一種同時快速測定胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種同時快速測定陰道分泌物胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒及其制備方法和用途。本發(fā)明提供一種同時快速測定胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒，包括互相獨立的胰島素樣生長因子-1檢測試紙卡和胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡，所述胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡均各自包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、熒光標記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。本發(fā)明所提供的檢測試劑盒首次將胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白通過熒光微球免疫層析技術(shù)同時進行檢測，不受血清、尿液、精液干擾，準確度偏差＜10%。
【專利說明】一種同時快速測定胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接 蛋白的檢測試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種同時快速測定陰道分泌物胰島素樣生 長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒及其制備方法和用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 胰島素樣生長因子（insulin-likegrowthfactors，簡稱IGFs)是一類多功能細 胞增殖調(diào)控因子。在細胞的分化、增殖、個體的生長發(fā)育中具有重要的促進作用。
[0003] 1957年Salmon和Daughaday在研宄生長激素的過程中，首先發(fā)現(xiàn)給予切除垂體 的大鼠GH后其血清能刺激S滲入體外培養(yǎng)的軟骨中，但培養(yǎng)液中直接加入GH卻沒有作 用，故認為GH本身不能直接刺激軟骨生長，而是通過一種"硫酸化因子"起作用的，這種 因子后來被稱為生長調(diào)節(jié)素。1963年Froesh等發(fā)現(xiàn)血清中對肌肉和脂肪細胞的胰島素 樣作用只有小部分被胰島素的抗血清抑制，剩下不被抑制的胰島素樣活性可溶于酸化的 乙醇中，并命名為NSILAS即不被抑制的胰島素樣活性（nonsuppressibleinsulin-like activity)。1972年P(guān)ieron和Temin從牛血清中純化出一種能刺激細胞分裂的因子，命 名為"增殖刺激活性"。在上述三個實驗完成后，人們發(fā)現(xiàn)了上面三種物質(zhì)所具有的不可抑 制的胰島素樣活性及生長刺激作用。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，1978年人們純化了兩種 形式的NSILA(I、11 )并發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)與胰島素原相似，分別命名為胰島素樣生長因子I、 II(IGFBP-l、IGFBP-2)以強調(diào)它們與胰島素結(jié)構(gòu)的同源性。同時證實了"硫酸化因子"和 "增殖刺激活性"與IGF為同一蛋白多肽家族的成員。
[0004] 胎兒纖維連接蛋白（fetalFibronectin，fFN)，是子宮絨毛膜細胞外的基質(zhì)成分， 存在于絨毛膜與蛻膜之間，主要由滋養(yǎng)層細胞產(chǎn)生。由于孕21周以后，絨毛膜與蛻膜的融 合阻止了fFN的釋放，而使正常的孕婦在22-35孕周時，fFN的含量極低，只有在絨毛膜與 蛻膜分離、絨毛膜與蛻膜界面的細胞外基質(zhì)遭到機械損傷或蛋白水解酶的降解時，fFN才可 見于宮頸陰道分泌物中。因此，在孕22-35周之間，宮頸陰道分泌物中fFN的水平與是否發(fā) 生早產(chǎn)有很大的相關(guān)性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種同時快速測定陰道分 泌物胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒及其制備方法和用途，用于 解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種同時快速測定胰島素樣生長因 子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒，包括互相獨立的胰島素樣生長因子-1檢測試紙 卡和胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡，所述胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白檢測 試紙卡均各自包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、熒光標記物 結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述胰島素樣生長因子-1檢測試紙卡的熒光標記物結(jié) 合墊上包含IGFBP-1抗體，所述胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡的熒光標記物結(jié)合墊上包 含fFN抗體，所述各硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線，所述熒光標記物結(jié)合墊上的 IGFBP-1抗體和fFN抗體采用熒光微球標記。
[0007] 優(yōu)選的，所述所述熒光標記物結(jié)合墊上的IGFBP-1抗體和fFN抗體采用180nm熒 光微球標記，Ex(nm)=650/Em(nm) = 670,具有信號受背景干擾小，檢測靈敏度高，結(jié)果重 復性好的優(yōu)點。
[0008] 優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發(fā)明中所述的熒光標 記物結(jié)合墊還經(jīng)過預處理，預處理中所使用的預處理緩沖液包括下列組分：水蘇糖、明礬、 果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸 的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L，緩沖液的pH值為7. 2 - 7. 6。
[0009] 優(yōu)選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種同時快速測定胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的檢測試劑盒，包括 互相獨立的胰島素樣生長因子-1檢測試紙卡和胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡，所述胰島 素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡均各自包括底板、及位于底板表面的從 加樣端開始依次排列的樣品墊、熒光標記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述胰島素樣 生長因子-1檢測試紙卡的熒光標記物結(jié)合墊上包含IGFBP-1抗體，所述胎兒纖維連接蛋白 檢測試紙卡的熒光標記物結(jié)合墊上包含fFN抗體，所述各硝酸纖維素膜上包被有檢測線和 質(zhì)控線，所述熒光標記物結(jié)合墊上的IGFBP-1抗體和fFN抗體采用熒光微球標記。
2. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述各硝酸纖維素膜上，檢測線位于 離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣端較遠一側(cè)。
3. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述胰島素樣生長因子-1檢測試紙 卡的檢測線上包被有IGFBP-1抗體。
4. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述胎兒纖維連接蛋白檢測試紙卡 的檢測線上包被有fFN抗體。
5. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述各質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。
6. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，還包括卡殼，所述卡殼包括背卡和上 蓋，所述背卡設(shè)有兩個平行的試紙卡卡槽，所述試紙卡分別嵌于所述試紙卡卡槽內(nèi)，所述上 蓋設(shè)有兩個測試窗和兩個加樣孔，所述兩個測試窗的位置分別與兩個試紙卡的檢測線和質(zhì) 控線的位置相配合，所述兩個加樣孔的位置與兩個試紙卡的樣品墊的位置相配合。
7. 如權(quán)利要求6所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述兩個加樣孔之間還設(shè)有連接兩 個加樣孔的橫槽。
8. 如權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒用于同時定量檢測 胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連接蛋白的含量。
9. 如權(quán)利要求1-8任一權(quán)利要求所述的定量檢測胰島素樣生長因子-1和胎兒纖維連 接蛋白的檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟： 1) 用熒光微球標記的IGFBP-1抗體和fFN抗體溶液分別噴涂IGFBP-1、fFN熒光標記 物結(jié)合墊； 2) 在IGFBP-1硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上分別噴涂IGFBP-1抗體及羊抗鼠抗 體，在fFN硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上分別噴涂fFN抗體及羊抗鼠抗體； 3) 將兩套樣品墊、步驟1制備的熒光標記物結(jié)合墊、步驟2制備的硝酸纖維素膜、吸水 墊依次粘貼在各自的底板上，切裁制得檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測 試劑盒。
【文檔編號】G01N33/68GK104459116SQ201410738084
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】吳瑜佳 申請人:重慶乾德生物技術(shù)有限公司