魚池中添加磺胺甲噁唑，濃度為1. 5ppm，實時監(jiān)控檢測水體和魚體中磺胺甲噁唑濃 度，每天換1次水； (3 )攪碎勻漿：磺胺甲噁唑在魚體的濃度不斷富集增高，待魚體內(nèi)磺胺甲噁唑濃度相對 穩(wěn)定后，第3天換水后每隔6小時隨意捕撈測定魚肉中的磺胺甲噁唑含量，當(dāng)達到lOppb時 全部將魚撈出放入_20°C冷凍2小時取出，室溫下解凍，取魚兩側(cè)肌肉部分，避免混入內(nèi)臟 及血液，將魚肉混合均勻，每5kg攪碎魚肉中加入500mg/kg維生素 C溶液lkg,混勻制成肉 糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的魚粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：魚粉分裝于聚乙烯瓶內(nèi)，在厭氧培養(yǎng)箱中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將 聚乙烯瓶進行真空封裝。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于豬肉中諾氟沙星和氧氟沙星殘留凍 干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備，控制目標(biāo)含量水平10-100ug/kg其具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：選取健康豬，體重60-70kg，用藥前7天需對豬飼喂進行控制，禁 止使用其他藥物，使豬體內(nèi)可能殘留的藥物完全代謝出體外； (2) 藥物飼養(yǎng)：將兩種藥物均按5mg/kg混在料中進行飼喂，連續(xù)2天，每天2次，第2天 喂食后12小時宰殺； (3) 攪碎勻漿：宰殺后取豬肌肉，須室溫存放2小時，洗凈血水；將豬肉混合攪勻，每5 kg攪碎豬肉中加1 kg維生素 C溶液，濃度為500mg/kg，混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的豬肉粉過0. 5 _孔篩，棄去篩余粗粉；用石油醚對干粉進行脫脂， 重新混勻過篩； (7) 包裝：豬肉粉分裝于聚乙烯瓶，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將 聚乙烯瓶進行真空封裝。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于蝦肉中3-氨基-2-惡唑酮AOZ、5-嗎 啉甲基-3-氨基-2-氨基-2-惡唑烷基酮AMOZ殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備，控制目標(biāo)含量 水平l-10ug/kg具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：市購活南美白蝦，要求個體大小均一、均重20-30 g，先確認(rèn)活蝦 未被飼喂過呋喃藥物，隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性樣品，正常飼養(yǎng)2天后，剔除受傷不健康 的蝦； (2) 藥物飼養(yǎng)：將AOZ和AMOZ藥粉準(zhǔn)確稱量，均按池水0. 2mg/L的濃度加藥，全池潑灑 式藥浴給藥，每天換一次水，第2天用藥后4小時將蝦全部撈出，用清水洗凈，去皮取蝦肉； (3) 攪碎勻漿：將蝦肉混合攪勻，每5 kg攪碎蝦肉中加1 kg維生素 C溶液，濃度為 500mg/kg，混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的奸粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：蝦粉分裝于聚乙烯瓶內(nèi)，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將 聚乙烯瓶進行真空封裝。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于魚肉中隱性結(jié)晶紫殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn) 樣品的制備，控制目標(biāo)含量水平l-l〇ug/kg具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：從市場上購買活鯉魚，要求個體大小均一、每條重1. 2-1. 5kg，選 取健康鯉魚，從中隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性后進行飼養(yǎng)； (2) 藥物飼養(yǎng)：養(yǎng)殖3天使其適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境，剔除不健康的魚，根據(jù)預(yù)先設(shè)定的藥物濃 度，向魚池中添加結(jié)晶紫溶液，濃度為lppm，實時監(jiān)控檢測魚體中顯性結(jié)晶紫和隱性結(jié)晶紫 濃度，每天換1次水； (3) 攪碎勻漿：顯性結(jié)晶紫和隱性結(jié)晶紫在魚體的濃度不斷富集增高，待魚體內(nèi)結(jié)晶紫 濃度相對穩(wěn)定后，第3天換水后測定魚糜中的隱性結(jié)晶紫含量，為2ppb左右時將魚撈出放 入-20°C冷凍2小時取出，室溫下解凍，取魚兩側(cè)肌肉部分，避免混入內(nèi)臟及血液，每5 kg肉 中加1 kg維生素 C溶液，濃度為500mg/kg,混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥；冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的魚粉用中藥粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的魚粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：魚粉分裝于瓶內(nèi)，在厭氧培養(yǎng)箱中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯 瓶進行真空封裝。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于魚肉中甲硝唑殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品 的制備，控制目標(biāo)含量水平l-l〇ug/kg具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：從市場上購買活鯉魚，要求個體大小均一、每條重1. 2-1. 5kg，選 取健康鯉魚，從中隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性后進行飼養(yǎng)； (2) 藥物飼養(yǎng)：養(yǎng)殖3天使其適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境，剔除不健康的魚，根據(jù)預(yù)先設(shè)定的藥物濃 度，向魚池中添加甲硝唑溶液,濃度為lppm,實時監(jiān)控檢測魚體中甲硝唑濃度,每天換2次 水； (3) 攪碎勻漿：甲硝唑在魚體的濃度不斷富集增高，待魚體內(nèi)甲硝唑濃度相對穩(wěn)定后， 第3天換水后測定魚糜中的甲硝唑含量，為lppb左右將魚撈出放入-20°C冷凍2小時取出， 室溫下解凍，取魚兩側(cè)肌肉部分，每5 kg攪碎肉中加1 kg維生素 C溶液，濃度為500mg/kg， 混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥；冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的魚粉用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的魚粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：魚粉分裝于聚乙烯瓶內(nèi)，在厭氧培養(yǎng)箱中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將 聚乙烯瓶進行真空封裝。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于雞肉中硝苯砷酸、洛克沙砷、金霉素 和強力霉素殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備，控制目標(biāo)含量水平l〇-l〇〇ug/kg具體步驟如下 ： (1) 實驗動物的選擇：市購肉雞，要求個體大小均一、均重2. 2 kg-2. 7kg，先確認(rèn)肉雞未 被飼喂過上述藥物，隨機取樣，檢測確認(rèn)為陰性樣品后進行喂養(yǎng)，正常飼養(yǎng)5天后，剔除受 傷不健康的雞； (2) 藥物飼養(yǎng)：將硝苯砷酸、洛克沙砷、金霉素和強力霉素藥粉分別準(zhǔn)確稱量0. 2mg，裝 入膠囊中，每只雞每天喂1顆膠囊，連喂2天，第2天停藥后10小時宰殺； (3) 攪碎勻漿：將雞肉混合攪勻，每5 kg攪碎雞肉中加1 kg維生素 C溶液，濃度為 500mg/kg，混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的雞肉粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：在厭氧工作站內(nèi)充氮包裝取出，再用鋁箔袋將包裝瓶進行真空封裝。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于牛肉中阿維菌素殘留凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣 品的制備，控制目標(biāo)含量水平l_20ug/kg具體步驟如下： (1) 實驗動物的選擇：選取健康牛，體重60-100kg，用藥前7天需對牛飼喂進行控制，禁 止使用其他藥物，使牛體內(nèi)可能殘留的藥物完全代謝出體外； (2) 藥物飼養(yǎng)：將阿維菌素拌入料中，按體重加藥，每公斤體重0. 2mg的藥量進行拌食， 連續(xù)喂食4天，第4天喂食后6小時宰殺； (3) 攪碎勻漿：宰殺后取牛肌肉，須室溫存放2小時，洗凈血水；將牛肉混合攪勻，每5 kg攪碎牛肉中加1 kg維生素 C溶液，濃度為500mg/kg，混勻制成肉糜； (4) 冷凍干燥：將肉糜放入真空冷凍干燥機內(nèi)冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質(zhì)：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質(zhì)后的牛肉粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：牛肉粉分裝于聚乙烯瓶內(nèi)，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋 將聚乙烯瓶進行真空封裝。
【文檔編號】G01N1/42GK104155162SQ201410418903
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】楊麗君, 王靜, 胡巧茹, 劉玉敏, 李兆杰, 梁君妮, 王美玲, 宋曉華 申請人:威海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心