一種甲氧芐啶半抗原化合物t1制備完全抗原的方法和應用的制作方法
【專利摘要】一種甲氧芐啶半抗原化合物T1制備完全抗原的方法和應用，屬于生物化工【技術領域】。本發(fā)明的甲氧芐啶半抗原化合物T1是利用嘧啶核一端的氨基衍生出活性羧基，經(jīng)過純化得到單一特異性結(jié)構(gòu)的甲氧芐啶羧基衍生物（TMP-HS），該衍生物為甲氧芐啶半抗原化合物T1，將該甲氧芐啶半抗原化合物T1與載體蛋白偶聯(lián)后形成甲氧芐啶完全抗原T1-MA-BSA。本發(fā)明的抗原或抗體可用于建立酶聯(lián)免疫吸附分析方法和膠體金試紙快速檢測法，從而用于快速檢測食品中的甲氧芐啶殘留。
【專利說明】一種甲氧芐啶半抗原化合物T1制備完全抗原的方法和應 用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種甲氧芐啶半抗原化合物Tl制備完全抗原的方法和應用，屬于生 物化工【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 三甲氧節(jié)胺啼陡（Trimethoprim，TMP )，又名甲氧節(jié)陡，和二甲氧節(jié)胺啼陡 (Diaveridine，DVD)都是一種二氨基啼陡類的二氫葉酸還原酶抑制劑，白色結(jié)晶型粉末，不 溶于水，微溶于氯仿、乙醇、丙酮，但易溶于冰乙酸等有機酸。本身抗菌能力較弱，因此常不 單獨使用，但與磺胺類、呋喃類、喹諾酮類等抗生素聯(lián)合使用，可大幅度增強抗生素的應用 效果，可治療雞白痢、禽霍亂、細菌性感染等畜禽疾病。但抗生素和協(xié)同增效劑的過度使用 和不合理用藥，使藥物過量殘留于動物性食物中，從而對人體健康造成危害。我國農(nóng)業(yè)部 和歐盟、日本等都對TMP在動物組織中的最大殘留限量值(MRL)做出了規(guī)定，其中我國規(guī) 定TMP的標志性殘留物是其本身，其在畜禽肌肉、肝腎、脂肪以及魚肉、皮等組織中的MRL 值為50yg/kg，歐盟明確規(guī)定其不能用于蛋類，日本規(guī)定其在魚類、雞組織中的MRL值為 50 μ g/kg〇
[0003] TMP和DVD的結(jié)構(gòu)式如下：

【權利要求】
1. 一種甲氧節(jié)陡半抗原化合物Tl的制備方法，其特征在于： 甲氧芐啶半抗原化合物Tl結(jié)構(gòu)簡式如下：
制備步驟為：在IOOmL的三頸瓶中依次加入IOmL吡啶、2g 丁二酸酐、5mg 4-二甲氨基 吡啶，60°C水浴加熱磁力攪拌至溶液澄清；另以IOmL吡啶溶解2. 9g甲氧芐啶并滴加到所 述三頸瓶中，繼續(xù)攪拌反應3天；采用薄層色譜法，以甲醇：三氯甲烷體積比為1 : 5作為 展開劑監(jiān)控反應進程；減壓蒸餾將溶劑全部蒸走，得到淡黃色油狀物；繼續(xù)滴加質(zhì)量體積 比為10%的NaHCO 3水溶液至不再產(chǎn)生渾濁，過濾并調(diào)節(jié)上清液在酸性條件下重結(jié)晶析出白 色固體，離心烘干即得產(chǎn)品甲氧芐啶半抗原化合物T1。
2. 用權利要求1所述方法制得的甲氧芐啶半抗原化合物Tl制備甲氧芐啶完全抗原的 方法，其特征在于：將甲氧芐啶半抗原化合物Tl與載體蛋白偶聯(lián)后制備得到甲氧芐啶完全 抗原。
3. 根據(jù)權利要求2所述甲氧芐啶半抗原化合物Tl制備甲氧芐啶完全抗原的方法，其特 征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、雞卵清白蛋白0VA、匙孔血藍蛋白KLH、血藍蛋 白LPH或人血清白蛋白HAS中的一種。
4. 根據(jù)權利要求3所述甲氧芐啶半抗原化合物Tl制備甲氧芐啶完全抗原的方法，其特 征在于：當載體蛋白為BSA時，具體步驟為： (1) 甲氧芐啶半抗原化合物Tl的活化：將甲氧芐啶半抗原化合物Tl用DMF溶解，按甲 氧芐啶半抗原化合物Tl :三正丁胺：氯甲酸異丁酯的摩爾比為1 : 1.2 : 1.2比例添加 反應物，(TC反應lh，得到活化的甲氧芐啶半抗原化合物Tl溶液； (2) 載體蛋白BSA溶液的配制：取BSA，使甲氧芐啶半抗原化合物Tl : BSA的摩爾比為 100 : 1，用0.01MpH6. 5的磷酸鹽緩沖液溶解BSA，0°C預冷30min，其中溶解后的BSA濃度 大于3mg/mL，且磷酸鹽緩沖液與DMF的體積比例為5 : 1，得到BSA溶液； (3) 甲氧芐啶完全抗原的制備：在0°C條件下，將步驟（1)所得14. 5mg/mL活化的甲氧 芐啶半抗原化合物Tl溶液lmL，慢速滴加到步驟（2)所得22mg/mL BSA溶液3mL中，(TC條 件下反應2h，然后室溫下反應12h ;用PBS緩沖液透析3天，期間換水8次，即得到甲氧芐啶 完全抗原TI-MA-BSA。
5. 用權利要求2或4所述方法制備的甲氧芐啶完全抗原的應用，其特征在于：通過甲 氧芐啶完全抗原免疫得到多克隆抗體和/或單克隆抗體，用于檢測甲氧芐啶。
【文檔編號】G01N33/543GK104370829SQ201410510867
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年9月29日 優(yōu)先權日:2014年9月29日
【發(fā)明者】匡華, 徐乃豐, 胥傳來, 徐麗廣, 馬偉, 劉麗強, 宋珊珊, 吳曉玲 申請人:江南大學