本發(fā)明涉及一種高效液相色譜分析方法，尤其是2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的分析檢測方法。
背景技術(shù)：
：依維莫司(everolimus)是新一代大環(huán)內(nèi)酯類雷帕霉素衍生物藥物。該藥由諾華制藥公司(NovartisCorp.)開發(fā)并于2004年首先在德國上市，主要用于1)其它藥物治療無效的晚期腎癌；2)可增補神經(jīng)鈣蛋白抑制劑環(huán)孢素的免疫抑制作用，用于預(yù)防心臟或腎臟移植的排異反應(yīng)；3)藥物支架用藥，是目前藥物洗脫支架最常用的藥物之一。2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇是合成依維莫司的重要中間體，其化學(xué)式為C8H20O2Si，結(jié)構(gòu)式如下：專利WO2012103959A1和CN101175760A中雖然記載了依維莫司及雷帕霉素相關(guān)衍生物的分析方法，但這些方法并不適用于2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的分析檢測，所以建立一種穩(wěn)定有效的分析檢測方法對2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇進行質(zhì)量控制是非常必要的。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的高效液相色譜分析檢測方法，用于2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的質(zhì)量控制。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗，最終獲得如下技術(shù)方案：2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的分析檢測方法，是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱(C18，4.6×250mm，5μm)，以0.01％甲酸水溶液為流動相A，0.01％甲酸乙腈溶液為流動相B，梯度洗脫，以檢測波長為205nm，柱溫為20～30℃，進行高效液相色譜法 分析檢測。所述流動相的梯度設(shè)置為：時間(分鐘)流動相A(％)流動相B(％)088～9712～32012～388～973012～388～973188～9712～34088～9712～3所述的柱溫優(yōu)選為25℃。本發(fā)明所述的分析檢測方法，可通過以下步驟實現(xiàn)：a、取2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇樣品適量，用甲醇或乙腈溶解，配制成每1mL含2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇3～21mg的樣品溶液；b、設(shè)置流動相流速為0.7～1.2mL/min，檢測波長205nm，柱溫為20～30℃；c、取a的樣品溶液20μL注入液相色譜儀，完成2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的分析檢測；其中：高效液相色譜儀：Waterse2695液相色譜系統(tǒng)；色譜柱：島津InertsilODS-3V；C18，4.6×250mm，5μm；流動相：A-0.01％的甲酸水溶液，B-0.01％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脫設(shè)置為：時間(分鐘)流動相A(％)流動相B(％)091920991309913191940919檢測波長：205nm；柱溫：25℃；流速：1.0mL/min。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的分析檢測方法，可以有效的將2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇及其雜質(zhì)分開，而且該方法分離度(高達4.14)及靈敏度高，操作簡單，重復(fù)性 及耐用性好，結(jié)果穩(wěn)定可靠，從而可用于2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的質(zhì)量控制，為最終成品的質(zhì)量提供有效保障。附圖說明圖1實施例1的2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇HPLC圖譜。圖2實施例2的2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇HPLC圖譜。圖3實施例3的2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇HPLC圖譜。圖4實施例7的2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇線性工作曲線具體實施方式以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步的描述，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。實施例1儀器與條件：Waterse2695液相色譜系統(tǒng)，Waters2489紫外/可見光檢測器，色譜柱：島津InertsilODS-3V；C18，4.6×250mm，5μm，檢測波長205nm，柱溫25℃，流速1.0mL/min，流動相：A-0.01％的甲酸水溶液，B-0.01％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脫設(shè)置為：時間(分鐘)流動相A(％)流動相B(％)091920991309913191940919實驗步驟：將2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇用甲醇溶解并定量稀釋制成每1mL中含2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇15mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖1。附圖1表明，在該色譜條件下，2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰和雜質(zhì)峰可以完全分離，且2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰的保留時間在18.336min，分離度為4.11。實施例2儀器與條件：Waterse2695液相色譜系統(tǒng)，Waters2489紫外/可見光檢測器，色譜柱： 島津InertsilODS-3V；C18，4.6×250mm，5μm，檢測波長205nm，柱溫20℃，流速0.7mL/min，流動相：A-0.01％的甲酸水溶液，B-0.01％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脫設(shè)置為：時間(分鐘)流動相A(％)流動相B(％)08812201288301288318812408812實驗步驟：將2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇用乙腈溶解并定量稀釋制成每1mL中含2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇15mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖2。附圖2表明，在該色譜條件下，2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰和雜質(zhì)峰可以完全分離，且2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰的保留時間在19.099min，分離度為4.14。實施例3儀器與條件：Waterse2695液相色譜系統(tǒng)，Waters2489紫外/可見光檢測器，色譜柱：島津InertsilODS-3V；C18，4.6×250mm，5μm，檢測波長205nm，柱溫30℃，流速1.2mL/min，流動相：A-0.01％的甲酸水溶液，B-0.01％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脫設(shè)置為：時間(分鐘)流動相A(％)流動相B(％)097320397303973197340973實驗步驟：將2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇用甲醇溶解并定量稀釋制成每1mL中含2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇15mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖3。附圖3表明，在該色譜條件下，2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰和雜質(zhì)峰可以完全分離，且2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰的保留時間在17.691min，分離度為4.10。實施例4系統(tǒng)適應(yīng)性實驗儀器與條件：與實施例1中的相同。實驗步驟：取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL中含15mg的溶液，作為供試品溶液。取供試品溶液，連續(xù)進樣六次，分別計算2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰峰面積以及保留時間的相對標準偏差，實驗結(jié)果見表1。表12-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇系統(tǒng)適用性實驗結(jié)果由表1可知，2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，對稱因子均小于1.5，理論板數(shù)均高于3000，峰面積的相對標準偏差為1.88％，保留時間的相對標準偏差為0.04％。可見，該色譜條件下，2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇及其雜質(zhì)可以完全分離，峰形較好，而且相對標準偏差較小(在中國藥典要求的限度內(nèi))，所得結(jié)果穩(wěn)定可靠。實施例5重復(fù)性實驗儀器與條件：與實施例1中的相同。實驗步驟：取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL中含15mg的溶液，作為供試品溶液，同法配制6份供試品溶液。取供試品溶液，連續(xù)進樣六次，按面積歸一化法計算2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇含量，并計算其相對標準偏差，實驗結(jié)果見表2。表22-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇重復(fù)性實驗結(jié)果由表2可知，各供試品溶液中2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的含量沒有明顯差異，相對標準偏差為0.02％，可見本分析檢測方法的重復(fù)性良好。實施例6耐用性實驗儀器與條件：除柱溫和流速外(見表3)，其他條件與實施例1中的相同。實驗步驟：取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL中含15mg的溶液，作為供試品溶液。分別通過改變柱溫、流速，記錄2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇含量的變化情況(按面積歸一化法計算)，實驗結(jié)果見表3。表32-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇耐用性實驗結(jié)果由表3可知，改變柱溫、流速后，2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇含量的測定結(jié)果沒有明顯差異，可見本發(fā)明分析檢測方法的耐用性良好。實施例7線性與范圍儀器與條件：與實施例1中的相同。實驗步驟：精密稱取本品1500.39mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度作為線性儲備液。精密量取線性儲備液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL分別置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，依法測定。以供試品溶液的濃度(mg/mL)為橫坐標，以2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇峰面積為縱坐標進行線性回歸，得線性回歸方程y＝541185.3751x+751987.8571，趨勢線的相關(guān)系數(shù)R2＝0.9949，結(jié)果見圖4。圖4表明，本品在3mg/mL～21mg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。實施例8檢測限實驗步驟：精密稱取本品376.50mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為檢測限儲備液。采用加甲醇逐步稀釋法，以S/N≈3時的濃度作為檢測限濃度，此時2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇的濃度為0.1506mg/mL，檢測限為3.012μg，可見本方法及儀器的靈敏度較高。當前第1頁1 2 3