一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其制備方法和應(yīng)用。金剛烷胺人工半抗原的分子結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)，金剛烷胺人工抗原的分子結(jié)構(gòu)式如式(Ⅱ)。所述應(yīng)用是所述金剛烷胺人工抗原在制備抗金剛烷胺抗體中的應(yīng)用。本發(fā)明的金剛烷胺人工半抗原最大程度地保留了金剛烷胺的特征結(jié)構(gòu)，且具有可以與載體蛋白發(fā)生偶聯(lián)的活性基團(tuán)，可作為抗原決定簇；進(jìn)一步制備獲得的金剛烷胺人工抗原可免疫獲得親和力高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的抗金剛烷胺抗體，經(jīng)免疫新西蘭白兔獲得的免疫血清的效價(jià)高達(dá)1:70000，可用于對(duì)金剛烷胺進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的免疫檢測(cè)和免疫分析。
【專利說明】一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物化工【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種金剛烷胺人工半抗原、人工抗原及 其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 金剛烷胺可以抑制病毒穿入宿主細(xì)胞，并影響病毒的脫殼，抑制其繁殖，在臨床上 用于預(yù)防和治療人流感病毒的感染，具有價(jià)格低廉、藥效明顯等特點(diǎn)，同時(shí)也曾是帕金森綜 合癥的治療藥物。但金剛烷胺蓄積會(huì)對(duì)人體造成嗜睡、失眠、眩暈、抑郁、惡心、食欲減退等 多種不良反應(yīng)，具有一定的毒副作用。長期使用金剛烷胺還可使病毒產(chǎn)生不同程度的耐藥 性，誘導(dǎo)產(chǎn)生新型耐藥病毒。
[0003] 然而，2012年11月媒體曝出國內(nèi)養(yǎng)殖的"速生雞"從孵出到端上餐桌只需45天，不 法商販為了保證其存活，給雞喂養(yǎng)了大劑量人用藥物來抑制禽類的禽流感等病癥。2012年 12月，央視調(diào)查中稱，一些養(yǎng)殖戶為進(jìn)一步縮短養(yǎng)殖周期，讓原本已經(jīng)是速成品種的白羽雞 長得更快，偷偷喂食違禁藥物，其中包括金剛烷胺等抗病毒藥品和地塞米松等激素類藥品。 "速成雞"事件的爆發(fā)引發(fā)了全國消費(fèi)者對(duì)禽肉食品安全的廣泛關(guān)注和擔(dān)憂，對(duì)建立快速、 靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)提出了迫切需求。
[0004] 目前，對(duì)金剛烷胺的檢測(cè)主要依靠高效液相色譜法（HPLC)、氣相色譜法（GC)、薄 層色譜法（TLC)、質(zhì)譜法（MS)等，但是存在儀器昂貴，檢測(cè)費(fèi)時(shí)，并且需要專業(yè)技術(shù)人員進(jìn) 行操作，不能達(dá)到現(xiàn)代檢測(cè)對(duì)快速、準(zhǔn)確的要求。
[0005] 免疫分析法可以彌補(bǔ)以上所有缺點(diǎn)，免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結(jié)合 反應(yīng)檢測(cè)各種物質(zhì)（藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等）的分析方法，建立小分子化合物的免疫 分析方法的關(guān)鍵是能夠制造出對(duì)小分子化合物具有高親和力和高特異性的抗體。但是，由 于包括金剛烷胺在內(nèi)的大多數(shù)小分子化合物（分子量小于1000)，不具有免疫原性，即缺乏 T細(xì)胞表位而無法直接誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，故小分子物質(zhì)被稱為半抗原。通過適 當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾，在半抗原分子結(jié)構(gòu)的某個(gè)位置上帶上端部為活性基團(tuán)的連接臂，再與大分 子載體結(jié)合，生成半抗原-載體偶聯(lián)物（即人工抗原），人工抗原可以借助T細(xì)胞表位來間 接誘導(dǎo)B細(xì)胞的增殖和分化，繼而產(chǎn)生特異性抗體。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)中還未有金剛燒胺人工半抗原、人工抗原的相關(guān)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種金剛烷胺人工半抗原，該金剛烷胺人工半抗原最大程度地保留 了金剛烷胺的特征結(jié)構(gòu)，且具有可以與載體蛋白發(fā)生偶聯(lián)的活性基團(tuán)，可作為抗原決定簇。
[0008] -種金剛烷胺人工半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如（I )所示：
[0009]

【權(quán)利要求】
1. 一種金剛烷胺人工半抗原，其特征在于，其分子結(jié)構(gòu)式如（I)所示：
2. 如權(quán)利要求1所述金剛烷胺人工半抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將金剛烷胺與丁二酸酐按摩爾比1:1. 1?1.5混合，于100?105°C下攪拌反應(yīng) 16?17h，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)水-二氯甲烷萃取，取有機(jī)相，得無色油狀產(chǎn)物A; (2) 將無色油狀產(chǎn)物A、N-羥基琥珀酰亞胺、1- (3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽 酸鹽按摩爾比1:1. 35?1.5:1.35?1.5混合，于20?30°C下攪拌反應(yīng)18?20h，反應(yīng)產(chǎn) 物經(jīng)洗滌、旋蒸后，得無色油狀產(chǎn)物B; (3) 將無色油狀產(chǎn)物B與對(duì)氨基苯甲酸按摩爾比1:1混合，于pH9?10、20?30°C下 攪拌反應(yīng)3?3. 5h，反應(yīng)結(jié)束后調(diào)節(jié)pH至5?6、用乙酸乙酯萃取，取有機(jī)相，獲得如權(quán)利 要求1所述的金剛烷胺人工半抗原。
3. -種金剛烷胺人工抗原，其特征在于，其分子結(jié)構(gòu)式如（II)所示：
式（II)中，BGG為牛丙種球蛋白。
4. 如權(quán)利要求3所述金剛烷胺人工抗原的制備方法，其特征在于，包括：通過混合酸酐 法使權(quán)利要求1所述的金剛烷胺人工半抗原與牛丙種球蛋白結(jié)合，獲得如權(quán)利要求3所述 的金剛烷胺人工抗原。
5. 如權(quán)利要求4所述金剛烷胺人工抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 將所述金剛烷胺人工半抗原、三乙胺、氯甲酸異丁酯按摩爾比1:1?1. 2:1?1. 3 混合，20?30°C下攪拌反應(yīng)18?19h，反應(yīng)結(jié)束后離心取上清液； (b) 將所述上清液滴加到牛丙種蛋白溶液中，將所得混合液置于3?5°C下靜置過夜， 經(jīng)透析、離心取上清，獲得如權(quán)利要求3所述的金剛烷胺人工抗原。
6. 如權(quán)利要求5所述金剛烷胺人工抗原的制備方法，其特征在于，步驟（b)中，所述牛 丙種蛋白溶液的濃度為5mg/mL，上清液與牛丙種蛋白溶液的體積比為1:5?6。
7. 如權(quán)利要求3所述金剛烷胺人工抗原在制備抗金剛烷胺抗體中的應(yīng)用。
8. -種抗金剛烷胺抗體，其特征在于，是由權(quán)利要求3所述金剛烷胺人工抗原經(jīng)動(dòng)物 免疫得到的、可與金剛烷胺發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的球蛋白。
9. 如權(quán)利要求8所述抗金剛烷胺抗體在檢測(cè)金剛烷胺中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N33/53GK104402753SQ201410652826
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月17日
【發(fā)明者】楊華, 邵越水, 張巧艷, 錢鳴蓉, 汪建妹, 吳俐勤, 肖英平 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 杭州傲銳生物醫(yī)藥科技有限公司