一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明實(shí)施例公開了一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法，應(yīng)用于臨床免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒包括卡殼，甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，所述卡殼包括上卡殼和下卡殼，所述上卡殼上有觀察窗和加樣孔，所述下卡殼的卡殼槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，所述上卡殼和所述下卡殼卡接固定。本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒解決了傳統(tǒng)的檢測(cè)方法的步驟繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)也定性檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題。
【專利說(shuō)明】一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及臨床免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法。

【背景技術(shù)】
[0002]甲胎蛋白(AFP)是一組不均質(zhì)蛋白質(zhì)組成的糖蛋白，它們?cè)诜肿咏Y(jié)構(gòu)上大部分相同，但是結(jié)構(gòu)上的碳水化合物鏈(糖鏈)有所不同，故稱為AFP異質(zhì)體。AFP的分子類型與其組織器官的來(lái)源不同其糖鏈結(jié)構(gòu)有所不同。組織細(xì)胞在合成分泌甲胎蛋白的過(guò)程中，根據(jù)細(xì)胞特性以及所處的生理與病理狀態(tài)不相同，可將其分為:AFP-L1來(lái)自良性肝病，占其主要部分;AFP-L2來(lái)自孕婦；而AFP-L3則為肝癌細(xì)胞分泌。
[0003]檢測(cè)AFP異質(zhì)體對(duì)肝癌的早期診斷有重要價(jià)值，其優(yōu)點(diǎn)有:不受AFP ^ 400 μ g/L的診斷標(biāo)準(zhǔn)所限制；不為影像陰性結(jié)果所束縛；縮短AFP濃度升高至肝癌確診的時(shí)間；有助于良性與惡性肝病的鑒別。臨床研宄發(fā)現(xiàn)大約35%的小肝癌(<2cm)患者血清中可檢出AFP-L3。肝癌患者AFP-L3陽(yáng)性常提示腫瘤生長(zhǎng)速度很快且可能發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。與影像學(xué)相比較，AFP-L3在早期肝癌的診斷中可提前9-12個(gè)月。AFP-L3用于腫瘤診斷的敏感性與腫瘤的臨床分期相關(guān)，大約在60%左右，特異性大于95%。AFP-L3是HCC OfepatoCellularCarcinoma，肝細(xì)胞肝癌)的一個(gè)重要的特異性的腫瘤標(biāo)志物。
[0004]目前AFP-L3的分析方法多采用親和層析、親和印跡、微量離心柱法和交叉免疫電泳法等，這些方法大多存在檢測(cè)過(guò)程繁瑣，檢驗(yàn)周期長(zhǎng)，靈敏度低等問(wèn)題。
[0005]雖然膠體金快速診斷技術(shù)已經(jīng)發(fā)展的很成熟了，但是尚未有一種膠體金檢測(cè)試劑盒檢測(cè)甲胎蛋白異質(zhì)體L3，且現(xiàn)有檢測(cè)甲胎蛋白其他異質(zhì)體的檢測(cè)方法也多是定性檢測(cè)的，即也尚未有一種定量檢測(cè)甲胎蛋白膠體金檢測(cè)方法，因此急需一種能夠簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法，解決了傳統(tǒng)的檢測(cè)方法的步驟繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)也定性檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題。
[0007]有鑒于此，本發(fā)明提供一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒，可包括:
[0008]卡殼，甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，
[0009]所述卡殼包括上卡殼和下卡殼，所述上卡殼上有觀察窗和加樣孔，所述下卡殼的卡殼槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，所述上卡殼和所述下卡殼卡接固定，
[0010]所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和PVC板，所述PVC板位于所述卡殼槽底層，所述硝酸纖維膜位于所述PVC板上層的中部，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于所述PVC板的上部且與所述硝酸纖維膜上端部分重疊，所述吸水墊位于所述PVC板的下部且與所述硝酸纖維膜硝酸纖維膜的下端部分重疊，所述樣品墊位于所述PVC板的上部且與所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊非靠近所述硝酸纖維膜一端部分重疊，所述硝酸纖維膜以靠近所述樣品墊為起始端，靠近所述吸水墊為終止端，依次包被甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的甲胎蛋白單克隆抗體，
[0011]所述甲胎蛋白試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和PVC板，所述PVC板位于所述卡殼槽底層，所述硝酸纖維膜位于所述PVC板上層的中部，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于所述PVC板的上部且與所述硝酸纖維膜上端部分重疊，所述吸水墊位于所述PVC板的下部且與所述硝酸纖維膜硝酸纖維膜的下端部分重疊，所述樣品墊位于所述PVC板的上部且與所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊非靠近所述硝酸纖維膜一端部分重疊，所述硝酸纖維膜以靠近所述樣品墊為起始端，靠近所述吸水墊為終止端，依次包被甲胎蛋白單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的甲胎蛋白單克隆抗體。
[0012]本發(fā)明還提供了一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的使用方法，其中，所述方法包括:
[0013]取待測(cè)液體在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的加樣孔中加入I?2滴，待完全滲入；
[0014]待所述待測(cè)液體與所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒中的甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條上的抗體均發(fā)生反應(yīng)后，在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的觀察孔中分別觀察所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線以及所述甲胎蛋白試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色情況；
[0015]待觀察到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均顯色后，將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均放入到膠體金定量檢測(cè)儀內(nèi)讀取所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度與所述甲胎蛋白試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度，得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值；
[0016]將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值分別與標(biāo)準(zhǔn)濃度擬合曲線對(duì)比得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度；
[0017]根據(jù)所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度的比值與預(yù)設(shè)閾值的比較判斷所述待測(cè)液體的陰陽(yáng)性。
[0018]本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法，采用膠體金定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣品中的AFP-L3，樣品中AFP-L3的含量與顯色區(qū)的顏色成正比，通過(guò)膠體金定量檢測(cè)儀讀取顯色區(qū)的強(qiáng)度。與傳統(tǒng)膠體金檢測(cè)條相比，檢測(cè)的靈敏度更高，特異性更強(qiáng)，且可以定量。解決了傳統(tǒng)的AFP-L3定量檢測(cè)方法操作步驟繁瑣，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題，同時(shí)解決了 AFP-L3定性檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的一種甲胎蛋白膠體金試劑盒的APF-L3試紙條和APF試紙條的結(jié)構(gòu)圖；
[0020]圖2為本發(fā)明實(shí)施例2提供的一種甲胎蛋白膠體金試劑盒的使用方法流程圖；
[0021]圖3為本發(fā)明實(shí)施例2提供的一種甲胎蛋白膠體金試劑盒的檢測(cè)AFP-L3結(jié)果的濃度擬合曲線圖；
[0022]圖4為本發(fā)明實(shí)施例2提供的一種甲胎蛋白膠體金試劑盒的檢測(cè)AFP結(jié)果的濃度擬合曲線圖。

【具體實(shí)施方式】
[0023]本發(fā)明實(shí)施例1提供了一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒，能夠解決了傳統(tǒng)的檢測(cè)方法的步驟繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)也定性檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題。
[0024]為了使本【技術(shù)領(lǐng)域】的人員更好地理解本發(fā)明方案，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分的實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0025]請(qǐng)參閱圖1，為本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒，本實(shí)施例1具體可以包括:
[0026]卡殼，甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，
[0027]所述卡殼包括上卡殼和下卡殼，所述上卡殼上有觀察窗和加樣孔，所述下卡殼的卡殼槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，所述上卡殼和所述下卡殼卡接固定，
[0028]所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和PVC板，所述PVC板位于所述卡殼槽底層，所述硝酸纖維膜位于所述PVC板上層的中部，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于所述PVC板的上部且與所述硝酸纖維膜上端部分重疊，所述吸水墊位于所述PVC板的下部且與所述硝酸纖維膜硝酸纖維膜的下端部分重疊，所述樣品墊位于所述PVC板的上部且與所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊非靠近所述硝酸纖維膜一端部分重疊，所述硝酸纖維膜以靠近所述樣品墊為起始端，靠近所述吸水墊為終止端，依次包被甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的甲胎蛋白單克隆抗體，
[0029]所述甲胎蛋白試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和PVC板，所述PVC板位于所述卡殼槽底層，所述硝酸纖維膜位于所述PVC板上層的中部，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于所述PVC板的上部且與所述硝酸纖維膜上端部分重疊，所述吸水墊位于所述PVC板的下部且與所述硝酸纖維膜硝酸纖維膜的下端部分重疊，所述樣品墊位于所述PVC板的上部且與所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊非靠近所述硝酸纖維膜一端部分重疊，所述硝酸纖維膜以靠近所述樣品墊為起始端，靠近所述吸水墊為終止端，依次包被甲胎蛋白單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的甲胎蛋白單克隆抗體。
[0030]具體的，本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒中所述的甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜(NC膜)、吸水墊和PVC板，其中的PVC板作為反應(yīng)支持物位于底層，NC膜位于PVC板的中部，金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于NC膜上部的一側(cè)并與之部分重疊；吸水墊位于NC膜上相對(duì)于結(jié)合墊而言的另一側(cè)并于NC膜部分重疊；樣品墊位于NC膜上與吸水墊相反的一側(cè)并于結(jié)合墊部分重疊；所述的NC膜以靠近樣品墊一端為起始端，靠近吸水墊一端為末端，依次包被AFP-L3 (AFP)單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，分別為檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)，結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的AFP單克隆抗體。
[0031]需要說(shuō)明的是，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的所述硝酸纖維膜包被羊抗鼠IgG抗體的為質(zhì)控線，且所述檢測(cè)線與所述質(zhì)控線平行；所述甲胎蛋白試紙上的所述硝酸纖維膜包被所述甲胎蛋白單克隆抗體的為檢測(cè)線，所述甲胎蛋白試紙條上的所述硝酸纖維膜包被羊抗鼠IgG抗體的為質(zhì)控線，且所述檢測(cè)線與所述質(zhì)控線平行；所述觀察窗為長(zhǎng)方形，所述加樣孔為圓形。
[0032]為了更清楚的理解一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒，現(xiàn)將所述甲胎蛋白膠體金試劑盒的制備方法描述如下:
[0033]所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的制備主要是所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條的制備，其中，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的制備包括膠體金標(biāo)記、金標(biāo)結(jié)合墊的制備和硝酸纖維膜的包被。所述膠體金的制備包括:(I)將10ml 0.01%的AuCl3溶液磁力攪拌下加熱至沸騰，準(zhǔn)確加入1.5-3ml I %的檸檬酸三鈉溶液。待顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱15分鐘，冷卻后加純水補(bǔ)充至100ml，避光保存。
[0034](2)用 K2CO3調(diào)節(jié) pH 至 7-9。
[0035](3)加入K2CO3靜置5分鐘，每毫升金溶液加入10_30ug AFP單抗，優(yōu)選為20ug，靜置30分鐘。
[0036](4)加入10 %的BSA (牛血清蛋白)溶液，一直到最終濃度為0.1%，靜置20分鐘。
[0037](5)將上述溶液12000rpm離心50分鐘，棄上清，用復(fù)溶液等體積復(fù)溶。此時(shí)膠體金標(biāo)記完成，接下來(lái)是金標(biāo)結(jié)合墊的制備，即將上述復(fù)溶后的溶液均勻滴加到6mm寬的結(jié)合墊上，37°C干燥12小時(shí)，最終制得金標(biāo)結(jié)合墊。下面是硝酸纖維膜的包被，包括:
[0038](1)APF-L3單抗和羊抗鼠IgG抗體用pH7.4PBS緩沖液稀釋，APF-L3單抗?jié)舛葹?.5-2.5mg/ml羊抗鼠IgG抗體濃度為0.8mg/ml。
[0039](2)按照l(shuí)ul/cm的速度包被檢測(cè)線和控制線。為防止擴(kuò)散，包被好的PVC板立即放到37°C干燥12小時(shí)。
[0040]所述甲胎蛋白試紙條的制備也是包括膠體金標(biāo)記、金標(biāo)結(jié)合墊的制備和硝酸纖維膜的包被。
[0041]所述膠體金的制備包括:(I)將10ml 0.01%的AuCl3溶液磁力攪拌下加熱至沸騰，準(zhǔn)確加入1.5-3ml I %的檸檬酸三鈉溶液。待顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱15分鐘，冷卻后加純水補(bǔ)充至100ml，避光保存。
[0042](2)用 K2CO3調(diào)節(jié) pH 至 7-9。
[0043](3)加入K2CO3靜置5分鐘，每毫升金溶液加入10-30ug AFP單抗，優(yōu)選為20ug，靜置30分鐘。
[0044](4)加入10 %的BSA (牛血清蛋白)溶液，一直到最終濃度為0.1%，靜置20分鐘。
[0045](5)將上述溶液12000rpm離心50分鐘，棄上清，用復(fù)溶液等體積復(fù)溶。此時(shí)膠體金標(biāo)記完成，接下來(lái)是金標(biāo)結(jié)合墊的制備，即將上述復(fù)溶后的溶液均勻滴加到6mm寬的結(jié)合墊上，37°C干燥12小時(shí)，最終制得金標(biāo)結(jié)合墊。下面是硝酸纖維膜的包被，包括:
[0046](I) APF單抗和羊抗鼠IgG抗體用pH7.4PBS緩沖液稀釋，APF單抗?jié)舛葹?.5-2.5mg/ml羊抗鼠IgG抗體濃度為0.8mg/ml。
[0047](2)按照l(shuí)ul/cm的速度包被檢測(cè)線和控制線。為防止擴(kuò)散，包被好的PVC板立即放到37°C干燥12小時(shí)。
[0048]在上述步驟均完成后，分別將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條的樣品墊、結(jié)合墊、NC膜和吸水墊分別依次黏貼到PVC板上，切成4_條，裝袋封口，室溫保存?zhèn)溆谩?br> [0049]本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒，采用膠體金檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣品中的AFP-L3，樣品中AFP-L3的含量與顯色區(qū)的顏色成正比，通過(guò)膠體金定量檢測(cè)儀讀取顯色區(qū)的強(qiáng)度。與傳統(tǒng)膠體金檢測(cè)條相比，檢測(cè)的靈敏度更高，特異性更強(qiáng)，且可以定量。解決了傳統(tǒng)的AFP-L3定量檢測(cè)方法操作步驟繁瑣，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題，同時(shí)解決了 AFP-L3定性檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題。
[0050]本發(fā)明還提供了一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的使用方法的實(shí)施例2，結(jié)合附圖2所示，其中，所述方法包括:
[0051]S201、取待測(cè)液體在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的加樣孔中加入I?2滴，待完全滲入；
[0052]S202、待所述待測(cè)液體與所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒中的甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條上的抗體均發(fā)生反應(yīng)后，在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的觀察孔中分別觀察所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線以及所述甲胎蛋白試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色情況；
[0053]S203、待觀察到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均顯色后，將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均放入到膠體金定量檢測(cè)儀內(nèi)讀取所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度與所述甲胎蛋白試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度，得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值；
[0054]S204、將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值分別與標(biāo)準(zhǔn)濃度擬合曲線對(duì)比得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度；
[0055]S205、根據(jù)所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度的比值與預(yù)設(shè)閾值的比較判斷所述待測(cè)液體的陰陽(yáng)性。
[0056]優(yōu)選的，若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值小于等于最小預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為陰性；若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值大于等于最大預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為陽(yáng)性；若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值大于所述最小預(yù)設(shè)閾值且小于所述最大預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為可疑。
[0057]優(yōu)選的，所述甲胎蛋白試紙條上的甲胎蛋白單克隆抗體和膠體金復(fù)合后為金標(biāo)，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線包被甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG抗體。
[0058]具體的，一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的使用方法具體可包括:取待測(cè)液體在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的加樣孔中加入I?2滴，待完全滲入，優(yōu)選的，取待測(cè)肝癌患者的血清為待測(cè)液體適量，滴入到所述甲胎蛋白膠體金檢查試劑盒的加樣孔中。由于所述甲胎蛋白膠體金檢查試劑盒中有甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條兩種，所以待所述待測(cè)液體與所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒中的甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條上的抗體均發(fā)生反應(yīng)后，在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的觀察孔中分別觀察所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線以及所述甲胎蛋白試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色情況。可以理解的是，所述甲胎蛋白試紙條上的甲胎蛋白單克隆抗體和膠體金復(fù)合后為金標(biāo)，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線包被甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG抗體，則等待所述待測(cè)液體(如待測(cè)肝癌患者的血清)與所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體發(fā)生反應(yīng)后以及所述待測(cè)液體與所述甲胎蛋白試紙條上的甲胎蛋白單克隆抗體發(fā)生反應(yīng)后觀察所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線以及所述甲胎蛋白試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色情況。待觀察到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均顯色后，將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均放入到膠體金定量檢測(cè)儀內(nèi)讀取所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度與所述甲胎蛋白試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度，將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度相除得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值，將所述甲胎蛋白試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度相除得到所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值。將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值分別與標(biāo)準(zhǔn)濃度擬合曲線對(duì)比得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度。可以參照附圖3和附圖4的濃度擬合曲線。具體的，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3(AFP-L3)的濃度獲取過(guò)程包括:
[0059]將空白樣品用AFP-L3定量檢測(cè)試紙重復(fù)檢測(cè)10次，用膠體金定量檢測(cè)儀讀取信號(hào)檢測(cè)線/質(zhì)控線(T/C)值。10個(gè)空白樣品T/C值的平均值(M)與3倍標(biāo)準(zhǔn)差⑶之和為臨界閾值。將顯色后的試紙條放入膠體金定量檢測(cè)儀讀取信號(hào)T/C值，將T/C值與圖3所示的濃度擬合曲線圖比較，將所述T/C值代入到圖3所示的公式中，即可得到所述AFP-L3的濃度。
[0060]具體的，所述甲胎蛋白(AFP)濃度獲取過(guò)程包括:
[0061 ] 將空白樣品用AFP定量檢測(cè)試紙重復(fù)檢測(cè)10次，用膠體金定量檢測(cè)儀讀取信號(hào)T/C值。10個(gè)空白樣品T/C值的平均值(M)與3倍標(biāo)準(zhǔn)差(S)之和為臨界閾值。將顯色后的試紙條放入膠體金定量檢測(cè)儀讀取信號(hào)T/C值，將T/C值與圖4所示的濃度擬合曲線圖比較，將所述T/C值代入到圖4所示的公式中，可得到所述AFP的濃度。
[0062]根據(jù)所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度的比值與預(yù)設(shè)閾值的比較判斷所述待測(cè)液體的陰陽(yáng)性。
[0063]具體的，所述待測(cè)液體陰陽(yáng)性的判定包括:
[0064]若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值小于等于最小預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為陰性；若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值大于等于最大預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為陽(yáng)性；若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值大于所述最小預(yù)設(shè)閾值且小于所述最大預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為可疑。
[0065]優(yōu)選的，若檢測(cè)的為肝癌中的AFP-L3，則具體的可以是:所述AFP-L3的濃度(ng/ml) +AFP 濃度(ng/ml) = AFP-L3 的％。
[0066]AFP-L3 的 ％〈5 % 為陰性；
[0067]AFP-L3的%大于5 %且小于10 %為可疑；
[0068]AFP-L3的％彡10%為陽(yáng)性(高度懷疑HCC的存在或轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的提示)。
[0069]結(jié)合附圖3和附圖4的濃度擬合曲線，附圖3為AFP-L3的以濃度為橫坐標(biāo)，T/C值為縱坐標(biāo)的擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，由附圖3所示，檢測(cè)濃度1.0 - 20ng/ml的AFP-L3標(biāo)準(zhǔn)品，由濃度擬合曲線可見線性關(guān)系良好，R2 = 0.9853，線性方程為:y = 0.0086χ-0.007。
[0070]圖4為AFP的以濃度為橫坐標(biāo)，T/C值為縱坐標(biāo)的濃度擬合曲線，由附圖4所示，檢測(cè)濃度為10-100ng/ml的AFP標(biāo)準(zhǔn)品，由濃度擬合曲線可見線性關(guān)系良好，R2 = 0.9963，線性方程為:y = 0.0024x-0.0001。
[0071]將新制備的AFP-L3和AFP條于37°C放置12天，檢測(cè)其靈敏度和特異性，與新制備的試紙條相比沒有明顯變化，說(shuō)明本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性良好。
[0072]本發(fā)明提供的一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒及其使用方法，采用膠體金定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣品中的AFP-L3，樣品中AFP-L3的含量與顯色區(qū)的顏色成正比，通過(guò)膠體金定量檢測(cè)儀讀取顯色區(qū)的強(qiáng)度。與傳統(tǒng)膠體金檢測(cè)條相比，檢測(cè)的靈敏度更高，特異性更強(qiáng)，且可以定量。解決了傳統(tǒng)的AFP-L3定量檢測(cè)方法操作步驟繁瑣，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題，同時(shí)解決了 AFP-L3定性檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題。
[0073]本發(fā)明的說(shuō)明書和權(quán)利要求書及上述附圖中的術(shù)語(yǔ)“第一”、“第二”、“第三?第四”等(如果存在)是用于區(qū)別類似的對(duì)象，而不必用于描述特定的順序或先后次序。應(yīng)該理解這樣使用的數(shù)據(jù)在適當(dāng)情況下可以互換，以便這里描述的實(shí)施例能夠以除了在這里圖示或描述的內(nèi)容以外的順序?qū)嵤４送?，術(shù)語(yǔ)“包括”和“具有”以及他們的任何變形，意圖在于覆蓋不排他的包含，例如，包含了一系列步驟或單元的過(guò)程、方法、系統(tǒng)、產(chǎn)品或設(shè)備不必限于清楚地列出的那些步驟或單元，而是可包括沒有清楚地列出的或?qū)τ谶@些過(guò)程、方法、產(chǎn)品或設(shè)備固有的其它步驟或單元。
[0074]以上所述，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括: 卡殼，甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條， 所述卡殼包括上卡殼和下卡殼，所述上卡殼上有觀察窗和加樣孔，所述下卡殼的卡殼槽里固定有左右平行的所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條，所述上卡殼和所述下卡殼卡接固定， 所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和PVC板，所述PVC板位于所述卡殼槽底層，所述硝酸纖維膜位于所述PVC板上層的中部，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于所述PVC板的上部且與所述硝酸纖維膜上端部分重疊，所述吸水墊位于所述PVC板的下部且與所述硝酸纖維膜硝酸纖維膜的下端部分重疊，所述樣品墊位于所述PVC板的上部且與所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊非靠近所述硝酸纖維膜一端部分重疊，所述硝酸纖維膜以靠近所述樣品墊為起始端，靠近所述吸水墊為終止端，依次包被甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的甲胎蛋白單克隆抗體， 所述甲胎蛋白試紙條包括樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和PVC板，所述PVC板位于所述卡殼槽底層，所述硝酸纖維膜位于所述PVC板上層的中部，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊位于所述PVC板的上部且與所述硝酸纖維膜上端部分重疊，所述吸水墊位于所述PVC板的下部且與所述硝酸纖維膜硝酸纖維膜的下端部分重疊，所述樣品墊位于所述PVC板的上部且與所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊非靠近所述硝酸纖維膜一端部分重疊，所述硝酸纖維膜以靠近所述樣品墊為起始端，靠近所述吸水墊為終止端，依次包被甲胎蛋白單克隆抗體和羊抗鼠IgG抗體，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊上噴涂有膠體金標(biāo)記的甲胎蛋白單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的所述硝酸纖維膜包被所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體的為檢測(cè)線，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的所述硝酸纖維膜包被羊抗鼠IgG抗體的為質(zhì)控線，且所述檢測(cè)線與所述質(zhì)控線平行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述甲胎蛋白試紙上的所述硝酸纖維膜包被所述甲胎蛋白單克隆抗體的為檢測(cè)線，所述甲胎蛋白試紙條上的所述硝酸纖維膜包被羊抗鼠IgG抗體的為質(zhì)控線，且所述檢測(cè)線與所述質(zhì)控線平行。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述觀察窗為長(zhǎng)方形，所述加樣孔為圓形。
5.一種甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的使用方法，其特征在于，所述方法包括: 取待測(cè)液體在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的加樣孔中加入I?2滴，待完全滲入； 待所述待測(cè)液體與所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒中的甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和甲胎蛋白試紙條上的抗體均發(fā)生反應(yīng)后，在所述甲胎蛋白膠體金檢測(cè)試劑盒的觀察孔中分別觀察所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線以及所述甲胎蛋白試紙條上的檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色情況； 待觀察到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均顯色后，將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條和所述甲胎蛋白試紙條均放入到膠體金定量檢測(cè)儀內(nèi)讀取所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度與所述甲胎蛋白試紙條上檢測(cè)線的強(qiáng)度和所述控制線的強(qiáng)度，得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值； 將所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條的檢測(cè)線/控制線比值和所述甲胎蛋白試紙條的檢測(cè)線/控制線比值分別與標(biāo)準(zhǔn)濃度擬合曲線對(duì)比得到所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度； 根據(jù)所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度的比值與預(yù)設(shè)閾值的比較判斷所述待測(cè)液體的陰陽(yáng)性。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值小于等于最小預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為陰性；若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值大于等于最大預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為陽(yáng)性；若所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3的濃度和所述甲胎蛋白的濃度比值大于所述最小預(yù)設(shè)閾值且小于所述最大預(yù)設(shè)閾值，則所述待測(cè)液體為可疑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述甲胎蛋白試紙條上的甲胎蛋白單克隆抗體和膠體金復(fù)合后為金標(biāo)，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的檢測(cè)線包被甲胎蛋白異質(zhì)體L3單克隆抗體，所述甲胎蛋白異質(zhì)體L3試紙條上的質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104459161SQ201410843180
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】李峰, 劉曉雷, 周宇璠, 趙柏松, 孫揚(yáng) 申請(qǐng)人:霍普金斯醫(yī)藥研究院（北京）有限責(zé)任公司