一種溶血?jiǎng)┘捌鋺?yīng)用和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，公開(kāi)了一種溶血?jiǎng)┘捌鋺?yīng)用和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法。本發(fā)明所述溶血?jiǎng)┌环N或兩種以上陽(yáng)離子表面活性劑、一種或兩種以上小分子醇、一種或兩種以上緩沖液、一種或兩種以上可溶性無(wú)機(jī)鹽，余量為水。本發(fā)明簡(jiǎn)化溶血?jiǎng)┑慕M分，采用相適宜、易獲取的原料制備出適合對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)的新型溶血?jiǎng)?，相比?dāng)下組分較為復(fù)雜的溶血?jiǎng)┊a(chǎn)品使用更加方便快捷，溶血時(shí)間僅需要5-20s，無(wú)需特殊溫度要求即可配合電阻抗法測(cè)量?jī)x器對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)，準(zhǔn)確度較高。
【專利說(shuō)明】一種溶血?jiǎng)┘捌鋺?yīng)用和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種溶血?jiǎng)┘捌鋺?yīng)用和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 白細(xì)胞亦稱白血球，血液細(xì)胞成分之一，為無(wú)色圓形細(xì)胞，比紅細(xì)胞略大，有細(xì)胞 核?？煞譃槭戎行粤＜?xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞五種。在機(jī) 體發(fā)生炎癥或疾病時(shí)，白細(xì)胞數(shù)往往發(fā)生變化，故白細(xì)胞分析是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室血液檢驗(yàn)中最 常采用的檢測(cè)項(xiàng)目之一。白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類不僅對(duì)疾病的診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后 分析均有重要意義，而且對(duì)健康狀態(tài)的評(píng)估也有一定的價(jià)值。
[0003] 白細(xì)胞中的嗜堿性粒細(xì)胞大小約為10?15um，呈圓形或橢圓形，細(xì)胞核與細(xì)胞 質(zhì)之比約為1 :2?1 :3,細(xì)胞核分葉狀，常被顆粒覆蓋，核染色質(zhì)聚集，無(wú)核仁，細(xì)胞質(zhì)含粗 大、致密、深紫色或黑色顆粒，在健康人體血液中嗜堿性粒細(xì)胞大約占白細(xì)胞總數(shù)的0. 5? 1%，嗜堿性粒細(xì)胞增多見(jiàn)于慢性粒細(xì)胞白血病、何杰金氏病、癌轉(zhuǎn)移、鉛鉍中毒等。
[0004] 采用瑞氏試劑對(duì)樣品染色并進(jìn)行人工鏡檢是白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù)的"金標(biāo)準(zhǔn)"，但 是隨著人們對(duì)臨床檢測(cè)要求的不斷提高，這種耗時(shí)、繁瑣的標(biāo)準(zhǔn)方法越來(lái)越不適應(yīng)如今的 臨床檢測(cè)。隨著醫(yī)學(xué)血液學(xué)的發(fā)展，各種類型的血細(xì)胞分析儀配合專用試劑（如溶血?jiǎng)?等）的檢測(cè)方法在國(guó)內(nèi)得到了廣泛的應(yīng)用，這些全自動(dòng)的儀器先通過(guò)專用試劑處理紅細(xì)胞 (RBC)，然后采用流式技術(shù)或電阻抗的計(jì)數(shù)原理，通過(guò)獲取白細(xì)胞不同細(xì)胞器發(fā)射出的熒光 信息和散射光信息將白細(xì)胞分成不同種類。
[0005] 然而，由于不同類的白細(xì)胞的體積可能差別不大，電阻抗原理這種方法只是將白 細(xì)胞簡(jiǎn)單分類成淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞，并不能將嗜堿性粒細(xì)胞區(qū)分和計(jì)數(shù)。也有的 儀器使用的是光散射原理，比如專利US3740143,使用光學(xué)方法可以將淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞， 中性粒細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞區(qū)分和計(jì)數(shù)，但由于嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量較少，這種方法也不能很 好的檢測(cè)到嗜堿性粒細(xì)胞。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)了多種用于白細(xì)胞分類的試劑，如CN2011100744709涉及一種用 于白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù)的溶血?jiǎng)┘坝猛尽Ｋ鋈苎獎(jiǎng)┯扇苎獎(jiǎng)〢與溶血?jiǎng)〣組成。溶血?jiǎng)〢 由聚氧乙烯型非離子表明活性劑、有機(jī)酸、季銨鹽陽(yáng)離子表面活性劑助溶劑、穩(wěn)定劑和滲透 壓調(diào)節(jié)劑組成；溶血?jiǎng)〣由堿性無(wú)機(jī)鹽和滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。該溶血?jiǎng)┠軌驅(qū)准?xì)胞分為 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，獲得各類白細(xì)胞數(shù)量。
[0007] 雖然上述專利記載的技術(shù)方案可以有效區(qū)分各類白細(xì)胞，但是對(duì)于僅需要區(qū)分嗜 堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞來(lái)說(shuō)，其所采用的溶血?jiǎng)┡浞捷^為復(fù)雜繁瑣，組分較多，而且使用 上也需要按照一定的操作步驟來(lái)，簡(jiǎn)便性較差。
[0008] US5196346(Didier Lefevre)公開(kāi)了一種測(cè)量白細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的溶血?jiǎng)?該溶血?jiǎng)┦褂梅请x子型表面活性劑Brij35和陰離子型表面活性劑，但這種溶血?jiǎng)?duì)使用 溫度要求高，溶血速度慢，且原料來(lái)源較為繁瑣，在使用上仍然不夠簡(jiǎn)便。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的溶血?jiǎng)?，使得該?血?jiǎng)┑娜苎俣瓤?、組分較少，使用方便，能夠正確區(qū)分嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞。
[0010] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0011] 一種溶血?jiǎng)?，包含?br> [0012] 一種或兩種以上陽(yáng)離子表面活性劑、一種或兩種以上小分子醇、一種或兩種以上 緩沖液、一種或兩種以上可溶性無(wú)機(jī)鹽，余量為水。
[0013] 本發(fā)明針對(duì)目前配方較為復(fù)雜的各種溶血?jiǎng)?，選擇適宜的組分組合使用，研制出 一種新型的可用于準(zhǔn)確區(qū)分嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的溶血?jiǎng)褂梅奖悴⑶胰苎俣?較快，彌補(bǔ)了現(xiàn)有溶血?jiǎng)┑娜毕荨?br> [0014] 其中，作為優(yōu)選，所述溶血?jiǎng)﹑H值為1. 5-4. 5,包含濃度為0. lg/L-100g/L的一種 或兩種以上陽(yáng)離子表面活性劑、濃度為〇_〇lg/L-50g/L的一種或兩種以上小分子醇、濃度 為0· 001m〇l/L-lm〇l/L的一種或兩種以上緩沖液、濃度不大于30g/L的一種或兩種以上可 溶性無(wú)機(jī)鹽。余量為水。
[0015] 更優(yōu)選地，所述溶血?jiǎng)﹑H值為2_3,包含濃度為lg/L-20g/L的一種或兩種以 上陽(yáng)離子表面活性劑、濃度為lg/L_20g/L的一種或兩種以上小分子醇、濃度為5mmol/ L - 200mmol/L的一種或兩種以上緩沖液、濃度不大于20g/L的一種或兩種以上可溶性無(wú)機(jī) 鹽。
[0016] 作為優(yōu)選，本發(fā)明溶血?jiǎng)┲兴鲫?yáng)離子表面活性劑選自季銨鹽表面活性劑或/和 吡啶季銨鹽表面活性劑；進(jìn)一步，最優(yōu)選地，所述季銨鹽表面活性劑選自十二烷基三甲基氯 化銨、十二烷基三甲基溴化銨，十四烷基三甲基氯化銨，十四烷基三甲基溴化銨，十六烷基 三甲基氯化銨、十六烷基三甲基溴化銨，所述吡啶季銨鹽表面活性劑選自十二烷基吡啶氯 化銨，十二烷基吡啶溴化銨。
[0017] 作為優(yōu)選，所述小分子醇選自甲醇、乙醇、異丙醇、苯氧甲醇。
[0018] 作為優(yōu)選，所述緩沖液選自蘋(píng)果酸、丁二酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、酒石酸、草酸、甲 酸、馬來(lái)酸、甘胺酸及它們各自的鹽，以及鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸。本發(fā)明所述緩沖液濃度還 可以根據(jù)所述溶血?jiǎng)┑膒H值加以確定。
[0019] 作為優(yōu)選，所述可溶性無(wú)機(jī)鹽選自硫酸鈉、硫酸鉀、氯化鈉、氯化鉀。
[0020] 本發(fā)明還提供一種嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法，包括：
[0021] 待測(cè)血液和本發(fā)明所述溶血?jiǎng)┮泽w積比1:500-1:100混合于電阻抗原理血液分 析儀的計(jì)數(shù)池中，反應(yīng)溫度30?40?，溶血時(shí)間為5-20秒，然后將處理好的待測(cè)血液樣品 依次通過(guò)寶石計(jì)數(shù)孔，通過(guò)檢測(cè)電壓的變化，獲得嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞數(shù)量。
[0022] 采用本溶血?jiǎng)┖?，紅細(xì)胞發(fā)生溶解，嗜堿性粒細(xì)胞不發(fā)生收縮，其他白細(xì)胞出現(xiàn) "裸核化"，示意圖見(jiàn)圖1。
[0023] 采用本發(fā)明所述溶血?jiǎng)?duì)待測(cè)血樣進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，通過(guò)電阻抗原理血液分 析儀檢測(cè)后，所獲得的嗜堿性粒細(xì)胞總數(shù)和其他白細(xì)胞總數(shù)與光學(xué)法測(cè)定的數(shù)據(jù)沒(méi)有明顯 差別，結(jié)果準(zhǔn)確度較高。
[0024] 由此，本發(fā)明還提供了本發(fā)明所述溶血?jiǎng)┰诎准?xì)胞計(jì)數(shù)和分類中的應(yīng)用以及在制 備白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類產(chǎn)品中的應(yīng)用。作為優(yōu)選，所述白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類為對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞 和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。
[0025]由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明簡(jiǎn)化溶血?jiǎng)┑慕M分，采用相適宜、易獲取的原料制備 出適合對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)的新型溶血?jiǎng)?，相比?dāng)下組分較為復(fù)雜的 溶血?jiǎng)┊a(chǎn)品使用更加方便快捷，溶血時(shí)間僅需要5-20s，無(wú)需特殊溫度要求即可配合電阻抗 法測(cè)量?jī)x器對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)，準(zhǔn)確度較高。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0026]圖1所示為采用本發(fā)明溶血?jiǎng)┖蠹t細(xì)胞、其他白細(xì)胞以及嗜堿性粒細(xì)胞的形態(tài)示 意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0027]本發(fā)明公開(kāi)了一種溶血?jiǎng)┘捌鋺?yīng)用和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法,本領(lǐng)域技術(shù)人員可以 借鑒本文內(nèi)各，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng) 域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述制備方法及產(chǎn)品 已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì) 本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0028] u下就本發(fā)麵提供的-種溶血?jiǎng)┘捌鋺?yīng)用和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)方法做進(jìn)一步說(shuō) 明。
[0029] 實(shí)施例1 :本發(fā)明所述溶血?jiǎng)?br> [0030] f二It基玉甲基氯化銨 4 7s 甲醇 甲酸 賊_1謝 氯側(cè) 掛水至 IL8 pH 2.5
[0031] 實(shí)施例2 :本發(fā)明所述溶血?jiǎng)?br> [0032] 十穴k基二甲基讓傷銨 2.1 g
[0033] 異丙醇 3g 鄰苯二甲酸 0.009mo丨 硫酸鈉 5.3g 鹽酸 5 mmol 補(bǔ)水至 1L pH 2.9
[0034] 實(shí)施例3 :本發(fā)明所述溶血?jiǎng)?br> [0035] 十四烷基三曱基溴化銨 3.5g 苯氧乙醇 4g 馬采酸 0.023mol 硫酸納 8g 硫酸 10 mmol 補(bǔ)水至 1L pH 22
[0036] 實(shí)施例4 :本發(fā)明所述溶血?jiǎng)?br> [0037] 十二烷基吡啶氯化銨 5.1 g 苯氧乙醇 3g 鄰苯二曱酸 0.016mol 氯化鉀 6.4g 盆酸 8 mmol 補(bǔ)水至 1L pH 2.6
[0038] 實(shí)施例5 :本發(fā)明所述溶血?jiǎng)?br> [0039] 十二烷基三曱基氯化銨 5.1g 苯氧乙醇 3g 酒石酸 O.OlOmol 硫酸鉀 8.1g
[0040] 鹽酸 4.:trrniol· .補(bǔ)水至 1_L 〇 Q ρΕ 2·?
[0041] 實(shí)施例6 :準(zhǔn)確性對(duì)比試驗(yàn)
[0042] 分別采用實(shí)施例1-5的溶血?jiǎng)?，按照本發(fā)明所述嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分 類計(jì)數(shù)方法，采用SC-8000A血液分析儀（電阻抗原理血液分析儀）對(duì)20例待測(cè)血樣進(jìn)行 檢測(cè)，方法如下：
[0043] 待測(cè)血液和本發(fā)明所述溶血?jiǎng)┮泽w積比1:500-1:100混合于電阻抗原理血液分 析儀的計(jì)數(shù)池中，反應(yīng)溫度3〇?4〇°C，溶血時(shí)間為5-20秒，然后將處理好的待測(cè)血液樣品 依次通過(guò)寶石計(jì)數(shù)孔，通過(guò)檢測(cè)電壓的變化，獲得嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞數(shù)量。
[0044]同時(shí)，將上述待測(cè)健康血樣采用光學(xué)法和鏡檢參考法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比三者的檢測(cè) 結(jié)果，結(jié)果見(jiàn)表1.
[0045] 表1檢測(cè)結(jié)果
[0046] L0047J

【權(quán)利要求】
1. 一種溶血?jiǎng)?，其特征在于，包含? 一種或兩種以上陽(yáng)離子表面活性劑、一種或兩種以上小分子醇、一種或兩種以上緩沖 液、一種或兩種以上可溶性無(wú)機(jī)鹽，余量為水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述溶血?jiǎng)?，其特征在于，pH值為1.5-4. 5,包含濃度為0. lg/ L-100g/L的一種或兩種以上陽(yáng)離子表面活性劑、濃度為0. 01g/L-50g/L的一種或兩種以上 小分子醇、濃度為〇. 〇〇lmol/L-lmol/L的一種或兩種以上緩沖液、濃度不大于30g/L的一種 或兩種以上可溶性無(wú)機(jī)鹽，余量為水。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述溶血?jiǎng)?，其特征在于，所述?yáng)離子表面活性劑選自季銨鹽表 面活性劑或/和吡啶季銨鹽表面活性劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述溶血?jiǎng)?，其特征在于，所述季銨鹽表面活性劑選自十二烷基 三甲基氯化銨、十二烷基三甲基溴化銨，十四烷基三甲基氯化銨，十四烷基三甲基溴化銨， 十六烷基三甲基氯化銨、十六烷基三甲基溴化銨。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述溶血?jiǎng)?，其特征在于，所述吡啶季銨鹽表面活性劑選自十二烷 基吡啶氯化銨，十二烷基吡啶溴化銨。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述溶血?jiǎng)?，其特征在于，所述小分子醇選自甲醇、乙醇、異丙 醇、苯氧甲醇。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述溶血?jiǎng)?，其特征在于，所述緩沖液選自蘋(píng)果酸、丁二酸、鄰 苯二甲酸、檸檬酸、酒石酸、草酸、甲酸、馬來(lái)酸、甘胺酸及它們各自的鹽，以及鹽酸、硫酸、磷 酸、硝酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述溶血?jiǎng)涮卣髟谟?，所述可溶性無(wú)機(jī)鹽選自硫酸鈉、硫酸 鉀、氯化鈉、氯化鉀。
9. 權(quán)利要求1所述溶血?jiǎng)┰诎准?xì)胞分類計(jì)數(shù)中的應(yīng)用或在制備白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)產(chǎn)品 中的應(yīng)用。
10. -種嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法，其特征在于，包括： 待測(cè)血液和權(quán)利要求1所述溶血?jiǎng)┮泽w積比1:500-1:100混合于電阻抗原理血液分析 儀的計(jì)數(shù)池中，反應(yīng)溫度30?40°C，溶血時(shí)間為5-20秒，然后將處理好的待測(cè)血液樣品依 次通過(guò)寶石計(jì)數(shù)孔，通過(guò)檢測(cè)電壓的變化，獲得嗜堿性粒細(xì)胞和其他白細(xì)胞數(shù)量。
【文檔編號(hào)】G01N15/10GK104297134SQ201410620796
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月5日
【發(fā)明者】馮劍軍, 朱漩, 蔣玉林 申請(qǐng)人:深圳市開(kāi)立科技有限公司