一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，包括如下步驟：首先在緩沖液中加入蔗糖調(diào)制成5—25%直線型蔗糖密度梯度液，接著在蔗糖密度梯度液中加入大腸桿菌核糖體后通過超速離心機(jī)離心分離獲得50S核糖體亞基，最后用磷酸鹽緩沖液稀釋50S核糖體亞基至2mg/ml后制備成蛋白。本發(fā)明所述的一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其是受體配體結(jié)合，而且配體容易批量獲得，具有更高的靈敏度及更低的生產(chǎn)成本。
【專利說明】一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]氯霉素廣泛應(yīng)用于動(dòng)物各種傳染病治療，特別是用于奶牛乳腺炎的治療，從而易使奶制品里有氯霉素殘留。由于氯霉素的苯環(huán)上含有硝基，對(duì)人體具有毒副作用，能抑制造血機(jī)能，因此我國農(nóng)業(yè)部已經(jīng)禁止使用氯霉素，無論內(nèi)銷還是出口，氯霉素殘留檢測(cè)都是必檢項(xiàng)目。
[0003]氯霉素類抗生素可作用于細(xì)菌核糖核蛋白體的50S亞基，而阻撓蛋白質(zhì)的合成，屬抑菌性廣譜抗生素。細(xì)菌細(xì)胞的70S核糖體是合成蛋白質(zhì)的主要細(xì)胞成分，它包括50S和30S兩個(gè)亞基。氯霉素通過可逆地與氯霉素50S亞基結(jié)合，阻斷轉(zhuǎn)肽酰酶的作用，干擾帶有氨基酸的胺基酰-tRNA終端與50S亞基結(jié)合，從而使新肽鏈的形成受阻，抑制蛋白質(zhì)合成。
[0004]


【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其是受體配體結(jié)合，而且配體容易批量獲得，具有更高的靈敏度及更低的生產(chǎn)成本。
[0005]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，包括如下步驟:首先在緩沖液中加入蔗糖調(diào)制成5—25%直線型蔗糖密度梯度液，接著在蔗糖密度梯度液中加入大腸桿菌核糖體后通過超速離心機(jī)離心分離獲得50S核糖體亞基，最后用磷酸鹽緩沖液稀釋50S核糖體亞基至2mg/ml后制備成蛋白。
[0006]所述緩沖液由以下重量比的原材料配置而成:
醋酸鎂0.2 ；
三(羥甲基)氨基甲烷 10;
氯化銨60。
[0007]所述5 — 25%直線型蔗糖密度梯度液依次分為蔗糖濃度為5%的溶解液，蔗糖濃度為10%的溶解液，蔗糖濃度為15%的溶解液，蔗糖濃度為20%的溶解液，蔗糖濃度為25%的溶解液。
[0008]所述超速離心機(jī)離心時(shí)離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速為65000rpm，離心時(shí)間為45min，離心溫度為4°C。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其是受體配體結(jié)合，而且配體容易批量獲得，具有更高的靈敏度及更低的生產(chǎn)成本。

【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，包括如下步驟:首先在緩沖液中加入蔗糖調(diào)制成5—25%直線型蔗糖密度梯度液，所述5 — 25%直線型蔗糖密度梯度液依次分為蔗糖濃度為5%的溶解液，蔗糖濃度為10%的溶解液，蔗糖濃度為15%的溶解液，蔗糖濃度為20%的溶解液，蔗糖濃度為25%的溶解液。
[0011]接著在蔗糖密度梯度液中加入大腸桿菌核糖體后通過超速離心機(jī)離心分離獲得50S核糖體亞基，最后用磷酸鹽緩沖液稀釋50S核糖體亞基至2mg/ml后制備成蛋白。離心后，50S核糖體亞基峰在17 %蔗糖梯度附近，距離離心管口約3.3cm, 30S核糖體亞基峰在13%蔗糖梯度附近，峰尖距管口約2.2cm。
[0012]所述超速離心機(jī)離心時(shí)離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速為65000rpm，離心時(shí)間為45min，離心溫度為4°C。超速離心機(jī)可采用Hitachi (日立)CP MX系列超速離心機(jī)。但超速離心機(jī)的加/減速速率檔次必須在5/5以上。
[0013]所述緩沖液由以下重量比的原材料配置而成:醋酸鎂0.2 ;三(羥甲基)氨基甲烷10 ;氯化銨60。緩沖液的配制有利于穩(wěn)定70S核糖體并有利于50S及30S亞基的分離。
[0014]本實(shí)施例的一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其是受體配體結(jié)合，而且配體容易批量獲得，具有更高的靈敏度及更低的生產(chǎn)成本。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其特征在于包括如下步驟:首先在緩沖液中加入蔗糖調(diào)制成5 — 25%直線型蔗糖密度梯度液，接著在蔗糖密度梯度液中加入大腸桿菌核糖體后通過超速離心機(jī)離心分離獲得50S核糖體亞基，最后用磷酸鹽緩沖液稀釋50S核糖體亞基至2mg/ml后制備成蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其特征在于:所述緩沖液由以下重量比的原材料配置而成: 醋酸鎂0.2 ； 三(羥甲基)氨基甲烷 10; 氯化銨60。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其特征在于:所述5— 25%直線型蔗糖密度梯度液依次分為蔗糖濃度為5%的溶解液，蔗糖濃度為10%的溶解液，蔗糖濃度為15%的溶解液，蔗糖濃度為20%的溶解液，蔗糖濃度為25%的溶解液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)氯霉素的蛋白制備方法，其特征在于:所述超速離心機(jī)離心時(shí)離心機(jī)的轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速為65000rpm，離心時(shí)間為45min，離心溫度為4°C。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104374922SQ201410686129
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月26日
【發(fā)明者】施戈韜 申請(qǐng)人:紹興康知生物科技有限公司