一種古代絲織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種古代絲織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，采用免疫膠體金層析技術(shù)的原理來檢測古代墓葬中絲織品的痕跡，即將膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體溶解在膠體金結(jié)合墊上，將鼠抗絲素蛋白抗體和山羊抗兔IgG(H+L)抗體分別噴在硝酸纖維素薄膜上形成檢測線和質(zhì)控線。若檢測線未顯色，質(zhì)控線顯色，證明樣品中不含有絲素蛋白；若檢測線和質(zhì)控線均顯色，證明樣品中含有絲素蛋白。本發(fā)明采用雙抗夾心免疫膠體金層析技術(shù)的原理對古代絲織品進行了檢測，一方面，靈敏度高，操作簡單。另一方面，成本低，反應(yīng)時間短，不需要專業(yè)人員操作，適合于考古現(xiàn)場檢測。
【專利說明】 —種古代絲織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于古代絲織品痕跡的檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種快速檢測古代絲織品的雙抗夾心法檢測試紙的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]絲織品由蠶絲編織而成，是中華民族智慧的結(jié)晶，是我國的寶貴遺產(chǎn)。但是蠶絲作為一種有機高分子材料，長期埋葬于墓葬環(huán)境中，必然會受到氧氣、水、微生物等因素的影響而發(fā)生降解，以至于外觀嚴(yán)重受到破壞而腐朽，肉眼根本無法識別。常規(guī)的檢測方法有紅外光譜分析，氨基酸分析，液相色譜分析等，但是由于糟朽絲織品雜質(zhì)含量多，譜圖解析困難，耗時長，靈敏度低，并且不能排除其它蛋白質(zhì)的干擾，給研究工作者帶來了一定的困難。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是:針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題提供一種快速、直觀、簡便的古代絲織品檢測方法。
[0004]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是:一種古代絲織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，其特征在于采用步驟如下:
A)金納米粒子的制備:采用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為25-50nm的金納米粒子；即將10ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入1.0-1.5ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸7-10min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)金標(biāo)兔抗絲素蛋白抗體的制備:用0.lmol/1的K2CO3溶液將10ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.0，邊攪拌邊加入兔抗絲素蛋白抗體20-50 μ L，所述抗體濃度為3.15mg/ml ;接著加入5ml的質(zhì)量濃度為1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在9000-11000r/min下離心40_60min，棄去上清液；將沉淀溶于0.01mol/l的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；
C)試紙條的組裝:用噴膜機將5-20μ L、用ΡΗ8.2的Tris-HCl溶液稀釋100-400倍的鼠抗絲素蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用；將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tris-HCl溶液稀釋10-20倍的金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用；將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4mm寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取Ig紡織品痕跡樣，溶解于50-100ml、PH為8.2的Tris-HCl溶液緩沖溶液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；5-10min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有絲素蛋白，該紡織品痕跡為絲織品的痕跡。
[0005]本發(fā)明采用免疫膠體金層析技術(shù)的原理來檢測古代墓葬中絲織品的痕跡，即將膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體溶解在膠體金結(jié)合墊上，將鼠抗絲素蛋白抗體和山羊抗兔IgG(H+L)抗體分別噴在硝酸纖維素薄膜上形成檢測線和質(zhì)控線。樣品加入樣品吸收墊，樣品中的液體首先溶解膠體金墊中含有的膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體，同時，樣品中待測抗原與膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體結(jié)合，形成膠體金標(biāo)記兔抗絲素蛋白抗體-抗原復(fù)合物，并靠毛細(xì)作用向檢測線移動。樣品經(jīng)過檢測線時，樣品中抗原的未結(jié)合位點與硝酸纖維素膜上的鼠抗絲素蛋白抗體結(jié)合。若樣品中含有抗原，膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體-抗原復(fù)合物就會在硝酸纖維素膜上聚集，檢測線顯出紅色。膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體-抗原-鼠抗絲素蛋白抗體復(fù)合物經(jīng)過質(zhì)控線，與山羊抗兔IgG(H+L)抗體反應(yīng)，膠體金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體聚集在質(zhì)控線上，顯出紅色。即若檢測線未顯色，質(zhì)控線顯色，證明樣品中不含有絲素蛋白；若檢測線和質(zhì)控線均顯色，證明樣品中含有絲素蛋白。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:采用雙抗夾心免疫膠體金層析技術(shù)的原理對古代絲織品進行了檢測，一方面，靈敏度高，操作簡單。另一方面，成本低，反應(yīng)時間短，不需要專業(yè)人員操作，適合于考古現(xiàn)場檢測。

【具體實施方式】
[0007]實施例1采用步驟如下:
A)金納米粒子的制備:采用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為25nm的金納米粒子；即將10ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入1.0ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸7min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)金標(biāo)兔抗絲素蛋白抗體的制備:用0.lmol/1的K2CO3溶液將10ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.0,邊攪拌邊加入兔抗絲素蛋白抗體20 μ L,所述抗體濃度為3.15mg/ml ;接著加入5ml的質(zhì)量濃度為1%%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在9000r/min下離心40min，棄去上清液；將沉淀溶于0.01mol/l的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于41:下保存；
C)試紙條的組裝:用噴膜機將5μ L、用ΡΗ8.2的Tris-HCl溶液稀釋100倍的鼠抗絲素蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用；將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tris-HCl溶液稀釋10倍的金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用；將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4mm寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取Ig紡織品痕跡樣，溶解于50ml、PH為8.2的Tris-HCl溶液緩沖溶液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；5min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有絲素蛋白，該紡織品痕跡為絲織品的痕跡。
[0008]實施例2采用步驟如下:
A)金納米粒子的制備:采用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為35nm的金納米粒子；即將10ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入1.3ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸8min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)金標(biāo)兔抗絲素蛋白抗體的制備:用0.lmol/1的K2CO3溶液將10ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.0,邊攪拌邊加入兔抗絲素蛋白抗體30 μ L,所述抗體濃度為3.15mg/ml ;接著加A5ml的質(zhì)量濃度為5%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在10000r/min下離心50min，棄去上清液；將沉淀溶于0.01mol/l的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于41:下保存；
C)試紙條的組裝:用噴膜機將15μ L、用ΡΗ8.2的Tris-HCl溶液稀釋200倍的鼠抗絲素蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用；將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tris-HCl溶液稀釋15倍的金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用；將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4mm寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取Ig紡織品痕跡樣，溶解于70ml、PH為8.2的Tris-HCl溶液緩沖溶液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；8min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有絲素蛋白，該紡織品痕跡為絲織品的痕跡。
[0009] 實施例3采用步驟如下:
A)金納米粒子的制備:采用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為50nm的金納米粒子；即將10ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入1.5ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸l(wèi)Omin，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)金標(biāo)兔抗絲素蛋白抗體的制備:用0.lmol/1的K2CO3溶液將10ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.0,邊攪拌邊加入兔抗絲素蛋白抗體50 μ L,所述抗體濃度為3.15mg/ml ;接著加入5ml的質(zhì)量濃度為10%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在11000r/min下離心60min，棄去上清液；將沉淀溶于0.01mol/l的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；
C)試紙條的組裝:用噴膜機將20μ L、用ΡΗ8.2的Tris-HCl溶液稀釋400倍的鼠抗絲素蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用；將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫_20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tris-HCl溶液稀釋20倍的金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用；將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4mm寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取Ig紡織品痕跡樣，溶解于10ml、PH為8.2的Tris-HCl溶液緩沖溶液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；1min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有絲素蛋白，該紡織品痕跡為絲織品的痕跡。
【權(quán)利要求】
1.一種古代絲織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，其特征在于采用步驟如下: A)金納米粒子的制備:采用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為25-50nm的金納米粒子；即將100ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入1.0-1.5ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸7-10min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠； B)金標(biāo)兔抗絲素蛋白抗體的制備:用0.lmol/1的1(20)3溶液將100ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.0，邊攪拌邊加入兔抗絲素蛋白抗體20-50 μ L，所述抗體濃度為3.15mg/ml ;接著加入5ml的質(zhì)量濃度為1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在9000-11000r/min下離心40_60min，棄去上清液；將沉淀溶于0.01mol/l的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為.0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存； C)試紙條的組裝:用噴膜機將5-20μ L、用ΡΗ8.2的Tris-HCl溶液稀釋100-400倍的鼠抗絲素蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37 °C烘干備用；將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tris-HCl溶液稀釋10-20倍的金標(biāo)記的兔抗絲素蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用；將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4mm寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存； D)取lg紡織品痕跡樣，溶解于50-100ml、PH為8.2的Tris-HCl溶液緩沖溶液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；5-10min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有絲素蛋白，該紡織品痕跡為絲織品的痕跡。
【文檔編號】G01N33/558GK104459118SQ201410848069
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月31日
【發(fā)明者】劉苗苗, 劉意, 胡智文 申請人:浙江理工大學(xué)