一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選增強(qiáng)試劑盒及其制備方法
【專利摘要】一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選劑盒的制備，具體步驟如下：將樣本放置室溫，充分解凍,加入-20度同等體積的試劑QLN，在50度水浴中反應(yīng)5分鐘；離心后，收集上清液；取上清后，加入同等體積的制備試劑QLB1；充分混合后，取溶液點(diǎn)在靶板上，靜置后進(jìn)樣進(jìn)樣檢測(cè)；QLN物質(zhì)組成及體積比為：50-80％甲醇，20-50％乙氰，1-5％三氟乙酸；QLB1物質(zhì)組成及體積比為：50-70％甲醇，30-50％離子水，1-5％三氟乙酸；此試劑盒制備方法簡(jiǎn)單、成本較低。
【專利說明】一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選增強(qiáng)試劑盒及其制備

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本技術(shù)屬于分析化學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及表面激光解析質(zhì)譜領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]表面激光解析質(zhì)譜是近年來發(fā)展起來的一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，其中以基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALD1-T0F-MS)為最重要的實(shí)例，此項(xiàng)發(fā)明獲得過諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。主要由兩部分組成:基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源(MALDI)和飛行時(shí)間質(zhì)量分析器(TOF)。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給生物分子，在電離過程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子得到質(zhì)子，而使生物分子電離的過程。因此它是一種軟電離技術(shù)，適用于混合物及生物大分子的測(cè)定。TOF的原理是離子在電場(chǎng)作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè)即測(cè)定離子的質(zhì)荷比(Μ/Z)與離子的飛行時(shí)間成正比，檢測(cè)離子。MALD1-T0F-MS具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點(diǎn)，為生命科學(xué)等領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力的分析測(cè)試手段。
[0003]然而，以基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜為首的所有基于表面激光解析的質(zhì)譜都需要將樣品制備在特制靶板上面，其操作是將樣品分散在基質(zhì)分子中并形成晶體。當(dāng)用激光照射晶體時(shí)，基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離，電離的樣品在電場(chǎng)作用下飛過真空的飛行管，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè)，即通過離子的質(zhì)量電荷之比(Μ/Z)與離子的飛行時(shí)間成正比來分析離子，并測(cè)得樣品分子的分子量。焦點(diǎn)問題就在于通用的基質(zhì)分子的分子量在1000-3000da，造成了過量的背景質(zhì)譜峰。這就決定了所有此類基于表面激光解析的質(zhì)譜分析只能適用于大分子檢測(cè)，比如蛋白質(zhì)，長(zhǎng)鏈多肽，核酸，高分子材料等等，而不能應(yīng)用于小分子檢測(cè)(分子量小于100da)，或者說基于表面激光解析的質(zhì)譜分析的高靈敏度/高通量等獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)無法施展在小分子分析檢測(cè)上面.而分子量小于100da的小分子卻是對(duì)人類最重要的最具應(yīng)用價(jià)值的一類化學(xué)產(chǎn)品，例如95%以上的藥物小分子，所有的氨基酸，維生素等等和人類生活健康相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)。
[0004]目前現(xiàn)有技術(shù)針對(duì)小分子檢測(cè)和篩選還停留在光譜法檢測(cè)，例如熒光發(fā)光檢測(cè)或者衍生出可以熒光檢測(cè)的底物，但此類檢測(cè)要求目標(biāo)小分子分子結(jié)構(gòu)具有光活性集團(tuán)，另一弊端就是往往光度法靈敏度較低，檢測(cè)不到微量的小分子濃度。液相質(zhì)譜(LC-MS)及氣相質(zhì)譜(GC-MS)的已經(jīng)開始應(yīng)用在小分子的檢測(cè)和高通量篩選。但需要消耗大量的人力和溶劑耗材，而且一個(gè)樣品從制備到質(zhì)譜分析再到出結(jié)果需要相當(dāng)長(zhǎng)一個(gè)過程，根據(jù)要求不同，分析一個(gè)樣品從樣品制備到拿到結(jié)果需要30-60分鐘，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代生物醫(yī)藥發(fā)展的高通量篩選要求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:找到一種制備方法簡(jiǎn)單、成本較低的增強(qiáng)電離緩沖液制備方法，節(jié)省開支與時(shí)間。
[0006]技術(shù)方案:一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒，由已用QLN已裂解樣本和同等體積的制備試劑QLN組成，QLN物質(zhì)組成及體積比為:50-80%甲醇，20-50%乙氰，1-5%三氟乙酸；QLB1物質(zhì)組成及體積比為:50-70%甲醇，30-50%離子水，1-7%三氟乙酸。
[0007]—種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒的制備，具體步驟如下:將樣本放置室溫，充分解凍，加入-20度同等體積的試劑QLN，在50度水浴中反應(yīng)5分鐘；離心后，收集上清液；取上清后，加入同等體積的制備試劑QLBl ;充分混合后，取溶液點(diǎn)在靶板上，靜置后進(jìn)樣進(jìn)樣檢測(cè)；QLN物質(zhì)組成及體積比為:50-80%甲醇，20-50%乙氰，1-5%三氟乙酸；QLB1物質(zhì)組成及體積比為:50-70%甲醇，30-50%離子水，1-7%三氟乙酸。
[0008]優(yōu)選方案為:QLF物質(zhì)組成及體積比為:80%甲醇，20%乙氰，5%三氟乙酸；QLB1物質(zhì)組成及體積比為:50 %甲醇，50 %離子水，3 %三氟乙酸。
[0009]有益效果:1、制備方法簡(jiǎn)單；2、成本較低。

【具體實(shí)施方式】
[0010]三聚氰胺等食品安全檢測(cè)，將樣本(單個(gè)離心管，96孔多孔板，384孔多孔板)放置室溫10分鐘，充分解凍。加入-20度同等體積的試劑QLN(50-80%甲醇，20-50%乙氰，
1-5%三氟乙酸)，作用15分鐘，并在50度水浴中作用5分鐘。3000rmp離心10分鐘后，收集上清液。取上清后，加入同等體積的制備試劑QLBl (50-70%甲醇，30-50%離子水，1-7%三氟乙酸)。充分混合后，取0.5微升溶液點(diǎn)在靶板上，通風(fēng)處下靜置10分鐘后進(jìn)樣即可。
【權(quán)利要求】
1.一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒，其特征在于，由已用QLN已裂解樣本和同等體積的制備試劑QLN組成，QLN物質(zhì)組成及體積比為:50-80%甲醇，20-50%乙氰，1-5%三氟乙酸；QLB1物質(zhì)組成及體積比為:50-70%甲醇，30-50%離子水，1-7%三氟乙酸。
2.權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒的制備，其特征在于，具體步驟如下:將樣本放置室溫，充分解凍，加入-20度同等體積的試劑QLN，在50度水浴中反應(yīng)5分鐘；離心后，收集上清液；取上清后，加入同等體積的制備試劑QLBl ;充分混合后，取溶液點(diǎn)在靶板上，靜置后進(jìn)樣進(jìn)樣檢測(cè)；QLN物質(zhì)組成及體積比為:50-80%甲醇，20-50%乙氰，1-5%三氟乙酸；QLBl物質(zhì)組成及體積比為:50-70%甲醇，30-50%離子水，1-7%三氟乙酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于一種應(yīng)用于三聚氰胺分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒的制備，其特征在于，QLF物質(zhì)組成及體積比為:80%甲醇，20%乙氰，5%三氟乙酸；QLB1物質(zhì)組成及體積比為:50%甲醇，50%離子水，3%三氟乙酸。
【文檔編號(hào)】G01N27/64GK104297330SQ201410454390
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月9日
【發(fā)明者】成曉亮, 鄭可嘉 申請(qǐng)人:武漢品生科技有限公司