毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，屬于生物分離分析【技術(shù)領(lǐng)域】。所述方法如下：對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳，進(jìn)樣順序先后依次為：毛細(xì)管中遷移速率慢的反應(yīng)物，電泳緩沖溶液，毛細(xì)管中遷移速率快的反應(yīng)物，使遷移速率不同的反應(yīng)物在所述電泳過(guò)程的毛細(xì)管中實(shí)現(xiàn)在線反應(yīng)混和后完成電泳，分離收集電泳產(chǎn)物，對(duì)所述產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)；所述反應(yīng)物為蛋白質(zhì)和ssDNA。所述方法中兩種反應(yīng)物在毛細(xì)管電泳過(guò)程中完成在線混合及反應(yīng)，不需孵育；復(fù)合物通過(guò)在線分離，快速簡(jiǎn)便；所述方法高效，快速，且樣品用量少，利用率高，尤其適用于來(lái)源困難，價(jià)格昂貴的蛋白質(zhì)。
【專利說(shuō)明】毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，屬于生 物分離分析【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 單鏈寡核苷酸（Single-stranded DNA，ssDNA)或RNA具有特定二級(jí)結(jié)構(gòu)，可以與 蛋白質(zhì)分子形成高親和性和特異性的復(fù)合物。寡核苷酸文庫(kù)是一類含有10 13?1〇15種不同 堿基的單鏈DNA分子（ssDNA)混合物，其中可能含有一種或數(shù)種能與靶分子具有高特異性， 高親和性結(jié)合的ssDNA，即核酸適配體（Aptamer)。核酸適配體是通過(guò)指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn) 化（SELEX)技術(shù)，從隨機(jī)寡核苷酸文庫(kù)中篩選得到的,具有與靶分子高親和性和高特異性 的寡核苷酸序列配體，其特性是親和力高、特異性強(qiáng)、易制備及修飾，并且靶分子分布廣。由 于在生物，醫(yī)藥以及分子識(shí)別和檢測(cè)方面有重要的應(yīng)用價(jià)值，目前已經(jīng)發(fā)展出多種核酸適 配體的篩選方法，如親和色譜，膜過(guò)濾，磁珠分離及毛細(xì)管電泳等。
[0003] 毛細(xì)管電泳（CE)具有高效、快速以及實(shí)驗(yàn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，是新型的微量分離分析 技術(shù)，在蛋白質(zhì)的核酸適配體篩選中有廣泛的應(yīng)用。
[0004] CE用于SELEX篩選核酸適配體即為CE-SELEX。CE-SELE)(可使核酸適配體篩選周 期縮短至傳統(tǒng)SELEX技術(shù)的三分之一，大大加快了篩選效率。由于傳統(tǒng)的CE-SELEX技術(shù)中， 需將初始的ssDNA文庫(kù)與靶分子混合孵育，并需要對(duì)孵育的溫度、時(shí)間以及ssDNA文庫(kù)與靶 分子的比例做一系列優(yōu)化，使操作復(fù)雜、耗時(shí)且樣品耗費(fèi)大。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)傳統(tǒng)的CE-SELEX技術(shù)篩選適配體時(shí)，靶分子用量大、反應(yīng)條件優(yōu)化過(guò)程繁瑣 以及耗時(shí)費(fèi)力的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核 酸復(fù)合物的方法，所述方法基于毛細(xì)管電泳的在線反應(yīng)及分離方法，用于靶分子核酸適配 體的高效篩選。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用的技術(shù)方案如下。
[0007] 一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，所述在線反應(yīng)為本 領(lǐng)域常用術(shù)語(yǔ)，是指在毛細(xì)管區(qū)帶電泳時(shí)毛細(xì)管中的反應(yīng)，所述方法步驟如下：
[0008] 對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳，進(jìn)樣順序先后依次為：毛細(xì)管中遷移速率慢的反 應(yīng)物，電泳緩沖溶液，毛細(xì)管中遷移速率快的反應(yīng)物，使遷移速率不同的反應(yīng)物在所述電泳 過(guò)程的毛細(xì)管中實(shí)現(xiàn)在線反應(yīng)混和后完成電泳，分離收集電泳產(chǎn)物，對(duì)所述產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì) 管電泳-激光誘導(dǎo)熒光（CE-LIF)檢測(cè)；所述反應(yīng)物為蛋白質(zhì)和ssDNA,根據(jù)本領(lǐng)域毛細(xì)管 區(qū)帶電泳的要求制成樣品溶液后進(jìn)樣。
[0009] 優(yōu)選在電泳緩沖液中加入反應(yīng)物之一，可抑制復(fù)合物在所述電泳過(guò)程中解離，進(jìn) 而促進(jìn)較弱復(fù)合物的形成。
[0010] 其中，所述毛細(xì)管中的遷移速率可通過(guò)分別對(duì)反應(yīng)物，即蛋白質(zhì)和ssDNA進(jìn)行毛 細(xì)管區(qū)帶電泳，根據(jù)所述反應(yīng)物的出峰時(shí)間確定，先出峰的反應(yīng)物遷移速率快。
[0011] 通過(guò)改變所述反應(yīng)物的進(jìn)樣時(shí)間，即進(jìn)樣量，可獲得不同反應(yīng)物的最佳進(jìn)樣量比 例。
[0012] 所述反應(yīng)物可通過(guò)以下方法制成樣品溶液進(jìn)樣：將蛋白質(zhì)溶于純水中制成原始蛋 白質(zhì)儲(chǔ)備液，將ssDNA溶于純水中制備成原始ssDNA儲(chǔ)備液；將原始蛋白質(zhì)儲(chǔ)備液稀釋后得 到蛋白質(zhì)樣品溶液，將原始ssDNA儲(chǔ)備液稀釋后得到ssDNA樣品溶液。
[0013] 優(yōu)選確定反應(yīng)物在毛細(xì)管中的遷移速率時(shí)的毛細(xì)管區(qū)帶電泳使用涂層毛細(xì)管，可 抑制蛋白質(zhì)在管壁的吸附，可采用總長(zhǎng)度48· 5cm,有效長(zhǎng)度40cm，內(nèi)徑75 μ m的毛細(xì)管；可 使用Agilent 7100毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行所述電泳；電泳緩沖液可為硼酸硼砂溶液，可通過(guò)將 50mM的硼砂溶液與20mM的硼酸溶液按體積比為3:2混合得到硼酸硼砂溶液，pH值為8. 7 ; 進(jìn)樣條件可為：50mbar下，進(jìn)樣3s?25s,分析條件可為：分析溫度25°C，分析電壓_15kV ; 可使用UV 195nm進(jìn)行檢測(cè)。
[0014] 優(yōu)選反應(yīng)物在毛細(xì)管區(qū)帶電泳在線反應(yīng)時(shí)所使用的毛細(xì)管為涂層毛細(xì)管，可抑制 蛋白質(zhì)在管壁的吸附，可采用總長(zhǎng)度為50. 2cm，有效長(zhǎng)度為40cm，內(nèi)徑為75 μ m的涂層毛細(xì) 管；可采用Beckman P/ACE MDQ毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行所述電泳；電泳緩沖液與確定反應(yīng)物在 毛細(xì)管中的遷移速率時(shí)的毛細(xì)管區(qū)帶電泳使用的電泳緩沖液相同，可采用硼酸硼砂溶液， 可通過(guò)50mM的硼砂溶液與20mM的硼酸溶液按體積比為3:2混合得到硼酸硼砂溶液，pH值 為8. 7 ;進(jìn)樣條件可為：蛋白質(zhì)進(jìn)樣：0. 5psi,20s ;電泳緩沖液進(jìn)樣：0. 5psi，10s ;ssDNA進(jìn) 樣：0. 5psi，10s ;分析條件可為：分析溫度為25°C，分析電壓為-15kV ;可采用的毛細(xì)管電 泳-激光誘導(dǎo)焚光（CE-LIF)檢測(cè)條件為：激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm。
[0015] 有益效果
[0016] 1.本發(fā)明提供了一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，首 先進(jìn)樣遷移速率慢的反應(yīng)物，中間進(jìn)樣電泳緩沖液隔離，然后進(jìn)樣遷移速率快的反應(yīng)物，可 避免兩種反應(yīng)物提前混合，確保兩種反應(yīng)物在電泳分離開始后進(jìn)行在線反應(yīng)，在毛細(xì)管電 泳過(guò)程中，遷移速率快的反應(yīng)物會(huì)"穿越"遷移速率慢的反應(yīng)物區(qū)域，并在"穿越"過(guò)程中伴 隨復(fù)合物的形成和解離過(guò)程；由于所述方法是將反應(yīng)物在毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行在線反應(yīng)，因此對(duì) 反應(yīng)物需求量很少，且所有反應(yīng)物都在線參與反應(yīng)，該方法尤其適用于來(lái)源困難，價(jià)格昂貴 的靶標(biāo)反應(yīng)物；
[0017] 2.本發(fā)明提供了一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，在 所述電泳過(guò)程中，由于兩種反應(yīng)物是在毛細(xì)管中在線反應(yīng),省去孵育步驟，避免繁瑣操作；
[0018] 3.本發(fā)明提供了一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，在 所述電泳過(guò)程中，在電泳緩沖液中分別加入兩種反應(yīng)物之一形成背景緩沖液，可抑制復(fù)合 物在毛細(xì)管中在線反應(yīng)時(shí)解離，進(jìn)而促進(jìn)較弱復(fù)合物的形成；通過(guò)增加反應(yīng)物的進(jìn)樣量可 使復(fù)合物量增大，有益于收集得到較多的復(fù)合物；
[0019] 4.本發(fā)明提供了一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，在 所述電泳分離過(guò)程中，遷移速率快、慢的反應(yīng)物以及反應(yīng)形成的復(fù)合物根據(jù)其荷質(zhì)比大小， 依次通過(guò)毛細(xì)管末端的檢測(cè)窗口，根據(jù)復(fù)合物的遷移時(shí)間，計(jì)算出復(fù)合物遷移至毛細(xì)管出 口端的時(shí)間，進(jìn)而可在毛細(xì)管出口端收集復(fù)合物；
[0020] 5.本發(fā)明提供了一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，由 于所述反應(yīng)物在線進(jìn)行反應(yīng)，分離速度快，操作簡(jiǎn)便，有益于兩種反應(yīng)物的反應(yīng)條件優(yōu)化。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1為實(shí)施例1中毛細(xì)管區(qū)帶電泳DAD檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果圖。
[0022] 圖2為實(shí)施例2中毛細(xì)管區(qū)帶電泳LIF檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果圖。
[0023] 圖3為實(shí)施例3中毛細(xì)管區(qū)帶電泳LIF檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果圖。
[0024] 圖4為實(shí)施例4中毛細(xì)管區(qū)帶電泳LIF檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果圖。
[0025] 圖5為實(shí)施例5中電泳緩沖液為Aptl5-FAM背景緩沖液時(shí)，毛細(xì)管區(qū)帶電泳LIF 檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果圖。
[0026] 圖6為實(shí)施例5中電泳緩沖液為H-Thr背景緩沖液時(shí)，毛細(xì)管區(qū)帶電泳LIF檢測(cè) 器檢測(cè)結(jié)果圖。
[0027] 圖7為實(shí)施例6中毛細(xì)管區(qū)帶電泳LIF檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0028]為了充分說(shuō)明本發(fā)明的特性以及實(shí)施本發(fā)明的方式，下面給出實(shí)施例。
[0029] 以下實(shí)施例1中，15堿基H-Thr適配體（Aptl5)序列：5' -GGT TGG TGT GGT TGG-3'，29 堿基 H-Thr 適配體（Apt29)序列：5'-AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT_3'，以上適配體均購(gòu)自生工生物工程（上海）有限公司；實(shí)施例2?7中，熒光標(biāo)記15 堿基 H-Thr 適配體（Aptl5-FAM)序列：5'-FAM-GGT TGG TGT GGT TGG-3'，熒光標(biāo)記 29 堿基 H-Thr 適配體（Apt29-FAM)序列：5'-FAM-AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT-3'， 所述適配體均購(gòu)自生工生物工程（上海）有限公司；人凝血酶（H-Thr)購(gòu)自Enzo Life Science 公司；80 熒光庫(kù)：5'-AGCAGCACAGAGGTCAGATG-(40N)-CCTATGCGTGCTACCGTGAA-3'， 購(gòu)自生工生物工程（上海）有限公司。
[0030] 反應(yīng)物在毛細(xì)管區(qū)帶電泳在線反應(yīng)所使用的毛細(xì)管為涂層毛細(xì)管，涂層毛細(xì)管購(gòu) 自河北邯鄲開發(fā)區(qū)奧泰克生物科技有限公司；毛細(xì)管在線反應(yīng)采用Beckman P/ACE MDQ毛 細(xì)管電泳儀，在毛細(xì)管出口端配備LIF檢測(cè)器，檢測(cè)器檢測(cè)條件為：激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波 長(zhǎng)520nm ;所用涂層毛細(xì)管外包硅膠層，總長(zhǎng)度為50. 2cm，有效長(zhǎng)度為40cm，內(nèi)徑為75 μ m ; 電泳緩沖液是pH值為8· 7的硼酸硼砂溶液，通過(guò)將50mM的硼砂溶液與20mM的硼酸溶液按 體積比為3:2混合得到。
[0031] 實(shí)施例1
[0032] 原始Aptl5儲(chǔ)備液制備：將購(gòu)買的Aptl5晶體狀，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，力口 入純水配制成1. OX l(T4mol/L的原始Aptl5儲(chǔ)各液。
[0033] 原始Apt29儲(chǔ)備液制備：將購(gòu)買的Apt29晶體狀，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，力口 入純水配制成1. OX l(T4mol/L的原始Apt29儲(chǔ)備液。
[0034] 原始H-Thr儲(chǔ)備液制備：將購(gòu)買的H-Thr晶體狀，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心5min，加入 純水配制成1. OX l〇_4mol/L的原始H-Thr儲(chǔ)備液。
[0035] ⑴將原始Aptl5儲(chǔ)備液用純水稀釋得到濃度為1· 〇X l〇_5m〇l/L的Aptl5樣品溶 液，采用Agilent 7100毛細(xì)管電泳儀，經(jīng)50mbar壓力進(jìn)樣l〇s，以pH值為8. 7的硼酸硼砂 溶液為電泳緩沖液，在總長(zhǎng)度48· 5cm，有效長(zhǎng)度40cm，內(nèi)徑75 μ m的毛細(xì)管中進(jìn)行毛細(xì)管區(qū) 帶電泳，電泳分析時(shí)間為2〇min，分析電壓為-15KV,分析溫度為25°C ;將原始H-Thr儲(chǔ)備液 用純水稀釋得到H-Thr樣品溶液，將10 μ L濃度為1· Ο X l(T5m〇l/L的H-Thr樣品溶液，采用 Agilent 7100毛細(xì)管電泳儀，經(jīng)50mbar壓力進(jìn)樣10s，以pH值為8. 7的硼酸硼砂溶液為電 泳緩沖液，在總長(zhǎng)度48. 5cm，有效長(zhǎng)度40cm，內(nèi)徑75 μ m的毛細(xì)管中進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳， 電泳分析時(shí)間為20min，分析電壓為-15KV，分析溫度為25°C，毛細(xì)管的出口端為正極，入口 端為負(fù)極，Aptl 5和H-Thr的DAD檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果如圖1左圖所示。
[0036] 圖1左圖下方譜線為Aptl5譜線，在4. 5min處產(chǎn)生信號(hào)峰；圖1左圖上方譜線為 H-Thr譜線，由于H-Thr對(duì)毛細(xì)管壁吸附性較強(qiáng)，所以在lOmin以后出現(xiàn)很寬的峰。由此可 見，在毛細(xì)管中遷移速率：Aptl 5>H-Thr。由于Aptl5-FAM和Aptl5在毛細(xì)管中遷移速率基 本一致，所以在毛細(xì)管中遷移速率：Aptl5-FAM>H-Thr。
[0037] (2)將步驟（1)中的Aptl5換成Apt29,其余同步驟⑴，Apt29和H-Thr的DAD檢 測(cè)器檢測(cè)結(jié)果如圖1右圖所示。
[0038] 圖1右圖下方譜線為Apt29譜線，在6min處產(chǎn)生信號(hào)峰；圖1右圖上方譜線為 H-Thr譜線，由于H-Thr對(duì)毛細(xì)管壁吸附性較強(qiáng)，所以在lOmin以后出現(xiàn)很寬的峰。由此可 見，在毛細(xì)管中遷移速率：Apt29>H-Thr。由于Apt29-FAM和Apt29在毛細(xì)管中遷移速率基 本一致，所以在毛細(xì)管中遷移速率：Apt29-FAM>H-Thr。
[0039] 實(shí)施例2
[0040] 原始Apt29-FAM儲(chǔ)備液制備：將購(gòu)買的Apt29-FAM晶體狀，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心 5min,加入純水配制成1. OX l(T4mol/L的原始Apt29-FAM儲(chǔ)備液；將原始Apt29-FAM儲(chǔ)備液 用純水稀釋得到1. 〇X l(T6mol/L的Apt29-FAM樣品溶液；將實(shí)施例1制得的原始H-Thr儲(chǔ) 備液用純水稀釋得到1. 〇X l(T6mol/L的H-Thr樣品溶液。
[0041] (1)在Beckman P/ACE MDQ毛細(xì)管電泳儀中進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳，分別取H-Thr 樣品溶液、電泳緩沖液和Apt29-FAM樣品溶液，運(yùn)行時(shí)首先進(jìn)樣遷移速率慢的H-Thr樣品 溶液，然后進(jìn)樣電泳緩沖液，最后進(jìn)樣遷移速率快的Apt29-FAM樣品溶液，進(jìn)樣條件如下： H-Thr 進(jìn)樣：0. 5psi，20s，電泳緩沖液進(jìn)樣：0. 5psi，10s，Apt29_FAM進(jìn)樣：0· 5psi，10s，電泳 分析時(shí)間為20min，分析電壓為-15KV，分析溫度為25°C，在毛細(xì)管區(qū)帶電泳過(guò)程中所述兩 種樣品溶液在毛細(xì)管中進(jìn)行混合形成復(fù)合物完成電泳，毛細(xì)管的出口端為正極，入口端為 負(fù)極，進(jìn)行毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)，LIF檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果如圖2上方譜線所示。
[0042] (2)進(jìn)樣時(shí)只進(jìn)樣Apt29-FAM，其余步驟同步驟（1)，LIF檢測(cè)器檢測(cè)結(jié)果如圖2下 方譜線所示。
[0043] 由圖2下方譜線可知，在6min處產(chǎn)生信號(hào)峰，所述信號(hào)峰為Apt29-FAM信號(hào)峰。 由圖2上方譜線可知，在6. 5min處產(chǎn)生信號(hào)峰，比下方譜線Apt29-FAM信號(hào)峰出峰時(shí)間慢 0. 5min，是由于電泳過(guò)程中Apt29-FAM要穿過(guò)一段H-Thr,因此其遷移速率減慢，所以確定 6. 5min信號(hào)峰為Apt29-FAM信號(hào)峰；與下方譜線對(duì)比，上方譜線中Apt29_FAM信號(hào)峰峰高 降低，并在11. 5min產(chǎn)生了新的信號(hào)峰，是由于部分Apt29-FAM與H-Thr反應(yīng)生成H-Thr和 Apt29-FAM復(fù)合物，所以初步確定11. 5min信號(hào)峰為H-Thr和Apt29_FAM復(fù)合物峰。

【權(quán)利要求】
1. 一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方法，其特征在于：所述方 法步驟如下： 對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳，進(jìn)樣順序先后依次為：毛細(xì)管中遷移速率慢的反應(yīng)物， 電泳緩沖溶液，毛細(xì)管中遷移速率快的反應(yīng)物，使遷移速率不同的反應(yīng)物在所述電泳過(guò)程 的毛細(xì)管中實(shí)現(xiàn)在線反應(yīng)混和后完成電泳，分離收集電泳產(chǎn)物，對(duì)所述產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電 泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)；所述反應(yīng)物為蛋白質(zhì)和ssDNA。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：在電泳緩沖液中加入反應(yīng)物之一。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：所述反應(yīng)物在毛細(xì)管中的遷移速率通過(guò)分別對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電 泳，根據(jù)所述反應(yīng)物的出峰時(shí)間確定，先出峰的反應(yīng)物遷移速率快。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：所述反應(yīng)物通過(guò)以下方法制成樣品溶液進(jìn)樣：將蛋白質(zhì)溶于純水中制成 原始蛋白質(zhì)儲(chǔ)備液，將ssDNA溶于純水中制備成原始ssDNA儲(chǔ)備液；將原始蛋白質(zhì)儲(chǔ)備液稀 釋后得到蛋白質(zhì)樣品溶液，將原始ssDNA儲(chǔ)備液稀釋后得到ssDNA樣品溶液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：所述毛細(xì)管為涂層毛細(xì)管。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或5所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合 物的方法，其特征在于：使用Beckman P/ACE MDQ毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行所述電泳，毛細(xì)管總長(zhǎng) 度為50. 2cm,有效長(zhǎng)度為40cm,內(nèi)徑為75 μ m,電泳緩沖液為硼酸硼砂溶液，進(jìn)樣條件為：蛋 白質(zhì)進(jìn)樣：〇· 5psi，20s，電泳緩沖液進(jìn)樣：0· 5psi，10s，ssDNA進(jìn)樣：0· 5psi，10s，分析條件 為：分析溫度為25°C，分析電壓為_15kV，毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)條件為：激發(fā)波 長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：所述毛細(xì)管為涂層毛細(xì)管。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3或7所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的 方法，其特征在于：使用Agilent 7100毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行所述電泳，涂層毛細(xì)管總長(zhǎng)度為 48. 5cm，有效長(zhǎng)度為40cm，內(nèi)徑為75 μ m，電泳緩沖液為硼酸硼砂溶液，進(jìn)樣條件為：50mbar 下，進(jìn)樣3s?25s，分析條件為：分析溫度25°C，分析電壓-15kV ;使用UV 195nm進(jìn)行檢測(cè)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：所述硼酸硼砂溶液的pH值為8. 7。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種毛細(xì)管電泳在線反應(yīng)分離蛋白質(zhì)-寡核酸復(fù)合物的方 法，其特征在于：所述硼酸硼砂溶液的pH值為8. 7。
【文檔編號(hào)】G01N27/447GK104297325SQ201410512777
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月29日
【發(fā)明者】屈鋒, 胡猷浩, 吳景剛, 趙新穎 申請(qǐng)人:北京理工大學(xué)