基于納米金及l(fā)scm反射光模式的細胞成像方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，該方法將特異性的靶向分子組裝到納米金顆粒表面，在LSCM下可直接觀察到該探針，將其與細胞共培養(yǎng)后，可利用LSCM觀察細胞內(nèi)部及表面的納米金生物探針的數(shù)量、分布及形態(tài)。本發(fā)明方法通過種子生長法制備40-50nm的納米金，在其表面修飾與細胞表面的特異性受體相對應(yīng)的靶向分子作為生物探針，該探針能大量的粘附在細胞表面或進入細胞內(nèi)，將其與細胞共培養(yǎng)，洗滌并固定后，采用LSCM(激光掃描共聚焦顯微鏡)反射光的模式來觀察納米金的反射光，可以較為便捷的實現(xiàn)細胞的LSCM成像。
【專利說明】基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及納米材料的功能化及應(yīng)用領(lǐng)域，尤其是一種基于納米金及LSCM(激光掃描共聚焦顯微鏡)反射光模式的細胞成像方法。

【背景技術(shù)】
[0002]目前，已有許多研究表明納米金可以作為探針進入生物組織內(nèi)部探測生物分子的生理功能，進而在分子水平上解釋生命過程。由于其良好的生物相容性和無毒副作用，被廣泛的應(yīng)用在生物化學(xué)分析，生物分子標(biāo)記和檢測等領(lǐng)域。如納米金探針在免疫分析中的應(yīng)用，納米金探針在單細胞分析中的應(yīng)用，納米金探針在靶向藥物中的應(yīng)用，納米金探針在DNA檢測中的應(yīng)用等，然而在眾多應(yīng)用中，納米金的光學(xué)檢測靈敏度仍受到限制，需要結(jié)合熒光染料標(biāo)記法，表面增強拉曼散射等技術(shù)來使用，對于其應(yīng)用造成了局限。
[0003]LSCM(Lsaer scanning confocal microscope,激光掃描共聚焦顯微鏡)是一種先進的分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究儀器。它在熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，結(jié)合數(shù)據(jù)化圖像處理技術(shù)，采集組織和細胞內(nèi)熒光標(biāo)記圖像，在亞細胞水平觀察鈣等離子水平的變化，并結(jié)合電生理等技術(shù)觀察細胞生理活動與細胞形態(tài)及運動變化的相互關(guān)系。由于它的應(yīng)用范圍較廣泛，已成為形態(tài)學(xué)、分子細胞生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)和藥理學(xué)等研究領(lǐng)域中很重要的研究技術(shù)。但在上述應(yīng)用中，大部分都需要對目標(biāo)進行熒光標(biāo)記，在這過程中，熒光探針在裝載及成像過程中易發(fā)生熒光淬滅，影響實驗結(jié)果，并且實驗步驟復(fù)雜，不易操作。而納米金作為一種較為穩(wěn)定的體系，只要在其表面接上靶向分子，則能使其對細胞有特異性的靶向作用，能大量的粘附在細胞表面或進入細胞內(nèi)，然后采用激光共聚焦反射光的模式來觀察納米金的反射光，可以較為便捷地實現(xiàn)細胞的激光掃描共聚焦顯微鏡成像。在現(xiàn)有的研究中，尚未見利用激光掃描共聚焦顯微鏡反射光模式觀察納米金生物探針與細胞相互作用及細胞成像的研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0006]本發(fā)明提供一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，將特異性的靶向分子組裝到納米金顆粒表面構(gòu)成探針，在LSCM下可直接觀察到該探針，將其與細胞共培養(yǎng)后，可利用LSCM觀察細胞內(nèi)部及表面的納米金生物探針的數(shù)量、分布及形態(tài)。
[0007]優(yōu)選地，所述方法包括如下步驟:
[0008](I)采用檸檬酸三鈉還原制得金種溶液；
[0009](2)采用種子生長法制得大粒徑的納米金溶液；
[0010](3)將靶向分子加入到步驟(2)制備的納米金溶液中，混合均勻，進行組裝；
[0011](4)組裝好的溶液離心洗滌；
[0012](5)洗滌后得到納米金生物探針，將該探針用細胞培養(yǎng)基重懸??；
[0013](6)將(5)處理后的納米金生物探針加入到細胞中，于培養(yǎng)箱中與細胞共培養(yǎng)；
[0014](7)將細胞用緩沖液洗滌并用多聚甲醛固定后，即可在激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察成像。
[0015]優(yōu)選地，所述納米金溶液所用納米金的粒徑為40_50nm ;粒徑過小，超過激光共聚焦顯微鏡分辨率；粒徑過大，導(dǎo)致所制備探針過大，引起聚集或影響后期應(yīng)用。
[0016]優(yōu)選地，所述金種溶液的制備方法為:所述金種溶液的制備方法為:將I?5mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入10?30mM HAuCl4溶液400 μ L，得到1nm的金種溶液。
[0017]優(yōu)選地，所述納米金溶液的制備方法為:將所述的金種溶液在原容器中降溫至90°C，注入10-30mM HAuCl4溶液400 μ L，30min反應(yīng)結(jié)束后，重復(fù)以上步驟兩次；取出22mL樣品,注入l_5mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)本步驟4_6次，得40_50nm的納米金溶液。
[0018]優(yōu)選地，所述靶向分子為葉酸、透明質(zhì)酸、多肽分子中的一種。
[0019]優(yōu)選地，所述離心洗滌的條件為4°C，12000-5000r/min，5min，洗滌液為去離子水；轉(zhuǎn)速過低造成探針的損失，過高可能會引起探針的聚集。
[0020]優(yōu)選地，所述納米金生物探針與細胞于37°C，體積含量5% CO2的培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)時間為 30-120min。
[0021]優(yōu)選地，所述激光的波長為488_633nm。
[0022]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果:
[0023](I)本發(fā)明利用制備的納米金-靶向分子生物探針應(yīng)用于細胞的LSCM反射光模式成像，不需要熒光標(biāo)記，操作簡便。納米金-靶向分子生物探針與細胞表面受體結(jié)合明顯，在LSCM下能看到細胞表面附著有亮點(激光波長不同，顆粒反射光顏色不同)，而作為對照組的未經(jīng)靶向分子標(biāo)記的納米金細胞與共培養(yǎng)時，細胞表面無明顯亮點出現(xiàn)。
[0024](2)本發(fā)明方法無需對目標(biāo)進行熒光標(biāo)記，避免熒光探針在裝載及成像過程中發(fā)生淬滅，能直觀地觀察到納米生物探針與細胞的識別及相互作用。
[0025](3)本發(fā)明采用納米金作為一種生物相容性極佳的材料，為作為腫瘤細胞靶向治療的藥物載體提供了可能。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將會變得更明顯:
[0027]圖1為未經(jīng)靶向分子修飾的納米金生物探針與細胞共培養(yǎng)后，在LSCM反射光模式下拍攝的照片；
[0028]圖2為納米金-靶向分子生物探針與細胞共培養(yǎng)后，在LSCM反射光模式下拍攝的照片。

【具體實施方式】
[0029]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0030]實施例1
[0031]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0032](l)2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuC14溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0033](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0034](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的HA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0035](4)用去離子水洗滌3遍；
[0036](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0037](6)將納米金-HA生物探針及未經(jīng)HA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min培養(yǎng)；
[0038](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌；將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用488nm激光拍攝。
[0039]實施例2
[0040]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0041](l)2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuCl4溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0042](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得45nm的金膠溶液；
[0043](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的HA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0044](4)用去離子水洗滌3遍；
[0045](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0046](6)將納米金-HA生物探針及未經(jīng)HA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min ；
[0047](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌，將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用532nm激光拍攝。
[0048]實施例3
[0049]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0050](l)2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuCl4溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0051](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0052](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的HA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0053](4)用去離子水洗滌3遍；
[0054](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0055](6)將納米金-HA生物探針及未經(jīng)HA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min ；
[0056](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌，將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用633nm激光拍攝。
[0057]實施例4
[0058]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0059](I) ImM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入10mMHAuC14溶液400 UL,得到1nm的金種；
[0060](2)在原容器中降溫至90°C，注入1mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入ImM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0061](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的HA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0062](4)用去離子水洗滌3遍；
[0063](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0064](6)將納米金-HA生物探針及未經(jīng)HA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min培養(yǎng)；
[0065](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌；將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用488nm激光拍攝。
[0066]實施例5
[0067]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0068](I) 5mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入50mMHAuC14溶液400 UL,得到1nm的金種；
[0069](2)在原容器中降溫至90°C，注入50mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入5mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0070](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的HA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0071](4)用去離子水洗滌3遍；
[0072](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0073](6)將納米金-HA生物探針及未經(jīng)HA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min培養(yǎng)；
[0074](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌；將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用488nm激光拍攝。
[0075]實施例6
[0076]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0077](l)2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuCl4溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0078](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0079](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的FA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0080](4)用去離子水洗滌3遍；
[0081 ] (5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0082](6)將納米金-FA生物探針及未經(jīng)FA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的肺腺癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min ；
[0083](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌，將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用488nm激光拍攝。
[0084]實施例7
[0085]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0086](l)2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuCl4溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0087](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0088](3)取金膠100 μ L與100 μ L ImM巰基修飾的FA溶液室溫下攪拌60min，所得溶液于4°C, 8000r/min離心5min,去上清；
[0089](4)用去離子水洗滌3遍；
[0090](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0091](6)將納米金-FA生物探針及未經(jīng)FA修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的肺腺癌細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min ；
[0092](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌，將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用633nm激光拍攝。
[0093]實施例8
[0094]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0095](I) 2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuCl4溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0096](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0097](3)取金膠100 μ L，用0.1M的NaOH調(diào)節(jié)pH為10，加入2%的多肽溶液10 μ L，室溫下組裝30min,所得溶液于4?, 8000r/min離心5min,去上清；
[0098](4)用去離子水洗滌3遍；
[0099](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0100](6)將納米金-多肽生物探針及未經(jīng)多肽修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min ；
[0101](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌，將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用488nm激光拍攝。
[0102]實施例9
[0103]本實施例涉及一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法:具體步驟如下:
[0104](l)2.2mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入25mMHAuCl4溶液400 μ L,得到1nm的金種；
[0105](2)在原容器中降溫至90°C，注入25mM HAuCl4溶液400 μ L，約30min后反應(yīng)結(jié)束，該過程重復(fù)兩次；吸出22mL樣品，注入2.2mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)以上步驟，約4-6次,可得40-50nm的金膠溶液；
[0106](3)取金膠100 μ L，用0.1M的NaOH調(diào)節(jié)pH為10，加入2%的多肽溶液10 μ L，室溫下組裝30min,所得溶液于4?, 8000r/min離心5min,去上清；
[0107](4)用去離子水洗滌3遍；
[0108](5)用100 μ L細胞培養(yǎng)基重懸；
[0109](6)將納米金-多肽生物探針及未經(jīng)多肽修飾的納米金分別加入到兩個含900 μ L培養(yǎng)基的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)皿中，于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60min ；
[0110](7)用pH = 7.4的PBS緩沖液洗滌三遍，并用多聚甲醛固定30min后洗滌，將細胞放置LSCM下,調(diào)反射光模式,米用633nm激光拍攝。
[0111]對比例
[0112]每個實施例步驟(6)中均設(shè)有對照組。圖1為未經(jīng)修飾的金與細胞共培養(yǎng)后的LSCM反射光模式成像，圖2為經(jīng)靶向分子修飾后的金與細胞共培養(yǎng)后的LSCM反射光模式成像。從圖1-2對比可看出，由于細胞表面含有靶向分子的受體，經(jīng)該靶向分子修飾后的金與受體識別并大量富集到細胞表面(即圖2中白色亮點區(qū)域)，實現(xiàn)了細胞的成像；作為對t匕，圖1中基本看不到白色亮點的富集區(qū)。
[0113]以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1.一種基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，將特異性的靶向分子組裝到納米金顆粒表面構(gòu)成探針，在LSCM下可直接觀察到該探針與細胞共培養(yǎng)后，利用LSCM觀察細胞內(nèi)部及表面的納米金生物探針的數(shù)量、分布及形態(tài)；所述方法包括如下步驟: (1)采用檸檬酸三鈉還原制得金種溶液； (2)采用種子生長法制得大粒徑的納米金溶液； (3)將靶向分子加入到步驟(2)制備的納米金溶液中，混合均勻，進行組裝； (4)組裝好的溶液離心洗滌； (5)洗滌后得到納米金生物探針，將該探針用細胞培養(yǎng)基重懸?。? (6)將(5)處理后的納米金生物探針加入到細胞中，于培養(yǎng)箱中與細胞共培養(yǎng)； (7)將細胞用緩沖液洗滌并用多聚甲醛固定后，即可在激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察成像。
2.如權(quán)利要求1所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述納米金溶液所用納米金的粒徑為40-50nm。
3.如權(quán)利要求1所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述金種溶液的制備方法為:將l_5mM檸檬酸三鈉溶液10mL加熱攪拌，冷凝回流至沸騰，快速注入10-30mM HAuCl4溶液400 μ L，得到1nm的金種溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述納米金溶液的制備方法為:將所述的金種溶液在原容器中降溫至90°C，注入10-30mMHAuCl4溶液400μ L，30min反應(yīng)結(jié)束后，重復(fù)以上步驟兩次；取出22mL樣品，注入l_5mM的檸檬酸三鈉22mL，作為種子溶液，重復(fù)本步驟4-6次，得40_50nm的納米金溶液。
5.如權(quán)利要求1任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述靶向分子為葉酸、透明質(zhì)酸、多肽分子中的一種。
6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述離心洗滌的條件為4°C，12000-5000r/min，5min，洗滌液為去離子水。
7.如權(quán)利要求1-5任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述納米金生物探針與細胞于37°C，體積含量5% CO2的培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)時間為30_120mino
8.如權(quán)利要求1-5任一項所述的基于納米金及LSCM反射光模式的細胞成像方法，其特征在于，所述激光的波長為488-633nm。
【文檔編號】G01N21/49GK104316497SQ201410606027
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】何丹農(nóng), 胡沖婭, 顏娟, 金彩虹 申請人:上海交通大學(xué), 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司