一種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選增強(qiáng)試劑盒及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】一種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選劑盒的制備，其特征在于，具體步驟如下：任一裂解液進(jìn)行裂解制備樣本，取上清后，加入同等體積的制備試劑QLP;充分混合；取溶液點(diǎn)在靶板上，通風(fēng)處下靜置后進(jìn)樣檢測(cè)；QLP物質(zhì)組成及體積比為：70-90%離子水，10-30%甲醇，1-5%甲酸；此試劑盒制備方法簡(jiǎn)單、成本較低。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本技術(shù)屬于分析化學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及表面激光解析質(zhì)譜領(lǐng)域。 一種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選增強(qiáng) 試劑盒及其制備

【背景技術(shù)】
[0002] 表面激光解析質(zhì)譜是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，其中以基質(zhì) 輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-T0F-MS)為最重要的實(shí)例，此項(xiàng)發(fā)明獲得過(guò)諾貝 爾化學(xué)獎(jiǎng)。主要由兩部分組成：基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源（MALDI)和飛行時(shí)間質(zhì)量分 析器（TOF)。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收 能量傳遞給生物分子，在電離過(guò)程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子得到質(zhì)子，而使 生物分子電離的過(guò)程。因此它是一種軟電離技術(shù)，適用于混合物及生物大分子的測(cè)定。T0F 的原理是離子在電場(chǎng)作用下加速飛過(guò)飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè) 即測(cè)定離子的質(zhì)荷比（M/Z)與離子的飛行時(shí)間成正比，檢測(cè)離子。MALDI-T0F-MS具有靈敏 度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點(diǎn)，為生命科學(xué)等領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力的分析測(cè)試手段。
[0003] 然而，以基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜為首的所有基于表面激光解析的質(zhì) 譜都需要將樣品制備在特制靶板上面，其操作是將樣品分散在基質(zhì)分子中并形成晶體。當(dāng) 用激光照射晶體時(shí)，基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使 得樣品分子電離，電離的樣品在電場(chǎng)作用下飛過(guò)真空的飛行管，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí) 間不同而被檢測(cè)，即通過(guò)離子的質(zhì)量電荷之比（M/Z)與離子的飛行時(shí)間成正比來(lái)分析離 子，并測(cè)得樣品分子的分子量。焦點(diǎn)問(wèn)題就在于通用的基質(zhì)分子的分子量在l〇〇〇_3〇〇〇da， 造成了過(guò)量的背景質(zhì)譜峰。這就決定了所有此類(lèi)基于表面激光解析的質(zhì)譜分析只能適用于 大分子檢測(cè)，比如蛋白質(zhì)，長(zhǎng)鏈多肽，核酸，高分子材料等等，而不能應(yīng)用于小分子檢測(cè)（分 子量小于l〇〇〇da)，或者說(shuō)基于表面激光解析的質(zhì)譜分析的高靈敏度/高通量等獨(dú)特的優(yōu) 勢(shì)無(wú)法施展在小分子分析檢測(cè)上面.而分子量小于l〇〇〇da的小分子卻是對(duì)人類(lèi)最重要的 最具應(yīng)用價(jià)值的一類(lèi)化學(xué)產(chǎn)品，例如95%以上的藥物小分子，所有的氨基酸，維生素等等和 人類(lèi)生活健康相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)。
[0004] 目前現(xiàn)有技術(shù)針對(duì)小分子檢測(cè)和篩選還停留在光譜法檢測(cè)，例如熒光發(fā)光檢測(cè)或 者衍生出可以熒光檢測(cè)的底物，但此類(lèi)檢測(cè)要求目標(biāo)小分子分子結(jié)構(gòu)具有光活性集團(tuán)，另 一弊端就是往往光度法靈敏度較低，檢測(cè)不到微量的小分子濃度。液相質(zhì)譜（LC-MS)及氣 相質(zhì)譜（GC-MS)的已經(jīng)開(kāi)始應(yīng)用在小分子的檢測(cè)和高通量篩選。但需要消耗大量的人力和 溶劑耗材，而且一個(gè)樣品從制備到質(zhì)譜分析再到出結(jié)果需要相當(dāng)長(zhǎng)一個(gè)過(guò)程，根據(jù)要求不 同，分析一個(gè)樣品從樣品制備到拿到結(jié)果需要30-60分鐘，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足現(xiàn)代生物醫(yī)藥發(fā) 展的高通量篩選要求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：找到一種制備方法簡(jiǎn)單、成本較低的增強(qiáng)電離緩沖液制備方法，節(jié)省開(kāi) 支與時(shí)間。
[0006] 技術(shù)方案：一種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒，由將 已裂解樣本和同等體積的制備試劑QLP組成，QLP物質(zhì)組成及體積比為：70-90%離子水， 10-30%甲醇，1-5%甲酸。
[0007] -種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒的制備，具體步驟如 下：任一裂解液進(jìn)行裂解制備樣本，取上清后，加入同等體積的制備試劑QLP ;充分混合；取 溶液點(diǎn)在靶板上，通風(fēng)處下靜置后進(jìn)樣檢測(cè)；QLP物質(zhì)組成及體積比為：70-90%離子水， 10-30%甲醇，1-5%甲酸。
[0008] 優(yōu)選方案為：QLP物質(zhì)組成及體積比為：90%離子水，10%甲醇，3%甲酸。
[0009] 有益效果：1、制備方法簡(jiǎn)單；2、成本較低。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010] 圖1利用本發(fā)明檢測(cè)到的小肽分子質(zhì)譜圖

【具體實(shí)施方式】
[0011] 本技術(shù)方法適合小肽分子，因?yàn)樾‰姆肿咏Y(jié)構(gòu)上帶有多個(gè)氨基，天然結(jié)合靶板，力口 上本發(fā)明的多肽分子曾強(qiáng)電離緩沖液，使得3000da以下分子量的小肽分子接近100%電離 和氣化飛向質(zhì)譜檢測(cè)器。
[0012] 首先通過(guò)某種裂解方式制備樣本，取上清后，加入同等體積的制備試劑 QLP (70-90%離子水，10-30%甲醇，1-5%甲酸）。充分混合后，取0. 5微升溶液點(diǎn)在靶板上， 通風(fēng)處下靜置10分鐘后進(jìn)樣即可。
[0013] 我們做了以下實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證此方法：將牛血清白蛋白裂解樣品進(jìn)行分析，可以看到 我們的發(fā)明技術(shù)可以檢測(cè)到至少10種小肽分子，靈敏度高達(dá)納納摩爾每升的級(jí)別。而基質(zhì) 輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜并不能檢測(cè)到任何小肽分子。如圖1所示。
【權(quán)利要求】
1. 一種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒，其特征在于，由將 已裂解樣本和同等體積的制備試劑QLP組成，QLP物質(zhì)組成及體積比為：70-90%離子水， 10-30%甲醇，1-5%甲酸。
2. 權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用于小肽分子定性定量分析檢測(cè)和高通量篩選試劑盒的 制備，其特征在于，具體步驟如下：任一裂解液進(jìn)行裂解制備樣本，取上清后，加入同等體積 的制備試劑QLP ;充分混合；取溶液點(diǎn)在靶板上，通風(fēng)處下靜置后進(jìn)樣檢測(cè)；QLP物質(zhì)組成及 體積比為：70-90%離子水，10-30%甲醇，1-5%甲酸。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于一種應(yīng)用于小肽小分子定性定量分析檢測(cè)和高通量 篩選試劑盒的制備，其特征在于，QLP物質(zhì)組成及體積比為：90%離子水，10%甲醇，3%甲 酸。
【文檔編號(hào)】G01N27/64GK104215686SQ201410455875
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月9日
【發(fā)明者】成曉亮, 鄭可嘉 申請(qǐng)人:武漢品生科技有限公司