絲氨酸蛋白酶抑制劑b3用于治療痛風(fēng)性腎病的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種絲氨酸蛋白酶抑制劑B3用于治療痛風(fēng)性腎病的新用途，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑B3的新用途【技術(shù)領(lǐng)域】，有關(guān)實(shí)驗(yàn)證明了絲氨酸蛋白酶抑制劑B3能用于診斷早期痛風(fēng)性腎病的藥物，也能用作治療痛風(fēng)性腎病的藥物，通過蛋白質(zhì)組學(xué)手段證明了絲氨酸蛋白酶抑制劑B3在痛風(fēng)性腎病患者中表達(dá)水平顯著降低，同時(shí)以大鼠痛風(fēng)性腎病模型為基礎(chǔ)，人工注射絲氨酸蛋白酶抑制劑B3后，能顯著降低腎臟組織中尿酸鹽的沉積。絲氨酸蛋白酶抑制劑B3作為治療痛風(fēng)性腎病的藥物，對(duì)動(dòng)物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn)有不良副作用，是一種安全、可靠的能夠用于治療痛風(fēng)性腎病的藥物。
【專利說明】絲氨酸蛋白酶抑制劑B3用于治療痛風(fēng)性腎病的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑B3的新用途，具體涉及一種絲氨酸蛋白酶抑制 劑B3用于治療痛風(fēng)性腎病的新用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著人們生活水平的提高，原發(fā)性高尿酸血癥在我國(guó)發(fā)病率逐漸增高，由 此引起的尿酸性腎病也日漸增多。痛風(fēng)性腎病又稱尿酸性腎病，是指尿酸鹽在血中濃度呈 過飽和狀態(tài)時(shí)沉積于腎臟而引起的腎病變，如能早期診斷并給與恰當(dāng)?shù)闹委?，腎臟病變可 減輕或停止發(fā)展；如延誤診治或治療不當(dāng)，則病情可惡化而死于腎衰竭。
[0003] 慢性痛風(fēng)性腎病起病隱匿，青春期前無異常，青春期后血尿酸逐漸升高，此期為無 癥狀高尿酸血癥期；至中年以后開始出現(xiàn)臨床癥狀，痛風(fēng)患者中10% -20%有臨床腎病表 現(xiàn)，其嚴(yán)重程度與血尿酸升高的持續(xù)時(shí)間和幅度有關(guān)。慢性高尿酸血癥可導(dǎo)致尿酸晶體主 要在遠(yuǎn)端集合管和腎間質(zhì)沉積，尤其在腎髓質(zhì)和乳頭區(qū)，鏡下可見尿酸和單鈉尿酸鹽在腎 實(shí)質(zhì)內(nèi)沉積。間質(zhì)尿酸結(jié)晶來源于集合管。這些結(jié)晶體形成核心，周圍有白細(xì)胞、巨噬細(xì) 胞浸潤(rùn)及纖維物質(zhì)包裹，這種標(biāo)志性組織學(xué)改變稱為痛風(fēng)石，經(jīng)典的痛風(fēng)性腎病，痛風(fēng)石在 皮髓交界處及髓質(zhì)深部沉積，在有長(zhǎng)期痛風(fēng)病史的患者中，腎臟不僅表現(xiàn)為痛風(fēng)石形成，且 還伴有纖維形成、腎小球硬化、動(dòng)脈硬化及動(dòng)脈壁增厚。早期患者可有輕度腰痛，可為單側(cè) 或雙側(cè)，伴有輕度浮腫；40% -45%病人有中度高血壓；約有85%的痛風(fēng)患者在出現(xiàn)明顯腎 損害之前，有持續(xù)數(shù)年的間斷或持續(xù)性輕度蛋白尿，很少有大量蛋白尿，據(jù)報(bào)告，20%痛風(fēng) 患者有蛋白尿，其中無癥狀高尿酸血癥者為15% ;尿濃縮稀釋功能障礙為腎受累最早指證， 后出現(xiàn)酸性尿和血尿；當(dāng)出現(xiàn)尿酸性結(jié)石時(shí)，結(jié)石梗阻尿路可引發(fā)繼發(fā)感染，呈腎盂腎炎表 現(xiàn)，有尿頻、尿急、尿痛、發(fā)熱及腰疼癥狀，尿中白細(xì)胞增多，細(xì)菌培養(yǎng)獲陽性結(jié)果，病程遷移 長(zhǎng)，易誤診為腎盂腎炎；年輕的慢性尿酸性腎病患者約在5-10年后加重，晚期腎小球功能 受損，出現(xiàn)肌酐清除率下降，尿素氮上升，呈尿毒癥的臨床表現(xiàn)，約10%死于尿毒癥，如果早 期診斷并給予恰當(dāng)治療，腎臟病變可以減輕或停止發(fā)展，這一點(diǎn)有別于其他不可逆腎病。
[0004] 慢性尿酸性腎病的診斷，主要依據(jù)腎組織活檢中有雙折光尿酸鹽結(jié)晶。但由于慢 性高尿酸血癥腎病時(shí)，尿酸鹽結(jié)晶多沉積在腎髓質(zhì)，越是髓質(zhì)深部越是明顯，針吸或穿刺活 檢常不易吸到。因此，凡中年以上男性腎病患者，有小至中等量蛋白尿伴鏡下血尿或肉眼血 尿、高血壓或水腫、尿濃縮功能受損者，伴發(fā)關(guān)節(jié)炎及尿路結(jié)石時(shí)，應(yīng)首先懷疑本病。當(dāng)先有 關(guān)節(jié)病變，又發(fā)現(xiàn)腎病變者，易作出診斷，但往往診斷時(shí)就已經(jīng)形成腎結(jié)石，延誤了最佳治 療時(shí)期，亦可因關(guān)節(jié)病變嚴(yán)重而忽視腎臟病變，造成漏診。因此，臨床上急需建立痛風(fēng)性腎 病的早期診斷標(biāo)準(zhǔn)，最終達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早治愈的目的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明在于提供絲氨酸蛋白酶抑制劑B3用于治療痛風(fēng)性腎病的一種新用途。
[0006] 其技術(shù)解決方案是：
[0007] 絲氨酸蛋白酶抑制劑B3在制備用于治療痛風(fēng)性腎病的藥物中的用途。
[0008] 絲氨酸蛋白酶抑制劑B3應(yīng)用在能診斷早期痛風(fēng)性腎病的藥物。
[0009] 絲氨酸蛋白酶抑制劑B3應(yīng)用在能降低腎臟組織中尿酸鹽沉積的藥物。
[0010] 本發(fā)明，絲氨酸蛋白酶抑制劑B3用于治療痛風(fēng)性腎病的用途，其有益技術(shù)效果如 下：通過蛋白質(zhì)組學(xué)手段證明了絲氨酸蛋白酶抑制劑B3在痛風(fēng)性腎病患者中表達(dá)水平顯 著降低，同時(shí)以大鼠痛風(fēng)性腎病模型為基礎(chǔ)，人工注射絲氨酸蛋白酶抑制劑B3后，能顯著 降低腎臟組織中尿酸鹽的沉積。
[0011] 絲氨酸蛋白酶抑制劑B3作為治療痛風(fēng)性腎病的藥物，對(duì)動(dòng)物無明顯損害，未發(fā)現(xiàn) 有不良副作用，是一種安全、可靠的能夠用于治療痛風(fēng)性腎病的藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步清楚、完整的說明：
[0013] 圖1為為痛風(fēng)性腎病患者2D DIGE分析電泳圖；
[0014] 圖2為絲氨酸蛋白酶抑制劑B3western blot驗(yàn)證圖；
[0015] 圖3為痛風(fēng)性腎病組病理圖；
[0016] 圖4為注射絲氨酸蛋白酶抑制劑B3后的腎臟病理圖。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 本發(fā)明應(yīng)用絲氨酸蛋白酶抑制劑B3為痛風(fēng)性腎病早期診斷的指標(biāo)，為臨床上針 對(duì)該病的診斷提供了可能的理論指導(dǎo)和依據(jù)。
[0018] 通過大量收集痛風(fēng)性腎病臨床病例，應(yīng)用2D DIGE進(jìn)行差異蛋白篩選，質(zhì)譜進(jìn)行差 異蛋白鑒定，western blot免疫著色進(jìn)行后期驗(yàn)證。
[0019] 技術(shù)指標(biāo)：
[0020] 1、痛風(fēng)性腎病患者與正常人應(yīng)用2D DIGE進(jìn)行標(biāo)志物即差異蛋白的篩選，參見圖 1 ；
[0021] 2、將差異蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定；
[0022] 3、將篩選到的差異蛋白通過進(jìn)行western blot驗(yàn)證參見圖2 ;
[0023] 具體試驗(yàn)步驟為：
[0024] 步驟1、蛋白提?。和ㄟ^丙酮沉淀法提取蛋白；
[0025] 步驟2、Bradford法蛋白定量；
[0026] 步驟3、DIGE實(shí)驗(yàn)樣品標(biāo)記；
[0027] 1)樣品調(diào)ph在8.0?9.0之間；
[0028] 2)取出DIGE染料母液，渦旋混勻30s，12000g離心30s，室溫放置lOmin，取0· 4ul 母液加入〇. 6ulDMF混勻，分別加入50ug的樣品中進(jìn)行標(biāo)記；
[0029] 3)渦旋混勻30s，12000g離心30s，冰上放置30min (避光）；
[0030] 4)加入Iul IOmmol賴氨酸終止反映，渦旋混勻30s，12000g離心30s，冰上放置 IOmin (避光）；
[0031] 5)將獲得的混合樣品中加入等體積的2X上樣緩沖液（4mgDTT，4ul兩性電解質(zhì) /0· 2ml水花液）；
[0032] 6)渦旋混勻30s，12000g離心30s，冰上放置IOmin (避光）；
[0033] 7)每管中加入水化液（15mgDTT，15ul兩性電解質(zhì)/2ml)至終體積450ul ;
[0034] 步驟4、等電聚焦；
[0035] 1)從冰箱取出IPG預(yù)制膠條，室溫放置10分鐘；
[0036] 2)在聚焦盤中將上面6管混合樣品連續(xù)、線性加樣，槽兩端各空Icm ;
[0037] 3)去除IPG預(yù)制膠條的保護(hù)層，放入聚焦盤，注意正反（膠面與樣品完全接觸）和 正負(fù)極（正極對(duì)正極），室溫放置30?60分鐘；IGP的重泡漲，應(yīng)保持20°C，溫度過低尿素 會(huì)結(jié)晶，溫度不穩(wěn)造成膠上蛋白質(zhì)點(diǎn)位置的變化；
[0038] 4)在膠條背面均勻、連續(xù)覆蓋礦物油；
[0039] 5)設(shè)置等點(diǎn)聚焦程序，注意正負(fù)極（正極對(duì)正極）；（注意設(shè)置IPG根數(shù)，溫度 17°C，極限50?70uA/每根）；
[0040] 6) 24cm設(shè)置：聚焦程序：
[0041]
[0042]

【權(quán)利要求】
1. 絲氨酸蛋白酶抑制劑B3在制備用于治療痛風(fēng)性腎病的藥物中的用途。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述絲氨酸蛋白酶抑制劑B3應(yīng)用于能診 斷早期痛風(fēng)性腎病的藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述絲氨酸蛋白酶抑制劑B3應(yīng)用于能降 低腎臟組織中尿酸鹽沉積的藥物。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104491839SQ201410699345
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】王云龍 申請(qǐng)人:王云龍