一種電鏡超薄切片批量染色裝置制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型提供一種電鏡超薄切片批量染色裝置，由2個(gè)染色管，2個(gè)染色管蓋，防污套管，預(yù)置有固體NaOH的防污套管蓋及染色膠條組成，染色膠條置于染色管內(nèi)，染色管置于防污套管內(nèi)。2個(gè)染色管分別裝載醋酸鈾染液和檸檬酸鉛染液。本實(shí)用新型設(shè)計(jì)合理，可對(duì)超薄切片載網(wǎng)樣品進(jìn)行批量化染色操作；節(jié)省操作時(shí)間，實(shí)現(xiàn)超薄切片染色批量化；染色過(guò)程在密閉容器中進(jìn)行，隔絕鉛染色液與二氧化碳接觸，減少對(duì)樣品的污染；染色使用的染液在不進(jìn)行染色操作時(shí)可直接保存于裝置中，反復(fù)使用，節(jié)省染液；染色過(guò)程更方便、安全，無(wú)需另行使用其他容器或設(shè)備，降低對(duì)容器和環(huán)境的污染；減少染色液毒性對(duì)操作者造成的污染；制備及使用極其簡(jiǎn)單易行，成本極低。
【專利說(shuō)明】—種電鏡超薄切片批量染色裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種電子顯微鏡超薄切片批量染色裝置，屬于生物電子顯微科學(xué)領(lǐng)域。
技術(shù)背景
[0002]在生物電子顯微科學(xué)領(lǐng)域中，超薄切片是一種經(jīng)典方法，電子染色是其中的關(guān)鍵技術(shù)之一。傳統(tǒng)的超薄切片電子染色，其染液采用醋酸鈾和檸檬酸鉛，具體染色方法是:在蠟板或parafilm M上滴鈾染液，將載有超薄切片的載網(wǎng)的樣品面向下懸浮在染液滴上，15-20分鐘后用鑷子夾持載網(wǎng)，在雙蒸水的燒杯中上下反復(fù)沖洗多次，將載網(wǎng)放置在干凈濾紙上，干燥后使用；樣品經(jīng)醋酸鈾染色后，在蠟板或周圍放置固體NaOH，操作同醋酸鈾染色進(jìn)行檸檬酸鉛染色。醋酸鈾具有毒性和放射性，檸檬酸鉛不僅有化學(xué)毒性，而且極易與空氣中的二氧化碳結(jié)合產(chǎn)生碳酸鉛沉淀污染切片。這種常規(guī)染色方法效率低，染色后的清洗需要對(duì)每個(gè)超薄切片載網(wǎng)分別進(jìn)行多達(dá)幾十次的清洗，費(fèi)時(shí)，費(fèi)力；滴染過(guò)程暴露在空氣中，檸檬酸鉛會(huì)和空氣中的二氧化碳反應(yīng)，容易污染切片；檸檬酸鉛在染色過(guò)程中受二氧化碳污染而無(wú)法重復(fù)使用，染色液消耗量大且每次需要清洗染色容器，對(duì)環(huán)境污染大，操作者在多次操作的過(guò)程中所受污染也大。
[0003]針對(duì)常規(guī)染色技術(shù)容易出現(xiàn)的問(wèn)題，國(guó)內(nèi)外很多實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)廠商不斷推出各種創(chuàng)新或改良方法。近幾年的多個(gè)廠家生產(chǎn)出了幾種染色套裝(2013-2015年度，北京中鏡科儀產(chǎn)品目錄生物篇P17)，在方便染色操作等方面有一定改進(jìn)，但仍存在一些問(wèn)題。如:1，一套染色裝置只能對(duì)20個(gè)左右的載網(wǎng)進(jìn)行操作，無(wú)法滿足日益增長(zhǎng)的電鏡樣品需求；2，使用這些染色套裝染色完畢，仍要清洗器皿，操作繁瑣，且清洗干凈與否影響下次染色質(zhì)量；3，染色液無(wú)法重復(fù)使用，消耗量大且對(duì)環(huán)境的污染也較大；4，市售染色套裝價(jià)格仍較高，數(shù)百元至上千元。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實(shí)用新型的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種電鏡超薄切片批量染色裝置，由染色管，染色管蓋，防污套管，預(yù)置有固體NaOH的防污套管蓋及染色膠條組成，染色膠條置于染色管內(nèi)，染色管置于防污套管內(nèi)，染色管蓋與染色管活動(dòng)連接，防污套管蓋與防污套管活動(dòng)連接，整套染色裝置中有2個(gè)染色管和染色管蓋,分別裝載醋酸鈾染液和朽1檬酸鉛染液。
[0005]具體使用本發(fā)明裝置的步驟如下:
[0006]1.非染色時(shí),將醋酸鈾染液保存于染色管中，蓋緊染色管蓋；將朽1檬酸鉛染液保存于另一染色管中，蓋緊管蓋，置于裝有固體NaOH的防污套管中，蓋好防污套管蓋。
[0007]2.染色步驟如下:
[0008](I)取市售染色膠條，或取塑料片自行裁剪做為染色膠條，在染色膠條中間段一面貼上雙面膠，作為載網(wǎng)粘著區(qū)，將載有超薄切片的載網(wǎng)粘于染色膠條的兩側(cè)，確定不會(huì)脫落；
[0009](2)將帶有載網(wǎng)的整根染色膠條置于裝有醋酸鈾染液的染色管中，蓋好管蓋，進(jìn)行醋酸鈾染色，雙蒸水清洗；
[0010](3)將帶有載網(wǎng)的整根膠條置于防污套管中的裝有檸檬酸鉛染色液的另一染色管中，蓋緊防污套管蓋，但不蓋染色管蓋，進(jìn)行檸檬酸鉛染色，之后取出帶有載網(wǎng)的染色膠條，以NaOH水溶液、雙蒸水依次清洗；
[0011](4)干燥后取下載網(wǎng)上機(jī)鏡檢。
[0012]3.裝置中的醋酸鈾及檸檬酸鉛無(wú)需倒出，可直接保存并下次使用(可反復(fù)染色20次以上)。
[0013]本實(shí)用新型可對(duì)超薄切片載網(wǎng)樣品進(jìn)行批量化染色操作；節(jié)省操作時(shí)間，實(shí)現(xiàn)了超薄切片染色批量化；染色過(guò)程在密閉容器中進(jìn)行，隔絕鉛染色液與二氧化碳接觸，減少對(duì)樣品的污染；染色使用的染液在不進(jìn)行染色操作時(shí)可直接保存于裝置中，可反復(fù)使用，節(jié)省染液；染色過(guò)程更方便、安全，無(wú)需另行使用其他容器或設(shè)備，降低對(duì)容器和環(huán)境的污染；減少染色液毒性對(duì)操作者造成的污染；本實(shí)用新型設(shè)計(jì)合理，制備及使用極其簡(jiǎn)單易行，成本極低。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1為發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015]圖2為醋酸鈾染色液保存示意圖。
[0016]圖3為檸檬酸鉛染色液保存示意圖。
[0017]圖4為將載網(wǎng)粘于染色膠條上的示意圖。
[0018]圖5為對(duì)載網(wǎng)進(jìn)行醋酸鈾染色示意圖。
[0019]圖6為分別應(yīng)用本裝置染色步驟(A)、傳統(tǒng)染色步驟(B)所染色制備的腎小球基底膜電鏡超薄切片樣本。

【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明及其應(yīng)用作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0021]實(shí)施例1 一種電鏡超薄切片染液存儲(chǔ)及批量染色裝置
[0022]參見(jiàn)圖1，本實(shí)用新型染色裝置由染色管I，染色管蓋2，預(yù)置有固體NaOH的防污套管3,防污套管蓋4及染色膠條5組成,染色膠條5置于染色管I內(nèi)，染色管I置于防污套管3內(nèi)，染色管蓋2與染色管I活動(dòng)連接,防污套管蓋4與防污套管3活動(dòng)連,接整套染色裝置中有2個(gè)染色管I和染色管蓋2，分別裝載醋酸鈾染液和檸檬酸鉛染液。
[0023]1.非染色時(shí)，將醋酸鈾染液保存于一染色管I中，蓋緊染色管蓋2，參見(jiàn)圖2。將檸檬酸鉛染液保存于另一染色管I中，蓋緊染色管蓋2，置于預(yù)置有固體NaOH 6的防污套管3中，蓋好防污套管蓋4，參見(jiàn)圖3。
[0024]2.染色步驟如下:
[0025](I)參見(jiàn)圖4，將帶有超薄切片的載網(wǎng)7以雙面膠粘于染色膠條5中間段的兩側(cè)，確定不會(huì)脫落，如果中間段長(zhǎng)度達(dá)60mm或以上則每根膠條可用于40個(gè)及以上的載網(wǎng)的同時(shí)染色，同時(shí)使用兩根染色膠條則可粘貼載網(wǎng)數(shù)達(dá)80個(gè)；
[0026](2)參見(jiàn)圖5，將帶有載網(wǎng)7的染色膠條5置于裝有醋酸鈾染液的染色管I中，(如有兩根染色膠條則將無(wú)雙面膠的面靠在一起，同時(shí)置于鈾存儲(chǔ)染色管中，)蓋好染色管蓋2，進(jìn)行醋酸鈾染色，之后取出帶有載網(wǎng)的染色膠條以雙蒸水清洗；
[0027](3)參見(jiàn)圖1，將帶有載網(wǎng)7的染色膠條5置于裝有檸檬酸鉛染色液的存儲(chǔ)染色管I中，染色膠條和染色管均放于預(yù)置有固體NaOH 6的防污套管3中，蓋緊防污套管蓋4,但不蓋存儲(chǔ)染色管蓋2，進(jìn)行檸檬酸鉛染色，之后取出帶有載網(wǎng)的染色膠條，以NaOH水溶液、雙蒸水依次清洗；
[0028]( 4 )干燥后取下載網(wǎng)上機(jī)鏡檢。
[0029]3.裝置中的醋酸鈾及檸檬酸鉛無(wú)需倒出，可直接保存并下次使用(可反復(fù)染色20次以上)。
[0030]實(shí)施例2
[0031]以本裝置實(shí)施例1染色步驟處理帶有超薄切片的載網(wǎng)，作為實(shí)驗(yàn)組；以常規(guī)染色步驟處理帶有超薄切片的載網(wǎng)，作為對(duì)照組；比較兩組染色操作時(shí)間及所需試劑，如表I所示，使用本裝置對(duì)大批量載網(wǎng)染色時(shí)，大大節(jié)省了染色時(shí)間及試劑。
[0032]
表I __

載網(wǎng)數(shù)
__^批量染色法常規(guī)染色法
5片載網(wǎng)_30分鐘 30分鐘

40片載網(wǎng) 40分# — 75分鐘用吋 80片載網(wǎng) 50分^中 150分鐘站 _5 片 i_8mL 8ml ImL Iml
mmB —M
m B80 片扭網(wǎng)BmU Smi 16ml.16ml
m-m--^--
___ 400 片載網(wǎng) 8ml、8ml 80ml、80ml
[0033]1.染色過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)組無(wú)需清洗染色用具，染液可反復(fù)使用，大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)試劑耗材，同時(shí)減少對(duì)環(huán)境污染；
[0034]2.參見(jiàn)圖6，以100KV透射電子顯微鏡觀察檢測(cè)兩組樣品的染色效果，實(shí)驗(yàn)組(A)和對(duì)照組(B)均對(duì)比度適中，結(jié)構(gòu)清晰，均無(wú)污染，電鏡下腎小球基底膜電子致密物結(jié)構(gòu)均清晰可見(jiàn)。
【權(quán)利要求】
1.一種電鏡超薄切片批量染色裝置，其特征在于，由染色管(1)，染色管蓋(2)，預(yù)置有固體NaOH的防污套管(3)，防污套管蓋(4)及染色膠條(5)組成，染色膠條(5)置于染色管(O內(nèi)，染色管(I)置于防污套管(3)內(nèi)，染色管蓋(2)與染色管(I)活動(dòng)連接,防污套管蓋(4)與防污套管(3)活動(dòng)連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電鏡超薄切片批量染色裝置，其特征在于，整套染色裝置中有2個(gè)染色管(I)和染色管蓋(2)，分別裝載醋酸鈾染液和檸檬酸鉛染液。
【文檔編號(hào)】G01N1/31GK203981474SQ201420368138
【公開(kāi)日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年7月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月6日
【發(fā)明者】王貝貝, 王麗, 洪健 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)