本發(fā)明涉及正丁酸鈉的檢測，更具體的說，涉及一種使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法及應用。

背景技術：

丁酸鈉作為被農業(yè)部在2003年列入《飼料添加劑品種目錄》中的新型飼料添加劑，可部分替代抗生素，起到酸化、電解質平衡調節(jié)、胃腸道微生態(tài)平衡調節(jié)、誘食等作用，已逐漸成為一種不可或缺的功能性飼料添加劑。

隨著人們對丁酸鈉的認可的提高和技術的提高，丁酸鈉產(chǎn)品也呈現(xiàn)出多樣化，產(chǎn)品劑型由過去粉狀產(chǎn)品發(fā)展到顆粒丁酸鈉、包膜丁酸鈉、緩釋丁酸鈉等等，含量也由98％變?yōu)?0％、70％、50％和30％等不同規(guī)格。目前國標中規(guī)定的含量檢測方法為非水滴定法，該方法可以準確的檢測原粉中的丁酸鈉含量，但是對其他的含有各種各樣載體的丁酸鈉產(chǎn)品則顯得無能為力，尤其是當載體具有較強的酸堿性或者能與酸發(fā)生反應時，會對測定結果造成相當大的誤差甚至錯誤。專利cn201310755483.1提出了采用hplc法檢測丁酸和丁酸鈉的方法，該專利表明采用hplc法可以準確檢測丁酸、丁酸鈉原粉及丁酸鈉微囊，檢測限和定量限分別為0.77μg和5.5μg，換算成樣品溶液的濃度分別為0.154g/l和1.1g/l。而丁酸鈉在配合飼料中的添加量通常為0.25～3g/kg，因此采用hplc法無法準確檢測配合飼料中的丁酸鈉含量。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題在于：提供一種使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法及應用，解決現(xiàn)有檢測方式針對的產(chǎn)品劑型單一、無法準確檢測特定濃度范圍內丁酸鈉含量的問題。

本發(fā)明解決上述技術問題的方案在于：提供一種使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法，精密吸取標準品溶液或樣品溶液注入離子色譜儀中，其色譜系統(tǒng)中的色譜柱為陰離子交換柱，檢測器為電導檢測器，淋洗液為koh水溶液，柱溫為30～40℃，進樣量為5～25μl，采用外標法檢測。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述樣品溶液的制備步驟為：準確稱取正丁酸鈉0.5g，用超純水定容至1000ml，搖勻后，取1ml稀釋至100ml，搖勻過0.22μm濾膜，得樣品溶液。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述樣品溶液的制備步驟為：準確稱取包含0.5g正丁酸鈉的正丁酸鈉顆?；虬ぎa(chǎn)品，置于1l燒杯中，加入500ml超純水，加熱溶解，再超聲10min，取出冷卻至室溫，然后轉移至1l容量瓶中定容，搖勻后，取1ml稀釋至100ml，搖勻過0.22μm濾膜，得樣品溶液。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述正丁酸鈉顆?；虬ぎa(chǎn)品中正丁酸鈉的含量為30％～100％。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述樣品溶液的制備步驟為：將包含正丁酸鈉的配合飼料樣品粉碎，準確稱取飼料樣品1～5g，置于100ml燒杯中，加入50ml超純水，加熱攪拌15min，再超聲10min，用布氏漏斗過濾，并用30ml超純水分3次洗滌濾餅，合并濾液和洗液，轉移至100ml容量瓶中，用超純水定容，搖勻后過0.22μm濾膜，得樣品溶液。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述配合飼料樣品中添加有正丁酸鈉，所述正丁酸鈉為顆粒產(chǎn)品和/或包膜產(chǎn)品。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述配合飼料中正丁酸鈉含量大于200mg/kg。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法中，所述標準品溶液的制備步驟為：準確稱取正丁酸鈉標準品0.1g用超純水定容至100ml，搖勻后作為標準品儲備液，每次檢測時取0.5ml稀釋至100ml，搖勻過0.22μm濾膜，得標準品溶液。

本發(fā)明還提供一種離子色譜法檢測正丁酸鈉的應用，使用上述任意一項所述的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法，應用于配合飼料中正丁酸鈉含量的檢測。

在本發(fā)明提供的使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的應用中，所述配合飼料中添加的正丁酸鈉為正丁酸鈉原粉產(chǎn)品、顆粒狀正丁酸鈉產(chǎn)品、包膜正丁酸鈉產(chǎn)品中的至少一種。

實施本發(fā)明，具有如下有益效果：本發(fā)明所述的離子色譜法檢測正丁酸鈉的方法，不僅可以準確測定各種規(guī)格型號的正丁酸鈉飼料添加劑產(chǎn)品，還可以準確檢測配合飼料中的丁酸鈉產(chǎn)品，從而可以更好地保證飼料的質量和品質。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。附圖中：

圖1為正丁酸鈉標準品的離子色譜圖；

圖2為正丁酸鈉原粉樣品的離子色譜圖；

圖3為包膜丁酸鈉樣品的離子色譜圖；

圖4為含有正丁酸鈉的配合飼料的離子色譜圖。

具體實施方式

下面將結合實施例，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。

國標中規(guī)定的非水滴定法檢測丁酸鈉含量只能檢測丁酸鈉原粉，對其他的含有各種各樣載體的丁酸鈉產(chǎn)品則顯得無能為力；hplc法檢測丁酸和丁酸鈉的方法，其檢測限和定量限明顯低于常規(guī)添加量，并不適用于配合飼料中的丁酸鈉含量的檢測。

本發(fā)明的主要創(chuàng)新點在于，使用離子色譜法檢測正丁酸鈉的含量，根據(jù)具體型號的離子色譜儀選擇合適淋洗液、流速、柱溫為、進樣量，采用外標法以峰面積計算樣品含量。

需要特別說明的是，本發(fā)明中所指丁酸鈉均為正丁酸鈉。

本發(fā)明在下文的各實施例中以美國dionex公司ics-3000型離子色譜儀為例進行說明。該離子色譜儀包括淋洗液自動發(fā)生器、單元泵、抑制器、電導檢測器等單元，所用柱子為ionpacas19陰離子分析柱，以及ohausar2140電子分析天平、kq5200de型數(shù)控超聲波清洗器。

丁酸鈉標準品(sigma-aldrich，含量≥99％)，丁酸鈉原粉樣品(含量≥98％)(湖北神舟化工有限公司)、30％包膜丁酸鈉樣品(湖北神舟化工有限公司)、50％包膜丁酸鈉樣品(湖北神舟化工有限公司)、50％顆粒型丁酸鈉樣品(湖北神舟化工有限公司)、70％包膜丁酸鈉樣品(湖北神舟化工有限公司)、70％顆粒型丁酸鈉樣品(湖北神舟化工有限公司)、90％包膜丁酸鈉樣品(湖北神舟化工有限公司)、添加了500g/t丁酸鈉產(chǎn)品的配合飼料樣品、添加了1000g/t丁酸鈉產(chǎn)品的配合飼料樣品、添加了2000g/t丁酸鈉產(chǎn)品的配合飼料樣品。

色譜條件：

使用陰離子分析柱，淋洗液為5～10mmol/lkoh水溶液，流速為1ml/min，柱溫為30～40℃，進樣量為25μl，采用外標法以峰面積計算樣品含量。

樣品制備：

丁酸鈉原粉樣品的制備步驟為：準確稱取正丁酸鈉0.5g，用超純水定容至1000ml，搖勻后，取1ml稀釋至100ml，搖勻過0.22μm濾膜，得樣品溶液。

顆粒型或包膜丁酸鈉樣品溶液的制備步驟為：準確稱取包含0.5g正丁酸鈉的正丁酸鈉顆?；虬ぎa(chǎn)品，置于1l燒杯中，加入500ml超純水，加熱溶解，再超聲10min，取出冷卻至室溫，然后轉移至1000ml容量瓶中定容，搖勻后，取1ml稀釋至100ml，搖勻過0.22μm濾膜，得樣品溶液。

包含丁酸鈉的配合飼料樣品溶液的制備步驟為：將包含正丁酸鈉的配合飼料樣品粉碎，準確稱取飼料樣品1～5g，置于100ml燒杯中，加入50ml超純水，加熱攪拌15min，再超聲10min，用布氏漏斗過濾，并用30ml超純水分3次洗滌濾餅，合并濾液和洗液，轉移至100ml容量瓶中，用超純水定容，搖勻后過0.22μm濾膜，得樣品溶液。

標準品溶液的制備步驟為：準確稱取正丁酸鈉標準品0.25g，用超純水定容至1000ml，搖勻后作為儲備液。再分別取0.5、1、1.5、2、2.5、3ml稀釋至100ml，搖勻過0.22μm濾膜，得到一系列正丁酸鈉標準品溶液，濃度分別為1.25、2.5、3.75、5.0、6.25、7.5mg/l。

實施例1

定性檢測：準確吸取濃度為5.0mg/l正丁酸鈉標準品溶液及正丁酸鈉原粉樣品溶液各25μl，分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖，如圖1、圖2所示，樣品與正丁酸鈉標準品的出峰時間一致。

標準曲線的制備：取上述制備好的一系列正丁酸鈉標準品溶液，各進樣25μl，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，以正丁酸鈉的質量濃度(mg/l)為橫坐標進行線性回歸，結果見表1，回歸方程為y＝7.6023x-0.1895，其中r²＝0.9999，表明正丁酸鈉在1.25～7.5mg/l質量濃度范圍內具有良好的線性關系。

表1正丁酸鈉標準曲線試驗結果(n＝6)

檢測限和定量限：以3倍的信噪比(s/n)確定該方法的檢測限，以10倍的信噪比(s/n)確定該方法的定量限，最終確定該方法的檢測限和定量限分別為0.024mg/l和0.083mg/l。

精密度試驗：準確吸取質量濃度為5.0mg/l丁酸鈉標準溶液25μl進樣，測定丁酸鈉的峰面積，重復進樣6次，統(tǒng)計峰面積，計算可知其rsd＝0.58％(n＝6)，如表2所示，這表明該測定方法具有良好的精密度。

表2正丁酸鈉精密度試驗結果(n＝6)

重復性試驗：取同一批丁酸鈉原粉樣品，準確稱取5份，每份0.5g，按照上述方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進行測定，結果如表3所示，丁酸鈉平均含量為99.63％，rsd＝0.15％(n＝5)，表明采用該方法測定丁酸鈉含量具有良好的重復性。

表3丁酸鈉重復性試驗結果(n＝5)

加標回收試驗：取一批已知含量的丁酸鈉原粉樣品，準確稱取6份進行加標回收試驗，每份0.25g，分別用超純水定容至1000ml，搖勻后，分別取1ml至100ml容量瓶中，再各加1ml丁酸鈉標準品儲備溶液，用超純水定容至刻度，搖勻過0.22μm濾膜，得加標樣品溶液，在上述色譜條件下測定，結果見表4，平均回收率為100.85％，rsd為0.36％，表明該方法的丁酸鈉的加標回收率高。

表4丁酸鈉加標回收試驗測定結果(n＝6)

樣品含量測定：取一批待測丁酸鈉原粉樣品，按上述樣品制備方法制備3份樣品，準確吸取25μl樣品溶液注入離子色譜儀，根據(jù)峰面積計算樣品含量，結果如表5所示，表明該方法可以準確測定丁酸鈉樣品的含量。

表5丁酸鈉原粉樣品檢測結果

實施例2

本實施例與實施例1中相同，區(qū)別僅在于本實施例中是用30％包膜丁酸鈉樣品代替了實施例1中的丁酸鈉原粉樣品。

定性檢測：準確吸取制備好的30％包膜正丁酸鈉樣品溶液25μl，注入離子色譜儀，記錄色譜圖，如圖3所示，樣品與正丁酸鈉標準品的出峰時間一致。

精密度試驗：準確吸取制備好的30％包膜丁酸鈉樣品溶液25μl進樣，測定丁酸鈉的峰面積，重復進樣6次，統(tǒng)計峰面積，計算可知其rsd＝0.80％(n＝6)，如表6所示，這表明該測定方法具有良好的精密度。

表630％包膜丁酸鈉精密度試驗結果(n＝6)

重復性試驗：取同一批30％包膜丁酸鈉樣品，準確稱取5份，每份1.67g，按照上述方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進行測定，結果如表7所示，丁酸鈉平均含量為30.26％，rsd＝0.67％(n＝5)，表明采用該方法測定包膜丁酸鈉含量具有良好的重復性。

表730％包膜丁酸鈉重復性試驗結果(n＝5)

加標回收試驗：取一批已知含量的30％包膜丁酸鈉樣品，準確稱取6份進行加標回收試驗，每份0.83g，分別按照上述樣品制備方法定容至1000ml，搖勻后，分別取1ml至100ml容量瓶中，再各加1ml丁酸鈉標準品儲備溶液，用超純水定容至刻度，搖勻過0.22μm濾膜，得加標樣品溶液，在上述色譜條件下測定，結果見表8，平均回收率為99.75％，rsd為0.22％，表明該方法的丁酸鈉的加標回收率高。

表830％包膜丁酸鈉加標回收試驗測定結果(n＝6)

樣品含量測定：取一批待測30％包膜丁酸鈉樣品，按上述樣品制備方法制備3份樣品，準確吸取25μl樣品溶液注入離子色譜儀，根據(jù)峰面積計算樣品含量，結果如表9所示，表明該方法可以準確測定包膜丁酸鈉樣品的含量。

表930％包膜丁酸鈉樣品檢測結果

實施例3

本實施例與實施例1中相同，區(qū)別僅在于本實施例中是用含有500mg/kg正丁酸鈉的配合飼料樣品代替了實施例1中的丁酸鈉原粉樣品。

定性檢測：準確吸取制備好的含有正丁酸鈉的配合飼料樣品溶液25μl，注入離子色譜儀，記錄色譜圖，如圖4所示，樣品與正丁酸鈉標準品出峰時間一致。

精密度試驗：準確吸取制備好的含有500mg/kg正丁酸鈉的配合飼料樣品溶液25μl進樣，測定丁酸鈉的峰面積，重復進樣6次，統(tǒng)計峰面積，計算可知其rsd＝0.41％(n＝6)，如表10所示，這表明該測定方法具有良好的精密度。

表10配合飼料樣品中丁酸鈉含量的精密度試驗結果(n＝6)

重復性試驗：取同一批含有500mg/kg正丁酸鈉的配合飼料樣品，準確稱取5份，每份1.0g，按照上述方法制備樣品溶液，在上述色譜條件下進行測定，結果如表11所示，該配合飼料中丁酸鈉平均含量為485.77mg/kg，rsd＝0.87％(n＝5)，表明采用該方法測定配合飼料中的丁酸鈉含量具有良好的重復性。

表11配合飼料樣品中丁酸鈉含量的重復性試驗結果(n＝5)

加標回收試驗：取一批已知丁酸鈉含量的配合飼料樣品，準確稱取6份進行加標回收試驗，每份0.5g，分別按照上述樣品制備方法將濾液和洗液轉移至100ml容量瓶中，再各加1ml丁酸鈉標準品儲備溶液，用超純水定容至刻度，搖勻過0.22μm濾膜，得加標樣品溶液，在上述色譜條件下測定，結果見表12，平均回收率為96.59％，rsd為0.43％，表明該方法的丁酸鈉的加標回收率高。

表12配合飼料樣品中丁酸鈉含量的加標回收試驗測定結果(n＝6)

樣品含量測定：取一批待測含有丁酸鈉的配合飼料樣品，按上述樣品制備方法制備3份樣品，準確吸取25μl樣品溶液注入離子色譜儀，根據(jù)峰面積計算樣品含量，結果如表13所示，表明該方法可以準確測定配合飼料樣品中的丁酸鈉含量。

表13配合飼料樣品中丁酸鈉含量的檢測結果

本發(fā)明所建立的丁酸鈉含量的檢測方法，靈敏度高、準確度高、操作簡便、重復性好，可用于丁酸鈉原粉、顆粒型或包膜丁酸鈉(丁酸鈉含量為30％至90％)以及添加了丁酸鈉產(chǎn)品的配合飼料等產(chǎn)品中的丁酸鈉含量的測定。由于離子色譜法檢測丁酸鈉是通過檢測丁酸根離子的含量來推算出丁酸鈉的含量，故該方法也可用于丁酸、各種丁酸鹽及含有這些物質的產(chǎn)品的含量測定。

顯然，上面描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。