一種單組份酶底物顯色液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種單組份酶底物顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0.1-0.5g甘油20-30ml，酶底物5-40mg，乙醇10-30mL。本發(fā)明用過硼酸鈉替代現(xiàn)有的過氧化氫、過氧化脲，與過氧化氫、過氧化脲相比，過硼酸鈉具有更好的氧化性，提高了單組份酶底物顯色液的顯色效果；同時(shí)本發(fā)明避免了酶底物顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少了操作時(shí)間，提高了效率，同時(shí)避免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯色效果；避免了酶底物顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了酶底物顯色液的靈敏度。
【專利說明】一種單組份酶底物顯色液

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及酶底物顯色液領(lǐng)域，具體地，涉及一種單組份酶底物顯色液。

【背景技術(shù)】
[0002] 酶底物即TMB，用于ELISA反應(yīng)。底物產(chǎn)生一種可溶性淡藍(lán)色的末端產(chǎn)物，可在370 或635nm在分光光度計(jì)上讀取。其適用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段的定量和定性分析。 其檢驗(yàn)的原理是：當(dāng)標(biāo)記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的酶底物、雙氧水等反應(yīng)，加入終 止液后溶液由無色變成黃色，黃色深淺反應(yīng)ELISA體系中抗原抗體結(jié)合的多少，從而判斷 某種抗原或抗體的多少。在通過酶標(biāo)儀測度吸光值，判斷免疫反應(yīng)的程度。
[0003] 現(xiàn)有市售的酶聯(lián)免疫試劑盒所采用酶底物顯色劑液大多為雙組份，分A液和B液， 使用之前需要先混勻，在使用上存在缺點(diǎn)一是不夠方便，二是在包裝材料上存在成本提高 和資源浪費(fèi)；三是使用中的混合過程容易造成批間質(zhì)量不均一；四是還存在穩(wěn)定性差、保 存時(shí)間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點(diǎn)。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)的酶底物顯色液及其制備方法，由A液和B液等體積混合后得到，所述 A液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸0? 01-0. 5mol/L，磷酸氫二鈉0? 01-0. 5mol/L，過氧化氫 0. 01-0. 5mol/L，EDTA0. 1-lmmol/L;所述B液包括酶底物、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底 物的摩爾濃度為〇.l-lmm〇l/L，所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷 酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為〇. 1-10%。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種單組份酶底物顯色液，以克服現(xiàn)有顯色液 操作麻煩、靈敏度低的問題。
[0006] 此外，本發(fā)明還包括上述單組份酶底物顯色液的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：一種單組份酶底物顯色液，其特征 在于，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉 0? 1-0. 5g，甘油 20-30ml，酶底物 5-40mg，乙醇 10-30mL。
[0008] 現(xiàn)有的酶底物顯色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各組分的摩爾濃 度為：朽1 檬酸 〇. 〇l_〇. 5mol/L，磷酸氫二鈉 0. 01-0. 5mol/L，過氧化氫 0. 01-0. 5mol/L， EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括酶底物、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底物的摩爾濃度 為0. 1-lmmol/L，所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為0. 1-10%，現(xiàn)有酶底物顯色劑的缺點(diǎn)在于A、B兩種液體在顯色之前需要等體積混勻，操作 不方便、耗時(shí)間、效率較低、批此之間存在差異，同時(shí)成本也高，且A液B液自混合的過程中， HC1會(huì)揮發(fā)，會(huì)導(dǎo)致顯色的有效成分的濃度發(fā)生改變，因而會(huì)導(dǎo)致混合后的酶底物顯色液的 在顯色過程中的靈敏度降低；本發(fā)明為單組份酶底物顯色液，避免了酶底物顯色液在使用 之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少了操作時(shí)間，提高了效率，同時(shí)避 免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯色效果；并且，不會(huì)存在因HC1揮 發(fā)導(dǎo)致的酶底物顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了酶底物顯色液的靈敏 度；本發(fā)明用過硼酸鈉替代現(xiàn)有的過氧化氫、過氧化脲，實(shí)驗(yàn)證明，與過氧化氫、過氧化脲相 t匕，過硼酸鈉具有更好的氧化性。
[0009] 進(jìn)一步地，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。
[0010] 實(shí)驗(yàn)證明，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g的1000mL單組份酶底物顯色液具 有更好的穩(wěn)定性。
[0011] 進(jìn)一步地，酶底物的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg。將酶底物的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg能有效 的提高顯色效果，提高顯色的靈敏度。
[0012] 進(jìn)一步地，過硼酸鈉為0? 4-0. 5g。
[0013] 實(shí)驗(yàn)證明，過硼酸鈉為0. 4-0. 5g的1000mL單組份酶底物顯色液具有更好的顯色 效果。
[0014] 一種如權(quán)利要單組份酶底物顯色液的應(yīng)用，其特征在于，將所述的單組份酶底物 顯色液應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
[0015] 綜上，本發(fā)明的有益效果是： 1、本發(fā)明用過硼酸鈉替代現(xiàn)有的過氧化氫、過氧化脲，與過氧化氫、過氧化脲相比，過 硼酸鈉具有更好的氧化性，過硼酸鈉提高了單組份酶底物顯色液的顯色效果。
[0016] 2、通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份酶底物顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色 階段，避免了酶底物顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少 了操作時(shí)間，提高了效率，同時(shí)避免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯 色效果。
[0017] 3、通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份酶底物顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色 階段，避免了酶底物顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了酶底物顯色液的 靈敏度。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步地的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0019] 實(shí)施例1 : 一種單組份酶底物顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10ml乙醇。
[0020] 實(shí)施例2 : 一種單組份酶底物顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉0?lg，甘油20ml,酶底物10mg，10ml乙醇。
[0021] 實(shí)施例3: 一種單組份酶底物顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物20mg，10ml乙醇。
[0022] 實(shí)施例4 : 一種單組份酶底物顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉0.lg，甘油20ml,酶底物30mg，10ml乙醇。
[0023] 實(shí)施例5 : 一種單組份酶底物顯色液，每lOOOmL的顯色液包括以下組分：檸檬酸10g，磷酸氫二鈉 20g，過硼酸鈉0? 5g，甘油30ml,酶底物40mg，30ml乙醇。
[0024] 實(shí)施例6 : 一種單組份酶底物顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸9g，磷酸氫二鈉 18g，過硼酸鈉0? 2g，甘油20ml，酶底物30mg，20ml乙醇。
[0025] 實(shí)施例7 : 一種單組份酶底物顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸9g，磷酸氫二鈉 18g，過硼酸鈉0? 4g，甘油20ml，酶底物30mg，20ml乙醇。

【權(quán)利要求】
1. 一種單組份酶底物顯色液，其特征在于，每lOOOmL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0? 1-0. 5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg，乙醇 10_30mL。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單組份酶底物顯色液，其特征在于，所述檸檬酸為 9-10g，磷酸氫二鈉 18-20g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種單組份酶底物顯色液，其特征在于，所述酶底物的質(zhì) 量設(shè)置為l〇_30mg。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種單組份酶底物顯色液，其特征在于，所述過硼酸鈉為 0. 4-〇. 5g〇
5. -種如權(quán)利要求1或2所述的單組份酶底物顯色液的應(yīng)用，其特征在于，將所述的單 組份酶底物顯色液應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/531GK104458717SQ201410685230
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】葉正義, 陶家春, 何遠(yuǎn)立, 楊秦 申請(qǐng)人:成都威爾諾生物科技有限公司