使用MR-proADM的糖尿病診斷和風險分級的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及使用MR-proADM的糖尿病診斷和風險分級。具體而言，本發(fā)明涉及糖尿病，特別是糖尿病繼發(fā)病的診斷和/或風險分級方法，其中在待研究的患者中進行標志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ?ID?No.2)或其部分肽或片段的測定，或如果其包含在標志物組合(標志物組，標志物簇)中進行測定。此外，本發(fā)明涉及用于進行所述方法的診斷設備和試劑盒。
【專利說明】使用MR-proADM的糖尿病診斷和風險分級
[0001]本申請為申請?zhí)枮?00780041709.4、申請日為2007年11月8日、發(fā)明名稱為“使用MR-proADM的糖尿病診斷和風險分級”的發(fā)明專利申請的分案申請。

【技術領域】
[0002]本發(fā)明涉及糖尿病，特別是糖尿病繼發(fā)病的診斷和/或風險分級方法，其中在待研究的患者中進行標志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(midreg1nal proadrenomedul I in,MR-proADM:SEQ ID N0.2)或其部分肽或片段的測定，或包含在標志物組合(標志物組，標志物簇)中進行測定。此外，本發(fā)明涉及用于進行所述方法的診斷設備和試劑盒。

【背景技術】
[0003]糖尿病的診斷以腎上腺髓質(zhì)素而眾所周知(Garcia-Unzueta MT, MontalbanC，Pesquera C，Berrazueta JR, Amado JA.Plasma adrenomedullin levels in typeldiabetes.Relat1nship with clinical parameters.Diabetes Care.21:999-1003, 1998和 Turk HM,Buyukberber S,Sevinc A, Ak G,Ates M,Sari R,Savli H, CigliA.Relat1nship between plasma adrenomedullin levels and metabolic control,riskfactors, and diabetic microang1pathy in patients with type2diabetes.Diabetes Care 23:864-7, 2000) 0然而，它的缺點在于由于腎上腺髓質(zhì)素缺乏穩(wěn)定性，以及其在血楽■中短暫的壽命(Lewis LK, Smith MW, Yandle TG, Richards AM, NichollsMG.Adrenomedullin(1-52)measured in human plasma by rad1immunoassay:plasmaconcentrat1n, adsorpt1n, and storage.Clin Chem.44:571-7, 1998),無法進行可靠的診斷。但是，需要提供糖尿病可靠的診斷，或進行(風險)分級，特別是關于進一步的臨床決策，和特別是關于糖尿病或糖尿病繼發(fā)病的嚴重程度。
[0004]此外，在診斷中進行腎上腺髓質(zhì)素原(p1ADM)檢測在本領域中被描述(EP0622458B1)，特別是關于膿毒癥的研究(EP1121600B1)。而且，腎上腺髓質(zhì)素原的另一片段，即，被稱為中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR_proADM:SEQ ID N0.2，也是SEQ ID N0.1中pr印roADM的氨基酸45-92 (圖1))，在EP1488209B1中被公開用于診斷目的。然而，中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-pix)ADM:SEQ ID N0.2)對糖尿病診斷的適合性沒有被公開。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的任務是得到用于糖尿病，特別是糖尿病繼發(fā)病的診斷和/或風險分級的改進方法。
[0006]該任務通過用于糖尿病體外診斷和/或風險分級的方法的手段完成，其中在待研究的患者中進行標志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ ID N0.2)或其部分肽或片段的測定，或其包含在標志物組合(標志物組，標志物簇)中進行測定(下文稱為依據(jù)本發(fā)明的方法)。
[0007]依據(jù)本發(fā)明，術語“風險分級(risk stratificat1n) ”,包含發(fā)現(xiàn)糖尿病患者,特別是預后較差的具有糖尿病繼發(fā)病的那些患者，用于糖尿病(繼發(fā)病)的深入診斷和療法/處理目的，其目標是使糖尿病的病程盡可能地有利。
[0008]由于這個原因，特別有利的是，可靠的診斷和/或風險分級可以通過依據(jù)本發(fā)明方法的方式進行。依據(jù)本發(fā)明的方法允許得到更迅速診斷的臨床決策，特別是對于糖尿病繼發(fā)病。這樣的臨床決策也包括使用藥物進一步治療，用于糖尿病的處理或治療。
[0009]在依據(jù)本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實施方式中，進行所述診斷和/或風險分級，以用于對糖尿病進行預后、預防、鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)和發(fā)現(xiàn)、嚴重程度評估、和伴隨治療的進程評估。
[0010]在依據(jù)本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實施方式中，體液樣品，特別是血液，任選全血、血清或可用血漿，從待研究患者收集，并且診斷在體外/離體(ex vivo)進行，即在人或動物體外。診斷和/或風險分級可以在下列測定基礎上進行:標志物中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ ID N0.2)或其部分肽或片段，及其存在的量，或與參考值相比量的變化，所述測定在至少一個患者的樣品中進行。
[0011 ] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術語“糖尿病”，特別是II型糖尿病(胰島素抵抗)，被理解為指代慢性代謝疾病，其中胰島素在胰腺胰島β細胞中的產(chǎn)生被打亂，或胰島素存在但不能在其靶位點一細胞膜一正確地發(fā)揮作用。這種擾亂的胰島素產(chǎn)生和作用的結(jié)果是升高的血糖值(高血糖)。在糖尿病進程中，在前驅(qū)糖尿病和實際明顯的糖尿病之間作出區(qū)分，在前驅(qū)糖尿病中，“葡萄糖耐量擾亂(disturbed)” 一其可通過實驗室化學方法檢測一僅發(fā)生在末期。胰島素抵抗發(fā)生在前驅(qū)糖尿病病程的開始。幾乎同時，內(nèi)皮功能障礙已經(jīng)發(fā)生，伴隨心血管系統(tǒng)的高脂蛋白血癥和高血壓。這種風險集合的結(jié)果是血管壁進一步動脈粥樣硬化改變(微管血管病變和大血管病變)，以及作為微循環(huán)問題結(jié)果的血管并發(fā)癥。其它繼發(fā)病和伴隨疾病是糖尿病性視網(wǎng)膜病直至失明，以及腎病直至腎機能不全，神經(jīng)病，糖尿病性足部綜合征,和心血管并發(fā)癥。
[0012]由于這種原因，本發(fā)明涉及II型糖尿病,及其繼發(fā)病和并發(fā)病,特別是內(nèi)皮功能障礙、高脂蛋白血癥、高血壓性循環(huán)調(diào)節(jié)障礙、糖尿病性視網(wǎng)膜病、腎病、腎機能不全、神經(jīng)病、糖尿病性足部綜合征和心血管并發(fā)癥的診斷和/或風險分級。
[0013]所有前述適應癥都在例如Pschyrembel, De Gruyter, Berlin 2004中進一步描述。
[0014]在本發(fā)明的范圍內(nèi)，“中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ ID N0.2) ”被理解為人類蛋白或多肽，其具有:具有前腎上腺髓質(zhì)素原SEQ ID N0.1(圖1) (KitamuraK,Sakata J, Kangawa K, Kojima M, Matsuo H, Eto T.Cloning and characterizat1n ofcDNA encoding a precursor for human adrenomedullin.B1chem B1phys Res Commun1993:194:720-725)的氨基酸序列45-92 (45位是Glu，92位是Val)，和/或具有SEQ IDN0.2(圖2)的氨基酸序列1-48。腎上腺髓質(zhì)素原的這一片段被稱為“中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM) ”(EP1488209B1)，并且顯示出強的血漿穩(wěn)定性，這是特別有利的。
[0015]此外，“中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原”依據(jù)本發(fā)明可以顯示出修飾，如糖基化、脂化或衍生化。
[0016]在另一實施方式中，中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ ID N0.2)的測定可以另外連同其它標志物一起進行，其中中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ ID N0.2)被包含在標志物組合(標志物組，標志物簇)中，特別優(yōu)選已經(jīng)表明糖尿病的那些標志物。在另一特定的實施方式中，這也可以是血管標志物，其能夠表明伴隨糖尿病的心血管系統(tǒng)內(nèi)皮功能障礙。
[0017]為此，本發(fā)明涉及依據(jù)本發(fā)明方法的實施方式，其中在待研究患者中，另外還連同選自炎性標志物、血管標志物的至少一種其它標志物一起進行所述測定。
[0018]依據(jù)本發(fā)明，炎性標志物可以選自下列至少一種標志物:C_反應蛋白(CRP)，細胞因子例如TNF-α，白細胞介素，例如IL-6、白細胞介素-1β，降鈣素原(1_116，3-116)，血管緊張素II，內(nèi)皮素-1，和粘附分子如VCAM或ICAM，并且血管標志物可以選自下列至少一種標志物:肌酸激酶，髓過氧化物酶，肌紅蛋白，利尿鈉蛋白(natriuretic protein),特別是 ANP (或 ANF)、proANP, NT-proANP, BNP、proBNP, NT-proBNP 或在每一情況下其部分序列，CRP。此外，該術語也被理解為指代調(diào)節(jié)循環(huán)的激素(原)，特別是例如胃泌素釋放肽原(proGRP)、內(nèi)皮素-1原、瘦蛋白原、神經(jīng)肽-Y原、生長抑素原、神經(jīng)肽-YY原、阿黑皮素原或它們各自的部分序列。
[0019]在另一種實施方式中，至少一種糖尿病標志物/因子可以被額外地測定。根據(jù)本發(fā)明，糖尿病標志物/因子特別是諸如脂連蛋白，碳水化合物，脂肪，如膽固醇(LDH)和其它，體重指數(shù)(BMI)，年齡，血壓，HOMA-1R(穩(wěn)態(tài)模型評估-胰島素抵抗指數(shù)，其檢測參見:Matthews DR, Hosker JP, Rudenski AS, Naylor BA, Treacher DF, Turner RC, HomeostasisModel Assessment:1nsulin Resistance and B—cell Funct1n from Fasting PlasmaGlucose and Insulin Concentrat1ns in Man.Diabetologia 28:412-419.1985)的那些。
[0020]在本發(fā)明的另一實施方式中，依據(jù)本發(fā)明的方法可以通過標志物的平行測定或同時測定(如，有96孔或更多孔的多重滴定板)的方式進行，其中所述測定在至少一個患者樣品上進行。
[0021]此外，依據(jù)本發(fā)明的方法及其測定可以在自動分析設備上，特別是借助于Kryptor (http: //www.kryptor.net/)來進行。
[0022]在另一實施方式中，依據(jù)本發(fā)明的方法及其測定可以通過快速測試(如橫向流動測試)來進行，不論是使用單參數(shù)或多參數(shù)測定。
[0023]此外，本發(fā)明涉及中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM:SEQ ID N0.2)或其部分肽或片段，或其包含在標志物組合(標志物組，標志物簇)中的用途，用于糖尿病特別是II型糖尿病、及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷和/或風險分級，并且，特別地，將前述實施方式納入考慮。如果必要,所述標志物組合可以含有另一種合適的標志物。
[0024]另一任務是得到相應的診斷設備，或應用這種設備進行依據(jù)本發(fā)明的方法。
[0025]在本發(fā)明的范圍內(nèi)，這樣的診斷設備特別地被理解為陣列或測試(如免疫測試、ELISA等)，在最寬泛的意義中，是用于實施依據(jù)本發(fā)明方法的設備。
[0026]本發(fā)明進一步涉及用于糖尿病特別是II型糖尿病、及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷或風險分級的試劑盒，或這種試劑盒的應用，其中，在待研究的患者中進行中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM: SEQ ID N0.2)或其部分肽或片段的測定，或包含在標志物組合(標志物組，標志物簇)中的測定，特別地將前述實施方式納入考慮。例如，這樣的檢測試劑包括抗體等。
[0027]以下實施例和附圖用于更詳細地解釋本發(fā)明，而非將本發(fā)明限制于這些實施例和附圖?！緦＠綀D】

【附圖說明】:
[0028]圖1示出帶有相關部分序列的pr印roADM的SEQ ID N0.1。
[0029]圖 2 示出 MR-proADM 的 SEQ ID N0.2。
[0030]圖3示出健康受試者，葡萄糖耐量擾亂的患者、沒有晚期并發(fā)癥(SK)(同義詞:繼發(fā)病)的II型糖尿病(DM II)患者、和具有晚期并發(fā)癥(同義詞:繼發(fā)病)的DM II患者中的 MR-proADM。
實施例:
[0031]實施例1
[0032]MR-proADM 測試依據(jù) Morgenthaler 等人(Morgenthaler NG, Struck J, AlonsoC，Bergmann A.Measurement of midreg1nal proadrenomedulI in in plasma with animmunoluminometric assay.Clin Chem.20050ct ;51 (10): 1823-9)所述進行。
[0033]在葡萄糖耐量未擾亂的100位健康受試者、葡萄糖耐量已擾亂的60位患者和患有明顯II型糖尿病(簡寫為“DM II”)的200位患者中檢測MR-proADM。這200位患者被分為未患任何繼發(fā)病的100名糖尿病患者，和已經(jīng)患有諸如糖尿病腎病和糖尿病性視網(wǎng)膜病的繼發(fā)病的100名糖尿病患者。
[0034]圖3顯示。隨著DM II的嚴重程度增加，MR-proADM值顯著升高。兩組DM II患者尤其與健康對照和葡萄糖耐量擾亂的患者不同。令人吃驚地，最高MR-proADM值在已顯示糖尿病繼發(fā)病的DM II患者中被發(fā)現(xiàn)。
[0035]表I不僅示出MR-proADM，也示出在每種情況下各組中與糖尿病相關的參數(shù)，如葡萄糖和HbAlC。
[0036]表1.(晚期并發(fā)癥(SK)(同義詞:繼發(fā)病))
[0037]
~健康的葡萄糖耐量無SK的有DK的 ~~
(n=100) 擾亂(n=60) DM IIDM II (趨勢)
____(11=100) (n=10Q)__
性別(％ 男性)__50__32__58__55__0.007
年齡(歲)__40 (14) 44 (11) 58 (10) 61 (10) <0.001
患病時間(年)__-__-__16 (7)__17(9)0.55
體重指數(shù)(kg/m2) 22.9 (3.7) 24.1 (4.2) 25.8 (4.2) 26.1 (4.5) <0.001收縮壓(mmHg)121 (14) 126 (22) 136(17) 147 (21) <0.001
舒張壓(mmHg)__77 (8)78 (12)81 (8)81 (11) 0.02
空腹血糖(mmoI/L) 4.9 (0.3) 5.9 (0.4) 7.0 (1.2) 8.5 (3.5) <0.001
HBAlc (%)__-__-__7.8 (1.3) 8.1 (1.6) 0.07
中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì) 0.27(0.09) 0.29 (0.13) 0.42 (0.13) 0.81 (0.54) <0.001素原(mmol/L)______
[0038]已經(jīng)存在的受限微循環(huán)與MR-proADM值之間的關系也通過患有DM II的50名患者的MR-pix)ADM值和測定為靜止前臂皮膚微循環(huán)灌流的循環(huán)流之間的顯著相關性(r =0.43, P = 0.002)顯不。(RCMP:A Enrique Caballero, Rola Saouafj Subodh Aroraj Su CLim，F(xiàn)rank W LoGerfoj Edward S Horton, Aristidis Veves.Reactivity of the micro—andmacro-circulat1n is impaired in those at risk for type 2diabetes.Diabetes48:1856-1862， 1999)。
【權利要求】
1.用于測定SEQID N0.2所示的中央?yún)^(qū)腎上腺髓質(zhì)素原的檢測試劑的用途，所述用途為用于制備用于在待研究的患者中進行糖尿病及其繼發(fā)病和并發(fā)病的體外診斷和/或風險分級的診斷劑。
2.根據(jù)權利要求1的用途，其特征在于:所述糖尿病為II型糖尿病，所述繼發(fā)病和并發(fā)病選自內(nèi)皮功能障礙、高脂蛋白血癥、高血壓性循環(huán)調(diào)節(jié)障礙、糖尿病性視網(wǎng)膜病、腎病、腎機能不全、神經(jīng)病、糖尿病性足部綜合征和心血管并發(fā)癥。
3.根據(jù)權利要求1或2的用途，其特征在于:在待研究的患者中，另外還對選自炎性標志物、血管標志物和/或糖尿病標志物/因子的至少一種其它標志物進行測定。
4.根據(jù)權利要求3的用途，其特征在于:所述炎性標志物選自下列至少一種標志物:C-反應蛋白(CRP)，細胞因子，白細胞介素，降鈣素原(1-116，3-116)，血管緊張素II，內(nèi)皮素-1。
5.根據(jù)權利要求4的用途，其特征在于:所述細胞因子是TNF-α，所述白細胞介素是IL-6或白細胞介素-1 β。
6.根據(jù)權利要求3的用途，其特征在于:所述血管標志物選自下列至少一種標志物:肌酸激酶，髓過氧化物酶，肌紅蛋白，利尿鈉蛋白，特別是ANP (或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP,或調(diào)節(jié)循環(huán)的激素(原)。
7.根據(jù)權利要求6的用途，其特征在于:所述調(diào)節(jié)循環(huán)的激素(原)是胃泌素釋放肽原(proGRP)、內(nèi)皮素-1原、瘦蛋白原、神經(jīng)肽-Y原、生長抑素原、神經(jīng)肽-YY原、阿黑皮素原。
8.根據(jù)權利要求3的用途，其特征在于:進行所述標志物的平行或同時測定。
9.根據(jù)權利要求8的用途，其特征在于:所述測定在至少一個患者樣品上進行。
10.根據(jù)權利要求8的用途，其特征在于:所述測定在自動分析設備上來進行。
11.根據(jù)權利要求8的用途，其特征在于:所述測定通過快速測試來進行。
12.根據(jù)權利要求11的用途，其特征在于:所述測定以單參數(shù)或多參數(shù)測定來進行。
13.根據(jù)權利要求1或2的用途，其特征在于:所述診斷用于對患者進行分級以進行臨床決策。
14.根據(jù)權利要求13的用途，其特征在于:所述臨床決策是用處理或治療糖尿病及其繼發(fā)病和并發(fā)病的藥物進行進一步處理。
15.根據(jù)權利要求1或2的用途，其特征在于:進行所述診斷和/或風險分級，以用于對糖尿病進行預后、預防、鑒別診斷性發(fā)現(xiàn)、嚴重程度評估、和伴隨治療的進程評估。
16.根據(jù)權利要求15的用途，其中所述鑒別診斷性發(fā)現(xiàn)為鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)。
【文檔編號】G01N33/74GK104198735SQ201410442798
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2007年11月8日 優(yōu)先權日:2006年11月8日
【發(fā)明者】A·博格曼, N·莫根塔勒, J·帕帕索提里奧, J·斯塔克 申請人:布拉姆斯有限公司