食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法
【專利摘要】一種食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：(1)稱取一定量的食品，加入二甲基甲酰胺溶解，過濾，得到待測(cè)液；(2)用高效液相色譜法測(cè)定待測(cè)液中偶氮二甲酰胺的含量，以pH＝3的磷酸水溶液為流動(dòng)相，采用光電二極管陣列檢測(cè)器。本方法操作簡單、檢出限低，提取效率高，重復(fù)性好，成本低，完全能滿足法律法規(guī)對(duì)偶氮二甲酰胺管控的要求。
【專利說明】食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品添加劑的檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè) 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 2014年2月，美國CNN曝光快餐巨頭"賽百味"（subway)在面包中添加偶氮二甲 酰胺事件，食品安全問題再次引起公眾的關(guān)注。
[0003] 偶氮二甲酰胺（Azodicarbonamide)，又名偶氮甲酰胺，是一種食品添加劑，具有漂 白和氧化雙重作用，是一種速效面粉增筋劑，可以對(duì)面粉增白增筋并促進(jìn)成熟，用以提高烘 焙制品品質(zhì)。但近年來有研究表明，盡管偶氮二甲酰胺本身并不致癌，但其在高溫分解過程 中，可能會(huì)產(chǎn)生致癌物氨基脲，而其本身食用過量也會(huì)出現(xiàn)氣喘和過敏等不良反應(yīng)，同時(shí)偶 氮二甲酰胺也會(huì)破壞面粉中的維生素、影響鈣質(zhì)的吸收。
[0004] 我國在《GB2760-2011食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中明文規(guī)定，偶氮二甲酰胺作為面粉 處理劑，最大允許含量為0. 〇45g/kg ;美國對(duì)其限值要求也為0. 045g/kg ;歐盟、澳洲、新西 蘭、新加坡和日本等地已禁止在食品中的添加偶氮二甲酰胺。食品中偶氮二甲酰胺的測(cè)試 具有非常廣闊的測(cè)試前景，但由于偶氮二甲酰胺具有不溶于冷水，不溶于醇、苯、丙酮等有 機(jī)溶劑及高溫易分解等特征，目前食品中偶氮二甲酰胺的測(cè)試還無任何標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法，期 干1J、雜志等也未有文獻(xiàn)做相關(guān)的報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于此，本發(fā)明提供一種食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法，本方法具有操作 簡單、提取效率高、檢出限低、重復(fù)性好及成本低等優(yōu)點(diǎn)。
[0006] -種食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0007] (1)稱取一定量的食品，加入二甲基甲酰胺溶解，過濾，得到待測(cè)液；
[0008] (2)用高效液相色譜法測(cè)定待測(cè)液中偶氮二甲酰胺的含量，以pH = 3的磷酸水溶 液為流動(dòng)相，采用光電二極管陣列檢測(cè)器。
[0009] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述一定量的食品，小于2g。
[0010] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（1)之前還包括以下步驟：將食品粉碎。
[0011] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，將所述食品粉碎至其最大粒徑小于Imm
[0012] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（1)中采用有機(jī)濾膜進(jìn)行所述過濾操作。
[0013] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述有機(jī)濾膜的規(guī)格為0. 45 i! m。
[0014] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟（2)中的所述流動(dòng)相在使用前經(jīng)0. 45 m有機(jī)濾 膜過濾后置于超聲波清洗器中超聲。
[0015] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述超聲的時(shí)間為IOmin?15min。
[0016] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述超聲的時(shí)間為lOmin。
[0017] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述高效液相色譜選用C18色譜柱，所述色譜柱內(nèi)徑為 250mm*4. 6mm，粒徑為 5 u m。
[0018] 上述食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下顯著優(yōu)點(diǎn)：
[0019] (1)本發(fā)明利用二甲基甲酰胺作為萃取溶劑，有效解決了偶氮二甲酰胺溶解性的 問題，能高效地提取食品中的偶氮二甲酰胺。
[0020] (2)本發(fā)明利用高效液相色譜帶二極管陣列檢測(cè)器對(duì)待測(cè)液中偶氮二甲酰胺進(jìn)行 檢測(cè)，解決了偶氮二甲酰胺高溫易分解的問題。
[0021] ⑶本發(fā)明的檢出限低，提取效率高，重復(fù)性好，成本低，完全能滿足法律法規(guī)對(duì)偶 氮二甲酰胺管控的要求。
[0022] (4)本發(fā)明方法使用范圍廣，適用于檢測(cè)面粉、面包及餅干等食品，且本發(fā)明方法 試樣制備簡單，方便快捷，適于標(biāo)準(zhǔn)化。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] 圖1為偶氮二甲酰胺的紫外吸收光譜圖，該光譜圖中縱坐標(biāo)代表百分透過率 (T% )，橫坐標(biāo)代表波長，單位為nm ;
[0024] 圖2為10mg/L偶氮二甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，該色譜圖中的縱坐標(biāo)代表峰強(qiáng)度， 橫坐標(biāo)代表保留時(shí)間，單位為min ;
[0025] 圖3為偶氮二甲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，該曲線圖中的縱坐標(biāo)代表氣相色譜峰面積的 響應(yīng)值，橫坐標(biāo)代表偶氮二甲酰胺的濃度。

【具體實(shí)施方式】
[0026] 為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的特征、技術(shù)手段以及所達(dá)到的具體目的、功能，下面結(jié)合

【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0027] 待測(cè)液的制備：精密稱取食品lg，精確到O.OOOlg，置于反應(yīng)瓶中，加入8mL? 15mL二甲基甲酰胺，機(jī)械振搖20min?40min，靜置5min?15min，待分層，取上層清液用 0. 45 y m有機(jī)濾膜過濾，得到待測(cè)液。
[0028] 需要說明的是，若加入二甲基甲酰胺振搖，靜置后，無明顯分層，則使用離心機(jī)在 1000r/min轉(zhuǎn)速下對(duì)樣品進(jìn)行離心，離心后取上層清液過0. 45 ii m有機(jī)濾膜過濾。
[0029] 檢測(cè)儀器為熱電Ultimate 3000高效液相色譜儀帶二極管陣列檢測(cè)器或等同設(shè) 備；
[0030] 色譜條件如下：
[0031] 色譜柱：Dionex Acclaim 200 C18色譜柱，其內(nèi)徑為250mm*4. 6mm，粒徑為5 u m或 同等性能色譜柱；
[0032] 進(jìn)樣體積：IOiiL;
[0033] 流動(dòng)相：磷酸水溶液，優(yōu)選的，pH = 3 ;
[0034] 柱流速：lmL/min;
[0035] 柱溫：30°C ;
[0036] 檢測(cè)波長：245nm ;
[0037] 掃描范圍：200nm ?600nm。
[0038] 可以理解，由于偶氮二甲酰胺具有不溶于冷水，不溶于醇、苯、丙酮等大部分有機(jī) 溶劑，為了確保樣品中的偶氮二甲酰胺完全溶解在萃取劑中，本發(fā)明測(cè)試偶氮二甲酰胺在 甲醇、乙腈、丙酮、四氫呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、苯、二甲基甲酰胺等一系列有機(jī) 溶劑中的溶解度，通過多次實(shí)驗(yàn)佐證，偶氮二甲酰胺在二甲基甲酰胺中有較好的溶解度，可 以達(dá)到llg/L，因而可以溶解出食品中添加的偶氮二甲酰胺。此外，偶氮二甲酰胺在二甲基 甲酰胺中只需要振搖即可以溶解，這樣可以簡化樣品的處理過程，提升偶氮二甲酰胺的提 取效率，降低測(cè)試成本。
[0039] 優(yōu)選的，加入二甲基甲酰胺溶解時(shí)，同時(shí)，加熱到40至50攝氏度，在該溫度下振蕩 2至5分鐘。優(yōu)選的，加熱到40至50攝氏度后，超聲振蕩2至5分鐘。這樣，可以縮短偶氮 二甲酰胺的溶解時(shí)間，提升偶氮二甲酰胺的提取效率。
[0040] 為了使偶氮二甲酰胺在色譜柱上有較好的分離效果，合適的流動(dòng)相的選擇是偶氮 二甲酰胺在高效液相色譜上應(yīng)用的重點(diǎn)。本發(fā)明選擇PH = 3磷酸水溶液為流動(dòng)相，由于室 溫條件下偶氮二甲酰胺微溶于水，其溶解度為35mg/L，而偶氮二甲酰胺由于具有兩個(gè)酰胺 基團(tuán)而呈弱堿性，通過增加流動(dòng)相的酸性可以增大偶氮二甲酰胺在流動(dòng)相的溶解度。
[0041] 通過多次實(shí)驗(yàn)佐證，當(dāng)選擇pH = 3磷酸水溶液為流動(dòng)相，柱流速為lmL/min時(shí)，可 以實(shí)現(xiàn)偶氮二甲酰胺具有較好的分離效果。如圖2所示，其為偶氮二甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)樣品溶解 在二甲基甲酰胺中的色譜圖。由色譜圖可知，偶氮二甲酰胺的保留時(shí)間為4. 383min，而溶劑 二甲基甲酰胺的保留時(shí)間為8. 970min，從高效液相色譜中可以將偶氮二甲酰胺與溶劑二甲 基甲酰胺有效地分離，從而避免了溶劑峰的干擾。
[0042] 為進(jìn)一步保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，其中，pH = 3的磷酸水溶液在使用前經(jīng)0. 45 ii m的 有機(jī)膜過濾后放入超聲波清洗器中超聲IOmin?15min，充分脫出pH = 3的磷酸水溶液中 的氣體。
[0043] 檢測(cè)波長的選擇：將偶氮二甲酰胺用二甲基甲酰胺配置成一定濃度的溶液后，在 二極管陣列下掃描，以波長（nm)為橫坐標(biāo)，百分透過率（T%)為縱坐標(biāo)繪制出偶氮二甲酰 胺紫外吸收光譜圖，結(jié)果見圖1。從圖1中可以看出，偶氮二甲酰胺在245nm處具有最大吸 收，因此，選擇245nm為檢測(cè)波長。
[0044] 下面為具體實(shí)施例部分。
[0045] 實(shí)施例1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制
[0046] 用電子天平準(zhǔn)確稱取偶氮二甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度為97 % ) 0. 0512g于25mL的容量 瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并定容至刻度線，搖勻，配制成1986. 56mg/L的偶氮二甲酰胺儲(chǔ) 備溶液。取503 ii L儲(chǔ)備液于IOmL容量瓶，用二甲基甲酰胺定容至刻度線，得100mg/L偶氮 二甲酰胺中間溶液。分別取〇. lmL、0. 2mL、0. 5mL、lmL、2mL中間溶液至5個(gè)IOmL容量瓶中， 用二甲基甲酰胺定容至刻度線，得到I. 〇mg/L、2. 0mg/L、5. 0mg/L、10. 0mg/L、20. Omg/L共5 個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。移取l〇y L注入高效液相色譜儀，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰的 峰面積為縱坐標(biāo)，與其對(duì)應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
[0047] 得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = I. 198X+0. 365,標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性R2 = 0. 9997,線性良好， 可用于偶氮二甲酰胺的定量檢測(cè)。
[0048] 實(shí)施例2面粉中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)
[0049] 制備待測(cè)液：精密稱取面粉Ig (精確到0. OOOlg)，置于40mL反應(yīng)瓶中，加入IOmL 二甲基甲酰胺，機(jī)械振搖30min，靜置lOmin，分層，取上層清液用0. 45 y m有機(jī)濾膜過濾，得 到待測(cè)液。
[0050] 重復(fù)上述待測(cè)液的制備過程3次，得到3份面粉待測(cè)液的平行樣A、B、C。
[0051] 用高效液相色譜對(duì)上述待測(cè)液進(jìn)行分析，檢測(cè)儀器及色譜條件與實(shí)施例1中相 同，根據(jù)對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積和實(shí)施例1中的標(biāo)準(zhǔn)曲線得出待測(cè)液的濃度，從而進(jìn)一步計(jì) 算出面粉中偶氮二甲酰胺的含量（mg/kg)、平均值及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，檢測(cè)結(jié)果見表1。
[0052] 表 1
[0053]

【權(quán)利要求】
1. 一種食品中偶氮二甲酰胺含量的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟： (1)稱取一定量的食品，加入二甲基甲酰胺溶解，過濾，得到待測(cè)液； ⑵用高效液相色譜法測(cè)定待測(cè)液中偶氮二甲酰胺的含量，以pH = 3的磷酸水溶液為 流動(dòng)相，采用光電二極管陣列檢測(cè)器。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述一定量的食品，小于2克。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟（1)之前還包括以下步驟：將 食品粉碎。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測(cè)方法，其特征在于，將所述食品粉碎至其最大粒徑小于 lmm〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟（1)中采用有機(jī)濾膜進(jìn)行所述 過濾操作。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述有機(jī)濾膜的規(guī)格為0. 45 y m。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟（2)中的所述流動(dòng)相在使用前 經(jīng)0. 45 y m有機(jī)濾膜過濾后置于超聲波清洗器中超聲。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述超聲的時(shí)間為lOmin?15min。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述超聲的時(shí)間為lOmin。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1至9任一所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述高效液相色譜選用C18 色譜柱，所述色譜柱內(nèi)徑為250mm*4. 6mm，粒徑為5 u m。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK104407070SQ201410682713
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】何曉瑩, 楊思敏 申請(qǐng)人:東莞市中鼎檢測(cè)技術(shù)有限公司