本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及試劑、試劑盒、應(yīng)用及檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：碘的英文名為Iodine，元素符號(hào)：I，原子量為126.90447，CAS：12190-71-5。有“智力元素”之稱(chēng)的碘與人類(lèi)的健康息息相關(guān)。成年人體內(nèi)含有20-50mg的碘，碘是維持人體甲狀腺正常功能所必需的元素。但是人體攝入過(guò)多的碘也是有害的，日常飲食碘過(guò)量會(huì)引起“甲亢”。單質(zhì)碘呈紫黑色晶體，易升華，升華后易凝華；有毒性和腐蝕性。碘單質(zhì)遇淀粉會(huì)變藍(lán)紫色。主要用于制藥、染料、碘酒、試紙和碘化合物等。在藥物的合成工藝中，碘及其化合物主要被當(dāng)作催化劑、氧化劑使用。所以，碘可能會(huì)以單質(zhì)或者離子的形式殘留在終產(chǎn)物中，從而能夠準(zhǔn)確、可靠的分析出多肽藥物中殘留碘的含量，對(duì)于藥物的生產(chǎn)控制和產(chǎn)品質(zhì)量控制具有重要的實(shí)用價(jià)值。然而，由于碘殘留沒(méi)有藥效，甚至?xí)绊懏a(chǎn)品的安全性，故需對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。碘含量的測(cè)定方法頗多，常用方法有：催化比色法、離子選擇性電極法、X-射線(xiàn)熒光法、陰極溶出伏安法、同位素稀釋質(zhì)譜法、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法和中子活化法等。但是每種方法都有一定的不足，比如比色法需對(duì)樣品進(jìn)行氧化還原反應(yīng)及其他處理，較為費(fèi)時(shí)。這是由于碘元素具有易揮發(fā)、不穩(wěn)定、含量低等特點(diǎn)。紫外法檢測(cè)碘離子的最大優(yōu)勢(shì)是靈敏度高，但碘離子不僅受到基體中大的干擾峰拖尾的影響，大量有紫外吸收的小干擾峰還使得基線(xiàn)非常復(fù)雜，這些干擾峰的位置會(huì)隨淋洗液濃度的改變發(fā)生不同程度的變化。且很多藥物的活性成分或輔料為堿金屬鹽或堿土金屬鹽，用一般的高效液相色譜方法進(jìn)行測(cè)定，靈敏度不高，專(zhuān)屬性不理想。雖然離子色譜法測(cè)定微量碘的技術(shù)也有報(bào)道，但是相對(duì)于其他領(lǐng)域的應(yīng)用，離子色譜法在藥物分析的領(lǐng)域起步較晚，在國(guó)內(nèi)藥物領(lǐng)域的應(yīng)用也不多，雖然在食品領(lǐng) 域應(yīng)用的比較多，但存在樣品加標(biāo)回收率低等問(wèn)題。因此，離子色譜技術(shù)在多肽藥物中的應(yīng)用開(kāi)發(fā)意義重大。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供一種試劑、試劑盒、應(yīng)用及檢測(cè)方法。該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度和回收率高，操作簡(jiǎn)便，濃度峰對(duì)稱(chēng)性好，干擾性小的離子色譜分析多肽藥中氧化劑碘殘留的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了硫代硫酸鈉用于檢測(cè)碘的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)碘的試劑，包括硫代硫酸鈉。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述試劑的空白溶液中硫代硫酸鈉的濃度為1～10μg/mL。在本發(fā)明的另一些具體實(shí)施方案中，所述試劑的空白溶液中硫代硫酸鈉的濃度為2μg/mL。本發(fā)明還提供了包括添加了硫代硫酸鈉的試劑用于檢測(cè)多肽藥物中殘留氧化劑碘的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)碘的試劑盒，包括硫代硫酸鈉。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，試劑盒中硫代硫酸鈉的濃度為1～10μg/mL。在本發(fā)明的另一些具體實(shí)施方案中，試劑盒中硫代硫酸鈉的濃度為2μg/mL。本發(fā)明還提供了包括硫代硫酸鈉的試劑盒用于檢測(cè)多肽藥物中殘留氧化劑碘的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)碘的方法，取待測(cè)樣品與硫代硫酸鈉混合，檢測(cè)。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法中所述硫代硫酸鈉的濃度為1～10μg/mL。在本發(fā)明的另一些具體實(shí)施方案中，所述方法中所述硫代硫酸鈉的濃度為2μg/mL。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法中所述待測(cè)樣品的終濃度為0.5～1mg/mL。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法中所述待測(cè)樣品的稱(chēng)樣量為10～40mg。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的方法中所述檢測(cè)為離子色譜分析法。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法中所述碘為多肽藥物中殘留的氧化劑碘。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法具體為：取所述待測(cè)樣品與2μg/mL的硫代硫酸鈉混合，定量稀釋制成所述待測(cè)樣品的終濃度為1mg/mL的待測(cè)溶液，離子色譜分析。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法采用外標(biāo)法定量檢測(cè)。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法具體為取所述待測(cè)樣品與2μg/mL的硫代硫酸鈉混合，定量稀釋制成所述待測(cè)樣品的終濃度為1mg/mL的待測(cè)溶液，經(jīng)離子色譜分析，以外標(biāo)法計(jì)算，得出樣品中碘殘留的含量。在本發(fā)明的另一些具體實(shí)施方案中，所述方法中外標(biāo)法計(jì)算過(guò)程中空白溶液為稀硫代硫酸鈉溶液，硫代硫酸鈉溶液的濃度為1～10μg/mL，還直接使用超純水、硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液以及定量測(cè)定碘的還原劑等溶劑。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法的色譜條件為：所用預(yù)柱為T(mén)hermoDionexIonPacAG19(4.0*50mm)，所用色譜柱為T(mén)hermoDIONEXIonPacAS19(4.0*250mm)或其他等效柱，也包括使用ThermoDionexIonPacAS26(4.0×250mm)，色譜柱長(zhǎng)為15～25cm；內(nèi)徑：2.7～4.6mm；進(jìn)樣量為1～200微升，柱溫為20～40℃，所用檢測(cè)器為抑制型電導(dǎo)檢測(cè)器，抑制器電流為120～170mA，流速為0.8～2mL/min。淋洗液：KOH在線(xiàn)發(fā)生梯度洗脫，KOH濃度范圍為10～58mM。洗脫梯度如表1所示：表1洗脫梯度時(shí)間(min)010404242.146KOH濃度(mM)101058581010在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述方法能夠準(zhǔn)確定量的濃度為50～1500ppm。在本發(fā)明的另一些具體實(shí)施方案中，所述方法能夠準(zhǔn)確定量的濃度為300ppm。本發(fā)明提供了硫代硫酸鈉用于檢測(cè)碘的應(yīng)用。還提供了專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度和回收率高，操作簡(jiǎn)便，濃度峰對(duì)稱(chēng)性好，干擾性小的離子色譜分析多肽藥中氧化劑碘殘留的方法。該方法能準(zhǔn)確定量的供試品中含碘殘留，能準(zhǔn)確定量的濃度為50～1500ppm。供試品測(cè)得含碘殘留量為300ppm，不超過(guò)規(guī)定限度(1000ppm)。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。圖1示對(duì)照品的離子色譜圖；圖2示待測(cè)樣品的離子色譜圖；圖3示樣品加對(duì)照品的離子色譜圖；圖4示測(cè)定多肽藥物中碘殘留含量的離子色譜圖；圖5示測(cè)定多肽藥物中碘殘留含量的離子色譜圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開(kāi)了一種試劑、試劑盒、應(yīng)用及檢測(cè)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明的技術(shù)方案為：選用ThermoDIONEXIonPacAS19(4.0*250mm)或其他等效柱作為分析色譜柱，取本品，精密稱(chēng)定，加2μg/mL的硫代硫酸鈉溶解并定量稀釋制成每1mL含1mg的溶液，直接進(jìn)離子色譜分析，以外標(biāo)法計(jì)算，得出樣品中碘殘留的含量。(供試品：1mg/mL)本發(fā)明提供的儀器、試劑、試劑盒、應(yīng)用及檢測(cè)方法中所用原料及試劑均可由市場(chǎng)購(gòu)得。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：實(shí)施例1：為了保證該分析方法的可行性，首先進(jìn)行了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果如下：空白溶液：稱(chēng)取201.00mg硫代硫酸鈉，加水稀釋至50mL。取上述溶液1mL，加水溶解并稀釋至2000mL。(S2O32-:0.002mg/mL)碘化鈉母液：稱(chēng)取碘化鈉118.60mg，置于100mL量瓶中，加空白溶液溶解并稀釋至刻度。(I-：1.004mg/mL)對(duì)照品儲(chǔ)備液：取碘化鈉母液5.0mL，置于50mL量瓶中，加空白溶液稀釋至刻度。(I-：0.1004mg/mL)對(duì)照品溶液：取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0mL至100mL量瓶中，加空白溶液稀釋至刻度。(I-：1.004μg/mL)結(jié)果如表2：表2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果對(duì)照品峰面積保留時(shí)間拖尾因子分離度R-0110.052026.4411.034.03R-0120.052726.4401.023.98R-0130.052426.4301.014.01R-0140.052226.4441.024.01R-0150.052226.4341.014.00平均值0.052326.438------RSD0.51％0.02％------連續(xù)進(jìn)樣對(duì)照品溶液5針，計(jì)算峰面積和保留時(shí)間的RSD，其結(jié)果分別為0.51％、0.02％，可見(jiàn)結(jié)果符合要求。實(shí)施例2：供試品溶液：稱(chēng)取供試品約20mg，加2μg/mL的硫代硫酸鈉溶解并定量稀釋制成每1mL含1mg的溶液(供試品：1mg/mL)。供試品加標(biāo)溶液：稱(chēng)取供試品約20mg，加對(duì)照品溶液溶解并定量稀釋制成每1mL含1mg的溶液。(供試品：1mg/mL，I-：1.004μg/mL)分別把空白溶液、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液和實(shí)施例1中的對(duì)照品溶液各進(jìn)樣1針，結(jié)果見(jiàn)附圖1、圖2、圖3?？梢钥闯?，空白溶液沒(méi)有干擾，對(duì)照品溶液、供試品加標(biāo)溶液中峰保留時(shí)間基本一致，且樣品中無(wú)雜峰干擾。實(shí)施例3：分別量取實(shí)施例1中的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.3mL、0.5mL、0.75mL、1.0mL、1.25mL、1.5mL置于100mL容量瓶中，加空白溶液稀釋至刻度，作為30％、50％、75％、100％、125％、150％水平的對(duì)照品線(xiàn)性溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果：碘離子的線(xiàn)性方程為Y＝0.059X－0.0037，R2＝0.9991；可見(jiàn)線(xiàn)性良好。實(shí)施例4：分析方法準(zhǔn)確度的測(cè)定具體過(guò)程為：4.1.對(duì)照品液的配置：50％濃度水平對(duì)照品液：取實(shí)施例1中的對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，置于200mL容量瓶中，用空白溶液稀釋至刻度。(I-：0.502μg/mL)100％濃度水平對(duì)照品液：取實(shí)施例1中的對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL，置于200mL容量瓶中，用空白溶液稀釋至刻度。(I-：1.004μg/mL)150％濃度水平對(duì)照品液：取實(shí)施例1中的對(duì)照品儲(chǔ)備液3mL，置于200mL容量瓶中，用空白溶液稀釋至刻度。(I-：1.506μg/mL)4.2.回收樣品溶液的配置：50％濃度水平的樣品溶液：稱(chēng)供試品19.58、20.10、20.05mg分別置于20mL量瓶中，用50％濃度水平對(duì)照品液稀釋至刻度。平行配3份。(供試品：1mg/mL，I-：0.502μg/mL)100％濃度水平的樣品溶液：分別稱(chēng)取供試品20.20、20.08、20.06mg置于20mL量瓶中，用100％濃度水平對(duì)照品液稀釋至刻度。平行配3份。(供試品：1mg/mL，I-：1.004μg/mL)150％濃度水平的樣品溶液：分別稱(chēng)取供試品20.16、20.03、20.10mg置于20mL量瓶中，用150％濃度水平對(duì)照品液稀釋至刻度。平行配3份。(供試品：1mg/mL，I-：1.506μg/mL)將以上各回收樣品溶液進(jìn)樣分析，以實(shí)施例1中的對(duì)照品液，作為對(duì)照品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表3：表3檢測(cè)結(jié)果三個(gè)濃度水平的平均回收率為99.32％，回收率RSD為1.97％，可見(jiàn)此方法可以對(duì)樣品中的碘殘留進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。實(shí)施例5：測(cè)定多肽藥物中碘殘留的含量分別稱(chēng)取本品20.02、20.15mg置于20mL量瓶中，加對(duì)照品溶液，作為精密度溶液；另取實(shí)施例1中的對(duì)照品液，作為對(duì)照品溶液。色譜條件：流速為1.0mL/min；柱溫為30℃。抑制器電流為144mA，用ThermoDIONEXIonPacAS19(4.0*250mm)色譜柱；在ThermoICS2100儀器上，以KOH在線(xiàn)發(fā)生梯度洗脫，KOH濃度范圍為10～58mM，按表4進(jìn)行梯度洗脫：表4洗脫條件時(shí)間(min)010404242.146KOH濃度(mM)101058581010精密量取對(duì)照品品溶液和精密度溶液各25μl，分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)附圖4。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果：本品中含碘殘留300ppm。實(shí)施例6：測(cè)定多肽藥物中碘殘留的含量分別稱(chēng)取特利加壓素20.02、20.15mg置于20mL量瓶中，加對(duì)照品溶液，作為精密度溶液；另取實(shí)施例1中的對(duì)照品液，作為對(duì)照品溶液。色譜條件：流速為1.0mL/min；柱溫為30℃。檢測(cè)波長(zhǎng)為223nm。以甲醇-水(體積比為30：70)溶液為流動(dòng)相，用WatersAtlantisdC18 (5um,4.6*250mm)色譜柱；在Waterse2695儀器上，精密量取對(duì)照品溶液和精密度溶液各10μl,分別注入液相色譜儀，記錄圖譜，見(jiàn)附圖5。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果：本品中含碘殘留302ppm。實(shí)施例7：測(cè)定多肽藥物中碘殘留的含量分別稱(chēng)取特利加壓素40.17、40.06mg置于40mL量瓶中，加對(duì)照品溶液，作為精密度溶液；另取實(shí)施例1中的對(duì)照品液，作為對(duì)照品溶液。色譜條件：流速為1.5mL/min；柱溫為40℃。抑制器電流為120mA,用ThermoDionexIonPacAS26(4.0×250mm)色譜柱；在ThermoICS2100儀器上，以KOH在線(xiàn)發(fā)生梯度洗脫，KOH濃度范圍為10～58mM，按表5進(jìn)行梯度洗脫：表5洗脫條件時(shí)間(min)010404242.146KOH濃度(mM)151556561515精密量取對(duì)照品品溶液和精密度溶液各25μl，分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果：本品中含碘殘留296ppm。實(shí)施例8：分別稱(chēng)取利拉魯肽10.54、10.17mg置于10mL量瓶中，加對(duì)照品溶液，作為精密度溶液；另取實(shí)施例1中的對(duì)照品液，作為對(duì)照品溶液。色譜條件：流速為0.8mL/min；柱溫為28℃。檢測(cè)波長(zhǎng)為223nm。以乙腈-水(體積比為30：70)溶液為流動(dòng)相，用WatersAtlantisdC18(5um,4.6*150mm)色譜柱；在Waterse2498儀器上，精密量取對(duì)照品溶液和精密度溶液各200μl,分別注入液相色譜儀，記錄圖譜，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果：本品中含碘殘留310ppm。實(shí)施例9：分別稱(chēng)取愛(ài)啡肽25.00、25.24mg置于25mL量瓶中，加對(duì)照品溶液，作為精密度溶液；另取實(shí)施例1中的對(duì)照品液，作為對(duì)照品溶液。色譜條件：流速為1.8mL/min；柱溫為35℃。檢測(cè)波長(zhǎng)為223nm。以乙腈-水(體積比為25：75)溶液為流動(dòng)相，用WatersAtlantisdC18(2.7um,4.6*250mm)色譜柱；在Waterse2695儀器上，精密量取對(duì)照品溶液和精密度溶液各200μl,分別注入液相色譜儀，記錄圖譜，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果：本品中含碘殘留307ppm。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3