中的應(yīng)用及其測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用槲皮素作為熒光探針測(cè)定F-的應(yīng)用及其一種利用槲皮素作為熒光探針對(duì)氟離子(F-)的測(cè)定方法，屬光分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。一種利用槲皮素作為熒光探針對(duì)F-的測(cè)定方法，其步驟如下：(1)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：在待測(cè)溶液F-的濃度范圍內(nèi)配置至少5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，在這至少5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品中加入濃度相同的槲皮素溶液，確定熒光強(qiáng)度與F-的濃度的定量關(guān)系；(2)將槲皮素加入到待測(cè)F-的二甲基亞砜溶液中，配置成與步驟(1)槲皮素濃度相同的溶液，記錄溶液的熒光強(qiáng)度；(3)根據(jù)定量關(guān)系確定待測(cè)溶液F-的濃度。本發(fā)明的測(cè)定過(guò)程具有簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】利用槲皮素作為熒光探針在測(cè)定廠中的應(yīng)用及其測(cè)定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種利用槲皮素作為熒光探針在測(cè)定？-中的應(yīng)用及其測(cè)定方法，屬光分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]槲皮素廣泛存在于植物中，是植物的次生代謝產(chǎn)物，已經(jīng)商業(yè)化，價(jià)廉易得。目前對(duì)槲皮素及其配合物的抗氧化、抗菌等生物活性研究較多，對(duì)其熒光探針的性質(zhì)研究甚少。槲皮素具有完整的大X鍵共軛體系、含有五個(gè)酚羥基及合適的空間構(gòu)型，能與陰離子發(fā)生氫鍵作用。這些相互作用會(huì)引起槲皮素光譜性質(zhì)的變化，因此可以利用檢測(cè)光譜性質(zhì)的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)陰離子的識(shí)別。
[0003]氟元素是人體中不可缺少的元素，主要存在于骨骼和牙齒中，具有增強(qiáng)骨骼和牙齒強(qiáng)度等作用，但是體內(nèi)氟元素過(guò)高，會(huì)引起氟中毒，例如厭食、惡心、腹痛、胃潰瘍、抽筋出血甚至死亡。但隨著工業(yè)化的發(fā)展，氟元素廣泛應(yīng)用到化工、日化產(chǎn)品中，也造成了一定的環(huán)境污染，對(duì)人體的威脅不容忽視，因此，監(jiān)測(cè)環(huán)境中的含量是一項(xiàng)具有重大意義的工作。目前，檢測(cè)？-的方法有很多種，例如:發(fā)射光譜法、滴定法，比色法、離子色譜法、氟離子選擇電極等都是常用的？—檢測(cè)方法，但是這些方法中都要用到許多精密儀器，且對(duì)樣品前處理要求嚴(yán)格，操作程序較多，因此檢測(cè)成本高、效率較低。熒光光譜分析法具有檢測(cè)下限較抵，靈敏度較高，檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，近幾年已應(yīng)用到檢測(cè)環(huán)境中的？―。專利⑶1028990288公開(kāi)了一種計(jì)量型氟離子熒光探針及其制備方法:在容器中，先加入帶有發(fā)光基團(tuán)的醇，然后在惰性氣體保護(hù)下，加入溶劑和三乙胺，再加入二氯硅烷類化合物，在15?30分鐘內(nèi)滴完，反應(yīng)8?18小時(shí)，得到計(jì)量型氟離子熒光探針粗品，然后按照常規(guī)方法對(duì)對(duì)得到的粗品進(jìn)行抽濾，提純，得到計(jì)量型氟離子熒光探針純產(chǎn)物，對(duì)氟離子有很好的選擇性和靈敏度。專利⑶102250134 8公開(kāi)了一種識(shí)別氟離子的熒光探針及其制備方法和用途:將原料在無(wú)水無(wú)氧條件下與金屬鈉反應(yīng)后再與氯硅烷式的化合物反應(yīng)，過(guò)硅膠柱進(jìn)行純化得到產(chǎn)物，將產(chǎn)物加到氟離子的陽(yáng)離子表面活性劑溶液中，根據(jù)熒光的變化來(lái)測(cè)定氟離子，對(duì)氟離子的選擇性較好。由此可以看出，熒光光譜法可以、靈敏地檢測(cè)氟離子，但是，目前主要的熒光探針材料都是合成得到，合成的原料結(jié)構(gòu)復(fù)雜、合成步驟較多，且會(huì)用到一些易燃易爆的危險(xiǎn)試劑，安全性不高，應(yīng)用范圍受到限制。為克服以上缺點(diǎn)，本發(fā)明采用廣泛存在于植物體內(nèi)的槲皮素作為熒光探針來(lái)檢測(cè)環(huán)境中的氟離子，具有靈敏度高、識(shí)別能力強(qiáng)、簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是提供一種利用槲皮素作為熒光探針在測(cè)定廠中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明還提供了一種利用槲皮素作為熒光探針對(duì)的測(cè)定方法。該測(cè)定方法具有靈敏度聞、識(shí)別能力強(qiáng)、簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。
[0006]一種利用槲皮素作為熒光探針在測(cè)定廠的應(yīng)用。
[0007]—種利用槲皮素作為熒光探針對(duì)廠的測(cè)定方法，其步驟如下:
[0008](1)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:在待測(cè)溶液的濃度范圍內(nèi)配置至少5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，在這至少5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品中加入濃度相同的槲皮素溶液，確定熒光強(qiáng)度與？一的濃度的定量關(guān)系；
[0009](2)將槲皮素加入到待測(cè)的二甲基亞砜溶液中，配置成與步驟(1)槲皮素濃度相同的溶液，記錄溶液的熒光強(qiáng)度；
[0010](3)根據(jù)定量關(guān)系確定待測(cè)溶液的濃度。
[0011]所述的步驟(1)為將槲皮素加入到含有不同濃度？—的二甲基亞砜中，配成槲皮素濃度相同的溶液，記錄各溶液的熒光強(qiáng)度，確定熒光強(qiáng)度與的濃度的定量關(guān)系。
[0012]所述的熒光強(qiáng)度測(cè)定條件是激發(fā)波長(zhǎng)為390=%發(fā)射波長(zhǎng)為500=%激發(fā)狹縫為511111，發(fā)射狹縫為1511111，掃描范圍為450-70011111。
[0013]所述的？-的濃度在1?8 —范圍，槲皮素的濃度為1\10—511101 ? 171。
[0014]有益效果:
[0015]本發(fā)明利用廉價(jià)易得的槲皮素作為熒光探針來(lái)檢測(cè)0130溶液中的？―，利用槲皮素與配位后熒光強(qiáng)度的變化規(guī)律，繪制熒光強(qiáng)度？對(duì)濃度0 (^)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品中的濃度。操作簡(jiǎn)單，分析快速，對(duì)？—識(shí)別能力強(qiáng)，受其它離子干擾小，靈敏度高。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1為在0130溶液中，濃度為1父10—511101 -1^1的槲皮素與？— (0?10 9 1)的熒光滴定譜圖；
[0017]圖2為槲皮素與的熒光滴定曲線；
[0018]圖3為其它陰離子對(duì)槲皮素識(shí)別熒光光譜的影響。

【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1
[0020]1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0021](1)準(zhǔn)確稱取0.01518槲皮素(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，100081-200907)，用0130定容至50此容量瓶中，從中取10此用0130定容到100此容量瓶中，配成1 X 10^01 - 171待用；準(zhǔn)確量取濃度為1001 - 171的四丁基氟化銨溶液250 ^匕用0130定容至25此容量瓶中，配成1\10—211101噸―1溶液，從中取1此用0130定容到10此容量瓶中，配成1X10—- 171溶液，待用。
[0022](2)準(zhǔn)備11只10此干燥潔凈的容量瓶，分別加入1此1 X 10^01 ? 171的槲皮素溶液，和不同體積的1 X 10^01 - 17午—溶液，并用0130定容到10111匕配成槲皮素濃度均為1X10^11101.[―1，？-濃度分別為 0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 9 1 的溶液。
[0023](3)設(shè)置熒光光譜儀激發(fā)波長(zhǎng)為39011111，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度分別為511111和1511111，掃描范圍設(shè)置為45011111至70011111 ；并對(duì)上述溶液進(jìn)行測(cè)試，分別記錄上述溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為50011111處的突光強(qiáng)度，如圖1所不。
[0024](4)繪制熒光強(qiáng)度？對(duì)廠濃度0 (廠)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，？ = -13.36^+173.4，線性相關(guān)系數(shù)為妒=0.991，線性范圍為1-81^11101 ? 171，可以完成對(duì)的微量檢測(cè)，如圖2所示。
[0025]2、樣品的測(cè)定
[0026](1)準(zhǔn)備1只10此干燥潔凈的容量瓶，加入1此1 X 10^01.171的槲皮素溶液，和25 ^ [的1 X 10^01 -廣廠溶液，并用0130定容到10111匕配成槲皮素濃度均為1 X 10^01.[-1，廠濃度分別為2.5^1的溶液。
[0027](2)設(shè)置熒光光譜儀激發(fā)波長(zhǎng)為39011111，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度分別為511111和1511111，掃描范圍設(shè)置為45011111至70011111；并對(duì)上述溶液進(jìn)行測(cè)試，記錄上述溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為50011111處的熒光強(qiáng)度，重復(fù)測(cè)三次，分別為:140.1471,140.0802和140.0401。
[0028](3)根據(jù)熒光強(qiáng)度？對(duì)廠濃度“廠)的標(biāo)準(zhǔn)曲線:？ = -13.36^+173.4計(jì)算得到廠的濃度為2.489，2.494和2.497 ^ 1，平均值為:2.493 ^ 1，相對(duì)誤差為:-0.28%。
[0029]實(shí)施例2
[0030]1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0031](1)準(zhǔn)確稱取0.01518槲皮素(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，100081-200907)，用0130定容至50此容量瓶中，從中取10此用0130定容到100此容量瓶中，配成1 X 10^01 - 171待用；準(zhǔn)確量取濃度為1001 - 171的四丁基氟化銨溶液250 ^匕用0130定容至25此容量瓶中，配成1\10—211101噸―1溶液，從中取1此用0130定容到10此容量瓶中，配成1X10—- 171溶液，待用。
[0032](2)準(zhǔn)備11只10此干燥潔凈的容量瓶，分別加入1此1 X 10^01 ? 171的槲皮素溶液，和不同體積的1 X 10^01 - 17午—溶液，并用0130定容到10111匕配成槲皮素濃度均為1X10^11101.[―1，？-濃度分別為 0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 9 1 的溶液。
[0033](3)設(shè)置熒光光譜儀激發(fā)波長(zhǎng)為39011111，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度分別為511111和1511111，掃描范圍設(shè)置為45011111至70011111 ；并對(duì)上述溶液進(jìn)行測(cè)試，分別記錄上述溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為50011111處的突光強(qiáng)度，如圖1所不。
[0034](4)繪制熒光強(qiáng)度？對(duì)廠濃度0 (廠)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，？ = -13.36^+173.4，線性相關(guān)系數(shù)為妒=0.991，線性范圍為1-81^11101 ? 171，可以完成對(duì)的微量檢測(cè)，如圖2所示。
[0035]2、樣品的測(cè)定
[0036](1)準(zhǔn)備1只10此干燥潔凈的容量瓶，加入1此1 X 10^01.171的槲皮素溶液，和50 ^ [的1 X 10^01 -廣廠溶液，并用0130定容到100匕配成槲皮素濃度均為1 X 10^01.[-1，廠濃度分別為5 9 I的溶液。
[0037](2)設(shè)置熒光光譜儀激發(fā)波長(zhǎng)為39011111，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度分別為511111和1511111，掃描范圍設(shè)置為45011111至70011111；并對(duì)上述溶液進(jìn)行測(cè)試，記錄上述溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為50011111處的熒光強(qiáng)度，重復(fù)測(cè)三次，分別為:106.9206,106.801和106.7603。
[0038](3)根據(jù)熒光強(qiáng)度？對(duì)廠濃度“廠)的標(biāo)準(zhǔn)曲線:？ = -13.36^+173.4計(jì)算得到廠的濃度為4.976,4.985和4.988^1，平均值為:4.983^1，相對(duì)誤差為:-0.34%。
[0039]實(shí)施例3
[0040]1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0041](1)準(zhǔn)確稱取0.01518槲皮素(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，100081-200907)，用0130定容至50此容量瓶中，從中取10此用0130定容到100此容量瓶中，配成1 X 10^01 - 171待用；準(zhǔn)確量取濃度為1001 - 171的四丁基氟化銨溶液250 ^匕用0130定容至25此容量瓶中，配成1 X 10^01噸―1溶液，從中取1此用0130定容到10此容量瓶中，配成1X10—- 171溶液，待用。
[0042](2)準(zhǔn)備11只10此干燥潔凈的容量瓶，分別加入1此1 X 10^01 ? 171的槲皮素溶液，和不同體積的1 X 10^01 - 17午—溶液，并用0130定容到10111匕配成槲皮素濃度均為1X10^11101.[―1，？-濃度分別為 0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 9 1 的溶液。
[0043](3)設(shè)置熒光光譜儀激發(fā)波長(zhǎng)為39011111，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度分別為511111和1511111，掃描范圍設(shè)置為45011111至70011111 ；并對(duì)上述溶液進(jìn)行測(cè)試，分別記錄上述溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為50011111處的突光強(qiáng)度，如圖1所不。
[0044](4)繪制熒光強(qiáng)度？對(duì)廠濃度0 (廠)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，？ = -13.36^+173.4，線性相關(guān)系數(shù)為妒=0.991，線性范圍為1-81^11101 ? 171，可以完成對(duì)的微量檢測(cè)，如圖2所示。
[0045]2、樣品的測(cè)定
[0046](1)準(zhǔn)備1只10此干燥潔凈的容量瓶，加入1此1 X 10^01.171的槲皮素溶液，和75 ^ [的1 X 10^01 -廣廠溶液，并用0130定容到10111匕配成槲皮素濃度均為1 X 10^01.[-1，廠濃度分別為7.5^1的溶液。
[0047](2)設(shè)置熒光光譜儀激發(fā)波長(zhǎng)為39011111，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度分別為511111和1511111，掃描范圍設(shè)置為45011111至70011111；并對(duì)上述溶液進(jìn)行測(cè)試，記錄上述溶液在發(fā)射波長(zhǎng)為50011111處的熒光強(qiáng)度，重復(fù)測(cè)三次，分別為:73.7340，73.4939和73.4405。
[0048](3)根據(jù)熒光強(qiáng)度？對(duì)廠濃度0 (廠)的標(biāo)準(zhǔn)曲線:？ = -13.36^+173.4計(jì)算得到廠的濃度為7.475，7.478和7.482 ^ 1，平均值為:7.478 ^ 1，相對(duì)誤差為:-0.29%。
[0049]此外，本發(fā)明還考查了不同陰離子對(duì)槲皮素識(shí)別廠熒光光譜的影響。在含槲皮素濃度1 X 10^01.[-1，廠濃度為1 X 10^01.[-1的溶液中，分別加入等摩爾的01、81'-、I—、0104 ~、％？04—，在相同的條件下測(cè)得的熒光強(qiáng)度如圖3所示，由圖可以看出，—、81' —、I—、0104 —、％？04—對(duì)的檢測(cè)幾乎沒(méi)有影響。說(shuō)明槲皮素對(duì)的選擇性好，識(shí)別能力強(qiáng)。
【權(quán)利要求】
1.一種利用槲皮素作為熒光探針在測(cè)定F-的應(yīng)用。
2.一種利用槲皮素作為熒光探針對(duì)F—的測(cè)定方法，其步驟如下: (1)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:在待測(cè)溶液F-的濃度范圍內(nèi)配置至少5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，在這至少5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品中加入濃度相同的槲皮素溶液，確定熒光強(qiáng)度與F-的濃度的定量關(guān)系； (2)將槲皮素加入到待測(cè)F—的二甲基亞砜溶液中，配置成與步驟(I)槲皮素濃度相同的溶液，記錄溶液的熒光強(qiáng)度； (3)根據(jù)定量關(guān)系確定待測(cè)溶液F—的濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用槲皮素作為熒光探針對(duì)F-的測(cè)定方法，其特征在于:所述的步驟(I)為將槲皮素加入到含有不同濃度F—的二甲基亞砜中，配成槲皮素濃度相同的溶液，記錄各溶液的熒光強(qiáng)度，確定熒光強(qiáng)度與F—的濃度的定量關(guān)系。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用槲皮素作為熒光探針對(duì)F-的測(cè)定方法，其特征在于:所述的熒光強(qiáng)度測(cè)定條件是激發(fā)波長(zhǎng)為390nm，發(fā)射波長(zhǎng)為500nm，激發(fā)狹縫為5nm，發(fā)射狹縫為15nm，掃描范圍為450-700nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用槲皮素作為熒光探針對(duì)F-的測(cè)定方法，其特征在于:所述的F_的濃度在I?8μ M范圍，槲皮素的濃度為lX10_5mol.L'
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104406947SQ201410677667
【公開(kāi)日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】徐莉, 楊世龍, 曹福亮, 印彬 申請(qǐng)人:南京林業(yè)大學(xué)