檢測人血液中1,5-脫水山梨醇的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種檢測人血液中1,5-脫水山梨醇的試劑盒，R1：緩沖液20～200mM4-氨基安替比林1～10mMATP0.2～2mMPEP1～10mM,ATP-HK 1～50KU/L,丙酮酸激酶1～50KU/L抗壞血酸氧化酶1～50KU/L釩酸鈉0.05～10mM表面活性劑0.01～5％穩(wěn)定劑0.1～10％防腐劑0.01～1％；R2:緩沖液20～200mM，TOOS 1～10mM，POD 1～100KU/L，PROD 10～200KU/L，表面活性劑0.01～5％，穩(wěn)定劑0.1～10％，防腐劑0.01～1％。具有效防止葡萄糖、膽紅素、抗壞血酸、血脂等內(nèi)源性干擾，穩(wěn)定性好的優(yōu)點。
【專利說明】檢測人血液中1,5-脫水山梨醇的試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的 試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病屬于臨床常見病、多發(fā)病，原因是胰島素分泌不足引起，血液中1，5_脫水 山梨醇（1，5-AG)與葡萄糖（GLU)、糖化血紅蛋白（HbAlc)、糖化白蛋白（GA)呈顯著的負相 關(guān)。有資料表明，血漿葡萄糖（GLU)>8. 3mmol/L者，無一例伴有高水平的血漿1，5_脫水 山梨醇（1，5-AG)。
[0003] 1，5-脫水山梨醇（1，5-AG)與現(xiàn)有的糖尿病指標均呈現(xiàn)出顯著的負相關(guān)，血液 中1，5_脫水葡萄糖醇的減少程度與糖尿病的嚴重程度顯著相關(guān)。1，5_脫水葡萄糖醇 (1，5-AG)與其他指標最顯著的區(qū)別是反映糖尿病病情變化的周期不同，血糖（GLU)反映 病人當(dāng)時血糖狀況，糖化白蛋白（GA)反應(yīng)病人半個月內(nèi)血糖的平均狀況，糖化血紅蛋白 (HbAlc)反映病人最近2?3個月左右的血糖平均水平，而1，5_脫水葡萄糖醇（1，5-AG)可 以反映近幾天至1周的平均血糖水平。
[0004] 測定1，5-脫水山梨醇有高效液項色譜、微柱層析法、化學(xué)發(fā)光法等。這些方法比 較準確，但操作費事難以批量檢測，并且這些方法只能現(xiàn)配現(xiàn)用，不能長期保存。而酶法測 定由于其無污染，并可試用與生化儀，操作簡單等特點，有利于大規(guī)模推廣。目前國內(nèi)外主 要采用酶法測定1，5_脫水山梨醇（1，5-AG)，主要有氧化酶法與脫氫酶法兩種方法。氧化 酶法的原理為，通過吡喃糖氧化酶（PROD)催化1，5-脫水山梨醇（1，5-AG)生成1，5-脫水 果糖和H2O2, H2O2在過氧化物酶的作用下使4-AAP和TOOS反應(yīng)生成醌類有色物質(zhì)。脫氫酶 法的原理為：1，5_脫水山梨醇在ADP依賴性己糖激酶（ADP-HK)的作用下生成AG-6磷酸 (AG-6-P)。AG-6-P再和NADP進行反應(yīng)，生成NADPH。NADPH具有還原性，和顯色劑作用生 成顯色物質(zhì)。但目前市場上的酶法試劑盒存在著穩(wěn)定性差，易受葡萄糖、膽紅素、抗壞血酸、 血脂等內(nèi)源性干擾。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種能有效防止葡萄糖、膽紅素、抗壞血 酸、血脂等內(nèi)源性干擾，穩(wěn)定性好的檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒。
[0006] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種檢測人血液中1，5-脫水 山梨醇的試劑盒，該試劑盒包含試劑1和試劑2,試劑1和試劑2中的組分和含量包括 ：
[0007] 試劑 1 :
[0008]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包含試劑1和 試劑2,上述兩試劑中的各組分和含量包括 ： 試劑1 : 緩沖液 20~200mM 4-氨基安替比林 l~10mM ATP 0.2~2mM 磷酸烯醇式丙酮酸 1?10mM ATP依賴性己糖激酶 1?50KU/L 丙酮酸激酶 1-50KU/L 抗壞血酸氧化酶 1-50KU/L 偏釩酸鈉 0.05~10mM 表面活性劑 0.01?5% 穩(wěn)定劑 0.1?10% 防腐劑 0.01~1%; 試劑2 : 緩沖液 20?200mM TOOS 卜 10mM 過氧化物酶 1~100KU/L 吡喃糖氧化酶 10~200KU/L 表面活性劑 0.01?5% 穩(wěn)定劑 0.1-10% 防腐劑 0.01~1%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于：該試 劑盒包含試劑1和試劑2,上述兩試劑中的各組分和含量包括 ： 試劑1 : 緩沖液 lOOmM 4-氨基安替比林 5mM ATP lmM 磷酸烯醇式丙酮酸 5mM ATP依賴性己糖激酶 20KU/L 丙酮酸激酶 20KU/L 抗壞血酸氧化酶 20KU/L 偏釩酸鈉 2mM 表面活性劑 0.1% 穩(wěn)定劑 1% 防腐劑 0.1% 試劑2 : 緩沖液 lOOmM TOOS 5mM 過氧化物酶 30KU/L 吡喃糖氧化酶 50KU/L 表面活性劑 0.1% 穩(wěn)定劑 1% 防腐劑 0.1%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于： 所述的緩沖液為磷酸緩沖液，Tris-HCl緩沖液，MES，MOPS，HEPES中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于： 所述表面活性劑為SDS，吐溫，曲拉通，司班，Brij35中的一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于： 所述穩(wěn)定劑為海藻糖，蔗糖，甘露醇中的一種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于： 所述防腐劑為疊氮鈉，proclin300,G418,苯甲酸鈉中的一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于，試劑1 中還含有0. 1?lOOmM鉀離子，或者0. 1?lOOmM鎂離子。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測人血液中1，5-脫水山梨醇的試劑盒，其特征在于，試劑1 和試劑2中的緩沖液的pH值為5. 0?9. 0。
【文檔編號】G01N33/66GK104483487SQ201410803217
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月22日
【發(fā)明者】鄒炳德, 鄒繼華, 汪屹, 賈江花 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司