一種中藥制劑心速寧膠囊的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種中藥制劑心速寧膠囊的檢測方法，該方法包括：Ⅰ、中藥原料的鑒別：對黃連、枳實、人參、苦參、麥冬、甘草的鑒別；Ⅱ、中藥有效成分黃連含量的測定。本發(fā)明采用高效液相色譜法與薄層色譜法提供了一種有效的檢測方法，可以有效的控制心速寧膠囊的質(zhì)量，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的檢測方法科學、可行，有較大的實用價值。
【專利說明】一種中藥制劑心速寧膠囊的檢測方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑，具體涉及中藥制劑的檢測方法，尤其涉及一種中藥制劑心 速寧膠囊的檢測方法。

【背景技術】
[0002] 中藥制劑心速寧膠囊是陜西摩美得制藥有限公司與山東中醫(yī)藥大學合作研制而 成的中國國家六類新藥。該制劑的中藥原料由黃連、半夏、茯苓、枳實、常山、蓮子心、苦參、 青蒿、人參、麥冬、甘草十一味中藥材組成。在配方中，黃連、半夏、茯苓、枳實為主藥，用以清 心熱，寧心定悸；常山、苦參、青蒿、蓮子心有清熱化痰作用；用人參、麥冬益氣養(yǎng)陰相佐；甘 草甘平，歸心肺脾胃經(jīng)，緩和藥性，調(diào)和諸藥為使藥。黃連清心降火，半夏化痰安中，蓮子心 清心安神，常山善開痰結(jié)，枳實行氣消痰，茯苓健脾化痰，苦參、青蒿寧心定悸，人參、麥冬益 氣，養(yǎng)陰、安神，甘草緩和藥性，調(diào)和諸藥。
[0003] 因此，心速寧膠囊具有抗心律失常，改善血脂、血液流變學，耐缺氧、耐低溫游泳及 鎮(zhèn)定安神四大作用。是中國唯一一個治療輕、中度室性早搏實證患者（如痰熱擾心證）的 有效中成藥。由于心速寧膠囊是由十一味藥材組成的中藥復方制劑，其中成分比較復雜，檢 測比較困難，產(chǎn)品的質(zhì)量不易控制，因此，需要根據(jù)中藥制劑心速寧膠囊配方特點，建立科 學的質(zhì)量檢測方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，需要對中藥制劑心速寧膠囊 的質(zhì)量進行有效、準確地控制，對其成品質(zhì)量建立科學的、有效的檢測方法。
[0005] 中藥制劑心速寧膠囊的配方中藥原料由黃連、半夏、茯苓、枳實、常山、蓮子心、苦 參、青蒿、人參、麥冬、甘草十一味中藥材組成。組成。
[0006] 本發(fā)明提供了一種中藥制劑心速寧膠囊的檢測方法。
[0007] 本發(fā)明采用高效液相色譜法與薄層色譜法對中藥制劑心速寧膠囊的中藥成分進 行檢測。
[0008] 本發(fā)明的方法包括下列步驟：
[0009]I、中藥原料的鑒別：
[0010] (一）黃連的鑒別：
[0011] ⑴供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物0.5-lg，研細加甲醇 10-20ml，置水浴中加熱回流15-30分鐘，濾過，濾液濃縮至3-6ml，作為供試品溶液；
[0012] (2)對照品溶液的制備：取黃連對照藥材50mg，加甲醇10ml-20ml，置水浴中加熱 回流15-30分鐘，濾過，濾液濃縮至3-6ml，制成對照藥材溶液；
[0013] (3)鹽酸小檗堿對照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含 0. 5mg的溶液，作為對照品溶液；
[0014] (4)吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別點于同一以 羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上（市售），以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃 氨試液（體積比為12 : 6 : 3 : 3 : 1)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的層析缸內(nèi)，展開，取 出，晾干，置紫外光燈（365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相 應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點為鹽酸小檗堿；
[0015] (二）枳實的鑒別：
[0016] (1)供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物2-5g，研細，置50-100ml 圓底燒瓶中，加甲醇20-40ml，置水浴中加熱回流30-60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣用水 20ml-50ml分三次加熱溶解，濾過，濾液置分液漏斗中，用0.lmol/L鹽酸調(diào)節(jié)PH至3,用乙 酸乙酯振搖提取3次，每次15ml-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2ml-5ml使溶解， 作為供試品溶液；
[0017] (2)柚皮苷對照品溶液的制備：取柚皮苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.4mg的溶 液，作為對照品溶液；
[0018] (3)吸取上述三種溶液各4μ1，分別點于同一含0. 5%氫氧化鈉的羧甲基纖維素 鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比為6 : 2 : 3)的上層溶液 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1 %三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試 品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點為柚皮苷；
[0019](三）人參的鑒別：
[0020] (1)供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物4_8g，研細，加三氯甲烷 40-80ml，置水浴中加熱回流1-1. 5小時，棄去三氯甲烷提取液，藥渣蒸干，加水飽和的正丁 醇30-60ml，超聲處理（功率250W，頻率40kHz) 30-60分鐘，濾過，濾液置分液漏斗中，用氨 試液洗滌2次，每次30-60ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2-4ml使溶解，作為供 試品溶液；
[0021] (2)人參對照藥材溶液制備：取人參對照藥材lg，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中 加熱回流1-1. 5小時，棄去三氯甲烷提取液，藥渣蒸干，加水飽和的正丁醇30-60ml，超聲處 理（功率250W，頻率40kHz) 30-60分鐘，濾過，濾液置分液漏斗中，用氨試液洗滌2次，每次 30-60ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2-4ml使溶解，制成對照藥材溶液；
[0022] (3)人參皂苷Re對照品和人參皂苷Rgl對照品溶液制備：取人參皂苷Re對照品 和人參皂苷Rgl對照品，分別加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液；
[0023] (4)吸取上述四種溶液各10μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅 膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（體積比為13 : 7 : 2)10°C以下放置的下層溶液 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10 %硫酸乙醇溶液，于105°C加熱至斑點顯色清晰，在日 光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點，Rf值偏小的為人參皂苷Re,Rf值偏大的為人參皂苷Rgl;
[0024] 對照藥材色譜和對照品色譜同時作對照，既保證了人參藥材整體的質(zhì)量控制又保 證了作為人參特征性成分的檢出。質(zhì)量控制標準更全面科學。
[0025](四）苦參的鑒別：
[0026](1)供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物2_4g，研細，置50-100ml 具塞瓶中，加0.lmol/L鹽酸30-60ml，放置15分鐘，混勻，濾過，濾液移至分液漏斗中， 用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH至10,加氯化鈉使飽和，用三氯甲烷振搖提取2次，每次 15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇使溶解，作為供試品溶液；
[0027] (2)苦參對照藥材溶液制備：取苦參對照藥材0. 5g，置50-100ml具塞瓶中，力口 0·lmol/L鹽酸30-60ml，放置15分鐘，混勻，濾過，濾液移至分液漏斗中，用lmol/L氫氧化 鈉溶液調(diào)PH至10,加氯化鈉使飽和，用三氯甲烷振搖提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲 烷液，蒸干，殘渣加乙醇使溶解，制成對照藥材溶液；
[0028] (3)槐定堿對照品溶液的制備：取槐定堿對照品，加乙醇制成每Iml含0·2mg的溶 液，作為對照品溶液；
[0029] (4)吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一含2%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉 為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（體積比2 : 4 : 2 :I)KTC 以下放置的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，在日光下檢視， 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點是苦參；在與對照品色 譜相應的位置上，顯一個相同的棕色斑點為槐定堿。
[0030] 對照藥材色譜和對照品色譜同時作對照，既保證了人參藥材整體的質(zhì)量控制又保 證了作為人參特征性成分的檢出。質(zhì)量控制標準更全面科學。
[0031](五）麥冬的鑒別：
[0032] (1)供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物4_8g，研細，加水20_40ml， 加熱至沸使溶解，放冷，濾過，濾液加鹽酸〇. 5ml，加熱煮沸，放冷，用三氯甲烷20-40ml振搖 提取，分取三氯甲烷層，濃縮至約l_2ml，作為供試品溶液；
[0033] (2)麥冬對照藥材溶液制備：取麥冬對照藥材lg，加水20_40ml，煎煮10-20分鐘， 濾過，濾液加鹽酸〇. 5ml，加熱煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振搖提取，分取三氯甲烷層，濃 縮至約l-2ml，作為對照藥材溶液；
[0034] (3)吸取上述兩種溶液5μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（體積比4 : 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙 醇溶液，于l〇〇°C加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位置上，顯相同顏色的主斑點；
[0035](六）甘草的鑒別：
[0036] (1)供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物2_4g，研細，加鹽酸l_2ml 和乙醚15-30ml，加熱回流提取1-2小時，放冷，濾過，濾液用水洗滌3次，每次5-10ml，棄去 水液，揮干乙醚溶液，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0037] (2)甘草次酸對照品溶液制備：取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每Iml含Img 的溶液，作為對照品溶液；
[0038] (3)吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G薄層板上，以石油醚（30?60°C)_甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10 : 20 : 7 : 0.5)為展 開劑，展開，取出，晾干，噴以10 %磷鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱約5分鐘，在日光下檢視， 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點為甘草次酸；
[0039]II、中藥有效成分黃連含量的測定：
[0040] 黃連為本藥品中君藥，且黃連中小檗堿含量高，測定方法成熟，因此，選擇檢測黃 連中小檗堿含量。
[0041](1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水 (體積比48 : 52) (IOOOml中含ΚΗ2Ρ043· 4g，十二烷基磺酸鈉I. 2g)為流動相；檢測波長為 270nm;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算，應不低于3500;
[0042] (2)對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每Iml含 25μg的溶液，即得；
[0043] (3)供試品溶液的制備取中藥制劑心速寧膠囊1粒的內(nèi)容物，研細，取0.2g，精密 稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（體積比100 : 1)的混合溶液25-40ml，密塞， 稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz) 30-50分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減 失的重量，搖勻，濾過，精密量取2ml，置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液， 即得；
[0044] (4)測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測 定，即得每粒中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物含黃連以鹽酸小檗堿（C2tlH17NO4 ·HC1)計，不得 少于8.Omg。
[0045] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明對心速寧膠囊通過采用高效液相色譜法與薄層色譜法提供 了一種有效的質(zhì)量檢測方法，本發(fā)明可以有效的檢測中藥制劑心速寧膠囊中的有效成分黃 連、枳實、人參、苦參、麥冬、甘草，從而控制心速寧膠囊的質(zhì)量，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明 的檢測方法科學、可行，有較大的實用價值。

【具體實施方式】
[0046] 下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而 更為清楚。但實施例僅是范例性的，不對本發(fā)明的范圍構成任何限制，本領域技術人員應該 理解為，在不偏離本發(fā)明的范圍下可以對本發(fā)明技術方案的細節(jié)和形式進行修改或替換， 但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0047] 實施例1中藥制劑心速寧膠囊的鑒別
[0048] (1)黃連的鑒別
[0049] 取中藥制劑心速寧膠囊內(nèi)容物0.5g(陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號： 131001，131002,131003)，研細，加甲醇10ml，置水浴中加熱回流15分鐘，濾過，濾液濃 縮至5ml，作為供試品溶液。取黃連對照藥材50mg(黃連（120913-201109)，購自中國食 品藥品檢定研究院），加甲醇l〇ml，制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿（鹽酸小檗堿 (110713-201212，購自中國食品藥品檢定研究院）對照品，加甲醇制成每Iml含0· 5mg的溶 液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液1μ1，對照藥材溶液和對照品溶液各2μ1，分別 點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上。以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙 醇-濃氨試液（體積比12 : 6 : 3 : 3 : 1)為展開劑，置氨蒸氣預飽和的層析缸內(nèi)，展開， 取出，晾干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜色譜相應的位 置上，顯相同的黃色熒光斑點，鑒定為黃連，在與對照藥材色譜色譜相應的位置上，顯相同 的黃色熒光斑點為鹽酸小檗堿。
[0050] (2)枳實的鑒別
[0051] 取中藥制劑心速寧膠囊內(nèi)容物（陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號：131001， 131002,131003) 2g，研細，置50ml圓底燒瓶中，加甲醇20ml，置水浴中加熱回流30分鐘， 濾過，濾液蒸干，殘漁用水20ml分三次加熱（60°C)溶解，濾過，濾液置分液漏斗中，用 0.lmol/L鹽酸調(diào)節(jié)PH至3,用乙酸乙酯振搖提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘 渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。取柚皮苷對照品（柚皮苷（110722-201111)，購自 中國食品藥品檢定研究院），加甲醇制成每Iml含0. 4mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上 述兩種溶液各4μ1，分別點于同一含0. 5%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的娃膠G 薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（體積比6 : 2 : 3)的上層溶液為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品 色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點為柚皮苷。
[0052] (2)人參的鑒別
[0053] 取中藥制劑心速寧膠囊內(nèi)容物（陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號：131001， 131002.131003) 4g，研細，加三氯甲烷40ml，置水浴中加熱回流1小時，棄去三氯甲烷提取 液，藥渣蒸干，加水飽和的正丁醇30ml，超聲處理（功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，濾過， 濾液置分液漏斗中，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲 醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參對照藥材（120917-201110)，購自中國食品藥品 檢定研究院）lg，加三氯甲烷40ml，置水浴中加熱回流1小時，棄去三氯甲烷提取液，藥渣 蒸干，加水飽和的正丁醇30ml，超聲處理（功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，濾過，濾液置分 液漏斗中，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶 解，，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Re對照品（110757-201324)，購自中國食品 藥品檢定研究院）和人參皂苷Rgl對照品（110703-201128)，購自中國食品藥品檢定研究 院），分別加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典 2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各10μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素 鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（體積比13 : 7 : 2)10°C以下放置 的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10 %硫酸乙醇溶液，于l〇5°C加熱至斑點顯色 清晰，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相 同顏色的斑點，鑒定為人參。
[0054] (3)苦參的鑒別
[0055] 取中藥制劑心速寧膠囊內(nèi)容物（陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號：131001， 131002.131003) 2g，研細，置50ml具塞瓶中，加0.lmol/L鹽酸30ml，放置15分鐘，混勻，濾 過，濾液移至分液漏斗中，用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH至10,加氯化鈉使飽和，用三氯甲烷 振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。 取苦參對照藥材（苦參（121019-101006)，購自中國藥品生物制品檢定所）0. 5g，加0.Imol/ L鹽酸30ml，放置15分鐘，混勻，濾過，濾液移至分液漏斗中，用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH 至10,加氯化鈉使飽和，用三氯甲烷振搖提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣 加乙醇Iml使溶解，同法制成對照藥材溶液。再取槐定堿對照品（槐定堿（110784-200804)， 購自中國食品藥品檢定研究院），加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作為對照品溶液。吸 取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一含2%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的娃膠 G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（體積比2 : 4 : 2 :I)KTC以下放置的上層 溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，在日光下檢視。供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，鑒定為苦參；在與對照品色譜相應的位 置上，顯一個相同的棕色斑點，鑒定為槐定堿。
[0056] (4)麥冬的鑒別
[0057] 取中藥制劑心速寧膠囊內(nèi)容物（陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號：131001, 131002.131003) 4g，研細，加水20ml，加熱至沸使溶解，放冷，濾過，濾液加鹽酸0. 5ml，加熱 煮沸，放冷至室溫，用三氯甲烷20ml振搖提取，分取三氯甲烷層，濃縮至Iml，作為供試品溶 液。另取麥冬對照藥材（麥冬（121013-201009,購自中國藥品生物制品檢定所）lg，加水 20ml，煎煮10分鐘，濾過，濾液加鹽酸0. 5ml，加熱煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振搖提取，分 取三氯甲烷層，濃縮至約lml，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部 附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液5μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（體積比4 : 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸 乙醇溶液，于l〇〇°C加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜 相應的位置上，顯相同顏色的斑點，鑒定為麥冬。
[0058] (5)甘草的鑒別
[0059] 取中藥制劑心速寧膠囊內(nèi)容物（陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號：131001， 131002，131003)2g，研細，加鹽酸Iml和乙醚15ml，加熱回流提取1小時，放冷至室溫，濾 過，濾液用水洗滌3次，每次5ml，棄去水液，揮干乙醚溶液，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供 試品溶液。另取甘草次酸（甘草次酸110723-200612,購自中國藥品生物制品檢定所）對 照品，加無水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典 2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各2μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素 鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（30?60°C)_甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（體積比 10 : 20 : 7 : 0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10 %磷鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱 約5分鐘，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點，鑒定為甘草次酸。
[0060] 實施例2本發(fā)明心速寧膠囊中有效成分含量的測定
[0061] 檢測黃連成分
[0062] 原標準中含量測定方法為薄層色譜掃描法測定處方中黃連的有效成分鹽酸小檗 堿，該方法相對較為落后，故研究選擇采用高效液相色譜法對本品處方中黃連的有效成分 的含量測定研究。
[0063] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水 (48 : 52) (1000ml中含KH2P043. 4g，十二烷基磺酸鈉I. 2g)為流動相；檢測波長為270nm。 理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算，應不低于3500。
[0064] 對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每Iml含25μg 的溶液，即得。
[0065]供試品溶液的制備（樣品由陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)，批號：131001， 131002.131003) 取本品10粒的內(nèi)容物，研細，取約0.2g，研細，取0.2g，精密稱定，置具塞錐 形瓶（25ml)中，精密加入甲醇-鹽酸（100 : 1)的混合溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲處 理（功率250W，頻率40kHz) 40分鐘，放冷至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖 勻，濾過，精密量取2ml，置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0066]測定結(jié)果：心速寧膠囊3批產(chǎn)品（批號：131001，131002,131003)，含量測定結(jié)果：三批產(chǎn)品每粒含黃連以小檗堿計均為11. 3mg/粒。
[0067] 實施例3本發(fā)明中藥制劑心速寧膠囊的檢測方法研究試驗
[0068] 一、系統(tǒng)適用性試驗
[0069] 取本品（131001批號，陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)）樣品適量，照上述供試品溶 液制備方法制成供試品溶液；再分別精密稱取鹽酸小檗堿對照品和鹽酸巴馬汀對照品分別 配置成相應濃度的對照品溶液；再取缺黃連的陰性樣品〇. 2047g，按上述供試品溶液制備 方法制成陰性對照溶液。取上述四種溶液，分別精密吸取10μ1注入色譜儀，照上述色譜條 件測定。結(jié)果供試品溶液HPLC圖譜中鹽酸巴馬汀色譜峰的保留時間為7. 213min，鹽酸小檗 堿色譜峰的保留時間為8. 140min，兩成分色譜峰之間及其與相鄰色譜峰之間均分離良好； 鹽酸小檗堿色譜峰峰形好，鹽酸巴馬汀色譜峰因含量比例較小而峰高較低，峰型較差；陰性 樣品色譜中，在與鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿色譜峰相對應的位置上未見色譜峰，陰性對照 無干擾。因此，本品采用高效液相色譜法測定黃連中有效成分的含量，其中鹽酸小檗堿照上 述方法測定，方法可行；其中鹽酸巴馬汀因含量較低，色譜峰型差，故本研究暫不進行鹽酸 巴馬汀含量測定方法學研究，只進行鹽酸小檗堿含量測定方法學研究。
[0070] 二、耐用性試驗
[0071] 取本品（131001批號樣品，陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)）同一供試品溶液，照上 述色譜條件測定，其中流動相分別按下列比例，分別測定對照品溶液、供試品溶液和陰性對 照溶液，根據(jù)在流動相比例少量變化的情況下，供試品色譜峰中鹽酸小檗堿主峰與相鄰色 譜峰的分離效果，以及鹽酸小檗堿色譜峰峰型的好壞情況，確定本品含量測定流動相要求。 流動相比例及試驗結(jié)果如下 ：
[0072] 流動相1 :乙睛-水（48 : 52) (1000ml中含KH2P043. 4g，十二烷基磺酸鈉I. 2g)
[0073] 流動相2:乙睛-水（50 : 50) (1000ml中含KH2P043. 4g，十二烷基磺酸鈉I. 2g)
[0074] 流動相3:乙睛-水（52 : 48) (1000ml中含KH2P043. 4g，十二烷基磺酸鈉I. 2g)
[0075] 實驗結(jié)果表明，本品按上述三個流動相比例測定，供試品色譜中鹽酸小檗堿色譜 峰峰型均較好，且與相鄰色譜峰分離效果好，陰性對照色譜中，在與鹽酸小檗堿色譜保留時 間相對應的位置上未顯色譜峰，不干擾本品含量測定（其中流動相1條件下測得的圖譜參 照系統(tǒng)適用性試驗項下圖譜）。故說明本品按上述色譜條件測定，在流動相比例少量變化的 情況下，不影響含量測定結(jié)果。
[0076] 三、供試品溶液制備方法考察
[0077] 本品含量測定項下供試品溶液制備方法參照中國藥典2010年版一部黃連藥材項 下含量測定供試品溶液制備方法，并結(jié)合本品制劑特點，選擇對超聲提取時間進行考察，選 擇最佳提取條件。具體制備方法如下：
[0078] 取本品（131001批號樣品陜西摩美得制藥有限公司生產(chǎn)）的內(nèi)容物，研細，分別稱 取6份，各取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（100 : 1)的混合 溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz) 30分鐘（其中兩份超聲處理 40分鐘，兩份超聲處理50分鐘），放冷，再稱定重量，分別用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，精密量取續(xù)濾液2ml，置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0079] 分別取按上述三種制備方法制備的6份供試品溶液，照上述色譜條件測定，分別 計算鹽酸小檗堿含量，確定最佳制備方法。試驗結(jié)果見表1。
[0080]表1不同超聲處理時間下含量測定結(jié)果
[0081]

【權利要求】
1. 一種中藥制劑心速寧膠囊的檢測方法，其特征在于，該方法包括下列步驟： I、中藥原料的鑒別： (一） 黃連的鑒別： (1) 供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物0. 5-lg，研細加甲醇10-20ml， 置水浴中加熱回流15-30分鐘，濾過，濾液濃縮至3-6ml，作為供試品溶液； (2) 對照品溶液的制備：取黃連對照藥材50mg，加甲醇10ml-20ml，置水浴中加熱回流 15-30分鐘，濾過，濾液濃縮至3-6ml，制成對照藥材溶液； (3) 鹽酸小檗堿對照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每lml含0. 5mg 的溶液，作為對照品溶液； (4) 吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各2iU，分別點于同一以羧甲 基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液，體 積比為12 : 6 : 3 : 3 : 1為展開劑，置氨蒸氣預飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫 外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相 同的黃色突光斑點為鹽酸小檗堿； (二） 枳實的鑒別： ⑴供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物2-5g，研細，置50-100ml圓底燒 瓶中，加甲醇20-40ml，置水浴中加熱回流30-60分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣用水20ml-50ml 分三次加熱溶解，濾過，濾液置分液漏斗中，用〇. lmol/L鹽酸調(diào)節(jié)PH至3,用乙酸乙酯振搖 提取3次，每次15ml-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2ml-5ml使溶解，作為供試品 溶液； (2) 柚皮苷對照品溶液的制備：取柚皮苷對照品，加甲醇制成每lml含0. 4mg的溶液， 作為對照品溶液； (3) 吸取上述三種溶液各4 yl，分別點于同一含0. 5%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉為 黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為6 : 2 : 3的上層溶液為展 開劑，展開，取出，晾干，噴以1 %三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜 中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的黃色熒光斑點為柚皮苷； (三） 人參的鑒別： (1) 供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物4-8g，研細，加三氯甲烷 40-80ml，置水浴中加熱回流1-1. 5小時，棄去三氯甲烷提取液，藥渣蒸干，加水飽和的正丁 醇30-60ml，超聲處理功率250W，頻率40kHz 30-60分鐘，濾過，濾液置分液漏斗中，用氨試 液洗滌2次，每次30-60ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2-4ml使溶解，作為供試 品溶液； (2) 人參對照藥材溶液制備：取人參對照藥材lg，加三氯甲烷40-80ml，置水浴中加 熱回流1-1.5小時，棄去三氯甲烷提取液，藥渣蒸干，加水飽和的正丁醇30-60ml，超聲處 理功率250W，頻率40kHz30-60分鐘，濾過，濾液置分液漏斗中，用氨試液洗滌2次，每次 30-60ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2-4ml使溶解，制成對照藥材溶液； (3) 人參皂苷Re對照品和人參皂苷Rgl對照品溶液制備：取人參皂苷Re對照品和人 參皂苷Rgl對照品，分別加甲醇制成每lml含2mg的溶液，作為對照品溶液； (4) 吸取上述四種溶液各10 yl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄 層板上，以三氯甲烷-甲醇-7jC，體積比為13 : 7 : 2，10°C以下放置的下層溶液為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以10 %硫酸乙醇溶液，于l〇5°C加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視， 供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，Rf值偏 小的為人參皂苷Re，Rf值偏大的為人參皂苷Rgl ; (四） 苦參的鑒別： (1) 供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物2-4g，研細，置50-100ml具塞瓶 中，加0? lmol/L鹽酸30-60ml，放置15分鐘，混勻，濾過，濾液移至分液漏斗中，用lmol/L氫 氧化鈉溶液調(diào)PH至10,加氯化鈉使飽和，用三氯甲烷振搖提取2次，每次15-30ml，合并三 氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇使溶解，作為供試品溶液； (2) 苦參對照藥材溶液制備：取苦參對照藥材0. 5g，置50-100ml具塞瓶中，加0. lmol/ L鹽酸30-60ml，放置15分鐘，混勻，濾過，濾液移至分液漏斗中，用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào) PH至10,加氯化鈉使飽和，用三氯甲烷振搖提取2次，每次15-30ml，合并三氯甲烷液，蒸干， 殘渣加乙醇使溶解，制成對照藥材溶液； (3) 槐定堿對照品溶液的制備：取槐定堿對照品，加乙醇制成每lml含0. 2mg的溶液， 作為對照品溶液； (4) 吸取上述三種溶液各5iU，分別點于同一含2%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉為黏 合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-7jC，體積比2 : 4 : 2 : 1，10°C以下放 置的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，在日光下檢視，供試品 色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點是苦參；在與對照品色譜相應 的位置上，顯一個相同的棕色斑點為槐定堿； (五） 麥冬的鑒別： (1) 供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物4-8g，研細，加水20-40ml，加 熱至沸使溶解，放冷，濾過，濾液加鹽酸〇. 5ml，加熱煮沸，放冷，用三氯甲烷20-40ml振搖提 取，分取三氯甲烷層，濃縮至約l_2ml，作為供試品溶液； (2) 麥冬對照藥材溶液制備：取麥冬對照藥材lg，加水20-40ml，煎煮10-20分鐘，濾 過，濾液加鹽酸〇. 5ml，加熱煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振搖提取，分取三氯甲烷層，濃縮 至約l-2ml，作為對照藥材溶液； (3) 吸取上述兩種溶液5 yl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層 板上，以三氯甲烷-丙酮，體積比4 : 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶 液，于l〇〇°C加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的 位置上，顯相同顏色的主斑點； (六） 甘草的鑒別： (1) 供試品溶液制備：取中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物2-4g，研細，加鹽酸l-2ml和乙 醚15-30ml，加熱回流提取1-2小時，放冷，濾過，濾液用水洗滌3次，每次5-10ml，棄去水 液，揮干乙醚溶液，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液； (2) 甘草次酸對照品溶液制備：取甘草次酸對照品，加無水乙醇制成每lml含lmg的溶 液，作為對照品溶液； (3) 吸取上述兩種溶液各2 yl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄 層板上，以石油醚（30?60°C)_甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10 : 20 : 7 : 0.5)為展開 齊|J，展開，取出，晾干，噴以10 %磷鑰酸乙醇溶液，于105°C加熱約5分鐘，在日光下檢視，供 試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點為甘草次酸； II、中藥有效成分黃連含量的測定： (1) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水，體 積比48 : 52,1000ml中含KH2P043. 4g，十二烷基磺酸鈉1. 2g為流動相；檢測波長為270nm ; 理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算，應不低于3500 ; (2) 對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每lml含25 y g 的溶液，即得； (3) 供試品溶液的制備取中藥制劑心速寧膠囊1粒的內(nèi)容物，研細，取0. 2g，精密稱定， 置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸，體積比100 : 1的混合溶液25-40ml，密塞，稱定重 量，超聲處理功率250W，頻率40kHz，30-50分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重 量，搖勻，濾過，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； (4) 測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOul，注入液相色譜儀，測定， 即得每粒中藥制劑心速寧膠囊的內(nèi)容物含黃連以鹽酸小檗堿C2(lH17N04 ? HC1計，不得少于 8. Omg〇
【文檔編號】G01N30/90GK104483408SQ201410802546
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月19日 優(yōu)先權日:2014年12月19日
【發(fā)明者】王保安, 毛鵬 申請人:王保安