一種海水魚類精子染色的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種海水魚類精子染色的方法，包括：(1)采集海水魚類新鮮且活力高的精子，測量精子的pH值，配制甲醛溶液并調(diào)節(jié)甲醛溶液的pH值；將精子稀釋，涂布在載玻片上；(2)待載玻片自然干燥后，先用吉姆薩染料平鋪在載玻片上染色，海水沖洗自然干燥后再復(fù)染，染好后海水再次沖洗，沖洗完后將載玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平鋪在載玻片上染色，海水沖洗自然干燥后復(fù)染，自然干燥后即可。本發(fā)明運(yùn)用此方法染色后精子頭部無破裂，形態(tài)完整，背景清晰，效果明顯，精子染色率高達(dá)99％。
【專利說明】一種海水魚類精子染色的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，涉及到一種海水魚類精子染色的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]我國是一個海水養(yǎng)殖大國，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中常常需要對海水魚類進(jìn)行催產(chǎn)繁育，而魚類精子質(zhì)量的好壞是繁育中非常重要的一個環(huán)節(jié)，直接影響胚胎受精率、孵化率和成活率等。為了解海水魚類精子的質(zhì)量，提高繁殖過程中的受精率、孵化率等指標(biāo)，需要對其精子的生物學(xué)特性進(jìn)行觀察，記錄精子形態(tài)，計(jì)算精子頭徑、鞭毛長度等數(shù)據(jù)。在對海水魚類精子進(jìn)行形態(tài)觀察時，一般有兩種方法，一種方法是對精子進(jìn)行染色后顯微鏡下拍照，相關(guān)軟件測量相應(yīng)數(shù)據(jù)，但目前所用的染色方法為單一染料染色，且海水魚和淡水魚精子都采用相同的方法，缺少針對性，導(dǎo)致染色效果不佳，圖片背景混雜，精子形態(tài)不清晰甚至變形；第二種方法是直接通過掃描電鏡進(jìn)行觀察，但這種方法只能觀察精子的外部形態(tài)，不能測量基本數(shù)據(jù)，且儀器價格昂貴，操作較為繁瑣。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供了一種海水魚類精子染色的方法，該方法針對海水魚類精子生物學(xué)特性，采用改進(jìn)后的方法固定精子后用兩種不同的染料分別染色一定的時間，海水沖洗后自然干燥，染色后的精子形態(tài)清晰，易于觀察，背景無雜色，染色效果好。
[0004]本發(fā)明的一種海水魚類精子染色的方法，包括:
[0005](I)采集海水魚類新鮮且活力高的精子，測量精子的pH值，配制甲醛溶液并調(diào)節(jié)甲醛溶液的PH值；將精子稀釋，涂布在載玻片上；
[0006](2)待載玻片自然干燥后，先用吉姆薩染料平鋪在載玻片上染色10?20min，海水沖洗自然干燥后再復(fù)染5?lOmin，染好后海水再次沖洗，沖洗完后將載玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平鋪在載玻片上染色15?25min，海水沖洗自然干燥后復(fù)染5?lOmin，自然干燥后即可。
[0007]所述步驟(I)中精子活力高于90%。
[0008]所述步驟(I)中甲醛溶液濃度為4%，用天然海水配制。
[0009]所述步驟⑴中用1% HCl或NaOH溶液調(diào)節(jié)甲醛溶液的pH值。
[0010]所述步驟⑴中將精子稀釋100倍。
[0011]所述步驟(I)中涂布載玻片的方法具體為:用吸管蘸取少量精子，滴一滴到載玻片的一端，再用膠頭滴管滴一滴甲醛溶液到精子上，用注射器針頭攪拌精子和甲醛的混合溶液，充分混勻；用另一塊干凈、邊緣光滑的載玻片沿著30°角將精子與甲醛的混合液向前輕推，使精子均勻涂布在載玻片的表面。
_2] 有益.效果
[0013]本發(fā)明采用改進(jìn)后的方法固定精子后用兩種不同的染料分別染色一定的時間，海水沖洗后自然干燥，染色后精子頭部無破裂，形態(tài)完整，背景清晰，易于觀察，效果明顯，精子染色率高達(dá)99%。

【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
[0015]實(shí)施例1
[0016]在海水魚類的繁殖季節(jié)，采集新鮮且活力高于90%的精子，用pH試紙測量精子的PH值，用天然海水配制4%的甲醛溶液，根據(jù)所測精子的pH值，用I % HCL或NaOH溶液調(diào)節(jié)甲醛的pH值，使甲醛溶液的pH值接近海水魚類精子的pH值，避免用甲醛溶液固定精子時由于滲透壓或PH的差異導(dǎo)致精子形態(tài)發(fā)生變化。用海水將精子稀釋100倍，用吸管蘸取少量稀釋后的精子，滴一滴到載玻片的一端，再用膠頭滴管滴一滴用海水調(diào)配過pH的4%甲醛溶液到精子上，用注射器針頭攪拌精子和甲醛的混合溶液，使其充分混勻。用另一塊干凈、邊緣光滑的載玻片沿著30°角將精子與甲醛的混合液向前輕推，使精子均勻涂布在載玻片的表面。
[0017]先配好吉姆薩母液(0.5g吉姆薩、33ml甘油、33ml甲醇)，將NaH2PO4和K2HPO4按I: I配成混合溶液，再將混合液與吉姆薩母液按6:1配成吉姆薩染料。待載玻片自然干燥后，滴加染料平鋪在載玻片上染色lOmin，海水沖洗自然干燥后再復(fù)染5min，染好后海水再次沖洗，沖洗完后將載玻片再次置于室內(nèi)自然干燥。等到完全干燥后，再用配好的瑞氏染料(Ig瑞氏染料、500ml甲醇)平鋪在載玻片上染色15min，海水沖洗自然干燥后復(fù)染5min，自然干燥后置顯微鏡下觀察拍照。
[0018]運(yùn)用此方法染色后精子頭部無破裂，形態(tài)完整，背景清晰，效果明顯，精子染色率聞達(dá)99 。
【權(quán)利要求】
1.一種海水魚類精子染色的方法，包括: (1)采集海水魚類新鮮且活力高的精子，測量精子的pH值，配制甲醛溶液并調(diào)節(jié)甲醛溶液的PH值；將精子稀釋，涂布在載玻片上； (2)待載玻片自然干燥后，先用吉姆薩染料平鋪在載玻片上染色10?20min，海水沖洗自然干燥后再復(fù)染5?lOmin，染好后海水再次沖洗，沖洗完后將載玻片再次自然干燥；等到完全干燥后，再用瑞氏染料平鋪在載玻片上染色15?25min，海水沖洗自然干燥后復(fù)染5?lOmin，自然干燥后即可。
2.如權(quán)利要求1所述的一種海水魚類精子染色的方法，其特征在于:所述步驟(I)中精子活力聞于90%。
3.如權(quán)利要求1所述的一種海水魚類精子染色的方法，其特征在于:所述步驟(I)中甲醛溶液濃度為4%，用天然海水配制。
4.如權(quán)利要求1所述的一種海水魚類精子染色的方法，其特征在于:所述步驟(I)中用I % HCl或NaOH溶液調(diào)節(jié)甲醛溶液的pH值。
5.如權(quán)利要求1所述的一種海水魚類精子染色的方法，其特征在于:所述步驟(I)中將精子稀釋100倍。
6.如權(quán)利要求1所述的一種海水魚類精子染色的方法，其特征在于:所述步驟(I)中涂布載玻片的方法具體為:用吸管蘸取少量精子，滴一滴到載玻片的一端，再用膠頭滴管滴一滴甲醛溶液到精子上，用注射器針頭攪拌精子和甲醛的混合溶液，充分混勻；用另一塊干凈、邊緣光滑的載玻片沿著30°角將精子與甲醛的混合液向前輕推，使精子均勻涂布在載玻片的表面。
【文檔編號】G01N1/30GK104406834SQ201410612064
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月4日
【發(fā)明者】黃曉榮, 章龍珍, 莊平, 趙峰, 劉鑒毅, 張濤, 宋超, 王妤, 楊剛 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所