一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡及其制備方法和使用方法
【專利摘要】一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡及其制備方法和使用方法，該速測卡包括卡殼和卡殼內(nèi)的試紙條，所述試紙條包括底板、粘著在底板上依次相連的樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊；金標(biāo)墊上包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體，在反應(yīng)膜的檢測線上包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥抗體，反應(yīng)膜的控制線上包被羊抗兔二抗，其中，所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體是用納米級氯金酸膠體顆粒包被而得。本發(fā)明制備的速測卡可同時檢測至少9種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，檢測限可達到0.01mg/kg，在常溫下可穩(wěn)定保存1.5年以上，特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好，并且操作簡便、快速、準(zhǔn)確，檢測時間短，可廣泛用于農(nóng)產(chǎn)品和水環(huán)境及土壤中的擬除蟲菊酯殘留快速檢測。
【專利說明】一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡及其制備方 法和使用方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種擬除蟲菊酯類農(nóng) 藥膠體金免疫層析速測卡及其制備方法和使用方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥（Pyrethriod insecticids)是一類天然仿生殺蟲劑，具有滅蟲 快、毒性低、使用安全等特點。是我國農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢出率較高的藥種之一。目前擬除 蟲菊酯類農(nóng)藥產(chǎn)量占?xì)⑾x劑類產(chǎn)量的20%，使用面積約占整個殺蟲劑使用面積的25%。由 于部分?jǐn)M除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留期較長，對非目標(biāo)性生物毒性較大，且具有環(huán)境內(nèi)分泌干擾 作用，因此，建立快速檢測技術(shù)具有十分重要的意義。
[0003] 目前，實驗室用于檢測擬除蟲菊酯的方法多為色譜方法或毛細(xì)管電泳方法，這類 方法檢測的周期長、成本高、操作不簡便，樣本制備復(fù)雜，幾乎都是側(cè)重于終端檢測，即使獲 得檢測結(jié)果后，可能大批的檢測材料已經(jīng)流向市場或者消費者手中。由于監(jiān)管分散、樣本分 散，實驗室方法難以及時快速、全面地從源頭和現(xiàn)場進行檢測。
[0004] 免疫膠體金技術(shù)（Immune colloidal gold technique)是以膠體金作為失蹤標(biāo)志 物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸（HAuC14)在還原劑如白 磷、抗壞血酸、檸檬酸鈉等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種 穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱膠體金。膠體金在弱堿性環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基 團形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。膠體金標(biāo)記 技術(shù)是免疫層析快速診斷的核心技術(shù)，它以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)， 其實質(zhì)是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。根據(jù)膠體金的一些物理性 狀，如高電子云密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物特性，因而使膠 體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。已有的免疫學(xué)檢測方法由 于沒有較好的寬譜抗體，檢測的靈敏度和穩(wěn)定性不高，難以滿足現(xiàn)場快速檢測的需要。利用 寬譜抗體建立免疫膠體金速測卡是目前農(nóng)藥殘留檢測領(lǐng)域的一個重要的發(fā)展方向。
[0005] 目前，將現(xiàn)有的免疫膠體金技術(shù)應(yīng)用到檢測農(nóng)藥殘留，仍然存在許多問題，如，特 異性差，穩(wěn)定性差，靈敏度不高，成本高，操作不簡便，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需對現(xiàn)有免疫 金技術(shù)進行改進，研制特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好的檢測多種擬除蟲菊酯類 農(nóng)藥的新方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡及其制備方 法和使用方法，克服了現(xiàn)有技術(shù)難以實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測農(nóng)產(chǎn)品、水環(huán)境及土壤中擬除蟲菊 酯類農(nóng)藥殘留的難題，可用于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的現(xiàn)場快速檢測盒篩查。
[0007] 為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0008] -種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，包括卡殼和卡殼內(nèi)的試紙條，所 述試紙條包括底板、粘著在底板上依次相連的樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊；所述卡殼 上開有加樣孔和觀察窗；所述加樣孔設(shè)于對應(yīng)所述樣品墊上方殼體，所述觀察窗設(shè)于對應(yīng) 所述反應(yīng)膜上方殼體，所述反應(yīng)膜上設(shè)有檢測線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上包被擬除蟲菊酯 類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體，在反應(yīng)膜的檢測線上包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體，反應(yīng)膜的質(zhì) 控線上包被羊抗兔二抗，其中，所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體為將擬除蟲菊酯類農(nóng) 藥寬譜抗體偶聯(lián)到20?25nm氯金酸膠體顆粒表面所得。
[0009] 進一步，所述樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊之間設(shè)有1?2mm的重疊區(qū)；所述檢 測線和質(zhì)控線間隔0. 5?1. 0cm。
[0010] 所述底板為PVC板，所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜。所述樣品墊由玻璃纖維膜或濾 紙制成，所述吸水紙由濾紙制成。
[0011] 又，所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體為擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜多克隆抗體。
[0012] 所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體的標(biāo)金量是14?16 μ g/mL,金標(biāo)墊上包被 的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體的濃度為14?16 μ g/mL。
[0013] 本發(fā)明擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體偶聯(lián)到氯金酸膠體顆粒表面所得時，所用氯金 酸膠體顆粒溶液的pH值為8. 0?8. 5。
[0014] 再，所述反應(yīng)膜的檢測線上包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體的濃度為0.8? 1. 4mg/mT,n
[0015] 本發(fā)明所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡的制備方法，包括如下步 驟：
[0016] 1)將樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊依次粘貼在底板上制成試紙條；
[0017] 2)將擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體用20?25nm氯金酸膠體顆粒包被，制得蛋白濃 度為14?16 μ g/mL擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體，噴涂于金標(biāo)墊上，干燥；再將蛋白濃 度為0. 8?1. 4 μ g/mL的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體噴涂于反應(yīng)膜上的檢測線位置，36? 37°C干燥；然后將羊抗兔二抗（親和層析純化）噴涂于反應(yīng)膜上的質(zhì)控線位置，干燥后將試 紙條裝到卡殼內(nèi)制備成速測卡。
[0018] 進一步，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體用納米金顆粒包被的具體方法是：取20? 25nm氯金酸膠體顆粒溶液至小試管中，離心，出去上清液，用等體積超純水懸浮，調(diào)節(jié)pH值 為8. 0?8. 5,隨后將擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體緩緩滴入納米金顆粒懸液，室溫震蕩，再 滴加 BSA，使BSA的終濃度為0. 1 % (體積濃度），室溫震蕩，以封閉納米金顆粒上為結(jié)合的 位點，避免非特異性吸附。離心，除去多余的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體和BSA，超純水懸 浮，洗滌，完成納米金顆粒與擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體的偶聯(lián)，得到擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金 標(biāo)寬譜抗體，其中，標(biāo)金量是14?16 μ g/mL。
[0019] 本發(fā)明所述一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡的使用方法，包括如下 步驟：
[0020] 1)待測樣品的前處理：若待測樣品為水和植物組織提取液或土壤水提液等液體 物質(zhì)時，可直接取50 μ 1待測樣品檢測。若待測樣品為植物葉片、莖干、種子等固體物質(zhì)時， 則需要將待測樣品進行預(yù)處理，即將待測樣品磨碎，加入樣品處理液，靜置后取50μ1檢 測。其中，所述樣品處理液為磷酸鹽緩沖液（包括磷酸鈉緩沖液和磷酸鉀緩沖液）。
[0021] 2)檢測：將所取樣品滴入加樣孔內(nèi)，樣品在毛細(xì)作用下沿著樣品墊遷移，室溫作 用5?lOmin，觀察結(jié)果。
[0022] 3)結(jié)果判斷：
[0023] 陽性：質(zhì)控線、檢測線均呈現(xiàn)紅色條帶，說明樣本中有擬除蟲菊酯類農(nóng)藥存在。
[0024] 陰性：質(zhì)控線呈現(xiàn)紅色條帶，檢測線不呈現(xiàn)紅色條帶，說明樣本中沒有擬除蟲菊酯 類農(nóng)藥存在。
[0025] 失效：質(zhì)控線、檢測線均不呈現(xiàn)紅色條帶或僅有檢測線呈現(xiàn)紅色條帶，說明試紙條 失效。
[0026] 本發(fā)明所述膠體金免疫層析速測卡主要針對二型擬除蟲菊酯類農(nóng)藥進行檢測，擬 除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體的標(biāo)金量是14?16 μ g/mL，金標(biāo)墊上包被的擬除蟲菊酯類 農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體的濃度為14?16 μ g/mL，所述反應(yīng)膜的檢測線上包被擬除蟲菊酯類農(nóng) 藥寬譜抗體的濃度為〇. 8?1. 4mg/mL，在這樣的條件下，反應(yīng)的靈敏度最高，結(jié)合特性性最 好，試紙條最穩(wěn)定。本發(fā)明整個檢測過程在5?lOmin內(nèi)完成，操作簡單、快速，且不需任何 儀器。
[0027] 本發(fā)明的有益效果：
[0028] 1)本發(fā)明首次選用擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體用于快速檢測農(nóng)藥殘留，擬除蟲菊 酯類農(nóng)藥寬譜抗體是由最大程度突出和保留擬除蟲菊酯類農(nóng)藥共性結(jié)構(gòu)的分子制備成，大 幅度提高了與多種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥抗原分子結(jié)合的特異性。
[0029] 2)本發(fā)明首次選用納米級氯金酸膠體顆粒來包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體，納 米級顆粒包被抗體優(yōu)于常規(guī)膠體金顆粒包被，納米級顆粒包被提高了與抗體結(jié)合的靜電引 力，不影響抗體的功能和效價，同時，納米級顆粒標(biāo)記抗體與硝酸纖維素膜結(jié)合的穩(wěn)定性大 幅度提1?。
[0030] 3)本發(fā)明首次選用羊抗兔二抗，該抗體效價優(yōu)于羊抗鼠抗體，同時便于大量制備 和純化。
[0031] 4)本發(fā)明制備的速測卡可同時檢測至少9種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，檢測限可達到 0. Olmg/kg，在常溫下可穩(wěn)定保存1. 5年以上，特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好，并且操作簡 便、快速、準(zhǔn)確，檢測時間短，可廣泛用于農(nóng)產(chǎn)品和水環(huán)境及土壤中的擬除蟲菊酯殘留快速 檢測。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0032] 圖1為本發(fā)明實施例速測卡的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0033] 圖2為本發(fā)明實施例速測卡的側(cè)面結(jié)構(gòu)示意圖；
[0034] 圖3為本發(fā)明實施例卡殼的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0035] 圖4為本發(fā)明實施例的檢測結(jié)果呈陽性示意圖；
[0036] 圖5為本發(fā)明實施例的檢測結(jié)果呈陰性示意圖；
[0037] 圖6為本發(fā)明實施例的檢測結(jié)果呈失效示意圖之一；
[0038] 圖7為本發(fā)明實施例的檢測結(jié)果呈失效示意圖之二。

【具體實施方式】：
[0039] 以下結(jié)合具體實施例進一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0040] 實施例1 :
[0041] 參見圖1?7, 一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其包括卡殼1和卡 殼1內(nèi)的試紙條2,其中，所述試紙2包括底板3、粘著在底板3上依次相連的樣品墊4、金 標(biāo)墊5、反應(yīng)膜6和吸水墊7。所述卡殼1上設(shè)有加樣孔8和觀察窗9,所述加樣孔8設(shè)于 對應(yīng)所述樣品墊4上方殼體，所述觀察窗9設(shè)于對應(yīng)所述反應(yīng)膜6上方殼體。所述依次相 連的樣品墊4、金標(biāo)墊5、反應(yīng)膜6和吸水墊7之間設(shè)有1?2mm的重復(fù)區(qū)。所述底板3為 PVC板，所述反應(yīng)膜6為硝酸纖維素膜。所述樣品墊4由玻璃纖維或濾紙制成，所述吸水墊 7由濾紙制成。
[0042] 本實施例中金標(biāo)墊5包被擬除蟲菊酯類寬譜抗體-納米級膠體金結(jié)合物。
[0043] 所述反應(yīng)膜6上設(shè)有包被擬除蟲菊酯類寬譜抗體的檢測線61和包被羊抗兔二抗 IgG的質(zhì)控線62,所述檢測線61和所述質(zhì)控線62間隔0. 5cm。
[0044] 本實施例擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡的制備過程如下：
[0045] 1)偶聯(lián)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體到納米金顆粒表面的具體方法是：本實施 例使用的納米金顆粒是由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物安全評價與檢測實驗室合成，量取l〇ml 20nm氯金酸膠體顆粒溶液至小試管中，離心（lOOOOrpm，lOmin)，出去上清液，用等體積超 純水懸浮，調(diào)節(jié)pH值為8. 0,隨后將親和層析純化后的0. 3ml擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體 (寬譜抗體由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物安全評價與檢測實驗室制備）緩緩滴入納米金顆粒懸 液，室溫震蕩2h，再滴加1 % BSA，使BSA的終濃度為0. 1 %，室溫震蕩2h，以封閉納米金顆粒 上為結(jié)合的位點，避免非特異性吸附。離心（8000rpm，lOmin)，除去多余的擬除蟲菊酯類農(nóng) 藥寬譜抗體和BSA，超純水懸浮，重復(fù)洗滌3次，完成納米金顆粒與擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜 抗體的偶聯(lián)，制備好的納米金標(biāo)抗體可存放在4°C冰箱備用。其中，納米金標(biāo)抗體的標(biāo)金量 是 16 μ g/mL〇
[0046] 2)將制備的16 μ g/mL納米金標(biāo)抗體噴涂于金標(biāo)墊上，干燥；再將1. 4 μ g/mL擬除 蟲菊酯類農(nóng)藥抗體噴涂于反應(yīng)膜上的檢測線位置，36-37°C干燥；然后將16 μ g/mL羊抗兔 二抗噴涂于反應(yīng)膜上的質(zhì)控線位置，干燥后將試紙條裝到卡殼內(nèi)制備成速測卡。
[0047] 本實施例膠體金免疫層析速測卡的使用：
[0048] (1)待測樣品的前處理：若待測樣品為水和植物組織提取液或土壤水提液等液體 物質(zhì)時，可直接取50μ 1樣品檢測。若待檢測樣品為植物葉片、莖干、種子等樣品時，則需要 將樣品進行預(yù)處理，即將樣品磨碎，加入樣品處理液（5Mm PBS pH 7. 4)，靜置后取50μ 1檢 測。
[0049] (2)檢測：將所取樣品滴入加樣孔8內(nèi)，樣品溶液在毛細(xì)作用下沿著樣品墊遷移， 室溫作用5?lOmin，然后觀察窗9觀察結(jié)果。
[0050] (3)結(jié)果判斷：
[0051] 陽性：檢測線61、質(zhì)控線62、均為紅色條帶，說明樣本中有擬除蟲菊酯農(nóng)藥存在， 如圖4所示。
[0052] 陰性：檢測線61不出現(xiàn)紅色條帶，質(zhì)控線62出現(xiàn)紅色條帶，說明樣本中沒有擬除 蟲菊酯農(nóng)藥存在，如圖5所示。
[0053] 失效：檢測線61、質(zhì)控線62均不出現(xiàn)紅色條帶或僅有檢測線出現(xiàn)紅色條帶，說明 速測卡失效，如圖6、圖7所示。
[0054] 實施例2擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡的靈敏度測試
[0055] 按照實例1中的方法制備擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡。分別測試該 膠體金免疫層析速測卡對氯氰菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯、苯醚氰菊酯、氟氰菊酯、氟氯氰菊 酯、乙氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊等9種菊酯類農(nóng)藥的檢測靈敏度。分別將這9種菊酯類 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到一定濃度，能夠檢測出陽性結(jié)果的最低濃度，即為速測卡對該農(nóng)藥的檢 測靈敏度。
[0056] 經(jīng)測試，9種菊酯農(nóng)藥檢測結(jié)果均為陽性，檢出限見表1 :對10mg/kg氯氰菊酯、甲 氰菊酯、溴氰菊酯、苯醚氰菊酯、氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、乙氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊的檢 出陽性率低于5%，視檢測結(jié)果為陰性。表明該速測卡可用于多種菊酯農(nóng)藥的篩查。
[0057] 表1菊酯類農(nóng)藥的檢出限
[0058]

【權(quán)利要求】
1. 一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，包括卡殼和卡殼內(nèi)的試紙條，所述 試紙條包括底板、粘著在底板上依次相連的樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊；所述卡殼上 開有加樣孔和觀察窗；所述加樣孔設(shè)于對應(yīng)所述樣品墊上方殼體，所述觀察窗設(shè)于對應(yīng)所 述反應(yīng)膜上方殼體，所述反應(yīng)膜上設(shè)有檢測線和質(zhì)控線，其特征在于，所述金標(biāo)墊上包被擬 除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體，在反應(yīng)膜的檢測線上包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體，反 應(yīng)膜的質(zhì)控線上包被羊抗兔二抗，其中，所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體為將擬除蟲 菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體偶聯(lián)到20?25nm氯金酸膠體顆粒表面所得。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所 述底板為PVC板，所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，所述樣品墊由玻璃纖維膜或濾紙制成，所述 吸水紙由濾紙制成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所 述樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊之間設(shè)有1?2mm的重疊區(qū)；所述檢測線和質(zhì)控線間隔 0. 5 ?1. 0cm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所 述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體的標(biāo)金量是14?16 μ g/mL,金標(biāo)墊上包被的擬除蟲菊 酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體的濃度為14?16 μ g/mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，擬 除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體偶聯(lián)到氯金酸膠體顆粒表面時，所用氯金酸膠體顆粒溶液的pH 值為8.0?8. 5。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所 述反應(yīng)膜的檢測線上包被擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體的濃度為〇. 8?1. 4mg/mL。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所 述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體為擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜多克隆抗體。
8. 如權(quán)利要求1?7任一項所述擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡的制備方 法，包括如下步驟： 1) 將樣品墊、金標(biāo)墊、反應(yīng)膜和吸水墊依次粘貼在底板上制成試紙條； 2) 將擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體用20?25nm氯金酸膠體顆粒包被，制得蛋白濃度 為14?16 μ g/mL的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體，噴涂于金標(biāo)墊上，干燥；再將蛋白濃 度為0. 8?1. 4 μ g/mL的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體噴涂于反應(yīng)膜上的檢測線位置，36? 37°C干燥；然后將羊抗兔二抗噴涂于反應(yīng)膜上的質(zhì)控線位置，干燥后將試紙條裝到卡殼內(nèi) 制備成速測卡。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗 體用納米金顆粒包被的具體方法是：取20?25nm氯金酸膠體顆粒溶液至小試管中，離心， 除去上清液，用等體積超純水懸浮，調(diào)節(jié)pH值為8. 0?8. 5,隨后將擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜 抗體緩緩滴入納米金顆粒懸液，室溫震蕩，再滴加 BSA，使BSA的終濃度為0. 1 %，室溫震蕩， 以封閉納米金顆粒上為結(jié)合的位點，避免非特異性吸附；離心，除去多余的擬除蟲菊酯類農(nóng) 藥寬譜抗體和BSA，超純水懸浮，洗滌，完成納米金顆粒與擬除蟲菊酯類農(nóng)藥寬譜抗體的偶 聯(lián)，得到擬除蟲菊酯類農(nóng)藥金標(biāo)寬譜抗體，其中，標(biāo)金量是14?16 μ g/mL。
10. 如權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析速測卡的使用方法，包括 如下步驟： 1) 待測樣品的前處理：若待測樣品為液體物質(zhì)時，可直接取待測樣品檢測；若待測樣 品為固體物質(zhì)時，將待測樣品磨碎，加入樣品處理液，靜置后檢測；其中，所述樣品處理液為 磷酸鹽緩沖液； 2) 檢測：將所取樣品滴入加樣孔內(nèi)，樣品在毛細(xì)作用下沿著樣品墊遷移，室溫作用5? lOmin，觀察結(jié)果； 3) 結(jié)果判斷： 陽性：質(zhì)控線、檢測線均呈現(xiàn)紅色條帶，說明樣品中有擬除蟲菊酯類農(nóng)藥存在； 陰性：質(zhì)控線呈現(xiàn)紅色條帶，檢測線不呈現(xiàn)紅色條帶，說明樣品中沒有擬除蟲菊酯類農(nóng) 藥存在； 失效：質(zhì)控線、檢測線均不呈現(xiàn)紅色條帶或僅有檢測線呈現(xiàn)紅色條帶，說明試紙條失 效。
【文檔編號】G01N33/543GK104297470SQ201410571154
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】唐雪明, 王金斌, 武國干, 劉華, 吳瀟, 趙凱, 李鵬, 呂貝貝, 蔣瑋 申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院