一種鉑雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于免疫分析和生物傳感【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種鉑雜化氧化銅多壁碳納米管免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。采用鉑雜化的氧化銅多壁碳納米管標(biāo)記的電化學(xué)免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了常見胰腺癌腫瘤標(biāo)記物的檢測，具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，檢測限低，對胰腺癌的檢測具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】一種鉑雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于新型功能納米材料、免疫分析和生物傳感【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤的發(fā)病率高，不易察覺，我國病例數(shù)相當(dāng)龐大，占全世界病例數(shù)的55%，且腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移的速度快，對人類的健康產(chǎn)生極大危害。腫瘤標(biāo)志物是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生和釋放的以抗原、酶、激素等形式的代謝產(chǎn)物存在于腫瘤細(xì)胞內(nèi)或宿主體液中，其在臨床上對于隨原發(fā)腫瘤的發(fā)現(xiàn)，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發(fā)展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評價(jià)及腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后的預(yù)測產(chǎn)生極大的影響，引起人們的廣泛關(guān)注。
[0003]CA199、CA242、CEA等常見的腫瘤標(biāo)志物，對于胰腺癌的診斷都能起到一定的作用。夾心型電化學(xué)免疫傳感器結(jié)合了高特異性的免疫分析技術(shù)和高靈敏的電化學(xué)分析技術(shù)，具有靈敏度高、制備簡單、檢測快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測、食品安全控制、生物監(jiān)測等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0004]氧化石墨烯表面有大量的羧基官能團(tuán)，使得他更容易與有機(jī)物結(jié)合反應(yīng)。且具有大的比表面積，良好的電子傳遞能力和催化性能，能有效吸附固載抗體。β -環(huán)糊精的分子洞適中，應(yīng)用范圍廣，生產(chǎn)成本低，是目前工業(yè)上使用最多的環(huán)糊精產(chǎn)品。β_環(huán)糊精其內(nèi)腔疏水而外部親水的特性使其可依據(jù)范德華力、疏水相互作用力、主客體分子間的匹配作用等與許多有機(jī)和無機(jī)分子形成包合物及分子組裝體系，這種選擇性的包絡(luò)作用即通常所說的分子識(shí)別，其結(jié)果是形成主客體包絡(luò)物，因此，β_環(huán)糊精還原石墨烯能結(jié)合更多的抗體且結(jié)合更牢固。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法及應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤標(biāo)志物的超靈敏檢測。
[0006]本發(fā)明的目的之一是提供一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管免疫傳感器的制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的之二是將所制備的鉬雜化氧化銅多壁碳納米管免疫傳感器，用于檢測腫瘤標(biāo)志物。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟。
[0009]1.一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法，步驟如下:
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6μ?、0.5?1.5mg/mL的b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯滴加到電極表面,室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6μ?,8?12 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中干燥；
(4)繼續(xù)將3μ?、0.5?1.5 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干；滴加6 μ?、0.0Ol?20 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6μ?、1?3 mg/mL的Pt@CuO/MWCNT-Ab2:抗孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器。
[0010]2.b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯的制備
稱取60?100 mg的β-環(huán)糊精加入到20mL超純水中，超聲溶解，與20mL、0.4?0.6 mg/mL的氧化石墨烯溶液混合，依次加入200?300 μ?氨水、1(Γ20μ?水合肼，強(qiáng)磁力攪拌5min，在60°C下水浴加熱3.0?4.0小時(shí)，離心分離得到β -環(huán)糊精修飾的還原石墨烯。
[0011]3.Pt@CuO/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液的制備
(1)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的制備
1)氧化銅多壁碳納米管的合成
稱取0.05?0.2 g CuO (OAc) 2與0.5 g多壁碳納米管混合,研磨30?40 min,在350°C、氬氣保護(hù)下煅燒3?4 h，冷卻，制得CuO/MWCNT ；
2)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的合成
4?6 mg研磨過的CuO/MWCNT置于圓底燒瓶內(nèi)，20?30 mg的K2PtCl2溶于5 mL水中，超聲溶解，置于上述圓底燒瓶中，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至3.2，100°C油浴中攪拌，回流12 h，冷卻至室溫，水洗，以8000rpm轉(zhuǎn)速，每次10 min離心分離3次，烘干，制得Pt@CuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物；
(2)PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
將2?6 mg的Pt@Cu0/MWCNT 二抗標(biāo)記物分散到I mL超純水中，加入100 μ L、8(Tl20μ g/mL的腫瘤標(biāo)志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4 V恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;在4 °C下，6000 rpm轉(zhuǎn)速下離心15 min，得到下層沉淀，加入I mL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液離心洗漆I次,得下層沉淀,最后加入ImL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，制得Pt@Cu0/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，4 V下保存?zhèn)溆谩?br> [0012]4.胰腺癌腫瘤標(biāo)志物的檢測
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉬絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10?7.98磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試；
(2)用時(shí)間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運(yùn)行時(shí)間 400 s ；
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10μ L、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
[0013]上述所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一:CA19_9、CA242、CEA。
[0014]本發(fā)明所用原材料均可在化學(xué)試劑公司或生物制藥公司購買。
[0015]本發(fā)明的有益成果
(I)本發(fā)明使用了 β -環(huán)糊精修飾的還原石墨烯，石墨烯有大的比表面積，可增加抗體的結(jié)合位點(diǎn)，石墨烯氧化得還原石墨烯，是親水性物質(zhì)，在水中有優(yōu)越的分散性，且羧基能與抗體上的氨基有效結(jié)合，β -環(huán)糊精能與許多有機(jī)和無機(jī)分子形成包合物及分子組裝體系，因此，β-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯增加了抗體結(jié)合率，使得結(jié)合更加牢固；
(2)采用PtOCuO/MWCNT作為二抗標(biāo)記物，MWCNT有極高的強(qiáng)度和良好的導(dǎo)電性，且對過氧化氫有催化作用，Pt和CuO對過氧化氫也有催化作用，因此，Pt@CuO/MWCNT對過氧化氫的催化作用呈三重的放大作用，從而提高了傳感器的靈敏度，降低了檢測限；
(3)—種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管免疫傳感器對腫瘤標(biāo)志物的檢測，其線性范圍0.5pg/mL?25 ng/mL,檢測限最低0.12 pg/mL,表明一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管免疫傳感器可以達(dá)到準(zhǔn)確測定的目的。

【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1 一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6PL、0.5 mg/mL的b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯滴加到電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6μ?,8 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 1:冰箱中干燥；
(4)繼續(xù)將3μ?、0.5 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干；滴加6 μ?、0.001?20 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6μ?、I mg/mL的Pt@CuO/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器。
[0017]實(shí)施例2 —種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6μ?、1.0 mg/mL的b_環(huán)糊精修飾的還原石墨烯滴加到電極表面,室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6μ?、10 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中干燥；
(4)繼續(xù)將3μ?、1.0 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干；滴加6 μ?、0.001?20 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6μ?、2 mg/mL的Pt@CuO/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器。
[0018]實(shí)施例3 —種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備
(1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈；
(2)取6μ?、1.5 mg/mL的b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯滴加到電極表面,室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；
(3)繼續(xù)將6μ?Λ2 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 V冰箱中干燥； (4)繼續(xù)將3μ?、1.5 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干；滴加6 μ?、0.0Ol?20 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥；
(5)將6μ?、3 mg/mL的Pt@CuO/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器。
[0019]實(shí)施例4 b_環(huán)糊精修飾的還原石墨烯的制備
稱取60 mg的b-環(huán)糊精加入到20 mL超純水中，超聲溶解,與20 mL、0.4 mg/mL的氧化石墨烯溶液混合，依次加入200 PL氨水、10 KL水合肼,強(qiáng)磁力攪拌5 min,在60°C下水浴加熱3.0 h，離心分離得到b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯。
[0020]實(shí)施例5 b_環(huán)糊精修飾的還原石墨烯的制備
稱取80 mg的b-環(huán)糊精加入到20mL超純水中，超聲溶解,與20 mL、0.5 mg/mL的氧化石墨烯溶液混合，依次加入250 PL氨水、15 KL水合肼,強(qiáng)磁力攪拌5 min,在60°C下水浴加熱3.5 h，離心分離得到b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯。
[0021]實(shí)施例6 b_環(huán)糊精修飾的還原石墨烯的制備
稱取100 mg的b-環(huán)糊精加入到20 mL超純水中，超聲溶解,與20 mL、0.6 mg/mL的氧化石墨烯溶液混合，依次加入300 PL氨水、20 KL水合肼,強(qiáng)磁力攪拌5 min,在60°C下水浴加熱4.0小時(shí)，離心分離得到b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯。
[0022]實(shí)施例7 PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
(1)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的制備
1)氧化銅多壁碳納米管的合成
稱取0.05 g CuO(OAc)2與0.5 g多壁碳納米管混合，研磨30 min,在350°C、氬氣保護(hù)下煅燒3 h，冷卻，制得CuO/MWCNT ；
2)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的合成
4mg研磨過的CuO/MWCNT置于圓底燒瓶內(nèi)，20 mg的K2PtCl2溶于5 mL水中，超聲溶解，置于上述圓底燒瓶中，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至3.2，100°C油浴中攪拌，回流12 h，冷卻至室溫，水洗，以8000 rpm轉(zhuǎn)速,每次10 min離心分離3次,烘干,制得PtOCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物；
(2)PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
將2 mg的Pt@Cu0/MWCNT 二抗標(biāo)記物分散到I mL超純水中，加入100 μ L、80 μ g/mL的腫瘤標(biāo)志物二抗Ab2溶液和900 μ L、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h ;在4 °CT,6000 rpm轉(zhuǎn)速下離心15 min,得到下層沉淀,加入I mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液離心洗漆I次,得下層沉淀,最后加入I mL、50mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，制得Pt@Cu0/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br> [0023]實(shí)施例8 PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
(I)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的制備
1)氧化銅多壁碳納米管的合成
稱取0.1 g CuO(OAc)2與0.5 g多壁碳納米管混合,研磨35 min,在350°C、IS氣保護(hù)下煅燒3.5 h，冷卻，制得CuO/MWCNT ；
2)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的合成 5mg研磨過的CuO/MWCNT置于圓底燒瓶內(nèi)，25 mg的K2PtCl2溶于5mL水中，超聲溶解，置于上述圓底燒瓶中，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至3.2，100°C油浴中攪拌，回流12 h，冷卻至室溫，水洗，以8000 rpm轉(zhuǎn)速,每次10 min離心分離3次,烘干,制得PtOCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物；
(2)PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
將4 mg的PtOCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物分散到I mL超純水中，加入100 μ L、100 μ g/mL的腫瘤標(biāo)志物二抗Ab2溶液和900 μ L、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;在4 °C下，6000 rpm轉(zhuǎn)速下離心15 min，得到下層沉淀，加入I mL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液離心洗漆I次,得下層沉淀,最后加入I mL、50mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，制得Pt@CuO/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br> [0024]實(shí)施例9 PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
(1)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的制備
1)氧化銅多壁碳納米管的合成
稱取0.2 g CuO(OAc)2與0.5 g多壁碳納米管混合，研磨40 min,在350°C、氬氣保護(hù)下煅燒4小時(shí)，冷卻，制得CuO/MWCNT ；
2)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的合成
6mg研磨過的CuO/MWCNT置于圓底燒瓶內(nèi)，30 mg的K2PtCl2溶于5 mL水中，超聲溶解，置于上述圓底燒瓶中，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.2，100°C油浴中攪拌，回流12小時(shí)，冷卻至室溫，水洗，以8000 rpm轉(zhuǎn)速,每次10 min離心分離3次,烘干,制得PtOCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物；
(2)PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備
將6 mg的Pt@Cu0/MWCNT 二抗標(biāo)記物分散到I mL超純水中，加入100 μ L、120 μ g/mL的腫瘤標(biāo)志物二抗Ab2溶液和900 μ L、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4 °C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;在4 °C下，6000 rpm轉(zhuǎn)速下離心15 min，得到下層沉淀，加入I mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液離心洗漆I次,得下層沉淀,最后加入I mL、50mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，制得Pt@Cu0/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br> [0025]實(shí)施例10胰腺癌腫瘤標(biāo)志物CA19-9的檢測
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉬絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10?7.98磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試；
(2)用時(shí)間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 S，運(yùn)行時(shí)間 400 s ；
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μ L、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化；
(4)測定樣品中CA19-9的線性范圍為Ipg/mL?20 ng/mL,檢測限為0.21 pg/mL。
[0026]實(shí)施例11胰腺癌腫瘤標(biāo)志物CA242的檢測
按照實(shí)施例10的方法對樣品中CA242進(jìn)行檢測，其線性范圍為0.5pg/mL?20ng/mL，檢測限為 0.12 pg/mL。
[0027] 實(shí)施例12胰腺癌腫瘤標(biāo)志物CEA的檢測按照實(shí)施例10的方法對樣品中CEA進(jìn)行檢測，其線性范圍為I pg/mL?25 ng/mL，檢測
限為 0.21 pg/mL。
【權(quán)利要求】
1.一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下幾個(gè)步驟: (1)將直徑為4mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨，超純水清洗干凈； (2)取6μ?、0.5?1.5mg/mL的b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯滴加到電極表面,室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干； (3)繼續(xù)將6μ?,8?12 Pg/mL的腫瘤標(biāo)志物一抗Ab1滴加到電極表面，超純水沖洗，4 °C冰箱中干燥； (4)繼續(xù)將3μ?、0.5?1.5 mg/mL的BSA溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中晾干；滴加6 μ?、0.001?20 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原Ag溶液，超純水沖洗電極表面，4 °C冰箱中干燥； (5)將6μ?、1?3 mg/mL的Pt@CuO/MWCNT-Ab2:抗孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4 °C冰箱中晾干，制得鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器。
2.如權(quán)利要求1所述的一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法，所述b-環(huán)糊精修飾的還原石墨烯的制備,步驟如下: 稱取60?100 mg的β-環(huán)糊精加入到20mL超純水中，超聲溶解，與20mL、0.4?0.6 mg/mL的氧化石墨烯溶液混合，依次加入200?300 μ?氨水、1(Γ20μ?水合肼，強(qiáng)磁力攪拌5min，在60°C下水浴加熱3.0?4.0小時(shí)，離心分離得到β -環(huán)糊精修飾的還原石墨烯。
3.如權(quán)利要求1所述的一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器的制備方法，所述PtOCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備，包括以下幾個(gè)步驟: (1)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的制備 I)氧化銅多壁碳納米管的合成 稱取0.05?0.2 g CuO(OAc)2與0.5g多壁碳納米管混合,研磨30?40 min,在350°C、氬氣保護(hù)下煅燒3?4小時(shí)，冷卻，制得CuO/MWCNT; (2)PtiCuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物的合成 4?6 mg研磨過的CuO/MWCNT置于圓底燒瓶內(nèi)，20?30 mg的K2PtCl2溶于5mL水中，超聲溶解，置于上述圓底燒瓶中，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至3.2，100°C油浴中攪拌，回流12小時(shí)，冷卻至室溫，水洗，以8000rpm轉(zhuǎn)速，每次10 min離心分離3次，烘干，制得Pt@CuO/MWCNT 二抗標(biāo)記物； (3)PtiCuO/MWCNT-Ab2 二抗孵化物溶液的制備 將2?6 mg的Pt@Cu0/MWCNT 二抗標(biāo)記物分散到I mL超純水中，加入100 μ L、8(Tl20μ g/mL的腫瘤標(biāo)志物二抗Ab2溶液和900 yL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液，4 V恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;在4 °C下，6000 rpm轉(zhuǎn)速下離心15 min，得到下層沉淀，加入I mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液離心洗漆I次，得下層沉淀，最后加入ImL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，制得Pt@Cu0/MWCNT_Ab2 二抗孵化物溶液，4 V下保存?zhèn)溆谩?br> 4.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種鉬雜化氧化銅多壁碳納米管傳感器，用于腫瘤標(biāo)志物的檢測,檢測步驟如下: (I)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉬絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10?7.98磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試； (2)用時(shí)間-電流法對分析物進(jìn)行檢測，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔0.1 S，運(yùn)行時(shí)間 400 s ； (3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μ L、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、3和4所述的腫瘤標(biāo)志物，其特征在于，所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一:CA19-9、CA242、CEA。
【文檔編號】G01N33/574GK104181299SQ201410462086
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】李月云, 姜麗萍, 韓健, 李法瀛, 董云會(huì) 申請人:山東理工大學(xué)