同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時(shí)測定阿莫西林鈉克拉維酸鉀血藥濃度的方法,該方法該方法采用對乙酰氨基酚為內(nèi)標(biāo),將人血漿樣品用甲醇沉淀蛋白后高速離心進(jìn)樣,以C18為色譜柱,以乙腈-0.05mmol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相,紫外檢測波長為220nm,得出阿莫西林鈉和克拉維酸鉀的最低檢測濃度。本發(fā)明簡便、準(zhǔn)確、靈敏、特異性強(qiáng)、重現(xiàn)性好,可作為阿莫西林鈉-克拉維酸鉀的生物利用度和生物等效性研究的血藥濃度測定方法。
【專利說明】同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是涉及醫(yī)藥生產(chǎn)領(lǐng)域,具體地,涉及一種同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]阿莫西林克拉維酸鉀是由β -內(nèi)酰胺抑制劑克拉維酸鉀與半合成青霉素阿莫西林組成的復(fù)方制劑。阿莫西林是殺菌性廣譜抗生素,克拉維酸鉀是不可逆的廣譜β_內(nèi)酰胺酶抑制劑,可有效地抑制耐藥菌產(chǎn)生的內(nèi)酰胺酶。臨床上已經(jīng)取得了滿意的療效。
[0003]人血漿中阿莫西林和克拉維酸鉀濃度測定方法有微生物法、HPLC-MS法,但是微生物測定法雖然不需特殊設(shè)備,但靈敏度較低,干擾因素多,不能滿足阿莫西林克拉維酸鉀動力學(xué)研究及生物等效性實(shí)驗(yàn)要求。HPLC-MS法靈敏度高,但儀器昂貴且不穩(wěn)定。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法,該方法采用對乙酰氨基酚為內(nèi)標(biāo),將人血漿樣品用甲醇沉淀蛋白后高速離心進(jìn)樣,以C18為色譜柱,以乙腈-0.05mmol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相,紫外檢測波長為220nm,得出阿莫西林鈉和克拉維酸鉀的最低檢測濃度,本方法漸變、準(zhǔn)確、靈敏、特異性腔、重現(xiàn)性好,能夠達(dá)到同時(shí)測定人血漿中阿莫西林鈉克拉維酸鉀濃度的方法。
[0005]本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是:
同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法,
(1)配制阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液:含阿莫西林鈉88.3微克/ml和克拉維酸鉀45.3微克/ml ;
(2)配制對乙酰氨基酚內(nèi)標(biāo)溶液和磷酸二氫鉀緩沖液;
(3)樣品預(yù)處理:取阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液于離心管中,加入空白血漿至215微升,精密加入10微升內(nèi)標(biāo)對乙酰氨基酚,漩渦振蕩10s,再精密加入200微升甲醇,漩渦振蕩15s后,4000r/min在4°C離心6min后,取上清液備用;
(4)取步驟(3)的上清液進(jìn)入色譜柱為C18,以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液10:90作為流動相,流速:lml/min,紫外檢測波長22nm的HPLC儀器中進(jìn)行分析;
(5)制備阿莫西林鈉-克拉維酸鉀回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制系列濃度阿莫西林鈉-克拉維酸鉀溶液照步驟(3)處理后取各系列濃度等量體積的上清液按照步驟(4)進(jìn)樣分析,得阿莫西林鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:C=8.946Y-1.362 ;克拉維酸鉀的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:C=8.946Y-1.475,其中Y為阿莫西林鈉、克拉維酸鉀與內(nèi)標(biāo)物峰面積比,且Y為橫坐標(biāo)。
[0006]磷酸二氫鉀緩沖液為0.05mmol/L,且pH為2.0-2.5。
[0007]照步驟(5)中的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線,稀釋加入空白人血漿的阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液得到阿莫西林鈉、克拉維酸鉀最低檢測濃度。
[0008]綜上,本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏、特異性強(qiáng)、重現(xiàn)性好,可作為阿莫西林鈉-克拉維酸鉀的生物利用度和生物等效性研究的血藥濃度測定方法。
【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合實(shí)施例,對本發(fā)明作進(jìn)一步地的詳細(xì)說明,但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0010]實(shí)施例1:
同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法,包括以下步驟:
(1)配制阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液:含阿莫西林鈉88.3微克/ml和克拉維酸鉀45.3微克/ml ;
(2)配制對乙酰氨基酚內(nèi)標(biāo)溶液和磷酸二氫鉀緩沖液;
(3)樣品預(yù)處理:取阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液于離心管中,加入空白血漿至215微升,精密加入10微升內(nèi)標(biāo)對乙酰氨基酚,漩渦振蕩10s,再精密加入200微升甲醇,漩渦振蕩15s后,4000r/min在4°C離心6min后,取上清液備用;
(4)取步驟(3)的上清液進(jìn)入色譜柱為C18,以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液10:90作為流動相,流速:lml/min,紫外檢測波長22nm的HPLC儀器中進(jìn)行分析;
(5)制備阿莫西林鈉-克拉維酸鉀回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制系列濃度阿莫西林鈉-克拉維酸鉀溶液照步驟(3)處理后取各系列濃度等量體積的上清液按照步驟(4)進(jìn)樣分析,得阿莫西林鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:C=8.946Y-1.362 ;克拉維酸鉀的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:C=8.946Y-1.475,其中Y為阿莫西林鈉、克拉維酸鉀與內(nèi)標(biāo)物峰面積比,且Y為橫坐標(biāo)。
[0011]磷酸二氫鉀緩沖液為0.05mmol/L,且pH為2.0-2.5。
[0012]照步驟(5)中的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線,稀釋加入空白人血漿的阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液得到阿莫西林鈉、克拉維酸鉀最低檢測濃度。
【權(quán)利要求】
1.同時(shí)測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法,其特征在于, 配制阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液:含阿莫西林鈉88.3微克/ml和克拉維酸鉀45.3 微克 /ml ; 配制對乙酰氨基酚內(nèi)標(biāo)溶液和磷酸二氫鉀緩沖液; 樣品預(yù)處理:取阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液于離心管中,加入空白血漿至215微升,精密加入10微升內(nèi)標(biāo)對乙酰氨基酚,漩渦振蕩10s,再精密加入200微升甲醇,漩渦振蕩15s后,4000r/min在4°C離心6min后,取上清液備用; 取步驟(3)的上清液進(jìn)入色譜柱為C18,以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液10:90作為流動相,流速:lml/min,紫外檢測波長22nm的HPLC儀器中進(jìn)行分析; 制備阿莫西林鈉-克拉維酸鉀回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制系列濃度阿莫西林鈉-克拉維酸鉀溶液照步驟(3)處理后取各系列濃度等量體積的上清液按照步驟(4)進(jìn)樣分析,得阿莫西林鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:C=8.946Y-1.362 ;克拉維酸鉀的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:C=8.946Y-1.475,其中Y為阿莫西林鈉、克拉維酸鉀與內(nèi)標(biāo)物峰面積比,且Y為橫坐標(biāo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,磷酸二氫鉀緩沖液為0.05mmol/L,且pH為 2.0-2.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,照步驟(5)中的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線,稀釋加入空白人血漿的阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲備液得到阿莫西林鈉、克拉維酸鉀最低檢測濃度。
【文檔編號】G01N30/06GK104345100SQ201410434466
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】王強(qiáng), 張靜文, 劉萍 申請人:四川制藥制劑有限公司