一種用于atp生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型提供了一種用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，該裝置包括：反應(yīng)杯，該反應(yīng)杯頂部設(shè)置加樣孔，底部設(shè)置排液孔且排液孔上設(shè)置密閉嘴塞，反應(yīng)杯內(nèi)靠近底部位置設(shè)置0.45μm濾膜，濾膜將反應(yīng)杯內(nèi)部分隔為濾膜上部的微生物截留空間以及濾膜下部的空間；設(shè)置加樣口及濾液出口的針頭式過濾器，該針頭式過濾器安裝固定于反應(yīng)杯的加樣孔上方，針頭式過濾器的濾液出口與反應(yīng)杯濾膜上部的微生物截留空間連通。利用本實(shí)用新型的裝置，可使得通過檢測ATP對微生物進(jìn)行檢測這個(gè)操作過程變得簡單便捷，能夠在15分鐘內(nèi)完成樣品中微生物總量的檢測，大大縮短了微生物檢測的時(shí)間。
【專利說明】—種用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及微生物快速檢測反應(yīng)裝置【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言涉及一種用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置。

【背景技術(shù)】
[0002]微生物檢測通常采用的是瓊脂平板計(jì)數(shù)法，這種方法中培養(yǎng)基的制備、平板培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)和生化鑒定等不僅工作量大、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且提供的是歷史性信息，不能滿足現(xiàn)場質(zhì)量控制、衛(wèi)生監(jiān)督檢測需要快速獲得信息的要求。而且，由于不同微生物對培養(yǎng)的條件(溫度、濕度及營養(yǎng)物質(zhì))要求不一致因此菌，菌落總數(shù)并不表示實(shí)際中的所有細(xì)菌總數(shù)，菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類。另一方面，由于待測樣品往往不宜完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長成的一個(gè)單菌落也可能來自樣品中的2?3或更多個(gè)細(xì)胞。所以培養(yǎng)法的數(shù)據(jù)的真實(shí)性有待解決。微生物檢測的另一類方法是基于大型儀器的自動(dòng)化檢測，但是其需要精密的儀器，而且沒法立即反映樣品中的微生物情況。
[0003]ATP生物熒光法作為一種快速檢測方法，在上世紀(jì)80年代已經(jīng)用于制藥廠和食品加工企業(yè)的潔凈度控制。由于該方法在檢測時(shí)不能去除游離ATP和動(dòng)物細(xì)胞ATP，無法檢測細(xì)菌總數(shù)。并且，通常的ATP檢測單位為相對發(fā)光值(RLU)，不能準(zhǔn)確定量細(xì)菌中ATP含量，也無法排除外界因素如環(huán)境溫度、pH、離子類物質(zhì)對實(shí)驗(yàn)的干擾。此外，現(xiàn)有技術(shù)中尚未提供一種采用ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，使該方法方便快捷，能夠有效應(yīng)用于食品安全、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)、疫源地消毒效果、實(shí)驗(yàn)室、制藥、食品加工環(huán)節(jié)的現(xiàn)場微生物的快速檢測。此外，現(xiàn)有技術(shù)中尚缺乏使用便捷的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，在一定程度上也限制了 ATP生物熒光法檢測微生物的推廣應(yīng)用。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0004]本實(shí)用新型的主要目的在于針對現(xiàn)有ATP生物熒光法缺乏便捷的反應(yīng)裝置的情況，提供了一種用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，以使得ATP生物熒光法檢測微生物的操作過程更為簡單便捷，縮短微生物檢測的時(shí)間。
[0005]為達(dá)到上述目的，本實(shí)用新型提供一種用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，該裝置包括:
[0006]反應(yīng)杯，該反應(yīng)杯頂部設(shè)置加樣孔，底部設(shè)置排液孔且排液孔上設(shè)置密閉嘴塞，反應(yīng)杯內(nèi)設(shè)置0.45 μ m規(guī)格的濾膜，濾膜將反應(yīng)杯內(nèi)部分隔為濾膜上部的微生物截留空間以及濾膜下部的空間；
[0007]設(shè)置加樣口及濾液出口的針頭式過濾器，該針頭式過濾器安裝固定于反應(yīng)杯的加樣孔上方，針頭式過濾器的濾液出口與反應(yīng)杯濾膜上部的微生物截留空間連通。
[0008]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，在用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置中，所述反應(yīng)杯容積為lmL?100mL。反應(yīng)杯的具體體積大小可根據(jù)熒光檢測儀所需檢測樣品體積而定。
[0009]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，在用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置中，所述反應(yīng)杯為適用于熒光檢測儀進(jìn)行檢測的透明反應(yīng)杯，可直接用于熒光檢測儀。
[0010]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，在用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置中，反應(yīng)杯的加樣孔設(shè)置在頂部中間位置，排液孔設(shè)置在底部中間位置。這樣可利用使用過程中快速無殘留的排出反應(yīng)液。此外，加樣孔的個(gè)數(shù)不作限定，在本實(shí)用新型的具體實(shí)施例中在頂部設(shè)置1個(gè)加樣孔且其上方安裝固定針頭式過濾器，在使用過程中，加樣過濾后，可以根據(jù)需要將針頭式過濾器卸除，再加入其他反應(yīng)試劑；作為一種可替代的方案，可以在反應(yīng)杯頂部設(shè)置2個(gè)加樣孔，其中1個(gè)加樣孔用于安裝固定針頭式過濾器，使用過程中不需要卸除針頭式過濾器，其他反應(yīng)試劑從另一個(gè)加樣孔進(jìn)入，使ATP生物熒光法檢測微生物更加簡便快捷，而且還可以避免操作過程中對反應(yīng)體系的污染。
[0011]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，在用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置中，反應(yīng)杯內(nèi)的濾膜固定設(shè)置在反應(yīng)杯內(nèi)靠近底部的位置，更有利于ATP生物熒光法檢測過程中試劑的加入等操作。
[0012]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，在用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置中，所述針頭式過濾器為5μπι規(guī)格的針頭式過濾器，可便于濾除待測樣品液體中的大顆粒與雜質(zhì)。
[0013]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，在用于ΑΤΡ生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置中，針頭式過濾器的濾液出口與反應(yīng)杯的加樣孔之間通過嵌合或螺紋方式密封連接。
[0014]根據(jù)本實(shí)用新型的具體實(shí)施方案，本實(shí)用新型的用于ΑΤΡ生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，還包括用于將待測樣品液體注入針頭式過濾器的加樣口的無菌注射器。無菌注射器的設(shè)置可快速將待測液體樣品打入反應(yīng)裝置內(nèi)，避免操作過程中環(huán)境對注射器的污染，使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。更進(jìn)一步地，所述無菌注射器為能與針頭式過濾器的加樣口之間形成密封接觸的無菌注射器，這樣，可通過無菌注射器與針頭式過濾器的加樣口之間的密封接觸，從而通過無菌注射器向反應(yīng)杯內(nèi)加壓，利于反應(yīng)杯內(nèi)待測樣品液體通過濾膜。
[0015]本實(shí)用新型的反應(yīng)裝置在用于ΑΤΡ生物熒光法檢測微生物時(shí)，可采用如下操作進(jìn)行:
[0016]打開反應(yīng)杯底部排液孔上的密閉嘴塞，使用無菌注射器取一定體積待檢樣品液體(如自來水或食品浸取液)，加入針頭式過濾器的加樣口，待測樣品液體通過針頭式過濾器,過濾除去大的顆粒和雜質(zhì),進(jìn)入反應(yīng)杯內(nèi)，流經(jīng)反應(yīng)杯內(nèi)的濾膜,待測樣品液體中的微生物被濾膜截留，水分通過濾膜進(jìn)入濾膜下部空間從反應(yīng)杯底部的排液孔排出?？衫米⑸淦鬟M(jìn)一步擠壓以加壓反應(yīng)杯內(nèi)空間，利于待測樣品液體中的水分通過濾膜。接著，向反應(yīng)杯內(nèi)加入體細(xì)胞ΑΤΡ消除劑，使其在反應(yīng)杯內(nèi)濾膜上停留一定時(shí)間以便消除濾膜上細(xì)菌細(xì)胞外的所有ΑΤΡ，之后，排空濾膜上的體細(xì)胞ΑΤΡ消除劑。然后，蓋上反應(yīng)杯排液孔上的密閉嘴塞，向反應(yīng)杯內(nèi)加入含有ΑΤΡ水解酶抑制劑的細(xì)菌裂解劑，具體可使用無菌注射器或移液槍量取熒光素-熒光素酶檢測液通過加樣口加入反應(yīng)杯內(nèi)，充分反應(yīng)后將反應(yīng)杯放入熒光檢測儀進(jìn)行檢測，讀取發(fā)光值，從而對待測樣品液體中的微生物數(shù)量進(jìn)行檢測。具體實(shí)施時(shí)，根據(jù)需要，可與ΑΤΡ標(biāo)準(zhǔn)品溶液檢測值進(jìn)行對照。
[0017]本實(shí)用新型的有益效果:
[0018]本實(shí)用新型所提供的用于ΑΤΡ生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，可有效過濾捕獲樣品中的微生物，并提供ATP消除、細(xì)菌裂解、熒光素酶-熒光素反應(yīng)的場所，且其反應(yīng)杯能作為最終的被檢測對象放于化學(xué)發(fā)光檢測儀內(nèi)進(jìn)行發(fā)光信號的檢測。采用本實(shí)用新型所提供的的反應(yīng)裝置使ATP生物熒光法檢測微生物簡單便捷，能夠在短時(shí)間內(nèi)(通常15分鐘內(nèi))完成樣品中微生物總量的檢測，大大縮短了微生物檢測的時(shí)間，可廣泛用于食品安全、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)、疫源地消毒效果、實(shí)驗(yàn)室、制藥、食品加工環(huán)節(jié)的現(xiàn)場微生物快速檢測。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1是本實(shí)用新型用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置結(jié)構(gòu)示意圖。其中，301為加樣口，302為針頭式注射器，303為加樣孔，304為反應(yīng)杯，305為濾膜，306為排液孔，307為密閉嘴塞。

【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本實(shí)用新型進(jìn)一步加以描述。所述實(shí)施例旨在以舉例方式具體闡明本實(shí)用新型，不構(gòu)成對本實(shí)用新型的限制。
[0021]實(shí)施例1
[0022]請參見圖1所示，本實(shí)用新型的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其包括:
[0023]反應(yīng)杯304,該反應(yīng)杯頂部中間位置設(shè)置加樣孔303,底部中間位置設(shè)置排液孔306，且排液孔306上設(shè)置密閉嘴塞307，反應(yīng)杯304內(nèi)靠近底部的位置設(shè)置0.45 μ m規(guī)格的濾膜305，濾膜305將反應(yīng)杯304內(nèi)部分隔為濾膜上部的微生物截留空間以及濾膜下部的空間；
[0024]針頭式過濾器302 (規(guī)格5 μ m)，其設(shè)置加樣口 301及濾液出口，該針頭式過濾器302安裝固定于反應(yīng)杯304的加樣孔303上方，針頭式過濾器302的濾液出口與反應(yīng)杯304的濾膜305上部的微生物截留空間連通。并且，針頭式過濾器302的濾液出口與反應(yīng)杯304的加樣孔303之間通過嵌合或螺紋方式密封連接。
[0025]本實(shí)施例中，反應(yīng)杯304容積為lmL，為可用于熒光檢測儀的透明反應(yīng)杯。
[0026]應(yīng)用本實(shí)用新型的裝置采用ATP生物熒光法檢測自來水或固體食品中的微生物含量，可按照如下具體操作進(jìn)行:
[0027]1、所需檢測試劑的制備
[0028]體細(xì)胞ATP消除劑的制備:體細(xì)胞消除劑為溶解于0.01M的pH7.4的PBS中的0.01國際單位的ATP水解酶，溶液中含有鎂離子0.01M、BSA的含量為1%。此消除劑經(jīng)過冷凍干燥為凍干粉，實(shí)際使用中，需要0.01M的pH7.4的PBS對凍干粉進(jìn)行復(fù)溶。復(fù)溶液要么及時(shí)使用，要么-20°C保存，且要防止反復(fù)凍融。體細(xì)胞ATP消除劑用于水解樣品中的非細(xì)菌細(xì)胞ATP，減少其對對檢測的干擾。
[0029]細(xì)菌細(xì)胞裂解液的制備:細(xì)菌細(xì)胞裂解液的主要成分為苯扎溴銨，在0.01M的PH7.4的PBS中加入苯扎溴銨，至濃度為0.05%。此裂解液能夠在30s內(nèi)裂解超過95%的細(xì)菌細(xì)胞，將其中的ATP釋放出來，并能有效抑制細(xì)菌自身的ATP水解酶的活性。
[0030]ATP標(biāo)準(zhǔn)品的配制:取具有國際標(biāo)準(zhǔn)品溯源的高濃度的ATP，用雙蒸水稀釋到濃度為ΙΟΟηΜ。期間所用的移液器、容器均無熱原。
[0031]2、待測自來水中的微生物含量檢測操作
[0032]打開反應(yīng)杯底部排液孔上的密閉嘴塞307，使用無菌注射器取10mL待檢的自來水，通過5μπι的針頭式過濾器302的加樣口 301加樣，針頭式過濾器可過濾除去大的顆粒和雜質(zhì)，待測水樣進(jìn)入反應(yīng)杯304內(nèi)流經(jīng)濾膜305，可用無菌注射器進(jìn)一步擠壓反應(yīng)杯的液體(無菌注射器能與針頭式過濾器的加樣口之間形成密封接觸，從而可向反應(yīng)杯內(nèi)加壓)，使反應(yīng)杯內(nèi)待測水樣中的水分從排液孔306排干，水樣中的微生物被截留在0.45 μ m濾膜305上方。
[0033]接著，蓋上反應(yīng)杯底部排液孔上的密閉嘴塞307，取下針頭式過濾器302，通過加樣孔303向反應(yīng)杯內(nèi)的底部濾膜305上加入一定量(應(yīng)沒過反應(yīng)杯內(nèi)的濾膜，例如50 μ L)上述制備的體細(xì)胞ΑΤΡ消除劑，反應(yīng)10分鐘，以便水解酶徹底水解細(xì)菌細(xì)胞外的所有ΑΤΡ ；打開反應(yīng)杯底部排液孔上的密閉嘴塞307，用無菌注射器排空濾膜上的體細(xì)胞ΑΤΡ消除劑(可用適量蒸餾水洗滌)。
[0034]之后，蓋上反應(yīng)杯排液孔上的密閉嘴塞307，向反應(yīng)杯內(nèi)加入適量(應(yīng)沒過反應(yīng)杯內(nèi)的濾膜，例如50 μ L)上述制備得到的細(xì)菌裂解劑(其中含有ΑΤΡ水解酶抑制劑)，使用lmL無菌注射器或lmL移液槍量取400 μ L突光素_突光素酶檢測液加入反應(yīng)杯內(nèi)，搖晃3次混勻，將反應(yīng)杯放入熒光檢測儀進(jìn)行檢測，讀取發(fā)光值Ml。
[0035]使用移液器加入10 μ L濃度為ΙΟΟηΜ的ATP標(biāo)準(zhǔn)品，搖晃3次混勻，再次放入熒光檢測儀內(nèi)，讀取發(fā)光值M2。
[0036]根據(jù)公式:微生物數(shù)量=1^500000/(12^)計(jì)算樣品中的微生物含量，此含量除以10即為lmL樣品中微生物的總量。
[0037]3、待測固體食品中的微生物含量檢測操作
[0038]稱取25g食品粉末，加入225ml水充分震蕩混勻，上清液為食品浸取液。之后按照前述待測自來水中的微生物含量檢測操作，對食品浸取液進(jìn)行檢測，換算出固體食品中微生物的含量。
[0039]綜上所述，本實(shí)用新型所提供的的反應(yīng)裝置使ATP生物熒光法檢測微生物簡單便捷,能夠在短時(shí)間內(nèi)完成樣品中微生物總量的檢測,大大縮短了微生物檢測的時(shí)間，可廣泛用于食品安全、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)、疫源地消毒效果、實(shí)驗(yàn)室、制藥、食品加工環(huán)節(jié)的現(xiàn)場微生物快速檢。
【權(quán)利要求】
1.一種用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，該裝置包括: 反應(yīng)杯，該反應(yīng)杯頂部設(shè)置加樣孔，底部設(shè)置排液孔且排液孔上設(shè)置密閉嘴塞，反應(yīng)杯內(nèi)設(shè)置0.45 μ m規(guī)格的濾膜，濾膜將反應(yīng)杯內(nèi)部分隔為濾膜上部的微生物截留空間以及濾膜下部的空間； 設(shè)置加樣口及濾液出口的針頭式過濾器，該針頭式過濾器安裝固定于反應(yīng)杯的加樣孔上方，針頭式過濾器的濾液出口與反應(yīng)杯濾膜上部的微生物截留空間連通。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述反應(yīng)杯容積為ImL?lOOmL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述反應(yīng)杯為適用于熒光檢測儀進(jìn)行檢測的透明反應(yīng)杯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，反應(yīng)杯的加樣孔設(shè)置在頂部中間位置，排液孔設(shè)置在底部中間位置。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，反應(yīng)杯內(nèi)的濾膜固定設(shè)置在反應(yīng)杯內(nèi)靠近底部的位置。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述針頭式過濾器為5 μ m規(guī)格的針頭式過濾器。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，針頭式過濾器的濾液出口與反應(yīng)杯的加樣孔之間通過嵌合或螺紋方式密封連接。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，該裝置還包括用于將待測樣品液體注入針頭式過濾器的加樣口的無菌注射器。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于ATP生物熒光法檢測微生物的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述無菌注射器為能與針頭式過濾器的加樣口之間形成密封接觸的無菌注射器。
【文檔編號】G01N21/64GK204101457SQ201420574793
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】王志, 喻曉峰, 胡國慶, 陸燁 申請人:北京智峰博泰生物科技有限公司