一種利用花粉作為固相萃取劑的樣品前處理方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種采用天然材料花粉作為固相萃取吸附劑的樣品前處理方法。該方法首先通過極性溶劑索氏提取清洗，然后干燥，即得到花粉材料，該材料的清洗方法簡單，安全易實施，原料便宜易得。利用該制備方法得到的材料重現(xiàn)性好，其作為固相萃取的填料用于植物、食品、環(huán)境和生物樣品中極性化合物或含n電子化合物的分離和富集，具有除雜效果好，回收率高，穩(wěn)定性好等特點。
【專利說明】-種利用花粉作為固相萃取劑的樣品前處理方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種采用天然產(chǎn)物花粉作為固相萃取的吸附 介質(zhì)的樣品前處理方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 固相萃?。╯olid phase extraction,固相萃?。┦墙陙戆l(fā)展迅速的樣品前處 理方法，其原理是基于待測物在液相溶劑和固相吸附劑之間的分配不同來進行保留和洗脫 的。相比于傳統(tǒng)的液液萃取，固相萃取具有簡單、省時、不易乳化、有機溶劑消耗量低等優(yōu) 點，并同時能滿足高回收率和高靈敏度的分析要求，因而被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜基體中痕量分 析物的萃取檢測。對于固相萃取來說，吸附劑的選擇是關(guān)鍵，然而大多數(shù)吸附劑的合成與制 備過程較長，操作繁瑣，變相增加了整個樣品前處理的時間。
[0003] 隨著人們對綠色分析化學(xué)重視程度的提高，天然吸附劑顯示出廣闊的應(yīng)用前景。 與傳統(tǒng)的合成吸附劑相比，天然吸附劑具有毒性小、來源廣、成本低和處理簡單等獨特優(yōu) 點。
[0004] 花粉是植物的雄性繁殖細胞，體積較小，粒徑一般在10-100 μ m。花粉由花粉壁和 原生質(zhì)組成，花粉壁也分為外壁和內(nèi)壁，外壁的主要成分是孢粉素。孢粉素是一種難分解、 耐高溫的物質(zhì)，穩(wěn)定性高，具有抗強酸、堿的特性，不溶于有機酸、無機酸、無機鹽、脂溶劑 等，它使花粉外壁變得非常牢固，保護花粉營養(yǎng)物質(zhì)不受外界干擾。目前已有大量文獻報 道孢粉素的分子結(jié)構(gòu)，由紅外光譜、拉曼光譜等實驗數(shù)據(jù)表明，花粉外壁含有極性羥基和疏 水性芳香基等功能團，可以與分析物發(fā)生疏水作用、作用、親水作用和氫鍵作用等，因 此可作為理想的固相萃取萃取材料。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明針對上述問題，采用簡單的清洗步驟，首次將天然產(chǎn)物花粉直接用作固相 萃取的填料用于萃取分析。
[0006] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案具體如下：
[0007] -種利用花粉作為固相萃取劑的樣品前處理方法，包括以下步驟：首先將經(jīng)過清 洗的花粉裝入帶有篩板的固相萃取空柱管中，不斷敲打使填料填充均勻，上端蓋上篩板壓 緊；然后用有機溶劑活化固相萃取柱體，然后在重力作用下使樣品溶液流過固相萃取柱，接 著加入清洗液洗去基體雜質(zhì)，最后使用洗脫液將分析物洗脫收集到離心管中。
[0008] 所述的有機溶劑為丙酮、正己烷、乙腈中的一種。
[0009] 所述花粉的清洗方式包括以下步驟：將粒徑為50 μ m的未破壁花粉置于索氏提取 器中，然后加入極性有機溶劑，加熱回流清洗，待花粉表面的雜質(zhì)去除后，60°C真空干燥即 可得到花粉固相萃取吸附劑。
[0010] 清洗花粉所用的極性有機溶劑為甲醇、異丙醇、乙腈、丙酮中的一種。
[0011] 所述的花粉為天然花粉。
[0012] 花粉作為固相萃取吸附劑在樣品中痕量化合物的富集和凈化中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明采用花粉作為固相萃取的吸附劑：由于花粉的外壁相當(dāng)穩(wěn)定，具有耐高 溫，抗強酸、強堿的特性，以及不溶于有機酸、無機酸、無機鹽、脂溶劑等性質(zhì)，且花粉外壁 富含極性羥基功能團，具有親水性，能夠與極性化合物如農(nóng)藥、生物堿、抗氧化劑等產(chǎn)生親 水作用、氫鍵作用等，因此花粉分離介質(zhì)能應(yīng)用于植物中激素分析、蔬果中農(nóng)殘分析及食品 中抗氧化劑含量檢測等；花粉外壁含有疏水性芳香基團，可應(yīng)用于環(huán)境水樣中有機污染物 如農(nóng)藥、多環(huán)芳烴和多氯聯(lián)苯等物質(zhì)的分析檢測。
[0014] 本方法采用真空泵提供負壓來驅(qū)動樣品溶液，在進行萃取之前，首先用有機溶劑 (如丙酮、正己烷、乙腈等）活化固相萃取柱體，然后在重力作用下使樣品溶液流過固相萃 取柱，接著采用適量體積清洗液洗去基體雜質(zhì)，最后使用合適的洗脫液將分析物洗脫收集 到離心管中，并將其在氮氣下濃縮至干，加入一定的溶液重新溶解殘渣后進入儀器進行定 量分析。
[0015] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點和有益效果：
[0016] (1)本發(fā)明花粉的清洗方法簡單，安全易實施，原料便宜易得。
[0017] (2)本發(fā)明環(huán)境友好、方法簡單、經(jīng)濟實惠，選用的天然材料性能穩(wěn)定，可直接作為 固相萃取的填料，用于復(fù)雜的植物、食品、環(huán)境和生物樣品中化合物的萃取分析。
[0018] (3)本發(fā)明的花粉固相萃取劑重現(xiàn)性好，用于植物、食品、環(huán)境和生物樣品中極性 化合物或含η電子化合物的分離和富集，具有除雜效果好，回收率高，穩(wěn)定性好等特點。
[0019] (4)本發(fā)明成功地應(yīng)用于蔬果中植物生長調(diào)節(jié)劑的分析檢測，花生油中白藜蘆醇 的萃取分析，環(huán)境水樣中殺蟲劑的含量測定等領(lǐng)域。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖1為本方法選用花粉的掃描電鏡圖。
[0021] 圖2為本方法應(yīng)用于花生油中白藜蘆醇的萃取分析，在6種花生油中檢測到的白 藜蘆醇。

【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明做進一步詳細的描述，其【具體實施方式】可從以下 實施例中得到進一步理解，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
[0023] 首先對花粉進行清洗處理：首先購買粒徑適宜（約50 μ m)的未破壁花粉，然后將 其置于索氏提取器中，然后加入極性有機溶劑，如甲醇、異丙醇、乙腈、丙酮等，加熱回流清 洗。待花粉表面的色素、油脂等雜質(zhì)去除后，60°C真空干燥即可得到花粉固相萃取吸附劑；
[0024] 實施例1 :花粉應(yīng)用于蔬果中植物生長調(diào)節(jié)劑的分析檢測
[0025] 八種常見的蔬果（黃瓜、豆芽、茄子、西紅柿、西瓜、桃子、蘋果和雪梨），分別稱取 l〇g已經(jīng)均質(zhì)的蔬果樣品于50mL塑料離心管中，加入15mL含1%乙酸的乙腈溶液，加入 1. 5g乙酸鈉、6g硫酸鎂、10g氯化鈉，漩潤混合提取5min，以9000r/min離心lOmin，取上清 液待測。
[0026] 準確稱取0. 4g花粉于3mL帶有篩板的固相萃取空柱管中，不斷敲打使其填充均 勻，上端蓋上篩板壓緊；在真空泵負壓下，將2mL乙腈/水（90/10, v/v)溶液和2mL乙腈依次 通過該固相萃取萃取柱，流速小于lmL/min ;接著將上述lmL蔬果乙腈提取液加入固相萃取 柱，使其在重力作用下緩慢流過萃取柱；然后加入lmL乙腈作為清洗液，保持流速小于lmL/ min通過萃取柱，以去除吸附在柱上的殘余色素，并在真空泵負壓下將清洗液抽干；最后加 入1. 5mL乙腈/水/甲酸（70/28/2, v/v/v)溶液作為洗脫液，保持其流速小于lmL/min通 過萃取柱并在真空泵負壓下將洗脫液抽干，收集洗脫物于離心管中，置于40°C氮吹下濃縮 至干，用100uL純水溶解殘渣，取2uL進入超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS)。
[0027] 液相色譜條件：C18色譜柱（lOOmmX 3. Ommi. d，L 7 μ m);流動相A :含(λ 1 %甲酸 的水溶液，流動相Β :乙腈；進樣量2uL ;流速：0. 5mL/min ;柱溫：40°C。梯度洗脫程序（以 下百分數(shù)均為體積百分數(shù)）：lmin5% B，15min5-70% B，4min70-95% B，3min95-5% B 和 2min5% B〇
[0028] 質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧離子源（ESI);掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM); 5500V(ESI+)和-4500V(ESI_);霧化器壓力（GS1) :40psi ;氣簾氣電壓（CUR) :35psi ;輔助 氣壓力（GS2) :55psi ;離子源溫度（TEM) :600°C ;CAD :Medium ;掃描時間：0· Is。
[0029] 檢測結(jié)果：對八種蔬果的加標回收率為80. 5-117. 3%，RSD彡15. 0%。
[0030] 花粉應(yīng)用于蔬果中植物生長調(diào)節(jié)劑檢測的加標回收率（％)，相對標準偏差 (RSD%，n = 3)和實際樣品殘留量（μ g · kg^，檢測結(jié)果見以下表格。
[0031] 其中：*表示實驗所用三種有機樣品由作者種植，未添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑，以 排除花粉假陽性現(xiàn)象；Nd表示未檢出植物生長調(diào)節(jié)劑。
[0032]

【權(quán)利要求】
1. 一種利用花粉作為固相萃取劑的樣品前處理方法，其特征在于，包括以下步驟：首 先將經(jīng)過清洗的花粉裝入帶有篩板的固相萃取空柱管中，不斷敲打使填料填充均勻，上端 蓋上篩板壓緊；然后用有機溶劑活化固相萃取柱體，然后在重力作用下使樣品溶液流過固 相萃取柱，接著加入清洗液洗去基體雜質(zhì)，最后使用洗脫液將分析物洗脫收集到離心管中。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品前處理方法，其特征在于：所述的有機溶劑為丙酮、正己 烷、乙腈中的一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的樣品前處理方法，其特征在于：所述花粉的清洗方式包 括以下步驟：將粒徑為50 μπι的未破壁花粉置于索氏提取器中，然后加入極性有機溶劑， 加熱回流清洗，待花粉表面的雜質(zhì)去除后，60 °C真空干燥即可得到花粉固相萃取吸附劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的樣品前處理方法，其特征在于：所述的極性有機溶劑為甲醇、 異丙醇、乙腈、丙酮中的一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求Γ4任一項所述的樣品前處理方法，其特征在于：所述的花粉為天然 花粉。
6. 花粉作為固相萃取吸附劑在痕量化合物的富集和凈化中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N30/08GK104215494SQ201410508905
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】馮鈺锜, 盧倩, 余瓊衛(wèi) 申請人:武漢大學(xué)