一種胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒及其制備方法和用途。本發(fā)明所提供的一種定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體采用熒光微球標(biāo)記。本發(fā)明所提供的試劑盒首次將胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1通過熒光微球免疫層析技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，兼具靈敏性和特異性，具有操作快速簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè) 試劑盒及其制備方法和用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-l(IGFBP-l)是用于檢測(cè)胎膜破裂的最佳方法，也是 經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)的金標(biāo)準(zhǔn)。世界各國臨床上有胎膜早破試紙條、高磷酸化、低磷酸化及非磷 酸化等不同稱謂，均指胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè)方法。該法經(jīng)臨床證明優(yōu)于其他 類似檢測(cè)方法，深藍(lán)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1檢測(cè)條準(zhǔn)確性高（大于99% )，簡單易 用。無論在婦產(chǎn)科診所、醫(yī)院檢查室、門診或家庭，均可得道同樣準(zhǔn)確的結(jié)果。
[0003] 非磷酸化的IGFBP-1主要存在羊水中由蛻膜細(xì)胞合成，臨產(chǎn)時(shí)蛻膜與絨毛膜分 離，蛻膜細(xì)胞碎片漏到宮頸黏液中。IGFBP-1在羊水中的體積分?jǐn)?shù)比母親血液中高100倍? 1000倍，其他體液較少，宮頸黏液、精液和尿液對(duì)實(shí)驗(yàn)均無影響。
[0004] 宮頸陰道分泌物中的IGFBP-1可作為診斷胎膜早破的客觀指標(biāo)。
[0005] 目前已知的IGFBP-1檢測(cè)方法還存在較多缺陷，如操作較為繁瑣，耗時(shí)較長，不適 宜臨床上使用。前我國市場(chǎng)上的IGFBP-1檢測(cè)試劑盒準(zhǔn)確度、靈敏度、重復(fù)性仍然較差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種快速測(cè)定胰島素樣生 長因子結(jié)合蛋白-1含量的試劑盒，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種快速測(cè)定胰島素樣生長因子結(jié) 合蛋白-1含量的試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端 開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含胰島素樣生長 因子結(jié)合蛋白-1單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上 的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1單克隆抗體采用熒光微球標(biāo)記。
[0008] 優(yōu)選的，所述金標(biāo)墊上的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1單克隆抗體采用180nm熒 光微球標(biāo)記，EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信號(hào)受背景干擾小，檢測(cè)靈敏度高，結(jié)果重 復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。
[0009] 優(yōu)選的，所述底板為PVC底板。
[0010] 優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測(cè)線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣 端較遠(yuǎn)一側(cè)。
[0011] 優(yōu)選的，所述檢測(cè)線上包被有胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1單克隆抗體。所述金 標(biāo)墊上的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1單克隆抗體與檢測(cè)線上的胰島素樣生長因子結(jié)合 蛋白-1單克隆抗體可以是相同的抗體，也可以是不同的抗體。
[0012] 優(yōu)選的，質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。
[0013] 優(yōu)選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖 液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液 的濃度為20-200mM。
[0014] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述的金標(biāo)墊還經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液選 自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 5_50mM〇
[0015] 優(yōu)選的，所述緩沖液還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。
[0016] 優(yōu)選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN20、 S-20TWEEN80、S-13TRIT0NX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRIT0NX305 中的任意一種或多 種的組合，所述表面活性劑的濃度為10?50g/L。
[0017] 優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發(fā)明所述的金標(biāo)墊在 預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉 和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L， 緩沖液的pH值為7. 2 - 7. 6。
[0018] 優(yōu)選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
[0019]

【權(quán)利要求】
1. 一種定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包 括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水 墊，所述金標(biāo)墊上包含胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢 測(cè)線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體采用熒光微球標(biāo)記。
2. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特 征在于，所述硝酸纖維素膜上，檢測(cè)線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣端較遠(yuǎn)一 側(cè)。
3. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特征 在于，所述檢測(cè)線上包被有胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體。
4. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特征 在于，質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。
5. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特征 在于，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸 緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 20-200mM〇
6. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特征 在于，所述金標(biāo)墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸 鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為5-50mM。
7. 如權(quán)利要求6所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特 征在于，所述緩沖液中還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000 或PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。
8. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特征 在于，還包括卡殼，所述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設(shè)有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于 所述試紙卡卡槽內(nèi)，所述上蓋設(shè)有測(cè)試窗和加樣孔，所述測(cè)試窗的位置與所述檢測(cè)線和質(zhì) 控線的位置相配合，所述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。
9. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測(cè)脂胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的檢測(cè)試劑盒，其特 征在于，所述檢測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1的含量。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1?9任一權(quán)利要求所述的定量檢測(cè)脂胰島素樣生長因子結(jié)合蛋 白-1的檢測(cè)試劑盒的制備方法，具體包括如下步驟： 1) 用熒光微球標(biāo)記的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體溶液噴涂金標(biāo)墊，制得包含 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體的金標(biāo)墊； 2) 在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線和質(zhì)控線上分別噴涂胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體 及羊抗鼠抗體，制得包被后的硝酸纖維素膜； 3) 將樣品墊、步驟1)制備的金標(biāo)墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在 底板上，切裁制得檢測(cè)試紙卡；最后將檢測(cè)試紙卡裝入卡殼制得檢測(cè)試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104459138SQ201410735829
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】吉權(quán) 申請(qǐng)人:重慶乾德生物技術(shù)有限公司