一種熟地黃中5-羥甲基糠醛的含量檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種熟地黃中5-羥甲基糠醛的含量檢測(cè)方法，采用高效液相法測(cè)定熟地黃中5-羥甲基糠醛，色譜條件，采用C18柱或C8，流動(dòng)相為5-15∶95-85的醋酸乙酯-0.5％醋酸水溶液或體積比為10-15:90-85乙腈-水溶液，等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為280-284nm。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，重現(xiàn)性好。
【專利說明】一種熟地黃中5-羥甲基糠醛的含量檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及中藥材化學(xué)成分的檢測(cè)，特別涉及熟地黃中的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]熟地黃為玄參科植物地黃的塊根，經(jīng)加工蒸曬而成。具有補(bǔ)血滋潤(rùn)；益精填髓的功能。用血虛萎黃；眩暈心悸；月經(jīng)不調(diào)；崩不止；肝腎陰虧；潮熱盜汗；遺精陽痿；不育不孕；腰膝酸軟；耳鳴耳聾；頭目昏花；須發(fā)早白；消渴；便秘；腎虛喘促等癥。
[0003]5-羥甲基糠醛(5-HMF)，又稱5_羥甲基_2_糠醛，是由葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物，是Maillard反應(yīng)的典型產(chǎn)物之一。文獻(xiàn)中表述該化合物對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害，具有神經(jīng)毒性，能與人體蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生積蓄中毒，2010年版中國(guó)藥典二部中明確規(guī)定了它在含葡萄糖注射液中的限量。此外，近年來也有研究表明，它具有抗氧化、抗心肌缺血、改變血液流變學(xué)等對(duì)人體有益的作用。目前5-HMF測(cè)定主要為UV法和HPLC法，熟地黃應(yīng)用廣泛，在加工干制的過程中會(huì)產(chǎn)生5-HMF，但是熟地黃藥材中5-HMF的含量測(cè)定未見文獻(xiàn)報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-UV建立熟地黃藥材中5-HMF的含量測(cè)定方法，對(duì)于研究炮制作用機(jī)理，規(guī)范炮制工藝，控制飲片炮制質(zhì)量具有一定意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的熟地黃中5-羥甲基糠醛的含量檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明提供的熟地黃中5-羥甲基糠醛含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟
[0006](A)供試品溶液的制備；
[0007](B)對(duì)照品溶液的制備；
[0008](C)高效液相色譜法測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，按照一定的色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法定量，計(jì)算，即得。
[0009]上述步驟(A)為取過60目篩的熟地黃藥材粉末，冰浴超聲或冰浴振搖提取，將得到提取離心，過濾，定容，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0010]進(jìn)一步的，上述步驟(A)為取過60目篩的熟地黃藥材粉末0.5-1.5g，精密稱定，置離心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超聲或冰浴振搖提取，每次20-30min，共提取3_4次，合并提取液，離心，過濾，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，搖勻，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0011]更進(jìn)一步的，上述步驟(A)為取過60目篩的熟地黃藥材粉末約l.0Og，精密稱定，置離心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超聲提取，每次25min，共提取3次，合并提取液，離心，過濾，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，搖勻，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0012]上述步驟(B)為精密稱取5-HMF對(duì)照品，加醋酸乙酯溶解，定容，搖勻即得。
[0013]進(jìn)一步的，取5-HMF對(duì)照品5.00-8.0Omg，精密稱定，置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，搖勻。從中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻即得，4°C儲(chǔ)藏備用。
[0014]更進(jìn)一步的，精密稱取5-HMF對(duì)照品6.0Omg置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，搖勻。從中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻即得，4°C儲(chǔ)藏備用。
[0015]上述的步驟(C)中的色譜條件可以采用下述的色譜條件:
[0016]色譜柱:選自C18或C8柱；
[0017]流動(dòng)相:選自體積比為5-15: 95-85的醋酸乙酯-0.5%醋酸水溶液或體積比為10-15:90-85乙腈-水溶液，等度洗脫；
[0018]流速:0.8-1.2mL.mirf1 ；
[0019]檢測(cè)波長(zhǎng):280_284nm;
[0020]柱溫:25-35O ；
[0021]進(jìn)樣量:10-20yL;
[0022]更進(jìn)一步的，上述的步驟(C)中的色譜條件為
[0023]色譜柱:C18；
[0024]流速:ImL.mirf1 ；
[0025]檢測(cè)波長(zhǎng):284nm；
[0026]柱溫:30°C;
[0027]進(jìn)樣量:1yL;
[0028]本發(fā)明采用的方法和實(shí)驗(yàn)條件是經(jīng)過篩選獲得的，能夠達(dá)到精確測(cè)定的目的
[0029]本發(fā)明所提供的熟地黃中5-羥甲基糠醛的含量檢測(cè)方法，是通過大量具體創(chuàng)造性試驗(yàn)篩選后得到的，通過對(duì)樣品、供試品處理方法的篩選，流動(dòng)相的選擇，建立了熟地黃中5-羥甲基糠醛的含量檢測(cè)方法HPLC分析方法，尤其是該方法供試品處理方法簡(jiǎn)單不需要過色譜柱、也不需要用毒有機(jī)溶劑反復(fù)萃取。該方法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性和穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
[0030]為了進(jìn)一步說明本發(fā)明方法的有益效果，將方法學(xué)驗(yàn)證舉例如下:
[0031]1.1儀器與試劑AgilentllOO型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)，萬分之一天平(AL204梅特勒-托利多儀器有限公司)，十萬分之一天平(XS105梅特勒-托利多儀器有限公司)，Mill1-Q超純水機(jī)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市天宇實(shí)驗(yàn)儀器有限公司制造)，超聲波清洗器(KQ5200型，昆山市超聲波儀器有限公司)，L-550低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心儀器有限公司)，WK-200B高速藥物粉碎機(jī)(青州市精誠機(jī)械有限公司)。
[0032]5-HMF對(duì)照品(批號(hào)111626-201308，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，醋酸乙酯(色譜純)，醋酸(色譜純)，水為實(shí)驗(yàn)室自制超純水，其他試劑均為分析純。

【具體實(shí)施方式】
[0033]以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0034]實(shí)施例1
[0035]供試品溶液的制備過60目篩的取熟地黃藥材粉末約1.00g，精密稱定，置離心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超聲提取，每次25min，共提取4次，合并提取液，離心，過濾，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，搖勻，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0036]對(duì)照品溶液的制備精密稱取5-HMF對(duì)照品6.07mg置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，搖勻。從中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻即得，4 °C儲(chǔ)藏備用。
[0037]高效液相色譜法測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，以C18色譜柱、醋酸乙酯-0.5%醋酸水(15: 85)溶液的流動(dòng)相等度洗脫、流速ImL.min'檢測(cè)波長(zhǎng)284nm、柱溫30°C的色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法定量，計(jì)算，即得。
[0038]實(shí)施例2
[0039]供試品溶液的制備過60目篩的取熟地黃藥材粉末約0.50g，精密稱定，置離心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超聲提取，每次20min，共提取3次，合并提取液，離心，過濾，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，搖勻，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0040]對(duì)照品溶液的制備取5-HMF對(duì)照品5.0Omg，精密稱定，置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，搖勻。從中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻即得，4°C儲(chǔ)藏備用。
[0041]高效液相色譜法測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，以C18色譜柱；流動(dòng)相:醋酸乙酯-0.5%醋酸水(15: 85)溶液的流動(dòng)相等度洗脫；流速0.8mL.mirT1 ;檢測(cè)波長(zhǎng)280nm ;柱溫25°C的色譜條件測(cè)定,外標(biāo)法定量,計(jì)算，即得。
[0042]實(shí)施例3
[0043]供試品溶液的制備過60目篩的取熟地黃藥材粉末約1.50g，精密稱定，置離心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超聲提取，每次35min，共提取4次，合并提取液，離心，過濾，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，搖勻，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0044]對(duì)照品溶液的制備取5-HMF對(duì)照品8.0Omg，精密稱定，置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，搖勻。從中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻即得，4°C儲(chǔ)藏備用。
[0045]高效液相色譜法測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，以C8色譜柱；流動(dòng)相:醋酸乙酯-0.5%醋酸水(10: 85)溶液的流動(dòng)相等度洗脫；流速1.2mL.mirT1 ;檢測(cè)波長(zhǎng)282nm ;柱溫35°C的色譜條件測(cè)定,外標(biāo)法定量,計(jì)算，即得。
【權(quán)利要求】
1.一種熟地黃中5-羥甲基糠醛含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟 (A)供試品溶液的制備:取過60目篩的熟地黃藥材粉末約1.00g，精密稱定，置離心管中，加入醋酸乙酯12mL，冰浴超聲提取，每次25min，共提取4次，合并提取液，離心，過濾，至50mL容量瓶中，用醋酸乙酯加至刻度，搖勻，過0.45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。； (B)對(duì)照品溶液的制備:精密稱取5-HMF對(duì)照品6.0Omg置1ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并定容至10mL，搖勻。從中精密吸取3mL置50mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻即得，4 °C儲(chǔ)藏備用。； (C)高效液相色譜法測(cè)定，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，以C18色譜柱、醋酸乙酯-0.5%醋酸水(15: 85)的流動(dòng)相等度洗脫、流速ImL.min'檢測(cè)波長(zhǎng)284nm、柱溫30°C的色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法定量，計(jì)算，即得。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104237400SQ201410438257
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月1日
【發(fā)明者】李曉楓 申請(qǐng)人:李曉楓