本發(fā)明涉及一種可以簡單的檢測出末梢循環(huán)癌細(xì)胞（CTC；CirculatingTumorCell）的檢測方法及檢測裝置。
背景技術(shù)：
：向來，已知的末梢循環(huán)癌細(xì)胞（CTC）以106～107個的末梢血單核細(xì)胞中1個的超低濃度，從上皮衍生的癌癥患者的末梢血中觀察到。惡化的癌細(xì)胞在血液或淋巴液中循環(huán)流動，導(dǎo)致向遠(yuǎn)隔器官轉(zhuǎn)移，因此CTC被認(rèn)為是主要原因。在乳癌或大腸癌等轉(zhuǎn)移性癌癥的案例中，血液中的CTC已被認(rèn)可對治療效果的判定或作為預(yù)后因素是有用的，比如，已知的有美國Veridex公司開發(fā)的關(guān)于乳癌、大腸癌等領(lǐng)域的檢測系列的CellSearch(注冊商標(biāo))系統(tǒng)。CellSearch(注冊商標(biāo))系統(tǒng)，利用抗EpCAM抗體固定化磁珠，將CTC濃縮分離后，通過免疫染色法來標(biāo)記CTC，計數(shù)出試樣中的CTC(例如，請參照非專利文件1)。此外，鑒于癌細(xì)胞對尿激酶（尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑（uPA））及其受體(尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑受體（uPAR））的表達(dá)，還公開了以尿激酶的活性為指標(biāo)，從而將CTC即簡便且高精度的檢測回收的循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法(請參照專利文件1)?！緦＠墨I(xiàn)1】特開2014-39480號公報【非專利文獻(xiàn)1】RiethdorfSetal.,Detectionofcirculatingtumorcellsinperipheralbloodofpatientswithmetastaticbreastcancer:avalidationstudyoftheCellSearchsystem.ClinCancerRes.2007Feb1;13(3):920-8.技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明所要解決的技術(shù)問題如上所述的CellSearch(注冊商標(biāo))系統(tǒng)，對癌細(xì)胞表面的EpCAM（上皮細(xì)胞粘附分子）表達(dá)，利用抗EpCAM抗體的固定化磁珠，來濃縮CTC。具體講就是，通過納米鐵粒子與抗EpCAM的抗體結(jié)合的磁性粒子，從血液眾多的細(xì)胞中將異常的上皮細(xì)胞分離出。將分離出的上皮細(xì)胞與熒光標(biāo)記后的細(xì)胞角蛋白單克隆抗體進(jìn)行反應(yīng)，然后一起被熒光性的DNA染色物質(zhì)將細(xì)胞核染色。此外，為了將白血球識別為CTC，使熒光標(biāo)記的CD45抗體發(fā)生反應(yīng)。然后，將CTC的反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移到固定有磁鐵的盒子中。由磁鐵產(chǎn)生的磁力使CTC移動到盒子上面。對顯示在盒子上面熒光的發(fā)色狀況的熒光圖像數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。如上所述，在CellSearch(注冊商標(biāo))系統(tǒng)中，濃縮CTC、將上皮細(xì)胞特別分離出，將附在血液中的CTC利用磁鐵來誘導(dǎo)，然后利用熒光發(fā)色，這樣的檢測方法或檢測裝置變得很復(fù)雜。鑒于以上情況，本發(fā)明以提供一種可以更簡便且高精度的檢測出末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法以及檢測裝置。解決問題的方法本申請的發(fā)明人，將從末梢血中分離出的淋巴細(xì)胞層進(jìn)行培養(yǎng)，對粘著在培養(yǎng)容器底部的粘著細(xì)胞進(jìn)行深入研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)利用細(xì)胞培養(yǎng)后的粘著細(xì)胞可以更簡單更精確的檢測出末梢循環(huán)癌細(xì)胞。也就是說，本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，是檢測生物試樣中的循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，包括以下（a）～（d）工序。(a)從末梢血中分離出淋巴細(xì)胞的分離工序、和(b)將分離的末梢血淋巴細(xì)胞層放在培養(yǎng)液中培養(yǎng)的培養(yǎng)工序、和(c)培養(yǎng)后，將附著于培養(yǎng)容器底部的細(xì)胞進(jìn)行免疫染色的免疫染色工序、和(d)根據(jù)從免疫染色工序中取得的染色細(xì)胞的觀察圖像，從生物試樣中檢測出循環(huán)癌細(xì)胞的檢出工序。在此，上述（c）的免疫染色工序，作為優(yōu)選，最好使用抗EMA（上皮膜抗原）抗體染色。使用抗EMA抗體進(jìn)行免疫染色得到的是分析數(shù)據(jù)的特異性低、靈敏度高的結(jié)果，結(jié)果是檢測的cut-off（臨界值）值等同與下降，是可以作為篩選檢測使用的。作為優(yōu)選，上述（b）的培養(yǎng)工序中使用的培養(yǎng)容器，最好是和上述（c）的免疫染色工序中使用的免疫染色容器為同一個容器，培養(yǎng)后，從培養(yǎng)容器排出上清液僅留下粘著于底部的細(xì)胞，往培養(yǎng)容器注入免疫染色的抗體，可以更簡便的進(jìn)行檢測。此外，培養(yǎng)液為至少含有1000U／ml的白細(xì)胞介素-2（IL-2）也是可以的。用來培養(yǎng)末梢血淋巴細(xì)胞層的培養(yǎng)液，從臨床經(jīng)驗(yàn)上來講最好是至少含有1000U／ml的白細(xì)胞介素-2（IL-2）。上述（b）的培養(yǎng)工序，最好是進(jìn)行48～72小時的培養(yǎng)。培養(yǎng)不滿48小時的話，從臨床經(jīng)驗(yàn)上來講要檢出循環(huán)癌細(xì)胞是比較困難的。此外，培養(yǎng)超過72小時的話，循環(huán)癌細(xì)胞會出現(xiàn)自然滅亡(細(xì)胞凋亡)。上述（a）的分離工序以后，最好將分離的末梢血淋巴細(xì)胞層至少使用抗CD3抗體和抗CD161抗體中的任意一種進(jìn)行固相化。這樣是因?yàn)橥ǔ＜?xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)瓶是使用經(jīng)過抗CD3抗體或抗CD161抗體等固相化過的。經(jīng)過抗CD3抗體或抗CD161抗體中任意一種的固相化，可使包含在末梢血淋巴層的細(xì)胞增殖和活化。固相化的處理工序，并不是特別限定的，可適宜進(jìn)行選擇。此外，本發(fā)明涉及的癌癥患者與健康人群的篩查方法，如上所述的關(guān)于本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中的上述（d）的檢測工序中，根據(jù)觀察圖像內(nèi)的染色細(xì)胞的個數(shù)來進(jìn)行判斷。根據(jù)觀察圖像內(nèi)的染色細(xì)胞的個數(shù)，進(jìn)行分級判斷。接下來，就本發(fā)明的末梢循環(huán)細(xì)胞的檢測裝置進(jìn)行說明。本發(fā)明涉及的末梢循環(huán)細(xì)胞的檢測裝置，具備從末梢血中分離出淋巴細(xì)胞的分離功能模塊、和將分離的末梢血淋巴細(xì)胞層放在培養(yǎng)液中培養(yǎng)的培養(yǎng)功能模塊、將粘著于培養(yǎng)容器底部的細(xì)胞實(shí)施免疫染色的免疫染色功能模塊、和根據(jù)取得的染色細(xì)胞的觀察圖像從生物試樣中檢測出循環(huán)癌細(xì)胞的檢出功能模塊。免疫染色功能模塊，最好使用抗EMA（上皮膜抗原）抗體進(jìn)行染色。此外，培養(yǎng)功能模塊中使用的培養(yǎng)容器最好是與免疫染色功能模塊中使用的免疫染色容器是同一個容器。經(jīng)過培養(yǎng)后，從培養(yǎng)容器排出上清液僅留下粘著于底部的細(xì)胞，可以往培養(yǎng)容器注入免疫染色的抗體，構(gòu)成更簡便的檢測裝置。培養(yǎng)液是至少含有1000U／ml的白細(xì)胞介素-2（IL-2）也是可以的。此外，將分離的末梢血淋巴層至少使用抗CD3抗體和抗CD161抗體中的任意一種進(jìn)行固定化也是可以的。發(fā)明效果本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞檢測方法及檢測裝置，具有可以更簡便且高精確度的檢測出末梢循環(huán)癌細(xì)胞的效果。附圖說明【圖1】是本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測流程圖【圖2】是本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測流程圖（包含固相化工序）【圖3】是卵巢癌患者的EMA陽性細(xì)胞電子顯微照片1【圖4】是卵巢癌患者的EMA陽性細(xì)胞電子顯微照片2【圖5】是健康人的EMA陽性細(xì)胞電子顯微照片1【圖6】是健康人的EMA陽性細(xì)胞電子顯微照片2具體實(shí)施方式以下，就本發(fā)明的實(shí)施形態(tài)中的一例，一邊參照圖面一邊進(jìn)行詳細(xì)說明。此外，關(guān)于本發(fā)明的范圍，不限定于以下的實(shí)施例或圖示例，可以有其他的變更或變形。本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，如圖1的流程圖所示，包括從末梢血中分離出淋巴細(xì)胞的分離工序（步驟S1）、和將分離的末梢血淋巴細(xì)胞層放在培養(yǎng)液中培養(yǎng)的培養(yǎng)工序（步驟S3）、和培養(yǎng)后，將粘著于培養(yǎng)容器底部的細(xì)胞實(shí)施免疫染色的免疫染色工序（步驟S5）、和根據(jù)免疫染色工序取得的染色細(xì)胞的觀察圖像，從生物試樣中檢測出循環(huán)癌細(xì)胞的檢測工序（步驟S7）構(gòu)成。具體講就是，在分離工序(步驟S1)中，從生物試樣30ml的末梢血中，使用淋巴細(xì)胞分離液(比重1.077±0.001)將淋巴細(xì)胞層分離。在培養(yǎng)工序(步驟S3)中，在75cm2的塑料培養(yǎng)瓶中，往以RPMI1640、IMDM為基礎(chǔ)的培養(yǎng)液、混合1000U/ml的IL-2調(diào)制成的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液，在5％CO2、37℃的恒溫箱里培養(yǎng)48～72小時。此外，比起使用低濃度的IL-2，混合1000U/ml的IL-2可提高細(xì)胞的生長速度和活性。已知的IL-2是會給細(xì)胞增殖及活性化帶來影響的細(xì)胞因子（從細(xì)胞釋放出的免疫物質(zhì)），也可人工合成。在免疫染色工序(步驟S5)中，經(jīng)過培養(yǎng)后，棄去上清液，將粘著在培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞用細(xì)胞刮刀剝離后，用95％的乙醇進(jìn)行固定，在常溫下實(shí)施免疫染色。在檢測工序（步驟S7）中，先對從免疫染色工序中取得的標(biāo)本進(jìn)行前處理，用內(nèi)源性過氧化物酶5分鐘阻斷后，然后滴加接下來要介紹的6種抗體20分鐘，使用DAB顯色劑4分鐘，蘇木素染色1分鐘后，在顯微鏡下進(jìn)行觀察。在此，如圖2的流程圖所示，在分離工序（步驟S1）之后，附加將分離的末梢血淋巴細(xì)胞層至少使用抗CD3抗體和抗CD161抗體中的任意一種進(jìn)行固定化的固相化工序（步驟S2）也是可以得。在固相化工序（步驟S2）中，使用的是抗CD3抗體或是抗CD161抗體，或者是抗CD3抗體和抗CD161抗體一起使用。另外，在末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，用于反應(yīng)的試劑、阻斷劑、聚合物試劑、DAB顯色劑、清洗液（EnvisionFlexKit顯色試劑盒）使用的是Dako公司的產(chǎn)品。此外，蘇木素染液是將梅耶氏蘇木精液自己調(diào)整配置的。然后，在免疫染色工序(步驟S5)中使用的抗體是Dako公司生產(chǎn)的稀釋過的抗EMA抗體、抗CEA抗體、抗CK（AE1/AE3）抗體、抗Ki-67抗體、抗CD20（L-26）抗體，或者是抗CD45RO抗體中的任意一種，染色使用的是自動免疫染色裝置。在以下的表1中，關(guān)于用于免疫染色的6種抗體，示意的是癌細(xì)胞的譜系及臨床意義?！颈?】使用的抗體細(xì)胞的譜系及臨床意義EMA在上皮性腫瘤、骨髓瘤細(xì)胞表達(dá)CEA在結(jié)腸癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、肺癌等腺癌表達(dá)CK（AE1/AE3;細(xì)胞角蛋白）在皮性腫瘤、細(xì)胞增殖活性細(xì)胞表達(dá)Ki-67在細(xì)胞增殖活性細(xì)胞表達(dá)CD20(L-26)在B細(xì)胞淋巴細(xì)胞瘤、成熟B細(xì)胞表達(dá)CD45RO在T細(xì)胞淋巴細(xì)胞瘤、成熟T細(xì)胞表達(dá)為了證實(shí)本發(fā)明的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法的有用性，在以下的實(shí)施例中對實(shí)施的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行說明。在以下的實(shí)施例中，如圖2的流程圖所示，將從30ml的末梢血中使用淋巴細(xì)胞分離液分離出的淋巴細(xì)胞層放在經(jīng)過抗CD3抗體和抗CD161抗體固相化處理過的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)?？笴D3抗體是UCTH－1（bdbiosciences公司生產(chǎn)）、抗CD161抗體使是191.B8(Immuno-Tech公司生產(chǎn)）。固相培養(yǎng)容器的制作，是往底部的內(nèi)表面積為75cm2的培養(yǎng)瓶滴加抗CD3抗體和抗CD161抗體實(shí)施固相化處理，即制成了固相培養(yǎng)瓶。固相化處理是將調(diào)制的1μg／ml抗CD3抗體注入培養(yǎng)瓶，在室溫下靜置24小時后，將多余的抗體用磷酸鹽緩沖液清洗。然后，將調(diào)制的1μg／ml的抗CD161抗體注入培養(yǎng)瓶，再放在室溫下靜置24小時后，放入5℃的冷藏庫保存，使用時將多余的抗體用磷酸鹽緩沖液清洗后使用。另外，如圖1的流程圖所示，不包括將分離的淋巴細(xì)胞層使用抗CD3抗體和抗CD161抗體固定化的固定化工序也是可以的?！緦?shí)施例1】關(guān)于實(shí)施例1，就免疫染色工序（步驟5）中使用抗EMA抗體進(jìn)行免疫染色的結(jié)果進(jìn)行說明。（受試者的選擇方法）關(guān)于受試者的選擇方法，受試對象并非事先就決定的，先檢查正解，分別選出癌癥患者37名（其中、男性22名、女性15名）和健康人33名（其中、男性15名、女性18名），合計70名（其中、男性37名、女性33名）。表2示意的是37名癌癥患者檢體（檢體名P1～P37），分別按照年齡、性別、癌癥種類、分期（Stage）、免疫染色的結(jié)果（Positive：陽性，或是Negative：陰性），根據(jù)免疫染色的分析結(jié)果得出的判定等級（0～3）。如表2所示，所涉及的癌癥種類范圍廣泛，如肝癌、乳腺癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肺癌、大腸癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸癌、惡性淋巴瘤等。此外，表3示意的是33名健康人（檢體名N1～N33），分別按照年齡、性別、免疫染色的結(jié)果（Positive：陽性，或是Negative：陰性），根據(jù)免疫染色的分析結(jié)果得出的判定等級（0～3）?！颈?】檢體序號年齡性別癌癥種類分期結(jié)果判定P162男肝癌StageIIIc陽性Grade2P257女乳腺癌StageIV陽性Grade1P365男胃癌StageIV陽性Grade2P470男胰腺癌StageIV陽性Grade2P576女食道癌StageIV陽性Grade1P666男食道癌StageIa陰性Grade0P765男胰腺癌StageIIIb陽性Grade1P871男胰腺癌StageIV陽性Grade3P963男肺癌StageIV陽性Grade2P1070女乳腺癌StageIIIc陽性Grade2P1160男進(jìn)展期直腸癌StageIIIb陽性Grade2P1273女肝細(xì)胞癌StageIII陽性Grade2P1344女乳腺癌StageIIc陽性Grade2P1458女胃癌StageIV陽性Grade2P1567男大腸癌StageIV陽性Grade1P1670男肺癌StageIV陽性Grade2P1774男惡性淋巴瘤StageIIIb陽性Grade2P1871女肺腺癌StageIV陰性Grade0P1942女胰腺癌StageIV陰性Grade0P2051男直腸癌StageIV陰性Grade0P2171男輸尿管癌StageIV陽性Grade1P2273男肺腺癌StageIIIa陰性Grade0P2378女胃癌StageIV陰性Grade0P2447女卵巢癌StageIV陰性Grade0P2575女直腸癌StageIV陽性Grade1P2671男食道癌StageIV陽性Grade2P2756男腦腫瘤StageIIIa陽性Grade3P2850男直腸癌StageIV陽性Grade2P2943女乳腺癌StageIV陽性Grade2P3030女卵巢癌StageIV陽性Grade1P3166女右腎癌StageIIIc陽性Grade2P3270男胃癌StageIIIb陽性Grade2P3371男胃癌StageIV陽性Grade2P3463男肺腺癌StageIIIb陽性Grade2P3555女胰腺癌StageIIIc陰性Grade0P3640男多發(fā)性骨髓瘤StageIII陰性Grade0P3770男前列腺癌StageIIIb陽性Grade1【表3】檢體序號年齡性別結(jié)果判定N139男陰性Grade0N228男陽性Grade2N345男陽性Grade2N434女陽性Grade2N547女陽性Grade3N644女陽性Grade2N769女陰性Grade0N836男陽性Grade2N935男陽性Grade2N1030女陰性Grade0N1160女陰性Grade0N1232女陰性Grade0N1350男陰性Grade0N1436男陰性Grade0N1545男陰性Grade0N1635女陰性Grade0N1759男陽性Grade2N1850幾歲女陰性Grade0N1960女陽性Grade2N2057女陽性Grade2N2154女陽性Grade2N2254女陽性Grade2N2343男陽性Grade1N2450幾歲女陰性Grade0N2540幾歲女陰性Grade0N2651男陰性Grade0N2757男陽性Grade2N2842女陽性Grade2N2952男陰性Grade0N3026女陰性Grade0N3172男陽性Grade2N3275女陰性Grade0N3360男陽性Grade3使用抗EMA抗體實(shí)施免疫染色取得的結(jié)果，如下表4，表5所示。在表4中，真陽性、真陰性、假陽性及假陰性的術(shù)語的定義如下（本說明書中涉及的其他表中的記載以及在文中的記載也是一樣）?！ふ骊栃裕航?jīng)過檢查被正確的檢測為陽性的人(事實(shí)上是病人：癌癥患者)·真陰性：經(jīng)過檢查被正確的檢測為陽性的人(事實(shí)上是非病人：健康人)·假陽性：事實(shí)上是非病人被判定為檢查陽性?！ぜ訇幮裕菏聦?shí)上是病人被判定為檢查陰性。此外，在表5中，敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及準(zhǔn)確度的術(shù)語的定義如下（本說明書中涉及的其他表中的記載以及在文中的記載也是一樣）?！っ舾行裕耗苷_檢出被檢者為陽性的比例·特異性：能正確檢出非病患者為陰性的比例·陽性預(yù)測值：能正確檢出陽性者有病的比例·陰性預(yù)測值：能正確說出陰性者沒病的比例·準(zhǔn)確度：總數(shù)中的準(zhǔn)確比例在此，將敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及準(zhǔn)確度的這5個作為通常診斷準(zhǔn)確率的指標(biāo)。雖然陽性率及患病率不是診斷準(zhǔn)確率的指標(biāo)，但確是解析數(shù)據(jù)的重要指標(biāo)。在表5中，分別顯示著各個指標(biāo)的計算公式。敏感性越高，陽性者(患者）被漏檢的就會減少，是診斷幾率高的檢查。此外，敏感性越高，漏檢(假陽性者）少的檢查。也就是說，當(dāng)陽性預(yù)測值高的檢查中出現(xiàn)陽性的話，那么患病率會很高，當(dāng)陰性預(yù)測值高的檢查中出現(xiàn)陰性的話，基本上可以否定該疾病。【表4】癌癥患者健康人合計檢查陽性真陽性：28假陽性：17陽性數(shù)：45檢查陰性假陰性：9真陰性：16陰性數(shù)：25合計（人數(shù)）患者數(shù)：37非患者數(shù)：33總數(shù)：70【表5】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)76特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)48陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)62陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)64患病率患者數(shù)／總數(shù)53陽性率陽性數(shù)／總數(shù)64準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)63如上表4所示，結(jié)果是癌癥患者中陽性（真陽性）28人、陰性（假陰性）9人，健康人中陽性（假陽性）17人，陰性（真陰性）16人。此外如上表5所示，雖然特異性為48%很低，敏感性卻高達(dá)76%，陽性預(yù)測值為62%的結(jié)果。使用抗EMA抗體實(shí)施免疫染色取得的結(jié)果是，解析數(shù)據(jù)的特異性低，敏感性高，結(jié)果是相當(dāng)于降低了篩查陽性界（Cutoff）值，可用于篩選試驗(yàn)。另外，相反的，解析數(shù)據(jù)的特異性高，敏感性低時，結(jié)果是相當(dāng)于升高了數(shù)據(jù)的篩查陽性界（Cutoff）值，可用于以啟動治療為目的的檢查。在此，對使用抗EMA抗體染色的細(xì)胞的譜系進(jìn)行說明?？笶MA抗體，除了上皮腫瘤細(xì)胞以外，也會對骨髓中的漿細(xì)胞進(jìn)行染色。由于健康人的骨髓漿細(xì)胞是不會出現(xiàn)在末梢血液中，在檢查過程中發(fā)現(xiàn)的健康人的EMA陽性細(xì)胞是漿細(xì)胞的可能性可以排除。在癌癥患者的末梢血中發(fā)現(xiàn)的EMA陽性細(xì)胞的疾患有霍奇金病（H＆L細(xì)胞）和間變性大細(xì)胞淋巴瘤（T細(xì)胞系細(xì)胞），此次沒有對這些患者進(jìn)行檢查。從以上理由可以得出，用抗EMA抗體染色的細(xì)胞，可判定是上皮腫瘤細(xì)胞或上皮起源的異常細(xì)胞。接下來，在培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)工序（步驟3）中，關(guān)于不同組成成分的培養(yǎng)液，是否會影響到EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)，用4名健康人的細(xì)胞進(jìn)行檢查的結(jié)果進(jìn)行說明。選擇1名為EMA陽性細(xì)胞表達(dá)呈陰性，其他3名有EMA陽性細(xì)胞表達(dá)的被驗(yàn)者，使用RPMI1640、IMDM為基礎(chǔ)的培養(yǎng)液，對EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行了比較。使用的是用抗CD3抗體和抗CD161抗體固相處理后的培養(yǎng)瓶進(jìn)行的培養(yǎng)。比較結(jié)果如下表6所示。從表6可以知道，不同組成成分的培養(yǎng)液，對EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)是沒有影響的?！颈?】如上所述，在本實(shí)施例中，如圖2的流程圖所示，從30ml的末梢血中使用淋巴細(xì)胞分離液分離出的淋巴細(xì)胞層放在經(jīng)過抗CD3抗體和抗CD161抗體固相化處理過的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。這是因?yàn)橥ǔ５募?xì)胞培養(yǎng)是使用抗CD3抗體及抗CD161抗體固相化處理過的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的。關(guān)于固相化工序（步驟S2）的有無，是否會影響到EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行了檢查。在實(shí)驗(yàn)中，分別使用經(jīng)過抗CD3抗體和抗CD161抗體的抗體處理過的培養(yǎng)瓶，和沒有實(shí)施抗體處理的培養(yǎng)瓶，同時進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)后，實(shí)施EMA的免疫染色。如下表7所示，即使沒有使用抗體進(jìn)行固相化處理的培養(yǎng)瓶，也有EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)，因此，抗體的固相化處理是沒有關(guān)系的。也就是說，即使是使用沒有用抗體進(jìn)行固相化處理的培養(yǎng)瓶，對EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)是沒有影響的，固相化工序（步驟S2）的有無，是不會影響到EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)。【表7】接下來，就本實(shí)施例涉及的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法的再現(xiàn)性進(jìn)行了調(diào)查。如下表8所示，選出健康人5名、癌癥患者7合計12名對EMA免疫染色的再現(xiàn)性進(jìn)行了調(diào)查。第2次，第3次的檢查是在第1次檢查完的1～2個月后實(shí)施的。如表8所示，除了1例（P2），剩下的11例認(rèn)可了再現(xiàn)性。表8的結(jié)果示意了本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法的再現(xiàn)率為92%（11/12）?！颈?】（ND:無數(shù)據(jù))將本實(shí)施例中的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法的結(jié)果與用其他方法取得的結(jié)果進(jìn)行了比較。將EMA陽性細(xì)胞的被驗(yàn)者的檢體使用CellSearch（注冊商標(biāo)）系統(tǒng)（美國Veridex公司開發(fā)的關(guān)于乳腺癌，直腸癌等領(lǐng)域的檢測系統(tǒng)）進(jìn)行了檢測。如下表9所示的，通過EMA染色取得的結(jié)果與通過CellSearch（注冊商標(biāo)）系統(tǒng)取得的結(jié)果是一致的。由此，可以表明本實(shí)施例中的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，不遜色于CellSearch（注冊商標(biāo)）系統(tǒng)的檢測敏感度?！颈?】接下來，就EMA陽性細(xì)胞的電子顯微鏡照片進(jìn)行說明。圖3和圖4是卵巢癌患者的EMA陽性細(xì)胞的電子顯微鏡照片。從圖3和圖4中觀察到的細(xì)胞，整體的N/C比高，雖然觀察到線粒體的形成，但高爾基體等其他的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)小器官的形成較差。此外，核小體的形成比較顯著。雖然幾乎沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞間連接裝置的形成，但有暗示細(xì)胞質(zhì)突起形成的粘附。雖然要特定細(xì)胞譜系是困難的，但可以推測是某些腫瘤細(xì)胞。另外，圖5和圖6是健康人的EMA陽性細(xì)胞的電子顯微鏡照片。在圖5和圖6中，雖然有少數(shù)，N/C比還是高的，觀察到核小體顯著的異形細(xì)胞。有一部分有出現(xiàn)細(xì)胞間相互粘附的影像，細(xì)胞間連接裝置的發(fā)育較差。高爾基體等細(xì)胞質(zhì)內(nèi)小器官的發(fā)育也比較差。從以上的觀察結(jié)果來看，雖然要特定在癌癥患者、健康人身上表達(dá)的EMA陽性細(xì)胞的細(xì)胞譜系是比較困難，但也可以推測出是某些腫瘤細(xì)胞或異形細(xì)胞的。下表10是總結(jié)了卵巢癌患者和健康人的EMA陽性細(xì)胞的電子顯微鏡照片的觀察比較結(jié)果?！颈?0】細(xì)胞的特征癌癥患者（StageⅣ）健康人N/C比大大線粒體的發(fā)育差差高爾基體差差核小體的形成顯著顯著細(xì)胞間連接裝置差差在此，就關(guān)于EMA陽性細(xì)胞為非腫瘤基質(zhì)細(xì)胞的可能性的研究結(jié)果進(jìn)行說明。基質(zhì)細(xì)胞里有免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，周細(xì)胞。其中，需要確認(rèn)的是EMA陽性細(xì)胞是否為基質(zhì)細(xì)胞的問題。特別是，血液中的是否為免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞。首先，炎癥細(xì)胞有嗜中性粒細(xì)胞和漿細(xì)胞，嗜中性粒細(xì)胞通過免疫染色會表達(dá)為非特異性的CEA陽性，但不會表達(dá)為EMA陽性。此外，漿細(xì)胞會在霍奇金病或間變性大細(xì)胞型淋巴瘤患者的末梢血中出現(xiàn)，不會在健康人的末梢血中出現(xiàn)。關(guān)于患有霍奇金病或間變性大細(xì)胞型淋巴瘤患者，已從此次的被驗(yàn)者中排除，因此可以排除漿細(xì)胞的可能性。此外，骨髓中的漿細(xì)胞是很罕有會呈EMA陽性的，漿細(xì)胞通常是不會出現(xiàn)在健康人的末梢血中，因此可以排除這個可能性。接下來是免疫細(xì)胞。在末梢血中有時會出現(xiàn)從胸腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的非腫瘤性的未成熟的T細(xì)胞。但是，非腫瘤性的未成熟的T細(xì)胞沒有在從健康人身上發(fā)現(xiàn)的見解，而在胸腺瘤患者的末梢血中出現(xiàn)。關(guān)于胸腺瘤患者，也已從此次的被驗(yàn)者中排除，因此，因此可以排除是免疫細(xì)胞的可能性。在此，還存在內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或者周細(xì)胞是否以末梢血的EMA陽性細(xì)胞表達(dá)的問題。還有一個問題，有可能在血液采集時從針孔混入的血管內(nèi)皮細(xì)胞，存在于皮下的成纖維細(xì)胞、周細(xì)胞。為了驗(yàn)證這些可能性，將在血液采集時有廢棄最初的2ml的末梢血，和沒有廢棄的末梢血進(jìn)行了培養(yǎng)比較。如下表11所示，采血時有廢棄2ml的末梢血，和沒有廢棄2ml的末梢血同樣都有EMA陽性細(xì)胞表達(dá)。由此，檢測出的EMA陽性細(xì)胞是采血時從針孔混入的血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、周細(xì)胞的可能性可以排除。從上可知，存在于末梢血中的EMA陽性細(xì)胞可以認(rèn)為是上皮細(xì)胞?！颈?1】接下來，就本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中通過觀察圖像內(nèi)的染色細(xì)胞個數(shù)，對癌癥患者和健康人進(jìn)行篩選判斷的方法進(jìn)行說明。判斷以Grade(等級)進(jìn)行，例如，Grade如下表12所定。也就是說，Grade0，就是EMA陽性細(xì)胞為0個，像這種情況，癌癥或癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的擔(dān)心較少，建議定期接受癌癥檢查。此外，Grade1是發(fā)現(xiàn)1個EMA陽性細(xì)胞，癌癥的可能性很低，但建議接受癌癥檢查。像這種情況，今后需要注意癌癥。此外，Grade2是出現(xiàn)數(shù)個EMA陽性細(xì)胞，有可能存在肉眼看不見的小癌細(xì)胞。像這種情況，建議接受詳細(xì)的癌癥檢查。然后，Grade3是EMA陽性細(xì)胞多于5%，像這種情況，身體的某個位置存在癌細(xì)胞的可能性較高，建議盡早接受詳細(xì)的癌癥檢查。此外，不管EMA陽性細(xì)胞數(shù)是多于5%、EMA陽性細(xì)胞數(shù)為10%、30%，不去考慮數(shù)量要素是可以的?！颈?2】就本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法的檢測結(jié)果的解釋，關(guān)于癌癥患者的EMA陽性細(xì)胞，健康人的EMA陽性細(xì)胞肯定不是癌細(xì)胞是有可能的。其中的一個理由是，有EMA陽性細(xì)胞表達(dá)的健康人，目前沒有發(fā)展成癌癥的例子。此外，為了證明這一點(diǎn)，對一部分EMA表達(dá)陽性細(xì)胞的健康人實(shí)施了PET-CT檢查、腫瘤標(biāo)志物的檢測的檢測結(jié)果是，目前沒有發(fā)現(xiàn)有癌細(xì)胞等異常的人。相反，從癌癥患者身上觀察到EMA陽性細(xì)胞，對癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的判定是有意義的（76％、真陽性28／患者數(shù)37），癌癥患者的EMA陽性細(xì)胞，可以說捕獲的是該癌細(xì)胞本身的可能性很高。在有EMA陽性細(xì)胞表達(dá)的患者中，在上述CellSearch（注冊商標(biāo)）系統(tǒng)的測定結(jié)果中也認(rèn)定有癌細(xì)胞存在的2個病例（檢體No＝P2，P10）,可以推測出EMA陽性細(xì)胞的表達(dá)與癌癥復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)性。這表明具有轉(zhuǎn)移潛能的EMA陽性細(xì)胞的存在，關(guān)系到預(yù)后（復(fù)發(fā)，轉(zhuǎn)移）的可能性。癌癥患者的EMA陽性細(xì)胞，轉(zhuǎn)移潛能高，與復(fù)發(fā)有關(guān)，可認(rèn)為是健康人的EMA陽性細(xì)胞的成瘤能力低的可能性。也就是說，從癌癥患者身上發(fā)現(xiàn)的EMA陽性細(xì)胞是具有轉(zhuǎn)移潛能的癌細(xì)胞，健康人身上發(fā)現(xiàn)的EMA陽性細(xì)胞，將來有可能發(fā)展成癌的、分裂慢的癌癥干細(xì)胞的可能性。此外，如上所述，這些有也可從卵巢癌患者和健康人身上表達(dá)的EMA陽性細(xì)胞放在電子顯微鏡下面觀察的結(jié)果推測出來。（參照圖3～6）。此外，即使是在檢查時沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的癌癥患者，在檢查以后確認(rèn)有EMA陽性細(xì)胞，可認(rèn)為是有癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的幾率變高的可能性。今后，有必要就癌癥患者或健康人的EMA陽性細(xì)胞是否確定是癌細(xì)胞，或癌癥干細(xì)胞進(jìn)行詳細(xì)查明。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有1個或2個EMA陽性細(xì)胞發(fā)現(xiàn)時，確定是否真是轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的癌癥發(fā)病癥狀是非常重要的。比如，在末梢血中即使有100個這樣的細(xì)胞出現(xiàn)，在培養(yǎng)過程中99個死掉的可能性也是有的。末梢血中的癌細(xì)胞有1萬個、10萬個或100萬個，存在著其中的1個或2個是否為癌的轉(zhuǎn)移細(xì)胞的幾率問題。也有末梢血中發(fā)現(xiàn)的癌細(xì)胞在1小時到2小時40分鐘左右自然死亡（細(xì)胞凋亡）的報告。有人體中1天內(nèi)產(chǎn)生3000～4000個癌細(xì)胞或異常細(xì)胞的說法。可是，這些細(xì)胞或被免疫細(xì)胞排除、或自然死亡（細(xì)胞凋亡），從而抑制癌癥發(fā)病。體內(nèi)若留下1個或2個這樣的細(xì)胞，這與培養(yǎng)條件不同，無法否認(rèn)100％不會在生物體內(nèi)發(fā)展為癌癥。另外，在健康人的末梢血中有類似EMA陽性細(xì)胞的上皮細(xì)胞的存在是無法想象的。EMA陽性細(xì)胞也就在52%（如上表4中的假陰性17／非患者數(shù)33）的健康人身上出現(xiàn)的現(xiàn)象，這也許就是證實(shí)了無論男女、日本人2個人中有1個人在一生中會被診斷為癌癥的說法。厚生勞動省在2010年的試算中提到，一生中患癌的幾率，男性為60%、女性為45%。即使是本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，在33名的健康人（男性15名、女性18名）中，有EMA陽性細(xì)胞表達(dá)的人為男性9名（60%；9／15）、女性8名（44%；8／18），這與厚生労働省的試算一致是令人深思?！緦?shí)施例2】在實(shí)施例2的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，在免疫染色工序（步驟S5）中使用抗CEA抗體取代抗EMA抗體進(jìn)行免疫染色后的結(jié)果進(jìn)行說明。由于抗CEA抗體會對大腸、肺、乳房、肝臟、胰臟等的腺癌細(xì)胞顯示特殊染色，如上表2所示根據(jù)檢體的癌癥種類和癌細(xì)胞的譜系，選出肺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等腺癌患者，從實(shí)施例1中70例的病例（癌癥患者和健康人分別為37名、33名），減少至52例（癌癥患者和健康人分別為30名、22名）。使用抗CEA抗體免疫染色取得的結(jié)果示意在下表13，表14中。此外，表中的用詞或指標(biāo)，與實(shí)施例1中說明的內(nèi)容相同?！颈?3】癌癥患者健康人合計檢查陽性真陽性：10假陽性：3陽性數(shù)：13檢查陰性假陰性：20真陰性：19陰性數(shù)：39合計（人數(shù)）患者數(shù)：30非患者數(shù)：22總數(shù)：52【表14】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)33特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)86陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)77陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)49患病率患者數(shù)／總數(shù)58陽性率陽性數(shù)／總數(shù)25準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)56如上表13所示，結(jié)果是癌癥患者的陽性（真陽性）是10人、陰性（假陰性）是20人，健康人的陽性（真陽性）是3人、陰性（假陰性）是19人。此外，如上表14所示，結(jié)果是特異性高達(dá)86%，敏感性低僅為33%，此外，陽性預(yù)測值為77%。使用抗CEA抗體免疫染色取得的結(jié)果的分析數(shù)據(jù)是特異性高、敏感性低，結(jié)果是使檢查的臨界（Cutoff）值變高，這與實(shí)施例1中記載的使用抗EMA抗體免疫染色的情況不同，可以用在判斷是否可以開始進(jìn)行癌癥治療的檢查上。根據(jù)以上結(jié)果，雖然有可以用于判斷是否可以開始進(jìn)行癌癥治療的檢查的可能性，但是抗CEA抗體雖會對大腸、肺、乳房、肝臟、胰臟等的腺癌細(xì)胞顯示特殊染色，但也時常會將炎癥時出現(xiàn)的嗜中性粒細(xì)胞顯示特殊染色。因此，實(shí)施例2的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，也就是使用抗CEA抗體的免疫染色，從檢查時抗體的特異性觀點(diǎn)來看會比實(shí)施例1的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法差一點(diǎn)?！緦?shí)施例3】在實(shí)施例3的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，在免疫染色工序（步驟S5）中將抗EMA抗體的EMA免疫染色的結(jié)果，和抗CEA抗體的EMA免疫染色的結(jié)果同時使用，對是否可以提高指標(biāo)的準(zhǔn)確度的調(diào)查結(jié)果進(jìn)行說明。將實(shí)施例1中70例的病例（癌癥患者和健康人分別為37名、33名），減少至57例（癌癥患者和健康人分別為35名、22名）。將抗EMA抗體的EMA免疫染色的結(jié)果、和抗CEA抗體的EMA免疫染色的結(jié)果同時使用，所取得的判斷結(jié)果如下表15，表16所示。此外，表中的術(shù)語或指標(biāo)與實(shí)施例1中說明的內(nèi)容相同。【表15】癌癥患者健康人合計檢查陽性真陽性：6假陽性：2陽性數(shù)：8檢查陰性假陰性：29真陰性：20陰性數(shù)：49合計（人數(shù)）患者數(shù)：35非患者數(shù)：22總數(shù)：57【表16】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)17特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)91陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)75陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)41患病率患者數(shù)／總數(shù)61陽性率陽性數(shù)／總數(shù)14準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)46如上表15所示，結(jié)果是癌癥患者的陽性（真陽性）是6人、陰性（假陰性）是29人，健康人的陽性（假陽性）是2人、陰性（真陰性）是20人。此外，如上表16所示，結(jié)果是特異性高達(dá)91%，敏感性低至17%，準(zhǔn)確度為46%低至一半以下。由此可見，同時使用抗EMA抗體的EMA免疫染色的結(jié)果、和抗CEA抗體的EMA免疫染色的結(jié)果進(jìn)行判斷的方法不合適，需通過進(jìn)一步的數(shù)據(jù)積累，從而發(fā)現(xiàn)實(shí)用的可能性?！緦?shí)施例4】在實(shí)施例4的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，對免疫染色工序（步驟S5）中使用抗CK（AE1／AE3）抗體取代抗EMA抗體實(shí)施免疫染色后的結(jié)果進(jìn)行說明。由于抗CK（AE1／AE3）抗體會對上皮性腫瘤及細(xì)胞增殖活性細(xì)胞顯示特殊染色。病例數(shù)為30例（癌癥患者和健康人分別為19名、11名）。從外，癌癥患者是通過隨機(jī)抽取的，與癌癥種類無關(guān)。使用抗CK（AE1／AE3）抗體取得的免疫染色的結(jié)果如下表17，表18所示。此外，表中的術(shù)語或指標(biāo)，與實(shí)施例1中說明的內(nèi)容相同?！颈?7】癌癥患者健康人合計檢查陽性真陽性：16假陽性：9陽性數(shù)：25檢查陰性假陰性：3真陰性：2陰性數(shù)：5合計（人數(shù)）患者數(shù)：19非患者數(shù)：11總數(shù)：30【表18】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)84特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)18陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)64陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)40患病率患者數(shù)／總數(shù)63陽性率陽性數(shù)／總數(shù)83準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)60如上表17所示，結(jié)果是癌癥患者的陽性（真陽性）是16人、陰性（假陰性）是3人，健康人的陽性（假陽性）是9人、陰性（真陰性）是2人。此外，如上表18所示，結(jié)果是敏感性高達(dá)84%，特異性低至18%，也沒有觀察到與敏感性的關(guān)聯(lián)。因此，以現(xiàn)在的結(jié)果來看，本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，可以知道用抗CK（AE1／AE3）抗體的免疫染色是不適合用于判斷的，需通過進(jìn)一步的數(shù)據(jù)積累，從而發(fā)現(xiàn)實(shí)用的可能性?！緦?shí)施例5】在實(shí)施例5的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，對免疫染色工序（步驟S5）中使用抗Ki-67抗體取代抗EMA抗體實(shí)施免疫染色后的結(jié)果進(jìn)行說明。由于抗Ki-67抗體會對細(xì)胞增殖活性細(xì)胞顯示特殊染色。病例數(shù)為15例（癌癥患者和健康人分別為8名、7名）。此外，癌癥患者是通過隨機(jī)抽取的，與癌癥種類無關(guān)。使用抗Ki-67抗體取得的免疫染色的結(jié)果如下表19，表20所示。此外，表中的術(shù)語或指標(biāo)，與實(shí)施例1中說明的內(nèi)容相同?！颈?9】癌癥患者健康人合計檢查陽性真陽性：6假陽性：5陽性數(shù)：11檢查陰性假陰性：2真陰性：2陰性數(shù)：4合計（人數(shù)）患者數(shù)：8非患者數(shù)：7總數(shù)：15【表20】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)75特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)29陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)55陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)50患病率患者數(shù)／總數(shù)53陽性率陽性數(shù)／總數(shù)73準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)53如上表19所示，結(jié)果是癌癥患者的陽性（真陽性）是6人、陰性（假陰性）是2人，健康人的陽性（假陽性）是5人、陰性（真陰性）是2人。此外，如上表20所示，結(jié)果是敏感性為75%較高，特異性為29%較低，也沒有觀察到與敏感性的關(guān)聯(lián)。因此，以現(xiàn)在的結(jié)果來看，本實(shí)施例子的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，可以知道用抗Ki-67抗體的免疫染色是不適合用于判斷的，需通過進(jìn)一步的數(shù)據(jù)積累，從而發(fā)現(xiàn)實(shí)用的可能性?！緦?shí)施例6】在實(shí)施例6的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，對免疫染色工序（步驟S5）中使用抗CD20（L-26）抗體取代抗EMA抗體實(shí)施免疫染色后的結(jié)果進(jìn)行說明。由于抗CD20（L-26）會對細(xì)胞增殖活性細(xì)胞顯示特殊染色。病例數(shù)為3例（癌癥患者和健康人分別為1名、2名）。此外，癌癥患者是從多發(fā)性骨髓瘤患者中選出的。使用抗CD20（L-26）抗體取得的免疫染色的結(jié)果如下表21，表22所示。此外，表中的術(shù)語或指標(biāo)，與實(shí)施例1中說明的內(nèi)容相同?！颈?1】【表22】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)100特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)0陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)33陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)0患病率患者數(shù)／總數(shù)33陽性率陽性數(shù)／總數(shù)100準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)33如上表21所示，結(jié)果是癌癥患者的陽性（真陽性）是1人、陰性（假陰性）是0人，健康人的陽性（假陽性）是2人、陰性（真陰性）是0人。由于病例數(shù)不足，如上表22所示，得出的結(jié)果是敏感性100%，特異性0%。因此，就現(xiàn)在的結(jié)果來看，本實(shí)施例子的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，也就是抗CD20（L-26）抗體的免疫染色是不適合用于判斷的，需通過進(jìn)一步的數(shù)據(jù)積累，從而發(fā)現(xiàn)實(shí)用的可能性?！緦?shí)施例7】在實(shí)施例7的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法中，對免疫染色工序（步驟S5）中使用抗CD45RO抗體取代抗EMA抗體實(shí)施免疫染色后的結(jié)果進(jìn)行說明。由于抗CD45RO抗體會對T細(xì)胞淋巴細(xì)胞瘤或成熟T細(xì)胞顯示特殊染色。病例數(shù)為13例（癌癥患者和健康人分別為10名、3名）。此外，癌癥患者是通過隨機(jī)抽取的，與癌癥種類無關(guān)。使用抗CD45RO抗體取得的免疫染色的結(jié)果如下表23，表24所示。此外，表中的術(shù)語或指標(biāo)，與實(shí)施例1中說明的內(nèi)容相同。【表23】癌癥患者健康人合計檢查陽性真陽性：10假陽性：3陽性數(shù)：13檢查陰性假陰性：0真陰性：0陰性數(shù)：0合計（人數(shù)）患者數(shù)：10非患者數(shù)：3總數(shù)：13【表24】指標(biāo)計算公式值（％）敏感性真陽性數(shù)／患者數(shù)100特異性真陰性數(shù)／非患者數(shù)0陽性預(yù)測值真陽性數(shù)／陽性數(shù)77陰性預(yù)測值真陰性數(shù)／陰性數(shù)0患病率患者數(shù)／總數(shù)77陽性率陽性數(shù)／總數(shù)100準(zhǔn)確度（真陽性數(shù)＋真陰性數(shù)）／總數(shù)77如上表23所示，結(jié)果是癌癥患者的陽性（真陽性）是10人、陰性（假陰性）是0人，健康人的陽性（假陽性）是3人、陰性（真陰性）是0人。如上表24所示，本實(shí)施例也得出了敏感性100%，特異性0%的結(jié)果。因此，就現(xiàn)在的結(jié)果來看，本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢測方法，也就是使用抗CD45RO抗體的免疫染色是不適合用于判斷的，需通過進(jìn)一步的數(shù)據(jù)積累，從而發(fā)現(xiàn)實(shí)用的可能性。【實(shí)施例8】(使用貝葉斯定理進(jìn)行的數(shù)據(jù)分析)關(guān)于本實(shí)施例的末梢循環(huán)癌細(xì)胞的檢出準(zhǔn)確度，數(shù)據(jù)是根據(jù)貝葉斯定理進(jìn)行的分析。在使用貝葉斯定理時，患病率作為先驗(yàn)概率，陽性預(yù)測值作為后驗(yàn)概率。這本來是檢查前患病的幾率（患病率），當(dāng)檢查知道是陽性后，顯示的是上升到是某種疾病幾率（陽性預(yù)測率）。在此，數(shù)據(jù)的計算是根據(jù)如下表25所示的計算公式進(jìn)行的。在表25中，似然比是將敏感性及特異性結(jié)合起來的指標(biāo)，作為檢出準(zhǔn)確度的指標(biāo)，選擇不受患病率影響的敏感性、特異性、似然比、ROC（受試者工作特征曲線）曲線。通過計算取得的EMA免疫染色的判斷、CEA免疫染色的判斷、同時使用EMA免疫染色和CEA免疫染色（EMA＋CEA）的判斷時的檢出準(zhǔn)確度如下表26所示。根據(jù)表26的結(jié)果可以知道，從敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確度及似然比，EMA免疫染色是最適合篩選試驗(yàn)的?！颈?5】【表26】工業(yè)應(yīng)用性本發(fā)明可作為健康人的早期發(fā)現(xiàn)癌癥用篩選測試檢查用的檢測裝置，癌癥患者手術(shù)后的復(fù)發(fā)檢查用裝置，此外，還可作為判斷抗癌藥物、放射治療或者癌癥免疫療法的治療效果的判斷裝置使用。圖中符號說明1EMA陽性細(xì)胞當(dāng)前第1頁1 2 3