一種浸染蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種浸染蛋白的方法，其步驟包括：提取植物蛋白；將植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝膠電泳，得到待染色的蛋白膠；將蛋白膠置于放有濃度為80％的核桃青皮染液的盤或皿中染色15-25分鐘；然后用乙醇脫色3-5小時(shí)即可；所述的核桃青皮染液通過(guò)如下步驟的方法制得：取核桃青皮原料洗凈，組織搗碎機(jī)搗碎取汁液，過(guò)濾去渣后快速放入加蓋的容器中；每500ml汁液加1粒維C片；加熱至65℃-75℃使其濃縮至濃度為20％-30％，于4℃冰箱保存。本發(fā)明用核桃青皮浸出液浸染蛋白，染色20分鐘，單乙醇脫色3-5小時(shí)，就可以用于識(shí)別不同的蛋白及蛋白的大小。此方法成本低廉、操作簡(jiǎn)便，能快速用于蛋白膠的染色顯示。
【專利說(shuō)明】一種浸染蛋白的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蛋白染色技術(shù)，具體是一種利用核桃青皮浸出液作為染色液浸染蛋白的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]目前，在生物科學(xué)領(lǐng)域研究蛋白質(zhì)時(shí)，經(jīng)常用到聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，以分析其功能成分的變化及作用關(guān)系，通過(guò)分析蛋白凝膠電泳后的色帶圖譜，可識(shí)別不同的蛋白，其中的顯色技術(shù)是關(guān)鍵?？捡R斯亮藍(lán)染色法是最常用的染色方法。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中配制試劑較多且都為化學(xué)合成試劑，對(duì)人體有一定的傷害，且費(fèi)時(shí)費(fèi)力(考馬斯亮藍(lán)染色后需用甲醇和乙酸復(fù)合液作為脫色液，且脫色時(shí)間通常要過(guò)夜)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]鑒于已有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種浸染蛋白的方法，該方法經(jīng)濟(jì)、環(huán)保，操作簡(jiǎn)單，工作效率高。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)解決方案是:
[0005]I)提取植物蛋白
[0006]2)將植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝膠電泳，得到待染色的蛋白膠；
[0007]3)將蛋白膠置于放有濃度為70-90%的核桃青皮染液的盤或皿中染色15-25分鐘(浸出液需淹沒(méi)膠體本身)；
[0008]4)然后用乙醇脫色3-5小時(shí)即可；
[0009]所述的核桃青皮染液通過(guò)如下方法制備得到:A)取核桃青皮原料洗凈，組織搗碎機(jī)搗碎取汁液，過(guò)濾去渣后快速放入加蓋的容器中；B)每500ml汁液加I粒維C片作為抗氧化劑；C)加熱至65°C _75°C使其濃縮至濃度為20% -30%，于4°C冰箱保存。
[0010]所述步驟3)中染色時(shí)間優(yōu)選為20分鐘。
[0011]所述步驟3)中核桃青皮染液的濃度優(yōu)選為80%。
[0012]本發(fā)明的有益效果:
[0013]核桃青皮浸出液作為純植物染液，環(huán)保性強(qiáng)，染色時(shí)間較短，本身具有抗菌殺蟲作用，因此該染色液不需加防霉抗菌劑。脫色液也較單一僅乙醇一種，操作性強(qiáng)，毒副作用較甲醇小。
[0014]總之，本發(fā)明使用純植物染液，成本低、環(huán)保；方法簡(jiǎn)單，技術(shù)難度小，易掌握；適宜于快速判定蛋白不同組分和大小的研究。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1:核桃青皮染液浸染白菜總蛋白電泳圖
[0016]具體實(shí)施方法
[0017]實(shí)施例1
[0018]1、制備核桃青皮染液:
[0019](I)取核桃青皮原料洗凈，組織搗碎機(jī)搗碎取汁液，過(guò)濾去渣后快速放入加蓋的容器中；
[0020](2)每500ml汁液加I粒維C片；
[0021](3)加熱至65°C -75°C使其濃縮至濃度為20% -30%，于4°C冰箱保存。
[0022]2、提取白菜葉片總蛋白:
[0023](I) Ig樣品加入3.5ml蛋白質(zhì)提取液，準(zhǔn)備提取液放在冰上；
[0024](2)把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置3小時(shí)；
[0025](3)用離心機(jī)離心 8000rpm 40min 4°C ；
[0026](4)提取上清液，樣品制備完成。
[0027]蛋白質(zhì)提取液:300mlUlMTris-HCl (PH8)45ml 2、甘油(Glycerol) 75ml 3、聚乙烯批咯燒酮(Polyvinylpolypyrrordone) 6g。
[0028]3、將提取出的白菜總蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝膠電泳；
[0029](I)制備分離膠和濃縮膠；
[0030](2)四泳道分別上樣20微升、18微升、16微升、14微升；
[0031](3)80V跑20分鐘，然后調(diào)高電壓到120V，直到溴酚藍(lán)跑到板底停止；
[0032]4、將跑好待染色的膠置于放有80%核桃青皮染液的盤或皿中染色20分鐘(浸出液淹沒(méi)膠體本身)；
[0033]5、經(jīng)乙醇脫色4小時(shí)；
[0034]6、脫色后可見(jiàn)到大小不同的清晰條帶(見(jiàn)圖1)。由于上樣量不同，所以各泳道條帶粗細(xì)有差別。
【權(quán)利要求】
1.一種浸染蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)提取植物蛋白 2)將植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝膠電泳，得到待染色的蛋白膠； 3)將蛋白膠置于放有濃度為70-90%的核桃青皮染液的盤或皿中染色15-25分鐘； 4)然后用乙醇脫色3-5小時(shí)即可； 所述的核桃青皮染液通過(guò)如下步驟的方法制得:A)取核桃青皮原料洗凈，組織搗碎機(jī)搗碎取汁液，過(guò)濾去渣后快速放入加蓋的容器中；B)每500ml汁液加1粒維C片；C)加熱至65°C _75°C使其濃縮至濃度為20% -30%，于4°C冰箱保存。
2.如權(quán)利要求1所述的一種浸染蛋白的方法，其特征在于，所述步驟3)中染色時(shí)間為20分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的一種浸染蛋白的方法，其特征在于，所述步驟3)中核桃青皮染液的濃度為80%。
【文檔編號(hào)】G01N1/30GK104390833SQ201410674079
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】馬曉麗, 裴雁曦, 梁雅麗, 金竹萍, 劉旦梅, 劉志強(qiáng), 張麗萍, 景巧麗 申請(qǐng)人:山西大學(xué)