生物載體及其在檢測(cè)中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種生物載體，其表面具有識(shí)別并與目標(biāo)分子結(jié)合作用的聚合物，作為載體顆粒應(yīng)用于免疫比濁檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)待測(cè)樣品中分子的定量檢測(cè)。本發(fā)明提供的生物載體不僅制取方便、穩(wěn)定性強(qiáng)、特異性高，且可以大量擴(kuò)增，減少生產(chǎn)環(huán)節(jié)，顯著降低生產(chǎn)成本，載體表面的抗原或抗體還使定量檢測(cè)更準(zhǔn)確。
【專利說(shuō)明】生物載體及其在檢測(cè)中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物檢測(cè)載體的應(yīng)用，尤其涉及一種利用展示技術(shù)獲得的生物檢 測(cè)載體在免疫比濁檢測(cè)中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 為了輔助臨床醫(yī)生對(duì)某類疾病的判斷，實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)早治療，對(duì)癥下藥的防治目的， 首先需要對(duì)生物體各項(xiàng)生理指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，以作直觀的了解。常用的檢測(cè)方法如：生化檢 測(cè)、微生物檢測(cè)和特異性抗體檢測(cè)等，也因此產(chǎn)生了眾多針對(duì)各種病癥的檢測(cè)產(chǎn)品（也稱： 試劑盒）。
[0003] 抗原或抗體的檢測(cè)屬于免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)記物的不同，可以將檢測(cè)方 法分為：酶聯(lián)免疫檢測(cè)、同位素免疫檢測(cè)、膠體金免疫檢測(cè)、熒光免疫檢測(cè)和化學(xué)發(fā)光免疫 檢測(cè)等，根據(jù)檢測(cè)方式不同，又可以分為：免疫酶標(biāo)板、免疫側(cè)向?qū)游鲈嚰埡兔庖邼B濾等方 法。除沉淀反應(yīng)、凝集試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等可用于特異性抗體檢測(cè)以外，免疫測(cè)定技術(shù)已 成為一中廣泛并常規(guī)應(yīng)用的檢測(cè)技術(shù)，其中酶聯(lián)免疫吸附（Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)是目前應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)技術(shù)之一。
[0004] 對(duì)于檢測(cè)多肽或蛋白類分子，限于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)定量準(zhǔn)確性差、操作時(shí)間長(zhǎng)、 自動(dòng)化程度低和干擾大等缺陷，其一般只能用于定性檢測(cè)。為了實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的定量測(cè)定， 中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200910194749. 3公開(kāi)一種半定量檢測(cè)類風(fēng)濕因子方法，以丙種球蛋白 通過(guò)物理吸附原理致敏在載體膠乳顆粒上，檢測(cè)時(shí)用不同稀釋度的待測(cè)血清與致敏膠乳顆 粒起凝集反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)類風(fēng)濕因子的半定量檢測(cè)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)201210545717. 5公 開(kāi)了一種人胱抑素C化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)方法，將磁微粒分離技術(shù)和酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)相結(jié) 合，采用雙抗體夾心一步反應(yīng)法原理，可用于血清、血漿和尿液樣本中人胱抑素C的含量測(cè) 定。該技術(shù)中，將FITC抗體共價(jià)連接在含羧基的磁微粒的表面制得磁分離試劑。
[0005] 研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適（一般規(guī)定抗體過(guò) 量）時(shí)，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促凝劑（如：聚乙二醇）的作用下，自液 相析出，形成微粒。在沉淀反應(yīng)中形成的復(fù)合物微粒具有特殊的光學(xué)性質(zhì)，可用儀器檢測(cè)， 提高了檢測(cè)的速度、靈敏度和易操作性。這種以抗原和抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測(cè)定的方法即為免疫 比濁檢測(cè)技術(shù)（如：CN1556408A)，又被分為：免疫透射比濁法、免疫散射比濁法和免疫膠乳 比池法。膠乳顆粒增強(qiáng)比池法（particle-enhancedturbidimetricimmunoassay，PETIA) 也是近年來(lái)出現(xiàn)的一種較為穩(wěn)定、準(zhǔn)確的體液蛋白均相免疫比濁檢測(cè)方法。
[0006] 如：中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200510096787. 7公開(kāi)了一種用于免疫比濁定量檢測(cè)的氨 基化高分子微球。將聚苯乙烯制成的種子微粒與氨基化單體進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，使種子微粒表 面接上氨基基團(tuán)，在交聯(lián)劑（戊二醛）的作用下與蛋白質(zhì)交聯(lián)而成穩(wěn)定的交聯(lián)產(chǎn)物。
[0007] 另如：中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200810084390.X公開(kāi)了一種檢測(cè)血清或血漿中胱抑素 C的膠乳增強(qiáng)型免疫比濁試劑盒，采用膠乳包被的抗胱抑素C的抗體，膠乳通過(guò)免疫反應(yīng)一 層一層聚集形成不溶性免疫顆粒復(fù)合物，膠乳的粒徑發(fā)生改變引起濁度明顯變化，用光透 射強(qiáng)度或光散射強(qiáng)度檢測(cè)該變化。
[0008] 再如：中國(guó)發(fā)明專利ZL201010140329.X公開(kāi)了一種采用膠乳免疫比濁法檢測(cè)纖 維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDP)含量的試劑盒，將酸化的抗人FDP抗體與聚乙烯基芐基氯膠 乳顆粒發(fā)生化學(xué)交聯(lián)并封閉后形成的抗人FDP抗體膠乳試劑。
[0009] 又如：中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)201210200339. 7公開(kāi)了一種競(jìng)爭(zhēng)法膠乳顆粒增強(qiáng)免疫 比濁BNP檢測(cè)試劑盒及其制備方法，在膠乳顆粒包被有FGRKMDR-X氨基酸序列，解決了目前 夾心法檢測(cè)BNP難度較高和檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題。
[0010] 基于膠乳顆粒增強(qiáng)比濁法定量檢測(cè)各種物質(zhì)的類似技術(shù)還有很多，各種技術(shù)各有 特點(diǎn)。雖有相關(guān)技術(shù)對(duì)膠乳進(jìn)行了改進(jìn)（如：CN101819208A)，但共同之處在于必須將具有 識(shí)別作用的分子（如：蛋白、多肽或抗體）共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合于載體顆粒（如：膠乳或磁微 粒）。雖然解決了定量檢測(cè)的問(wèn)題，簡(jiǎn)化了操作難度，縮短了檢測(cè)時(shí)間和提高了準(zhǔn)確性，但是 同樣增加了膠乳及其與特定分子結(jié)合的制備環(huán)節(jié)。由此，帶來(lái)了膠乳檢測(cè)試劑均一性和穩(wěn) 定性等新問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種生物載體，具有在其表面展示的聚合物，該聚合 物具有識(shí)別并與目標(biāo)分子結(jié)合的作用，適用于免疫比濁檢測(cè)技術(shù)。
[0012] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種生物載體，作為載體顆粒應(yīng)用于免疫比濁檢測(cè) 產(chǎn)品。
[0013] 本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種免疫比濁檢測(cè)組合物，含有一種表面具有聚合 物的生物載體。
[0014] 本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種免疫比濁檢測(cè)方法，向待測(cè)樣品中加入含有生 物載體的檢測(cè)試劑，以形成復(fù)合物（如：抗原和抗體形成的免疫復(fù)合物），并可通過(guò)進(jìn)行比 濁法定量或定性檢測(cè)。
[0015] 聚合物是一種由眾多原子或原子團(tuán)主要以共價(jià)鍵結(jié)合而成的化合物，尤其是以氨 基酸或核糖核苷為單體結(jié)合而成的多肽、蛋白質(zhì)、核酸、抗體或納米抗體。氨基酸或核糖核 苷可直接來(lái)自于自然界或通過(guò)水解、酶解或化學(xué)方式間接獲得，其構(gòu)型不得限定本發(fā)明。本 領(lǐng)域技術(shù)人員所能理解的，這些聚合物還應(yīng)當(dāng)包括其它必要的分子修飾或成鍵，如：但不僅 限于糖基化、二硫鍵和硫修飾等，以及以非共價(jià)鍵，如：但不僅限于氫鍵和疏水相互作用。
[0016] 這些聚合物應(yīng)理解為內(nèi)源性或外源性的分子，即其作為一個(gè)整體來(lái)自于生物載體 的遺傳信息所復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或表達(dá)而獲得的分子，如：核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體及其片段等， 也可以是并非完全來(lái)自于生物載體的遺傳信息所復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或表達(dá)的結(jié)果，即所謂的具有 外源性的屬性。這些外源性的聚合物可以通過(guò)生物或化學(xué)的方法在體外或體內(nèi)獲得、表達(dá) 或于生物載體表面展示，如：分離、多肽的化學(xué)合成、核酸的PCR擴(kuò)增、噬菌體展示、細(xì)菌展 示和真菌展示等。在這些聚合物中，優(yōu)先選擇的是含有抗原、抗體及其Fab片段、單鏈抗體、 單域抗體等分子。
[0017] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，抗原和抗體系免疫學(xué)上對(duì)兩種分子的表述，本發(fā)明中 應(yīng)理解為是一對(duì)能夠互相特異性結(jié)合的分子，具有識(shí)別性。
[0018] 抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖M(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體產(chǎn) 生抗體和引起細(xì)胞免疫。在免疫測(cè)定中，抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)?？乖姆磻?yīng)性取 決于抗原決定簇（antigenicdeterminant),亦稱表位（epitope)。一個(gè)抗原分子可帶有不 同的決定簇。此外，還可以通過(guò)基因工程或化學(xué)連接的方式對(duì)表位進(jìn)行拼接。
[0019] 本發(fā)明所稱的抗原還包括但不限于通常認(rèn)為的半抗原（即只有反應(yīng)原性，不具免 疫原性，hapten)。此外，那些既不具有反應(yīng)原性，也不具免疫原性的分子（如：重金屬）通 過(guò)與其它分子連接后而形成的半抗原或形成完全抗原而能夠被識(shí)別的分子也應(yīng)屬于此范 疇。
[0020] 抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即 IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測(cè)定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。本發(fā)明中，抗體還包 括具有識(shí)別抗原作用的分子，如：但不限于由Ig衍生而來(lái)的抗體Fab段、單鏈抗體、單域抗 體和納米抗體等也應(yīng)屬于此范疇。
[0021] 一種本發(fā)明納米抗體的【具體實(shí)施方式】，是基于一個(gè)重鏈可變區(qū)組成的單域抗體， 是通過(guò)克隆缺失輕鏈的重鏈抗體（如：來(lái)源于駱駝體內(nèi)）的可變區(qū)得到的功能性抗原結(jié)合 片段，亦稱單域抗體。其抗體片段可通過(guò)多肽合成的方式獲得，也可以通過(guò)生物載體表達(dá)所 克隆的序列而得到。
[0022] 多肽、蛋白質(zhì)、抗體、抗體Fab段、單鏈抗體、單域抗體或納米抗體的制備，可以通 過(guò)從自然界生物體中分離、多肽化學(xué)合成（Eur.J.Immunol. 1994, 24, 3188-3193 ;J.Org. Chem. 1972, 37, 3404-3409 ;多肽合成[P]，北京：科學(xué)出版社，1985)、原核微生物（如：大腸 桿菌）基因工程菌表達(dá)后純化、真核微生物（如：啤酒酵母、畢赤酵母和乳酸克魯韋酵母 等）基因工程菌表達(dá)后純化或由動(dòng)物細(xì)胞（如：中國(guó)倉(cāng)鼠CH0、倉(cāng)鼠BHK、鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠 成纖維細(xì)胞、猴CV1細(xì)胞和人淋巴細(xì)胞等）等進(jìn)行表達(dá)并純化。
[0023] 核酸的制備可以通過(guò)體外擴(kuò)增技術(shù)獲得，這些技術(shù)已記載于《分子克隆手冊(cè)》一書(shū) 中，也是普通技術(shù)人員必須具備和熟練掌握的操作技能。
[0024] 生物載體如：但不僅限于噬菌體、病毒、細(xì)菌、真菌和細(xì)胞等，其通常包括遺傳物質(zhì) 和包被。包被應(yīng)當(dāng)理解為能將遺傳物質(zhì)包覆于其內(nèi)，并能在其表面承載遺傳物質(zhì)所表達(dá)的 聚合物或能將聚合物結(jié)合于其表面的一類物質(zhì)的統(tǒng)稱。適宜的包被，如：但不僅限于脂膜、 脂質(zhì)體、細(xì)胞膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞器膜、病毒外殼和噬菌體外殼等。
[0025] 本發(fā)明中，通過(guò)生物表達(dá)系統(tǒng)而將外源性的分子引入生物載體中，并在生物載體 表面得以展示。對(duì)于這樣的展示，本領(lǐng)域技術(shù)人員僅需采用常見(jiàn)的展示技術(shù)就可實(shí)現(xiàn)。生 物表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)理解為是一類能攜帶遺傳信息的物質(zhì)，如：噬菌體展示相關(guān)質(zhì)粒（如：包括 但不限于pCantab、pHen和pComb等）、病毒展示相關(guān)質(zhì)粒（如：包括但不限于pBACsurf-1、 pLenti6、pAAv和pLV.Des2d.P等）、細(xì)菌展示相關(guān)質(zhì)粒（如：包括但不限于pMB172、 pINA1317、pETAg43、pTNIM和pBLIM等）和真菌展示相關(guān)質(zhì)粒（如：包括但不限于pCTcon2、 pYDl和pKFS等）。
[0026] 本發(fā)明所稱的展示還包括采用物理或化學(xué)方法將外源性的分子通過(guò)吸附、疏水相 互作用或偶聯(lián)等方式標(biāo)記到生物載體表面。
[0027] 本發(fā)明提供的生物載體還包括聚合體，即若干個(gè)生物載體以自動(dòng)的方式（如：物 理吸附）聚集在一起，而形成的集合體。在此情況下，應(yīng)理解為一種生物自發(fā)的自然現(xiàn)象。
[0028] 本發(fā)明提供的生物載體還包括連接體，即采用生物的或化學(xué)的連接技術(shù) (BioConjugateChemistry)以人為操作方式實(shí)現(xiàn)將一種或若干種生物載體相互連接在一 起。在此情況下，應(yīng)理解為其有別于生物的自然現(xiàn)象，而是在人為干預(yù)的情況下實(shí)現(xiàn)。這些 技術(shù)可以從現(xiàn)有已公開(kāi)的專利/申請(qǐng)、期刊或論文中了解并實(shí)施，如：美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)（ACS) 提供的期刊BioConjugateChemistry。
[0029] 本發(fā)明的提供一種免疫比濁檢測(cè)組合物，采用含有一種表面具有聚合物的生物載 體，其它組份與已公開(kāi)的技術(shù)大體相同。該免疫比濁檢測(cè)組合物用于定量檢測(cè)待測(cè)樣品所 含的目標(biāo)分子。
[0030] 本發(fā)明提供的一種免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于將生物載體作為檢測(cè)試劑加入 待測(cè)樣品中形成免疫復(fù)合物，或再輔以增敏劑、表面活性劑和緩沖液等手段，進(jìn)而通過(guò)比濁 法對(duì)待測(cè)樣品的進(jìn)行定量和定性的檢測(cè)。
[0031] 本發(fā)明所稱的"待測(cè)樣品"或"試樣"源自于受試者或病患的血液、分泌物、組織液、 體外培養(yǎng)液或組織等。
[0032] 本發(fā)明所稱的"病患"、"病人"和"受試者"指人、野生動(dòng)物和家畜（Livestock)。野 生動(dòng)物為自然狀態(tài)下未經(jīng)人工馴化的動(dòng)物。家畜是為了提供食物來(lái)源而人工飼養(yǎng)的動(dòng)物， 如：猴、狗、鼠、倉(cāng)鼠、豬、兔、奶牛、水牛、公牛、綿羊、山羊、鵝和雞等。給予診斷的"患者"優(yōu) 先選擇哺乳動(dòng)物，尤其是人。
[0033] 本發(fā)明提供的一種生物載體，為噬菌體，其外殼上具有抗體。
[0034] 本發(fā)明提供的一種生物載體，為噬菌體，其外殼上具有抗原。
[0035] 本發(fā)明提供的另一種生物載體，為細(xì)菌，其上細(xì)胞壁具有抗體或抗原。
[0036] 本發(fā)明提供的另一種生物載體，為真菌，其上細(xì)胞膜或細(xì)胞壁具有抗體或抗原。
[0037] 本發(fā)明針對(duì)不同種類的特定分子（抗原或抗體），可以通過(guò)添加目前通用的免疫 比濁法相關(guān)的增敏劑（如：PEG)、表面活性劑（如：但不僅限于非離子性表面活性劑、陰離 子性表面活性劑、陽(yáng)離子性表面活性劑和兩性表面活性劑）、緩沖液（如：磷酸緩沖液、Tris 緩沖液、咪唑緩沖液、三乙醇胺?鹽酸緩沖液、MES緩沖液、Bis-Tris緩沖液、ADA緩沖液、 PIPES緩沖液、Bis-Tris-丙烷緩沖液、ACES緩沖液、MOPS緩沖液、BES緩沖液、TES緩沖液、 HEPES緩沖液、HEPPS緩沖液、Tricine緩沖液、Bicine緩沖液和TAPS緩沖液等）或其他試劑 對(duì)檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)范圍或檢測(cè)靈敏度進(jìn)行調(diào)整。同時(shí)，檢測(cè)結(jié)果也可能會(huì)因檢測(cè)儀器（如： 不同光徑或光程的比色杯）、檢測(cè)環(huán)境（如：溫度和pH值等）不同而略有差異。
[0038] 本發(fā)明技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的有益效果：
[0039] 本發(fā)明通過(guò)在生物載體上展示特定抗原或抗體的方式，改變了目前使用雜交瘤獲 得抗體的方式，不僅簡(jiǎn)化了制取的過(guò)程，而且所獲得的單個(gè)生物載體（如：噬菌體）所展示 的抗體或抗原均為單克隆。
[0040] 經(jīng)驗(yàn)證，本發(fā)明生物載體適用于在可見(jiàn)光范圍內(nèi)應(yīng)用于樣品的免疫比濁檢測(cè)，不 僅大大加快檢測(cè)速度（與ELISA相比），其在較寬的濃度范圍內(nèi)均表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系， 有利于提高微量物質(zhì)檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
[0041] 本發(fā)明生物載體制備方便，穩(wěn)定性強(qiáng)、特異性高和易于大規(guī)模制取等特點(diǎn)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0042] 圖1為本發(fā)明生物載體用于檢測(cè)IgY的時(shí)間與濃度關(guān)系圖；
[0043] 圖2為本發(fā)明生物載體用于檢測(cè)無(wú)關(guān)蛋白BSA的時(shí)間與濃度關(guān)系圖；
[0044] 圖3為本發(fā)明生物載體在320nm波長(zhǎng)下的免疫比濁檢測(cè)結(jié)果；
[0045] 圖4為本發(fā)明生物載體在400nm波長(zhǎng)下的免疫比濁檢測(cè)結(jié)果；
[0046] 圖5為本發(fā)明生物載體濃度為3. 525X105檢測(cè)血清中抗體結(jié)果；
[0047] 圖6為本發(fā)明生物載體濃度為3. 525X107檢測(cè)血清中抗體結(jié)果；
[0048] 圖7為本發(fā)明生物載體配合使用5%PEG4000助劑而獲得的濁度變化情況；
[0049] 圖8為本發(fā)明生物載體配合使用不同分子量的PEG助劑而獲得的濁度變化情況；
[0050] 圖9為本發(fā)明生物載體配合使用不同濃度的PEG6000助劑而獲得的濁度變化情 況；
[0051] 圖10為通過(guò)化學(xué)法獲得的本發(fā)明生物載體使用不同濃度的PEG6000助劑而獲得 的濁度變化情況；
[0052] 圖11為通過(guò)化學(xué)法獲得的本發(fā)明生物載體對(duì)梯度抗原進(jìn)行檢測(cè)而獲得的濁度變 化情況。

【具體實(shí)施方式】
[0053] 以下結(jié)合附圖詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案。本發(fā)明實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技 術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精 神和范圍,其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。
[0054] 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如沒(méi)有特別注明，可參考自《分子克隆》一書(shū)（J.薩 姆布魯克、E.F.弗里奇、T.曼尼阿蒂斯著，科學(xué)出版社，1994)。該書(shū)及其后續(xù)出版版本是 本領(lǐng)域技術(shù)人員在進(jìn)行與分子生物學(xué)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)最常用的具有指導(dǎo)性的參考書(shū)籍。 此外，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康模绢I(lǐng)域技術(shù)人員在各種商品化試劑盒（Kit)所附帶的操作手冊(cè) 的指導(dǎo)下完成相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)或委托專業(yè)化的公司進(jìn)行，如：基因測(cè)序、質(zhì)粒測(cè)序和確定分子量 等。
[0055] 本發(fā)明實(shí)施例其它所用的試劑若未經(jīng)說(shuō)明，均購(gòu)自西格瑪一奧德里奇（Sigma- Aldrich)公司或者國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0056] 實(shí)施例1噬菌體納米抗體庫(kù)構(gòu)建
[0057] 通過(guò)抽取7只羊駝血細(xì)胞，并分離其淋巴細(xì)胞后，設(shè)計(jì)羊駝納米抗體引物，通過(guò)巢 式PCR，克隆羊駝納米抗體基因，構(gòu)建噬菌粒，感染細(xì)菌后，在輔助噬菌體協(xié)助下，包裝成展 示納米抗體的噬菌體，成功獲得滴度在10 11的納米抗體庫(kù)。主要內(nèi)容如下：
[0058] 涉及的三對(duì)引物如表1
[0059]表1
[0060]

【權(quán)利要求】
1. 一種生物載體在免疫比濁檢測(cè)技術(shù)中的應(yīng)用，所述的生物載體表面具有識(shí)別并與目 標(biāo)分子結(jié)合作用的聚合物。
2. -種生物載體在免疫比濁檢測(cè)產(chǎn)品中的應(yīng)用，以所述的生物載體作為載體顆粒，其 表面具有識(shí)別并與目標(biāo)分子結(jié)合作用的聚合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生物載體的用途，其特征在于所述的聚合物包括氨基酸、 多肽和蛋白質(zhì)之一種或幾種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生物載體的用途，其特征在于所述的聚合物為抗原和抗 體之一種或幾種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生物載體的用途，其特征在于所述的生物載體選自于噬 菌體、病毒、細(xì)菌和真菌之一種或幾種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生物載體的用途，其特征在于所述的生物載體為由噬菌 體、病毒、細(xì)菌和真菌之一種或幾種形成的聚合體和連接體。
7. -種免疫比濁檢測(cè)組合物，其特征在于含有一種生物載體，所述的生物載體表面具 有識(shí)別并與目標(biāo)分子結(jié)合作用的聚合物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫比濁檢測(cè)組合物，其特征在于所述的免疫比濁檢測(cè)組合 物為檢測(cè)試劑盒。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫比濁檢測(cè)組合物，其特征在于所述的聚合物包括氨基 酸。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫比濁檢測(cè)組合物，其特征在于所述的聚合物為抗原和 抗體之一種或幾種。
11. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫比濁檢測(cè)組合物，其特征在于所述的生物載體選自于 噬菌體、病毒、細(xì)菌和真菌之一種或幾種。
12. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫比濁檢測(cè)組合物，其特征在于所述的生物載體為由噬 菌體、病毒、細(xì)菌和真菌之一種或幾種形成的聚合體和連接體。
13. -種免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于將生物載體作為檢測(cè)試劑加入待測(cè)樣品中形 成復(fù)合物，所述的生物載體表面具有識(shí)別并與目標(biāo)分子結(jié)合作用的聚合物。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于所述的生物載體為由噬菌 體、病毒、細(xì)菌和真菌之一種或幾種形成的聚合體和連接體。
15. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于所述的生物載體為由噬菌 體、病毒、細(xì)菌和真菌之一種或幾種。
16. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于還加入增敏劑、表面活性 劑和緩沖液之一種或幾種。
17. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于所述的聚合物為抗原和抗 體之一種或幾種。
18. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫比濁檢測(cè)方法，其特征在于所述的聚合物包括氨基 酸。
【文檔編號(hào)】G01N33/569GK104459127SQ201410777916
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月16日
【發(fā)明者】顧晉元 申請(qǐng)人:顧晉元