本發(fā)明涉及預測或鑒定炎癥事件的標志物的鑒定。特別地，本發(fā)明涉及基于測量尿標志物來預測和鑒定加劇(exacerbation)事件，更特別地是肺加劇。本發(fā)明通過提供個體化家用檢驗從而允許由個人監(jiān)測炎癥狀態(tài)。發(fā)明背景存在一些不同的呼吸道疾病，其中許多具有炎癥組分。實例包括慢性阻塞性肺病(COPD)和囊性纖維化(CF)。肺病的慢性感染和炎癥可引起肺功能逐步下降，從而導致日常癥狀例如咳嗽和痰液產(chǎn)生。存在癥狀急性惡化的間歇發(fā)作，更常被稱為肺加劇。肺加劇(Pulmonaryexacerbation，PEx)是發(fā)病、死亡和入院的主要原因。發(fā)明描述能夠精確監(jiān)測對象以在PEx事件發(fā)生之前預測該事件，或者鑒定PEx的早發(fā)將是有用的。這將允許早期干預以使由PEx引起的炎性損傷最小化。理想地，這能夠以家庭自檢方法實現(xiàn)。發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)：尿樣品是能夠預測PEx事件的標志物的有用來源，從而使得用于預測PEx的家庭檢驗成為可能。該標志物可指示中性粒細胞活化，因此可被稱為“中性粒細胞活化標志物”。因此，在第一方面，本發(fā)明提供監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自對象的尿樣品中至少一種(中性粒細胞活化)標志物的水平，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。該方法優(yōu)選地在用于家用監(jiān)測的工具套裝或系統(tǒng)中實施。因此，本發(fā)明還提供用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的檢驗工具套裝或系統(tǒng)，其包含：a.用于測定尿樣品中至少一種(中性粒細胞活化)標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平是否提高或降低(或者水平是否保持相同)；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。本發(fā)明還涉及用于所述系統(tǒng)或檢驗工具套裝中的相應計算機應用。發(fā)明人已確定了，可通過組合多種尿標志物來獲得特異且靈敏的結果以監(jiān)測或預測PEx事件。因此，本發(fā)明還提供監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自對象的尿樣品中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種標志物的水平，其中尿樣品中至少一種所述標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。類似地，本發(fā)明還提供用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的檢驗工具套裝或系統(tǒng)，其包含：a.用于測定尿樣品中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中每種標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中至少一種標志物的水平是否提高或降低(或者水平是否保持相同)；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種所述標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。本發(fā)明還涉及用于所述系統(tǒng)或檢驗工具套裝中的相應計算機應用。根據(jù)本發(fā)明的所有方面，所述標志物可用于監(jiān)測炎癥。因此，所述標志物不但證明了對鑒定或預測炎癥事件例如PEx有用，而且還可以用于指示從炎癥事件恢復或者炎癥事件的成功治療。因此，在一些實施方式中，尿樣品中至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。降低可降至加劇前的水平，然后可持續(xù)測量以確保它們此后被維持。因此，本發(fā)明可以與個體對象的治療聯(lián)合使用并指導個體對象的治療。本發(fā)明可用于監(jiān)測正在進行的治療以及輔助確定是否應該改變治療(例如，調(diào)整劑量、改變干預水平)、停止治療或者用替選方案替代。類似地，對象的尿中標志物的水平穩(wěn)定可指示病情得到控制且炎癥狀態(tài)穩(wěn)定。在一些實施方式中，本發(fā)明可適用于鑒定加劇的細菌原因或病毒原因。在根據(jù)本發(fā)明所有方面的一些特定實施方式中，所監(jiān)測的炎癥狀態(tài)是肺炎癥狀態(tài)。在另一些實施方式中，所指示和/或預測的炎癥加劇是肺加劇。所述對象是哺乳動物對象，通常是人。在某些實施方式中，對象患呼吸系統(tǒng)疾病。更特別地，呼吸系統(tǒng)疾病可以是慢性阻塞性肺病(COPD)或囊性纖維化(CF)。發(fā)明人已積累了顯示這種方法在這些特定疾病病情中的有效性的數(shù)據(jù)。COPD代表一批肺病，包括慢性支氣管炎、肺氣腫和慢性阻塞性氣道疾病，因此任何這些肺病均可根據(jù)本發(fā)明來監(jiān)測。本發(fā)明還可適用于監(jiān)測哮喘和間質(zhì)性肺病(ILD)。本發(fā)明還可應用于支氣管擴張癥。應該注意的是，本發(fā)明是基于經(jīng)分離的尿樣品在體外進行的。在一些實施方式中，尿樣品可以是中段尿樣品。在一些實施方式中，本發(fā)明的方法可包括獲得用于檢驗的尿樣品的步驟。類似地，在一些實施方式中，系統(tǒng)和檢驗工具套裝包含用于接收尿樣品的合適容器。這些容器可被特別調(diào)整為適合尿收集并且可因?qū)ο蟮男詣e而異?？缮藤彽膶嵗≒eezyMSU尿收集裝置(WilliamsMedical)?？蓪θ萜鬟M行著色以保護任何光敏性分析物?！皹酥疚铩北硎局甘狙装Y、通常指示中性粒細胞活化的分子。在一些實施方式中，至少一種標志物選自信號分子(signallingmolecule)或效應物(effector)/效應物抑制劑分子(effectorinhibitormolecule)。應該注意的是，在說明書全文中，術語“至少一種標志物”包括多種標志物的水平被檢測的情況下的“至少一種標志物”。信號分子可負責招募引起炎癥損傷的分子。效應物分子引起炎癥損傷。它們可以是酶。效應物抑制劑分子抑制效應物分子的活性。它們可以是酶抑制劑。在一些實施方式中，效應物分子選自蛋白酶活性、中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)、鈣網(wǎng)蛋白或髓過氧化物酶(MPO)。效應物分子(尤其是NGAL活性)可以是游離的或者處于復合體中。在另一些實施方式中，蛋白酶活性選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性、人中性粒細胞彈性蛋白酶(HNE)活性和組織蛋白酶G活性。存在可有用地被檢測的多種MMP，如本文所更詳細討論的那樣。在一些特定實施方式中，MMP活性包括MMP9和/或MMP8活性。根據(jù)本發(fā)明，可額外地或者替代性地測定效應物抑制劑分子的水平。在一些特定實施方式中，效應物抑制劑分子包括蛋白酶抑制劑分子、基本上由蛋白酶抑制劑分子組成或者由蛋白酶抑制劑分子組成(即，為蛋白酶抑制劑分子)。在一些實施方式中，蛋白酶抑制劑分子選自金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)、胱抑素c(cystatinc)、分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)和α-1抗胰蛋白酶(A1AT)。根據(jù)本發(fā)明，可額外地或者替代性地測定信號分子的水平。在一些特定實施方式中，信號分子選自ICAM-1、IL-6、IL-1β、IL-8、N-甲?；?Met-Leu-Phe(fMLP)、IL-6誘導的纖維蛋白原、細胞因子誘導的β-2-微球蛋白(B2M)和補體蛋白的片段。在某些實施方式中，所述至少一種標志物包括或進一步包括由于炎癥而產(chǎn)生的分子。在一些特定實施方式中，由于炎癥而產(chǎn)生的分子包括蛋白酶活性的降解產(chǎn)物，例如細胞外基質(zhì)分解產(chǎn)物和/或氧化損傷的產(chǎn)物例如氯化肽(chlorinatedpeptides)和/或代謝物例如乳酸和游離脂肪酸。細胞外基質(zhì)分解產(chǎn)物的實例包括膠原分解產(chǎn)物例如Ac-PGP、彈性蛋白片段/肽、鎖鏈素。然而，在一些特定實施方式中，不測量鎖鏈素的水平。在一些實施方式中，可以測量大彈性蛋白片段(LEF)的水平。在所述方法中有用的一些特定標志物包括TIMP1(一種金屬蛋白酶組織抑制劑)和胱抑素c(一種溶酶體蛋白酶抑制劑)?？山M合使用的另一些有用標志物包括MMP水平或活性和A1AT水平或活性。在一些實施方式中，標志物可選自圖1中列出的那些。在某些實施方式中，一種或多種標志物選自TIMP(特別是TIMP2)、NGAL、A1AT、IL-6、FMLP、肌酸酐、胱抑素c、HSA、RBP4和β2微球蛋白。IL-8也可以是有用的標志物。通過ELISA測量時，鎖鏈素可以是有用的標志物。這些標志物中的每一種均已顯示出在指示炎癥加劇中單獨有用(參見本文中的表1和實施例2)?？捎糜诒景l(fā)明的另一些特定標志物組合包括：B2M和鈣網(wǎng)蛋白或IL-6B2M和鈣網(wǎng)蛋白和HNE(活性或表達水平)B2M和鈣網(wǎng)蛋白和HNE(活性或表達水平)和A1ATB2M和IL-6和MMP(活性或表達水平)B2M和IL-6和MMP(活性或表達水平)和鎖鏈素(優(yōu)選地通過ELISA測量)或HNE(活性或表達水平)鎖鏈素(優(yōu)選地通過ELISA測量)和IL-8或IL-6或A1AT鎖鏈素(優(yōu)選地通過ELISA測量)和A1AT和FMLPTIMP2和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)或MMP(活性或水平)或IL-1β或IL-6TIMP2和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)和IL-6TIMP2和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)和IL-6和MMP(活性或表達水平)TIMP2和IL-6和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)TIMP2和IL-6和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)和MMP(活性或表達水平)TIMP2和MMP(活性或表達水平)和A1AT或IL-6TIMP2和MMP(活性或表達水平)和A1AT和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)TIMP2和MMP(活性或表達水平)和IL-6和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)TIMP2和IL-1β和IL-6TIMP2和IL-1β和IL-6和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)或MMP(活性或表達水平)。在本文中以實驗方法顯示在預測和鑒定加劇事件(和/或從加劇事件恢復，包括成功治療)中單獨有用的另一些標志物包括選自RBP4、肌酸酐、胱抑素C、LEF、CRP和CC16的標志物。C-反應蛋白(CRP)是在肝臟中合成且在血漿中發(fā)現(xiàn)的環(huán)狀五聚體蛋白。其在血漿中的水平響應于炎癥而升高。然而，以前沒有觀察到CRP能夠通過腎臟屏障并因此在尿樣品中檢測到?？死毎鞍?CC16)是15.8-kDa的蛋白，其沿著整個氣管支氣管樹且尤其在克拉拉細胞所在的末端細支氣管中分泌。這種蛋白以前未被用作炎癥或炎癥加劇的尿生物標志物。在本文中以實驗方法顯示在預測和鑒定從加劇事件恢復(和/或這種事件的發(fā)生率)中單獨有用的另一些標志物包括選自根據(jù)本文所述方法測量的MMP活性(最終ELTABA(ultimateELTABA))、肌酸酐、LEF和CRP的標志物?？捎糜陬A測或鑒定加劇事件(和/或從其恢復，包括成功治療)的標志物組合包括CRP連同IL1B和/或鎖鏈素(例如，通過側向流測量時)。可用于預測或鑒定加劇事件(和/或由其恢復，包括成功治療)的另一些標志物組合包括CRP和A1AT中的至少一種。它們可以與Ac-PGP(例如，通過競爭性EIA測量)、fMLP、TIMP1、HSA和CC16中的至少一種直至所有一起使用。它們可以與Ac-PGP(例如，通過競爭性EIA測量)、fMLP和TIMP1中的至少一種直至所有一起使用。它們可以與fMLP、鎖鏈素片段、鎖鏈素和TIMP1中的至少一種直至所有一起使用。它們可以與Ac-PGP(例如，通過競爭性EIA測量)、fMLP和CC16中的至少一種直至所有一起使用。本文中證明的另一些有用組合包括：TIMP2、CRP和鎖鏈素-TIMP2可通過側向流試驗(LF)測量。鎖鏈素可通過例如如本文所述的酶免疫分析法測量。TIMP1、CRP和CC16-在一些實施方式中，TIMP1和CC16可通過ELISA測量。B2M、CRP和Ac-PGP。Ac-PGP可通過例如如本文所述的酶免疫分析法測量。MMP活性、CRP和LEF。MMP活性可通過如本文所述的最終ELTABA測量。LEF可通過如本文所述的大彈性蛋白片段試驗測量。MMP活性、CRP和HSA。MMP活性可通過如本文所述的最終ELTABA測量。LEF可通過如本文所述的大彈性蛋白片段試驗測量。人血清白蛋白可通過ELISA測量。肌酸酐、CRP、Ac-PGP。Ac-PGP可通過例如如本文所述的酶免疫分析法測量。fMLP、CRP和TIMP2。fMLP可通過例如如本文所述的酶免疫分析法測量。TIMP2可通過ELISA測量。Ac-PGP、CRP、替代性Ac-PGP試驗。Ac-PGP可通過酶免疫分析法(例如如本文所述的多種試驗之一)測量。如本文所述，可相對參照標志物(例如，肌酸酐)將標志物水平歸一化。在這類實施方式中，以下特定標志物和標志物組合可以是特別有用的：TIMP2和IL-6或FMLP或鎖鏈素(任選地通過側向流測量)或MMP(活性或表達水平)TIMP2和IL-6和MMP(活性或表達水平)TIMP2和IL-6和MMP(活性或表達水平)和HNE(活性或表達水平)或鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)或HSATIMP2和FMLP和IL-6或鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)TIMP2和FMLP和IL-6和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)或HSATIMP2和FMLP和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)和MMP(活性或表達水平)TIMP2和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)和A1AT或MMP(活性或表達水平)TIMP2和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)和A1AT和HNE(活性或表達水平)TIMP2和鎖鏈素(任選地通過側向流測量)和MMP(活性或表達水平)和HNE(活性或表達水平)TIMP2和MMP(活性或表達水平)和IL-6或通過熒光底物試驗測量的MMPTIMP2和MMP(活性或表達水平)和IL-6和HNE(活性或水平)或鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)TIMP2和MMP(活性或表達水平)和通過熒光底物試驗測量的MMP和鎖鏈素(任選地通過ELISA測量)。在一些實施方式中，本發(fā)明可依賴于鑒定效應物分子和效應物抑制劑分子之間的相互關系。例如，作為加劇的早期指標，蛋白酶水平可提高。這可導致相應抑制劑相稱地提高以抑制蛋白酶活性。這繼而可使蛋白酶活性水平回到正常。取決于在什么時間點檢驗樣品，可觀察到抑制效應物分子和/或抑制劑分子的提高。在一些實施方式中，檢測到效應物分子水平早期驟增可預測即將發(fā)生的加劇。在一些實施方式中，檢測到抑制水平提高可鑒定加劇。本文中討論了效應物分子的實例，其包括蛋白酶例如MMP。本文中還討論了抑制劑分子的實例，其包括蛋白酶抑制劑例如TIMPs(比如，TIMP2)和A1AT。代表性個體實例示于圖28中，其驗證了在個體基礎上測量多種標志物的重要性。在對象678和2023中，效應物分子的水平(MMP活性)提高以鑒定加劇事件。在對象2097和2505，效應物抑制劑分子(分別為A1AT和TIMP2)的水平提高以鑒定加劇事件。存在多種已知的可測量標志物水平的技術。因此，標志物水平表示標志物的濃度和/或量和/或活性和/或表達的水平?？稍谀蛑袦y量標志物的表達水平。表達水平可與活性相關，因此可被用作活性的替代物。可根據(jù)任何合適的方法在蛋白水平或mRNA水平上測量表達水平。蛋白修飾(例如，糖基化)也可是相關的，其可通過任何合適的方法來測量。許多此類方法在本領域眾所周知，其包括使用質(zhì)譜分析法(例如，MALDI-TOF質(zhì)譜分析法)。也可以在尿樣品中測量微RNA，所述微RNA作為基因表達的轉錄后調(diào)控因子。它們在尿中相對穩(wěn)定。平臺(例如由Exiqon提供的平臺)可用于提供高通量微RNA譜。這類平臺可以基于陣列和/或PCR。標志物(例如，蛋白質(zhì))的表達水平和/或量和/或濃度可依賴于結合劑例如與目的標志物(例如，蛋白質(zhì))特異性結合的抗體或適配體?？贵w可以為單克隆來源或多克隆來源。還可以利用片段和衍生抗體，包括但不限于，F(xiàn)ab片段、ScFv、單域抗體、納米抗體、重鏈抗體、適配體等，其保留特異性結合功能并被包括在“抗體”的定義中。這類抗體在本發(fā)明的方法中是有用的。它們可用于測量特定標志物(例如蛋白質(zhì)，或者在一些情況下，蛋白質(zhì)的一種或多種特定亞型。本領域技術人員完全能夠鑒定允許將特定亞型彼此區(qū)分開的表位)的水平。生成特異性抗體的方法是本領域技術人員已知的。抗體可具有人類來源或非人類來源(例如，嚙齒動物，例如大鼠或小鼠)并根據(jù)已知技術(Jones等人,Nature(1986)5月29日-6月4日；321(6069):522-5；Roguska等人,ProteinEngineering,1996,9(10):895-904；和Studnicka等人,HumanizingMouseAntibodyFrameworksWhilePreserving3–DStructure.ProteinEngineering,1994,第7卷,第805頁)被人源化等等。在某些實施方式中，使用綴合到標簽的抗體或適配體測定標志物的表達水平和/或量和/或濃度。標簽表示允許直接或間接檢測的組分。例如，標簽可以是酶，任選地過氧化酶，或熒光團?？梢岳媒饦撕灒缒z體金形式的金標簽。標簽是檢測劑的一個實例。檢測劑表示可用于輔助檢測抗體-標志物(例如，蛋白質(zhì))復合體的試劑。當抗體綴合到酶時，檢測劑可包含化學組合物以使得酶催化化學反應以產(chǎn)生可檢測的產(chǎn)物。由合適酶催化的反應的產(chǎn)物可以是，但不限于，熒光、冷光或放射性物質(zhì)或者它們可以吸收或反射可見光或紫外光。適合檢測這類可檢測標簽的檢測器的實例包括但不限于，x射線膠片、放射性計數(shù)器、閃爍計數(shù)器、分光光度計、比色計、熒光計、光度計、光檢測器和光密度計。在某些實施方式中，檢測劑可包含第二抗體。此時則使用與靶蛋白結合的未標記的第一抗體和綴合到標簽的第二抗體測定表達水平，其中第二抗體與第一抗體結合。在標志物的濃度和/或量和/或蛋白水平上測定表達水平的額外技術包括，例如，蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀、免疫細胞化學、質(zhì)譜分析法、ELISA等(參見ImmunoAssay:APracticalGuide,BrianLaw編,由Taylor&Francis,Ltd.出版,2005版)。為了提高基于免疫反應性的試驗方法的特異性和靈敏度，往往使用單克隆抗體，這是因為它們的特異性表位識別。多克隆抗體也已被成功用于多種免疫分析中，這是因為相較于單克隆抗體，它們對靶標的親和性更高。在一些實施方式中，可使用側向流試驗檢測蛋白水平(在本文中更詳細地討論)。測量生物樣品中的mRNA可被用作檢測尿樣品中相應蛋白水平的替代。因此，本文所述任何相關標志物的表達水平也可以通過檢測合適的RNA來檢測。因此，在一些特定實施方式中，通過微陣列、northern印跡或核酸擴增來測定表達水平。核酸擴增包括PCR及其所有變體例如實時法和終點法以及qPCR。另一些核酸擴增技術在本領域眾所周知，其包括以下方法例如NASBA、3SR和轉錄介導的擴增(TMA)。另一些適合的擴增方法包括連接酶鏈反應(LCR)、靶標多核苷酸序列的選擇性擴增(美國專利No.6,410,276)、共有序列引物聚合酶鏈反應(美國專利No4,437,975)、任意引物聚合酶鏈反應(WO90/06995)、Invader技術、鏈置換技術、重組酶聚合酶擴增(RPA)、切口酶擴增反應(NEAR)和切口置換擴增(WO2004/067726)。該列表不打算表示窮舉；可使用任何核酸擴增技術，只要特異性擴增合適的核酸產(chǎn)物即可。本領域技術人員能夠設計合適引物和/或探針。多種引物設計工具可免費使用以輔助這種方法，所述工具例如NCBI引物-BLAST工具。引物和/或探針的長度可以為至少15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(或者更多)個核苷酸?？赏ㄟ^反轉錄定量聚合酶鏈反應(RT-PCR，接著是qPCR)來測量mRNA表達水平。RT-PCR被用于由mRNA生成cDNA。cDNA可被用在qPCR試驗中以隨著DNA擴增過程進行而產(chǎn)生熒光。通過與標準曲線進行比較，qPCR能夠產(chǎn)生絕對測量例如每個細胞的mRNA拷貝數(shù)。Northern印跡、微陣列、Invader試驗和RT-PCR連同毛細管電泳均已被用于測量樣品中mRNA的表達水平。參見GeneExpressionProfiling:MethodsandProtocols,RichardA.Shimkets編輯HumanaPress,2004?？赏ㄟ^使RNA與一組探針雜交來測定RNA表達。探針可被排列在陣列中。微陣列平臺包括由例如Affymetrix、Illumina和Agilent的公司制造的那些。還可以使用下一代測序方法(例如，RNA-seq)來測量RNA表達。類似地，可以在尿樣品中測量效應物分子的活性，例如酶活性。可例如通過檢測樣品中底物(其可帶有標簽)的處理來測量酶活性。例如，試驗可以是熒光底物試驗。可以使用合適的側向流試驗來檢測酶活性。合適的試驗方式的實例包括國際專利申請WO2009/024805、WO2009/063208、WO2007/128980、WO2007/096642、WO2007/096637、WO2013/156794和WO2013/156795(其中每個的內(nèi)容均通過引用并入本文)中所述的試驗。在一些特定實施方式中，通過測量肽底物的切割來測定蛋白酶活性。例如，試驗可以是熒光底物試驗。在某些實施方式中，通過以下方法測定蛋白酶活性，所述方法包括：a.使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含i.包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述蛋白酶，若存在的話，切割；和ii.捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；b.向所述檢驗樣品中加入能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；c.在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有所述新結合位點的指示物分子部分；和d.通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的所述指示物分子的新結合位點的結合來檢測至少一個切割位點的切割。該試驗在本文中可被稱為“最終ELTABA”試驗。因此，本發(fā)明可包括用于檢測檢驗樣品中是否存在能夠切割底物的酶的切割活性的酶檢測裝置，所述裝置包括：(i)用于加入到所述檢驗樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；(ii)用于接收所述檢驗樣品的捕獲區(qū)，其中所述捕獲區(qū)包含能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子以固定包含所述新結合位點的指示物分子；和(iii)能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。類似地，本發(fā)明可包括用于檢測檢驗樣品中是否存在能夠切割底物的酶的切割活性的酶檢測裝置，所述裝置包括：(i)用于加入到所述檢驗樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域，其中至少一部分保持與所述捕獲位點相連接；(ii)用于接收所述檢驗樣品的捕獲區(qū)，其中所述捕獲區(qū)包含能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子；和(iii)結合分子，其能夠與含有與所述捕獲位點相連接的至少一部分切割區(qū)域的指示物分子部分結合，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。切割區(qū)域的兩部分因此在切割位點彼此分離。在切割位點的切割事件產(chǎn)生新結合位點。這些裝置可作為一個或多個檢驗裝置包含在本發(fā)明的系統(tǒng)和檢驗工具套裝中。本發(fā)明可進一步依賴于檢測檢驗樣品中是否存在能夠切割底物的酶的切割活性的方法，所述方法包括：(i)使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；(ii)向所述檢驗樣品中加入能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；(iii)在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有所述新結合位點的指示物分子部分；和(iv)通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的所述指示物分子的新結合位點的結合來檢測所述至少一個切割位點的切割。類似地，本發(fā)明還包括檢測檢驗樣品中是否存在能夠切割底物的酶的切割活性的方法，所述方法包括：(i)使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域，其中至少一部分保持與所述捕獲位點相連接；(ii)向所述檢驗樣品中加入結合分子，所述結合分子能夠與含有與所述捕獲位點相連接的至少一部分切割區(qū)域的指示物分子部分結合，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；(iii)在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有與所述捕獲位點相連接的至少一部分切割區(qū)域的指示物分子部分；和(iv)通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的指示物分子部分的結合來檢測所述至少一個切割位點的切割。發(fā)明人已展示了這些特定裝置和方法非常靈敏。所以，它們通過測量尿樣品中效應物分子的活性而特別用于監(jiān)測炎癥狀態(tài)。因此，本發(fā)明還提供通過檢測能夠切割底物的酶的切割活性來監(jiān)測尿樣品中的炎癥狀態(tài)、特別是預測或鑒定PEx事件的方法，所述方法包括：(i)使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；(ii)向所述檢驗樣品中加入能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；(iii)在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有所述新結合位點的指示物分子部分；和(iv)通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的所述指示物分子的新結合位點的結合來檢測所述至少一個切割位點的切割，其中切割水平提高指示提高的炎癥水平，特別地預測或鑒定PEx事件。本發(fā)明還提供通過檢測能夠切割底物的酶的切割活性來監(jiān)測尿樣品中的炎癥狀態(tài)、特別是預測或鑒定PEx事件的方法，所述方法包括：(i)使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域，其中至少一部分保持與所述捕獲位點相連接；(ii)向所述檢驗樣品中加入結合分子，所述結合分子能夠與含有與所述捕獲位點相連接的至少一部分切割區(qū)域的指示物分子部分結合，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；(iii)在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有與所述捕獲位點相連接的至少一部分切割區(qū)域的指示物分子部分；和(iv)通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的指示物分子部分的結合來檢測所述至少一個切割位點的切割，其中切割水平提高指示炎癥水平提高，特別地預測或鑒定PEx事件。如本文所述，酶是一種“效應物分子”。通常，酶是蛋白酶例如MMP、HNE或組織蛋白酶G。在本發(fā)明中有用的酶檢測裝置可以以供立即使用的形式提供?；蛘?，必要組分可被提供為一套部件，任選地連同合適的試劑/或用于組裝酶檢測裝置的說明。因此，本文提供用于檢測尿檢驗樣品中是否存在能夠切割底物的酶的切割活性的酶檢測工具套裝，所述工具套裝包括：(i)用于加入到所述檢驗樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；(ii)能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子；(iii)固體支持物，所述捕獲分子能夠附著于(即，可附著的或者已附著的)所述固體支持物以形成用于接收所述檢驗樣品的捕獲區(qū)；和(iv)能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。在本發(fā)明中也有用的是用于檢測尿檢驗樣品中是否存在能夠切割底物的酶的切割活性的酶檢測工具套裝，所述工具套裝包括：(i)用于加入到所述檢驗樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；和(b)捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域，其中至少一部分保持與所述捕獲位點相連接；(ii)能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子；(iii)固體支持物，所述捕獲分子能夠附著于(即，可附著的或者已附著的)所述固體支持物以形成用于接收所述檢驗樣品的捕獲區(qū)；和(iii)結合分子，其能夠與含有與所述捕獲位點相連接的至少一部分切割區(qū)域的指示物分子部分結合，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。在相關方面，本發(fā)明還提供本文所描述和限定的酶檢測裝置用于監(jiān)測尿檢驗樣品中的炎癥狀態(tài)、尤其是用于指示或預測尿檢驗樣品中的炎癥加劇的用途。類似地，本發(fā)明還提供本文所描述和限定的方法用于指示或預測尿檢驗樣品中的炎癥加劇的用途。本發(fā)明還提供本文所描述和限定的酶檢測工具套裝用于指示或預測尿檢驗樣品中的炎癥加劇的用途。在這些用途中的每種中，呼吸疾病可以是作為囊性纖維化結果的呼吸道炎癥或者慢性阻塞性肺病。本發(fā)明這些方面的中心是指示物分子。指示物分子包含切割區(qū)域，所述切割區(qū)域包含至少一個切割位點。切割位點在具有相關酶切割活性的尿檢驗樣品中被效應物分子(通常是一種或多種酶)切割。如果樣品中存在酶，則切割區(qū)域為切割位點提供合適的環(huán)境以保證切割有效。在一些特定實施方式中，切割區(qū)域是肽。除了代表蛋白酶切割位點的肽鍵之外，肽中的另外氨基酸可保證切割的特異性和靈敏性。在某些實施方式中，尤其是其中指示物分子結構受到限制、例如其還包含支架分子的一些實施方式中，切割區(qū)域可包含多個切割位點。指示物分子還包含捕獲位點(旨在涵蓋至少一個捕獲位點)。捕獲位點是允許指示物分子(無論是否被切割)被固定在捕獲區(qū)的指示物分子的分立區(qū)域(discreteregion)。下文將詳細討論捕獲位點。指示物分子還任選地包含如下文所詳細討論的支架分子。指示物分子的切割使指示物分子裂開以露出或形成至少一個新結合位點。切割區(qū)域的兩部分因此在切割位點彼此分離。新結合位點通常包含由于切割而產(chǎn)生的構象表位。使用與新露出的一個或多個結合位點特異性結合但不與切割前的指示物分子特異性結合的結合分子使得能夠特異性且靈敏地檢測酶的切割活性。因此，在一些實施方式中，切割至少一個切割位點產(chǎn)生至少兩部分指示物分子(或指示物分子的切割區(qū)域)，其中至少一部分包含捕獲位點(或者保持與捕獲位點相連接)且作為切割的結果，包含結合分子的結合位點，且其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與結合位點結合。換言之，在位于切割位點的切割發(fā)生之前，切割位點是隱藏的或者未形成。在一些實施方式中，切割至少一個切割位點產(chǎn)生至少兩個分離的指示物分子(的切割區(qū)域)部分。因此，切割可產(chǎn)生至少兩個部分或者片段：含有捕獲位點或者與捕獲位點相連接的一個部分或者片段，以及不含捕獲位點或者不與捕獲位點相連接的分離部分或者片段。結合分子結合到含有或者包括捕獲位點的指示物分子的一個或多個部分上的新結合位點。這允許通過與捕獲分子結合特異性檢測在指示物分子捕獲位點的切割(即，在捕獲區(qū)檢測結合分子的結合)。然而，(在切割位點的)切割產(chǎn)生至少兩個完全分離的分子不是必要的，條件是切割產(chǎn)生結合分子的新結合位點且其中直到切割發(fā)生結合分子才能與所述結合位點結合。因此，切割產(chǎn)生兩部分切割區(qū)域，它們在切割位點分離。因此，在一些實施方式中，切割至少一個切割位點產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域，其中至少兩部分保持與捕獲位點直接或間接(對于每部分)連接。這示意性顯示于圖16A中。在一些特定實施方式中，指示物分子含有遠離切割位點或者在切割區(qū)域之外的另外的鍵或聯(lián)結以使得切割至少一個切割位點產(chǎn)生至少兩部分指示物分子的切割區(qū)域，它們保持彼此相連接。這并不排除以下可能性：切割產(chǎn)生至少三個片段，其中至少一個不通過另外的鍵或聯(lián)結保持相連接。當切割區(qū)域可包含多于一個切割位點時，情況尤其如此。這示意性顯示于圖16B中。在一些實施方式中，另外的鍵或聯(lián)結可包括二硫鍵。已發(fā)現(xiàn)，使用與指示物分子相連的支架分子在指示物分子內(nèi)提供另外的鍵或聯(lián)結。這種支架分子可充當結構限制，所述結構限制對于開發(fā)僅在切割發(fā)生后與指示物分子結合的結合分子是有用的。不受理論束縛，結構限制被認為輔助產(chǎn)生直到在切割位點的切割發(fā)生才出現(xiàn)的特異性且可再生的結合位點。如本文所詳細討論的，支架分子可增加切割前的指示物分子和切割后的指示物分子之間的空間構象差異。支架還可以限制切割后處于特定空間構象的經(jīng)切割的指示物分子。通過提供在切割后清楚限定且不同的分子(可針對這一點設計或建立結合分子)，就結合分子在經(jīng)切割的指示物分子和未切割的指示物分子之間區(qū)分而言，這可輔助提高檢測的特異性。因此，在一些實施方式中，結合分子與切割區(qū)域結合。在一些特定實施方式中，結合位點可因此包含切割后切割位點的兩側(即，至少兩部分切割區(qū)域)。結合分子可與切割后指示物分子的兩部分都結合。因此，本發(fā)明還可依賴于指示物分子在檢測尿檢驗樣品中是否存在效應物分子(例如，能夠切割底物的酶)的切割活性的用途，所述指示物分子包含：(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割；(b)捕獲位點；和(c)支架分子，其作用為在切割位點之外(例如，切割區(qū)域之外)連接至少兩部分指示物分子，其中所述支架還起在結構上限制指示物分子的作用，以使得所述至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點，所述結合分子結合所述新結合位點，但其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。本發(fā)明還可包括指示物分子，所述指示物分子用于檢測尿檢驗樣品中是否存在效應物分子(特別是能夠切割底物的酶)的切割活性的用途，所述指示物分子包含：(a)包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述酶，若所述酶切割活性存在的話，切割從而產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域；(b)捕獲位點；和(c)支架分子，其作用為連接至少兩部分指示物分子以使得所述至少一個切割位點的切割產(chǎn)生至少兩部分指示物分子的切割區(qū)域，它們保持彼此相連接，其中所述支架還起在結構上限制指示物分子的作用，以使得所述至少一個切割位點的切割產(chǎn)生(新)結合位點，所述結合分子結合所述新結合位點，但其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。支架分子通常遠離切割位點與指示物分子相連以使得酶的切割活性不被支架抑制。因此，切割區(qū)域與支架分子可被一個或多個連接子或間隔子區(qū)域隔開。在一些實施方式中，這些連接子或間隔子區(qū)域可包括捕獲位點。支架分子通常通過兩個鍵與指示物分子相連，但也可以使用額外的鍵例如3、4、5或6個等鍵，這取決于所用的支架分子和指示物分子的性質(zhì)。還有可以的是，單個支架分子可與多個指示物分子相連。在支架分子含有多于兩個鹵素取代基(尤其是溴甲基取代基，例如4個或6個溴甲基取代基)的實施方式中，支架分子可為多個指示物分子提供結構限制。可使每對取代基相連以連接至少兩部分切割區(qū)域。因此，支架有效連接(并在結構上限制)多個分離的切割區(qū)域。在一些特定實施方式中，指示物分子包含多于一個受限制的肽(切割區(qū)域)。切割區(qū)域也可以是不同的，從而產(chǎn)生含有不同可切割序列的單個分子。本文中可以使用兩個或多個不同的結合分子(例如，針對其經(jīng)切割底物建立的抗體)檢測每個單獨肽切割區(qū)域的切割。因此，在僅在存在兩種或多種蛋白酶時才需要試驗信號的情況下，可以在所有不同的切割位點均已被切割時結合分子(抗體)結合才發(fā)生。在這種情況下，必須針對指示物分子被兩種或多種蛋白酶切割后的形式建立結合分子(抗體)。支架分子輔助限制指示物分子(通常是肽)的經(jīng)切割末端或部分以產(chǎn)生結合分子(通常是與新露出或產(chǎn)生的表位、尤其是構象表位結合的抗體)的新特異性結合位點。因此，結合分子可與指示物分子的任一經(jīng)切割末端或部分特異性結合或者與切割位點的兩側(即，在切割區(qū)域內(nèi)切割位點的任一側)特異性結合。在一些特定實施方式中，支架還起著在結構上限制指示物分子的作用，以使得所述至少一個切割位點的切割產(chǎn)生含有指示物分子的兩部分切割區(qū)域的結合位點，所述結合分子結合到所述結合位點，但其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。在一些特定實施方式中，結合位點包括切割位點。在一些特定實施方式中，結合位點代表指示物分子的新結構構象。切割可產(chǎn)生至少一個新構象表位。結合分子的新結合位點可包含指示物分子的任何部分，條件是酶切割活性和捕獲基本上不被阻礙。在某些實施方式中，結合位點包含至少部分切割區(qū)域。在一些特定實施方式中，結合位點包含至少部分支架分子。在大部分實施方式中，切割位點對蛋白酶切割特異。然而，如本文所述，本發(fā)明的指示物分子可被在炎癥加劇事件中充當效應物分子的另一些酶切割。根據(jù)本發(fā)明可檢測一種或多種不同的蛋白酶。在某些實施方式中，切割位點對基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)切割特異。MMP是鋅依賴型內(nèi)肽酶。它們負責切割多種蛋白，包括細胞外基質(zhì)蛋白。MMP包括MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP19、MMP20、MMP21、MMP23A、MMP23B、MMP24、MMP25、MMP26、MMP27和MMP28。另一些相關的效應物分子包括HNE和組織蛋白酶G。在一些實施方式中，至少一個切割位點可偏向被特異性蛋白酶切割。這允許利用本發(fā)明來檢測檢驗樣品中的特異性蛋白酶活性。許多蛋白酶是已知的且其優(yōu)選切割位點被充分報告。在某些實施方式中，至少一個切割位點偏向被特異性基質(zhì)金屬蛋白酶切割。更特別地，在一些實施方式中，至少一個切割位點偏向被MMP-9和/或MMP-8或者MMP-13和/或MMP-9切割。至少一個切割位點可偏向被MMP-13、MMP-9、MMP-2、MMP-12和MMP-8切割。偏向可以是對于MMP組相等的或者可以為特定的優(yōu)先次序。如本文所示，可以設計特定指示物分子和指示物分子內(nèi)偏向被這些特定MMP以特定優(yōu)先次序切割的切割位點。因此，在一些實施方式中，切割位點在氨基酸序列GPQGIFGQ(SEQIDNO:1)內(nèi)。這可被視為指示物分子的“切割區(qū)域”的特定實例。在這些實施方式中，切割產(chǎn)生含有氨基酸序列GPQG的指示物分子的切割區(qū)域部分和含有氨基酸序列IFQG的指示物分子的切割區(qū)域部分。任一部分均可以是與捕獲位點相連接的部分。在一些特定實施方式中，指示物分子包含氨基酸序列CGPQGIFGQC(SEQIDNO:2)。包含半胱氨酸殘基提供了巰基，巰基代表對于多種支架分子而言方便的連接點。在一些實施方式中，切割區(qū)域與支架分子的連接點可被一個或多個連接子或間隔子區(qū)域隔開。因此，指示物分子可包括以下結構：在一些實施方式中，可在一個或兩個間隔子內(nèi)找到捕獲位點。因此，本發(fā)明的指示物分子在N末端和C末端或者接近N末端和C末端處可包含合適的氨基酸以促進與支架分子相連。所述氨基酸可包含巰基。合適的殘基包括半胱氨酸和硒。支架分子可以通過硫醚鍵與指示物分子相連。WO2004/077062和WO2008/013454中討論了一系列合適的支架分子和使支架分子與肽相連的方法，所述文獻的相關公開內(nèi)容通過引用并入本文中。本發(fā)明以新方式應用這些支架分子以展示切割位點并在切割后產(chǎn)生新結合位點，這允許檢測檢驗樣品中的酶切割活性(尤其是蛋白酶活性)作為炎癥加劇的指示或預測。在某些實施方式中，支架分子包含(雜)芳族分子。在一些更具體的實施方式中，(雜)芳族分子包含至少兩個芐基鹵素取代基。在一些實施方式中，支架分子是鹵代甲基芳烴，例如選自雙(溴甲基)苯、三(溴甲基)苯和四(溴甲基)苯或其衍生物的鹵代甲基芳烴。在一些特定實施方式中，支架選自鄰-二鹵代二甲苯、間-二鹵代二甲苯和對-二鹵代二甲苯以及1,2,4,5四鹵代四甲基苯，例如間-1,3-雙(溴甲基)苯(m-T2)、鄰-l,2-雙(溴甲基)苯(o-T2)、對-l,4-雙(溴甲基)苯(p-T2)、間-1,3-雙(溴甲基)吡啶(m-P2)、2,4,6-三(溴甲基)三甲基苯(T3)、間-1,3-雙(溴甲基)-5-疊氮苯(m-T3-N3)和/或1,2,4,5四溴四甲基苯(T4)。合適的鹵代甲基芳烴衍生物包括鄰-雙(溴甲基)苯、間-雙(溴甲基)苯和對-雙(溴甲基)苯。更特別地，1,2-雙(溴甲基)苯、1,3-雙(溴甲基)苯和1,4-雙(溴甲基)苯。進一步取代的鹵代甲基芳烴包括1,3,5-三(溴甲基)苯、1,2,4,5-四(溴甲基)苯和1,2,3,4,5,6-六(溴甲基)苯。多環(huán)鹵代甲基芳烴包括2,7-雙(溴甲基)-萘、1,4-雙(溴甲基)-萘、1,8-雙(溴甲基)-萘、1,3-雙(溴甲基)-萘、1,2-雙(溴甲基)-萘、2,3-雙(溴甲基)-萘、2,6-雙(溴甲基)-萘、1,2,3,4-四(溴甲基)-萘、9,10-雙(溴甲基)-菲、5,10-雙(溴甲基)-蒽和1-(溴甲基)-3-[3-(溴甲基)芐基]苯。甲基取代的鹵代甲基芳烴包括1,3-雙(溴甲基)-5-甲基苯、2,5-雙(溴甲基)-1,3-二甲苯、2,5-雙(溴甲基)-1,4-二甲苯、2,4-雙(溴甲基)-1,3,5-三甲苯和3,6-雙(溴甲基)四甲基苯。硝基取代的鹵代甲基芳烴包括3,4-雙(溴甲基)-硝基苯和2,3-雙(溴甲基)-硝基苯。羥基取代的鹵代甲基芳烴包括1,3-雙(溴甲基)-5-羥基苯且氰基取代的鹵代甲基芳烴包括2,6-雙(溴甲基)-芐腈。甲氧基取代的鹵代甲基芳烴包括1,3-雙(溴甲基)-5-甲氧基苯、1,3-雙(溴甲基)-2-甲氧基-5-甲基苯、1,3-雙(溴甲基)-5-羥基苯、2,3-雙(溴甲基)-1,4-二甲氧基苯和2,5-雙(溴甲基)-1,4-二甲氧基苯。圖14中顯示了一些適用于本發(fā)明的指示物分子中的支架分子。圖15中也顯示了一些具體的合適支架分子以及建議的命名。由于鹵代甲基芳烴衍生物的相對剛性和易于合成使用，它們是充當本發(fā)明中的支架分子的優(yōu)選候選物。它們特別便于產(chǎn)生受限制的肽底物。然而，人們能夠想到用來使指示物分子(例如，肽)“環(huán)化”的另一些合適化學方法。在肽含有巰基的情況下(例如：以半胱氨酸的形式)，可以使用簡單的二硫鍵形成或二環(huán)氧化物衍生物來進行結構的共價閉合。另一種合適的化學方法包括“點擊化學(clickchemistry)”方法，所述方法涉及疊氮化物和炔烴之間的環(huán)加成反應從而形成穩(wěn)定的三唑。此處例如帶有兩個疊氮基賴氨酸氨基酸的肽可通過二炔烴試劑在分子內(nèi)交聯(lián)。這類反應可被銅催化。然而，在一些實例(例如，使用張力烷烴(strainedalkyne)的那些)中，不需要催化劑。另外的化學途徑包括穩(wěn)定形成腙的途徑。含兩個苯基肼部分的指示物分子(尤其是肽)可通過二醛試劑在分子內(nèi)交聯(lián)。另外的化學途徑可通過含兩個酪氨酸氨基酸的肽基指示物分子進行。可使用雙(重氮)支架使這些肽在分子內(nèi)交聯(lián)以形成相應的重氮加合物。支架分子還可以包含另外的官能團或反應基團以促進酶切切割位點后生成新結合位點。因此，在切割位點切割后，存在至少兩部分指示物分子的切割區(qū)域，它們不再通過切割位點彼此連接。這些“游離”部分中的一個或多個可通過與支架分子相互作用而變得進一步受限制。這可引起整體分子的結構顯著變化。這繼而允許生成特異性結合分子，該結合分子不與切割之前的指示物分子交叉反應。因此，例如，在肽被支架分子限制的情況下，人們能夠想象切割位點被切割后的特定構象變化。所提供的在肽鏈中的自由度可允許它通過非共價相互作用以新的穩(wěn)定構象自組裝，從而產(chǎn)生新構象表位，所述新構象表位對于分子是唯一的且被結合分子(例如，針對經(jīng)切割底物建立的抗體)識別。這些非共價相互作用可包括支架分子中的芳環(huán)和氨基酸側鏈之間的疏水相互作用?？衫脭U展的取代模式進一步增強支架中的非共價相互作用以使得例如帶負電荷的硝基取代基能夠與切割區(qū)域內(nèi)所含的帶正電荷的氨基酸(例如賴氨酸、精氨酸或組氨酸)相互作用。甲氧基和/或羥基芳基取代基與一些氨基酸(包括絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸)之間的氫鍵相互作用也是可以的。此外，切割后，切割區(qū)域的兩個經(jīng)切割肽部分可自由地互相自組裝，從而引入二級結構例如螺旋或β鏈結構。在另一些實施方式中，如上所述的肽-支架相互作用和肽-肽相互作用二者的組合可產(chǎn)生被結合分子識別的新結合位點。這種相互作用起著區(qū)分未切割“閉合”形式的三維空間結構和切割后的“開放”形式的三維空間結構的作用并因此顯著增強了經(jīng)切割指示物分子和結合分子(例如，針對經(jīng)切割肽產(chǎn)物建立的抗體)之間相互作用的特異性。所產(chǎn)生的高相互作用特異性有益于檢測樣品內(nèi)酶切割活性的靈敏度，因為其方便了使用過量的指示物分子而沒有結合分子與未切割指示物分子結合(例如，針對經(jīng)切割肽建立的抗體與未切割肽結合)的風險。支架不應該阻礙在一個或多個切割位點的切割。在一些實施方式中，支架可使指示物分子(的切割區(qū)域)定位以優(yōu)化或提高切割位點的切割效率。支架可有效固定或限制切割區(qū)域以使得以對檢測酶活性有利的方式呈現(xiàn)切割位點。支架分子對切割任何給定底物的影響可容易通過簡單的時程實驗來檢驗。檢驗可確定酶存在情況下在合理時間(例如，5-10分鐘)內(nèi)是否發(fā)生切割。該檢驗可被量化，例如通過質(zhì)譜分析，任選地結合HPLC，因為它應該形成新水解的分子(具有不同分子質(zhì)量)，所述新水解的分子在反相分析柱上也應該保持不同。包含支架分子的這些指示物分子可，例如，然后被制備為呈純化的經(jīng)切割形式的免疫原。這種免疫原可用來在合適動物(例如，綿羊)中建立抗體，所述抗體的形式是游離肽或者綴合到載體蛋白。然后可通過ELISA將抗血清表征到固定化抗原并可使用抗原柱來親和純化和精制與經(jīng)切割指示物分子特異性反應的多克隆抗體。之后可根據(jù)本發(fā)明的方法檢驗完整的指示物分子。本文公開了一系列適用于本發(fā)明的結合分子，該討論原則上適用于此處。通常，結合分子包括抗體(再次如本文所限定)。為免生疑問，這些指示物分子可用于本發(fā)明的任何方面(裝置、工具套裝、方法、用途等)。在本發(fā)明的整體語境中，一個或多個切割位點可以是存在可酶促切割鍵的任何位點。例如，該鍵可存在于指示物分子的相鄰殘基之間。這類殘基可選自核苷酸、單糖和氨基酸。指示物分子通常包含肽切割區(qū)域。因此，在一些實施方式中，切割區(qū)域包含氨基酸序列。在一個優(yōu)選的本發(fā)明實施方式中，切割位點是位于兩個氨基酸殘基之間的特異性肽鍵。在另一些的本發(fā)明實施方式中，至少一個切割位點位于肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)或核酸切割區(qū)域內(nèi)。在某些實施方式中，可改造指示物分子以使得其包含酶的天然底物或其一部分，這樣酶就被呈遞有其天然切割位點(任選地在切割區(qū)域內(nèi)處于其天然狀態(tài))。在某些另一些實施方式中，可改造指示物分子以使得其包含人工切割位點或非天然切割位點和/或底物區(qū)域。例如，可以改造或者突變指示物分子中的切割位點以使得酶所展示的切割活性速率或切割活性特異性相對于在可比較條件下針對酶的天然底物測量的酶的切割活性速率和/或切割活性特異性增加(或降低)。在某些本發(fā)明實施方式中，切割區(qū)域可包含多個切割位點，其中在任何一個位點的切割產(chǎn)生至少兩部分切割區(qū)域，其中至少一部分保持與捕獲位點相連接。在本發(fā)明的語境中，術語“多個”表示至少兩個、至少三個、至少四個等等。在某些實施方式中，指示物分子的切割區(qū)域包含介于2、3、4、5個和10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、100、500或1000個之間的切割位點。在一些實施方式中，指示物分子包含介于2個和5、6、7、8、9或10個之間的切割位點。在一種實施方式中，多個切割位點可以全部相同。在這種構型中，重復的切割位點可以相對非特異或者可以對上文限定的一種或酶亞型高度特異。此外，使用這種類型的指示物分子可有助于提高酶檢測裝置的靈敏度，這是通過提供增加檢驗樣品內(nèi)存在的切割位點的濃度的方法實現(xiàn)的。在另一些實施方式中，指示物分子的切割區(qū)域可包含多個切割位點，其中同一指示物分子內(nèi)存在至少兩個不同的切割位點。在一些優(yōu)選的本發(fā)明實施方式中，指示物分子可包含至少三個、至少四個、至少五個、直至至少八個不同的切割位點。在一個進一步優(yōu)選的實施方式中，不同切割位點被不同酶或上文所限定的不同類別、子類別或亞型的酶識別，以使得本發(fā)明的裝置可用于檢測多種不同酶的活性。當根據(jù)本發(fā)明測量多種效應物分子時，情況尤其如此?？蓪钚赃M行分組，以使得酶活性的檢測提供有用的結果。例如，MMP組(例如，MMP8和MMP9)可參與加劇事件，這樣檢測該酶組中的一個或多個的相關活性能用于預測或鑒定炎癥加劇。對于檢驗樣品中要檢測的酶活性水平極低的情況，使用多個切割位點(無論是否相同)可以是特別有用的。例如，上文所限定的具有多個切割位點的指示物分子可用于檢測含低水平蛋白酶的尿樣品中的酶活性。當指示物分子包含支架分子時，使用多個切割位點也可以是特別適用的。除了含至少一個切割位點的切割區(qū)域之外，指示物分子還包含捕獲位點。捕獲位點介導指示物分子與捕獲區(qū)內(nèi)存在的捕獲分子結合。因此，捕獲位點是指示物分子的一部分，其負責將指示物分子保留或者定位在捕獲區(qū)內(nèi)。指示物分子被切割之后，捕獲位點可保持完整或基本上完整，以使得該位點仍然被裝置捕獲區(qū)內(nèi)存在的捕獲分子識別并與其結合。在這些情況下，完整的指示物分子和切割后包含捕獲位點的那部分指示物分子二者均將與捕獲區(qū)內(nèi)的捕獲分子結合。捕獲位點可包含任何合適的分子，例如生物素分子。支架分子也可以形成捕獲位點的一部分或者全部以允許在捕獲區(qū)固定指示物分子。例如，捕獲區(qū)可包含針對支架分子建立的抗體，所述支架分子優(yōu)選地呈與指示物分子相連的形式。在這些實施方式中，支架分子基本上不參與和結合分子結合。指示物分子效力的關鍵是：切割發(fā)生后，通過捕獲位點和捕獲分子之間的相互作用固定在捕獲區(qū)并同時與結合分子結合來。在支架分子限定了切割后結合分子的一部分結合位點的那些實施方式中，捕獲位點必須足夠獨特以避免結合事件之一或二者被阻止。如上所述，切割位點可以在肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂質(zhì)或核酸切割區(qū)域內(nèi)。在一些特定的本發(fā)明實施方式中，切割區(qū)域和捕獲位點由肽或蛋白質(zhì)內(nèi)的分立的氨基酸組或氨基酸限定。在本文中使用時，術語“肽”旨在表示不多于(約)20、30、40或50個氨基酸的長度的氨基酸。或者，捕獲位點可存在于指示物分子的一個區(qū)域內(nèi)，所述區(qū)域與切割位點所在的區(qū)域是分離的。因此，在某些本發(fā)明實施方式中，捕獲位點可存在于指示物分子的捕獲區(qū)域內(nèi)，且切割位點可存在于分離的切割區(qū)域內(nèi)。在捕獲位點處于與切割位點分離的指示物分子區(qū)域內(nèi)的實施方式中，捕獲位點可包含與在含切割位點的分子區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)的物質(zhì)或殘基完全不同的物質(zhì)或殘基。例如，切割區(qū)域可包含氨基酸殘基而捕獲位點可包含生物素部分或由生物素部分組成。此外，在指示物分子包含帶有切割位點和捕獲位點的分離區(qū)域的實施方式中，可通過本領域技術人員已知的任何方法使所述區(qū)域相關聯(lián)。在一個優(yōu)選的實施方式中，可通過直接共價鍵使所述區(qū)域相關聯(lián)。所述區(qū)域可緊鄰或者可被連接子或間隔子(例如，聚乙二醇部分)隔開。在尿中檢測的效應物分子于別處討論。待根據(jù)本發(fā)明檢測的這些酶必須能夠在切割位點切割指示物分子。對于待在切割位點切割的指示物分子，該活性是必需的以產(chǎn)生至少兩部分指示物分子切割區(qū)域，其中至少一部分保持與捕獲位點相連接。在本發(fā)明的語境中，指示物分子可(通過捕獲位點)與捕獲分子以相對高的親和力結合。在一些實施方式中，指示物分子的解離常數(shù)(kd)相對低且優(yōu)選地介于1x10-17M和1x10-7M之間(取決于試驗所需的靈敏度)。在某些本發(fā)明實施方式中，指示物分子的解離常數(shù)介于1x10-15M和1x10-9M之間。在某些本發(fā)明實施方式中，這種相互結合作用可由于指示物分子的捕獲位點與捕獲區(qū)中存在的捕獲分子的直接結合而被實現(xiàn)。在該語境中，直接結合表示指示物分子(通過捕獲位點)與捕獲分子結合而沒有任何中間物。在一些本發(fā)明實施方式中，指示物分子的捕獲位點和捕獲區(qū)中存在的捕獲分子是結合對的兩半。在該語境中，結合對由能夠彼此結合的兩個分子或?qū)嶓w組成。在某些本發(fā)明實施方式中，相互結合作用是特異的以使得結合對的每個成員只能與其各自的伴侶(partner)或者有限數(shù)量的結合伴侶結合。此外，如上文所詳述，結合對優(yōu)選展示出相對高的親和力。結合對可以是在自然中發(fā)現(xiàn)的結合對或者人工生成的相互作用分子或?qū)嶓w對。在一些本發(fā)明實施方式中，指示物分子的捕獲位點和捕獲分子是結合對的兩半，其中結合對選自以下：抗原和抗體或抗體的抗原結合片段；生物素和親和素、鏈霉親和素、中性親和素或captavidin；免疫球蛋白(或其合適結構域)和蛋白A或蛋白G；碳水化合物和凝集素；互補核苷酸序列；配體和受體分子；激素和激素結合蛋白；酶輔因子和酶；酶抑制劑和酶；纖維素結合結構域和纖維素纖維；固定化的氨苯基硼酸和順式-二醇攜帶分子；以及木葡聚糖和纖維素纖維及其類似物、衍生物和片段。在一些特定的本發(fā)明實施方式中，結合對由生物素和鏈霉親和素組成。在一個另外的本發(fā)明實施方式中，指示物分子的捕獲位點包括表位且捕獲分子包括抗體，所述抗體與存在于第一捕獲位點的表位特異性結合。在本發(fā)明的語境中，術語抗體包括來自任何物種的天然免疫球蛋白、嵌合抗體、人源化抗體、F(ab')2片段、Fab片段、Fv片段、sFv片段和高度相關分子例如基于保留特異性結合親和力的抗體結構域的那些(例如，單結構域抗體)?？贵w可以是單克隆抗體或多克隆抗體。因此，在一些特定實施方式中，捕獲分子包括抗體。在另一些實施方式中，捕獲位點包括生物素分子且捕獲區(qū)包括鏈霉親和素分子。在某些本發(fā)明實施方式中，指示物分子的捕獲位點與裝置的捕獲分子的結合可以是間接的。在本發(fā)明的語境中，“間接結合”表示由一些中間實體介導的結合，所述中間實體能夠橋接指示物分子的捕獲位點和捕獲分子，例如能夠同時結合指示物分子的捕獲位點和捕獲分子的“銜接子”。當指示物分子和捕獲分子的結合是間接的且由銜接子介導時，多個指示物分子可與每個捕獲分子結合。在該語境中，多個表示至少兩個、至少三個、至少四個等等。這可通過包含多價銜接子分子來實現(xiàn)，所述多價銜接子分子例如，除了由生物素組成或者包含生物素的捕獲分子之外，能夠同時與多個含生物素的指示物分子結合的鏈霉親和素分子。如本文中所詳述的，其中多個指示物分子與每個捕獲分子結合的裝置的實施方式可用來實現(xiàn)提高的試驗準確度。本發(fā)明的這種實現(xiàn)方式的另一關鍵分子是結合分子。本發(fā)明依賴于能夠與切割產(chǎn)生的新結合位點或者切割后含有捕獲位點的那部分指示物分子結合的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。因此，在一些特定實施方式中，結合分子包括抗體。為免生疑問，術語抗體包括來自任何物種的天然免疫球蛋白、嵌合抗體、人源化抗體、F(ab')2片段、Fab片段、Fv片段、sFv片段和高度相關分子例如基于保留特異性結合親和力的抗體結構域的那些(例如，單結構域抗體)?？贵w可以是單克隆抗體或多克隆抗體。發(fā)明人已生成了下述抗體，所述抗體僅在切割后識別切割區(qū)域，因此直到在切割位點的切割發(fā)生，所述抗體才能與指示物分子結合(達到任何顯著程度)?？筛鶕?jù)本領域已知的技術來生產(chǎn)抗體。這可依賴于利用切割產(chǎn)物對動物(例如綿羊、兔或山羊)進行免疫。例如，可使用切割后保持與捕獲位點相連接的那部分切割區(qū)域(任選地包括捕獲位點自身)進行免疫?？蓪⒍嗫寺】贵w從血清中分離并進行親和純化。可使用眾所周知的表征的雜交瘤技術生產(chǎn)單克隆抗體。在一些實施方式中，結合分子還可包含適配子。因此，本發(fā)明還提供結合分子，通常是抗體，其在切割后與本文所限定的指示物分子結合。本發(fā)明提供結合分子，通常是抗體，其與指示物分子中作為切割結果產(chǎn)生的新結合位點結合，其中直到切割發(fā)生，結合分子才能與指示物分子結合。在一些實施方式中，結合分子在切割區(qū)域結合。在一些特定實施方式中，切割至少一個切割位點產(chǎn)生至少兩部分指示物分子切割區(qū)域，其中至少一部分保持與捕獲位點相連接且作為切割的結果含有結合分子的結合位點，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述結合位點結合。在一些實施方式中，切割至少一個切割位點產(chǎn)生指示物分子的兩個分離部分，因此切割后，結合分子與分離部分之一或二者結合。與此相符，本發(fā)明提供結合分子，任選地是抗體，其與包含氨基酸序列GPQG的指示物分子結合但不與包含氨基酸序列GPQGIFGQ(SEQIDNO:1)(作為切割區(qū)域)的指示物分子結合。類似地，本發(fā)明提供結合分子，任選地是抗體，其與包含氨基酸序列IFGQ的指示物分子結合但不與包含氨基酸序列GPQGIFGQ(SEQIDNO:1)(作為切割區(qū)域)的指示物分子結合。在其中指示物分子結構受到限制且其中切割至少一個切割位點產(chǎn)生至少兩部分保持彼此相連的指示物分子切割區(qū)域的本發(fā)明實施方式中，切割后結合分子可與切割區(qū)域結合。在一些特定實施方式中，切割后，結合分子與指示物分子切割區(qū)域的兩部分均結合。因此，切割后，結合分子可結合有效跨越切割位點的區(qū)域。切割后，指示物分子的結構限制(例如，使用本文所述的支架分子)提供良好限定且穩(wěn)定的結合分子的結合位點。在一些特定實施方式中，結合分子所結合到的結合位點代表指示物分子的新結構構象。切割可產(chǎn)生至少一個新構象表位。結合分子的結合位點可包含指示物分子的任何部分。這可存在以下前提條件：指示物分子的酶切割活性和/或捕獲基本上不被結合分子的結合所阻礙。在某些實施方式中，結合位點包含切割區(qū)域的至少一部分和/或與支架分子相連且將支架分子與切割區(qū)域分開的連接子或間隔子區(qū)域的至少一部分。在另一些實施方式中，結合分子可與包含至少部分支架分子的新結合位點結合?？衫脠蟾娣肿又苯踊蜷g接標記結合分子以允許檢測結合分子與指示物分子的結合。報告分子可以是適合通過本領域技術人員可用的任何方法檢測的任何物質(zhì)或部分。因此，報告分子通常能夠生成或產(chǎn)生信號。在某些本發(fā)明實施方式中，報告分子選自以下：金顆粒；色原；發(fā)光化合物；熒光分子；放射性化合物；可見化合物；脂質(zhì)體或包含信號生成物質(zhì)的其他囊泡；電活性物質(zhì)；或者酶和其底物的組合。適用作報告部分的酶-底物組合可以是堿性磷酸酶和硝基藍四唑5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸底物。在一個特定的本發(fā)明實施方式中，報告部分是金顆粒。本發(fā)明中還涵蓋了利用報告分子間接標記結合分子。因此，報告分子可與另外的結合分子相連，而另外的結合分子轉而與結合分子相結合以提供標簽。這種間接結合可由能夠同時結合結合分子和報告分子的銜接子介導。作為其中結合分子是抗體的示例性實施方式，間接標記可由以特異性方式與抗體結合分子結合的另外的抗體介導?？衫脠蟾娣肿又苯訕擞浟硗獾目贵w，所述報告分子例如金顆粒；色原；發(fā)光化合物；熒光分子；放射性化合物；可見化合物；脂質(zhì)體或包含信號生成物質(zhì)的其他囊泡；電活性物質(zhì)；或者酶和其底物的組合。適用作報告部分的酶-底物組合可以是堿性磷酸酶和硝基藍四唑5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸底物。在一個特定的本發(fā)明實施方式中，報告部分是金顆粒。在報告分子憑借銜接子分子與結合分子結合的本發(fā)明實施方式中，可以在將檢驗樣品加入指示物分子中之前，使銜接子與結合分子預復合，條件是：銜接子不妨礙結合分子與經(jīng)切割指示物分子的結合。銜接子可以是能夠介導結合分子與報告分子的間接相互作用的任何物質(zhì)或分子。在一些實施方式中，銜接子是鏈霉親和素且結合分子包括生物素分子。銜接子也可以是“銜接子結合對”，其中所述結合對包括：(i)能夠與結合分子結合的第一成員；和(ii)能夠與結合對的第一成員和報告分子結合的第二成員。在某些本發(fā)明實施方式中，指示物分子的檢測區(qū)域包括生物素，銜接子結合對的第一成員是親和素或鏈霉親和素，銜接子結合對的第二成員是生物素，且報告分子包括能夠結合生物素的部分。包含銜接子分子或者銜接子結合對可促進多個報告分子與每個結合分子的結合。例如，使用多價鏈霉親和素作為銜接子將允許含生物素的結合分子和多個含生物素的報告分子的同時結合。在某些實施方式中，可以在側向流或縱向流裝置中進行本發(fā)明。因此，一般而言，本發(fā)明(或者一個或多個檢測裝置)可依賴于某種形式的固體支持物。固體支持物可限定樣品的液體流動路徑。在一些特定實施方式中，固體支持物包括色譜介質(zhì)或毛細流動裝置。在一些實施方式中，可以以檢驗條形式提供本發(fā)明。代表性例子示于圖2中并在本文中更詳細地描述。在一些特定的本發(fā)明實施方式中，捕獲區(qū)形成于固體支持物上。旨在涵蓋捕獲分子可與其連接從而形成捕獲區(qū)的任何支持物。固體支持物可為例如珠子(例如，sepharose或瓊脂糖珠子)或孔(例如，在微孔板中)的形式。因此，在某些實施方式中，裝置包含固體支持物，其中捕獲分子與所述固體支持物連接從而形成捕獲區(qū)。在本發(fā)明工具套裝的情況下，可以提供未與捕獲分子連接的固體支持物。在這些實施方式中，在使用帶有檢驗樣品的裝置之前，工具套裝的使用者可將捕獲分子固定在固體支持物上以形成捕獲區(qū)。因此，工具套裝可還包含用于將捕獲分子固定在固體支持物上的工具。固定化工具可包括允許形成捕獲區(qū)的任何合適試劑。可利用合適的固定化工具預形成固體支持物。例如，固體支持物可包含生物素分子，所述生物素分子被排列為與形成(部分)捕獲分子的親和素(例如，鏈霉親和素)分子相互作用。當然，如本文所述和如本領域技術人員所容易理解的，可以利用其他結合對相互作用將捕獲分子固定在固體支持物上以形成捕獲區(qū)。捕獲區(qū)可以通過在其中或之上固定化能夠與指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子來限定?？赏ㄟ^任何合適的方法實現(xiàn)捕獲分子的固定化。當裝置是包含色譜介質(zhì)的流動裝置時，捕獲分子可通過與介質(zhì)直接結合而被固定化或者通過與和介質(zhì)相連或關聯(lián)的載體分子(例如，蛋白質(zhì))結合而被間接固定化。在另一些實施方式中，固體支持物還包含樣品施加區(qū)，樣品施加在所述樣品施加區(qū)上。樣品施加區(qū)可預先加載有指示物分子，以使得當施加檢驗樣品時，樣品中的任何酶均作用于樣品施加區(qū)內(nèi)的指示物分子的切割位點。樣品施加區(qū)可包含屏障，所述屏障保持樣品在樣品施加區(qū)中持續(xù)預定的時段。這允許樣品與指示物分子相互作用持續(xù)足夠的時期以達到可測量水平的切割。如本領域技術人員所容易理解的，取決于待檢測的酶，所述時期可以是1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、60分鐘或更長。該段時間后，屏障可被樣品降解或者以其他方式被除去，從而允許樣品繼續(xù)流過裝置?；蛘撸深A混合或預孵育檢驗樣品和指示物分子，然后將混合物加入裝置(例如樣品施加區(qū))中。然而，當可預混合或預孵育檢驗樣品和指示物分子時，可以省略樣品施加區(qū)。此處，可以將混合物直接加入捕獲區(qū)中以允許通過與捕獲分子的相互作用來固定指示物分子。在一些實施方式中，可在位于捕獲區(qū)上游的位點將檢驗樣品施加到色譜介質(zhì)中以使得檢驗樣品通過例如毛細管作用穿過捕獲區(qū)被拖動。色譜介質(zhì)可由流體能夠穿過的任何物質(zhì)(例如，流體通道或多孔膜)制成。在某些本發(fā)明實施方式中，色譜介質(zhì)包含條或膜，例如硝化纖維條或膜。在裝置中，結合分子必須以允許與指示物分子(如果在切割位點切割的話)相互作用的方式被提供。因此，可以將結合分子與指示物分子預混合，然后施加到裝置。這可以在指示物分子已與檢驗樣品混合之前或之后。優(yōu)選在之后以避免結合分子可能對(檢驗樣品中的)在指示物分子的切割位點的酶活性造成的任何影響。結合分子也可以被提供在裝置上或裝置中位于捕獲區(qū)上游的任何點，以使得在指示物分子被固定(通過指示物分子的捕獲位點和限定捕獲區(qū)的捕獲分子之間的相互作用)之前，結合分子遇到檢驗樣品和指示物分子?；蛘撸梢栽谝呀?jīng)將檢驗樣品和指示物分子加到捕獲區(qū)之后，將結合分子加到捕獲區(qū)。這能夠保證任何指示物分子均已被固定在捕獲區(qū)，從而提供(在經(jīng)切割指示物分子的情況下)結合分子的結合位點以產(chǎn)生信號。取決于待檢測的特定酶切割活性，在裝置或方法中包含合適的酶抑制劑可以是有必要的。這對于防止酶作用于裝置或方法的其他組分(例如，結合分子或捕獲分子)可以是重要的。當檢驗樣品與指示物分子一起預孵育時，在孵育階段結束時添加酶活性抑制劑可以是有利的。這優(yōu)選地在結合分子接觸檢驗樣品之前?；蛘?，一種或多種酶活性抑制劑可被包含在裝置中位于結合分子上游的任何點，其中結合分子被提供在裝置上或裝置中。這是在捕獲區(qū)上游(根據(jù)上文所述)。抑制劑可被簡單干燥或者被動吸附到裝置上以使得當檢驗樣品穿過裝置時使抑制劑流通。應該注意的是，使用抑制劑不是必需的且在抑制劑將導致不能檢測尿中的其他標志物時可被排除。例如，根據(jù)本發(fā)明檢測的一些酶活性(例如，特異性蛋白酶活性)可足夠特異，從而蛋白酶將不作用于裝置或方法中除了底物之外的任何其他組分。特定酶的切割位點在本領域是眾所周知的，其可用來設計裝置和方法的多個組分。例如，可進行(例如，使用可免費獲取的工具例如根據(jù)標準設置的BLAST)計算機篩選以確定待檢測酶的切割位點不包含在任何相關分子(例如，結合分子和捕獲分子)內(nèi)。還可以通過將相關分子(例如，結合分子和捕獲分子)與待檢驗的酶活性一起孵育并檢測是否發(fā)生切割來檢查交叉反應性。在一些實施方式中，由于待檢測的酶切割活性的性質(zhì)，待檢測的酶切割活性將不作用于相關分子。例如，如果要檢測核酸酶活性，則核酸酶活性不應該展示出與抗體結合分子或鏈霉親和素或抗體捕獲分子有關的任何切割活性。固體支持物可進一步包含對照區(qū)，相對于樣品流，所述對照區(qū)位于捕獲區(qū)和樣品施加區(qū)(若存在的話)的下游，其含有與結合分子結合的另外的結合分子以指示使用裝置的試驗成功完成?；蛘撸硗獾慕Y合分子可以與加入到樣品或裝置中并與樣品一起流過裝置的另外的分子結合?？梢杂帽疚乃薅ǖ膱蟾娣肿又苯踊蜷g接標記另外的分子。優(yōu)選地，報告分子與和結合分子相連的報告分子相同以易于檢測，但也可以不同。對照區(qū)與捕獲區(qū)在空間上分離，例如如果報告分子結合或固定在各個區(qū)中的話，以用來產(chǎn)生兩條分離的檢驗線。這種對照區(qū)用來確認檢驗樣品(包括結合分子)已穿過整個裝置和確認裝置正確運行。預期在對照區(qū)有陽性信號，這不依賴于樣品中是否存在酶切割活性?；谂c指示物分子的切割位點結合的結合分子的性質(zhì)或者基于加入到樣品中的另外的分子的性質(zhì)來選擇另外的結合分子。結合分子和另外的結合分子或另外的分子和另外的結合分子可形成本文所限定的結合對。例如，如果結合分子是物種特異性抗體(例如，綿羊抗體)，則另外的結合分子可以是抗物種抗體(例如，抗-綿羊抗體)。或者，如果另外的分子是來自不同物種(例如，雞或山羊)的抗體，則另外的結合分子可以是合適的抗物種抗體。這允許憑借特異性相互作用將結合分子或另外的分子固定在對照區(qū)。可通過任何合適的方法(例如，通過共價相互作用或非共價相互作用)將另外的結合分子固定在對照區(qū)。雖然這些實施方式主要是關于測定尿樣品中效應物分子的水平描述的，但同樣的技術也可用于測定其他標志物。特別地，可通過類似技術測定效應物抑制劑分子的水平。預期抑制劑分子將降低效應物分子的活性，因此能夠例如通過競爭性試驗來檢測尿中效應物抑制劑分子的水平。例如，在存在已知量的加入到樣品中的效應物分子的情況下，能夠測定效應物抑制劑分子的水平。下表和表2.1a中示出了適用于特定標志物的試驗方式的一些實例：因此，能夠容易看出，ELISA和側向流方式特別適用于本發(fā)明。酶譜法可用于某些標志物。發(fā)明人已想到了多種試驗來測定本文所述標志物的水平?？捎糜诒景l(fā)明中的一種標志物是N-乙酰基Pro-Gly-Pro(Ac-PGP)，其是中性粒細胞趨化因子，來源于細胞外基質(zhì)(ECM)的分解且在氣道炎癥期間生成。在炎癥疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)中，Ac-PGP通過中性白細胞的蛋白水解作用從膠原上被切下。根據(jù)本發(fā)明，可通過酶免疫分析法(EIA)檢測Ac-PGP。在某些實施方式中，EIA是競爭性試驗。因此，本發(fā)明提供用于檢測尿樣品中Ac-PGP的競爭性酶免疫分析，其包括：(a)使尿樣品與其上為固定化PGP的免疫分析表面(例如，以AHX-PGP或Ac-PGP的形式)接觸(b)向樣品中加入與PGP特異性結合的試劑(例如，抗體，如本文所限定，一個具體實例是CF1763)，所述試劑綴合到酶(例如堿性磷酸酶)(c)移除未結合到免疫分析表面的試劑(d)測量免疫分析表面酶活性的水平作為樣品中Ac-PGP水平的指示。在樣品中缺乏Ac-PGP的情況下，固定在免疫捕獲表面上的PGP將與所述試劑結合并因此檢測酶活性。隨著樣品中的Ac-PGP水平提高，這些分子將競爭與所述試劑結合并因此降低免疫捕獲表面的酶活性水平。一個優(yōu)選的試劑是綿羊抗-Ac-PGP抗體CF1763。一種替代物是CF1764。在一些實施方式中，試劑可以綴合到堿性磷酸酶。圖34中顯示了合適試驗方式的示意圖。圖35中顯示了這種試驗的代表性校準曲線。這種試驗可被稱為版本3。一種替代性的試驗利用固定化的Ac-PGP結合試劑，例如抗-Ac-PGP抗體(例如，CF1763–版本1或CF1764–版本2作為捕獲抗體)。此處，競爭試劑可以是B-AHX-PGP(生物素化的AHX-PGP)，其與樣品中的Ac-PGP競爭。然后，第三步利用鏈霉親和素AP(鏈霉親和素堿性磷酸酶)標記在樣品中缺乏“游離”Ac-PGP的情況下結合到抗體捕獲線的任何B-AHX-PGP。在另一些實施方式(包括使用側向流作為上文提及試驗的方式)中，可以以側向流方式檢測Ac-PGP?？捎糜诒景l(fā)明中的另一種標志物是N-甲?；娜鏵MLP(N-甲?；?L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-苯丙氨酸)。中性粒細胞通過產(chǎn)生和釋放殺滅細菌的活性氧類和表達吸引其他免疫細胞至感染位點的趨化因子來響應細菌感染。N-甲?；娜鏵MLP(N-甲?；?L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-苯丙氨酸)作為有效的化學引誘物起著重要作用。fMLP源于多種細菌(作為細菌的蛋白加工機制的結果)和/或源于降解的細菌(PAMP)。fMLP也可以在真核細胞線粒體蛋白(例如，“DAMP”)中產(chǎn)生。N-甲?；氖荏w與G-蛋白偶聯(lián)并引發(fā)/傳播人中性粒細胞和其他細胞中的吞噬和促炎癥反應，例如用fMLP刺激后產(chǎn)生活性氧中間體(例如，超氧化物；O2-·)。根據(jù)本發(fā)明，可通過酶免疫分析法(EIA)檢測fMLP。在某些實施方式中，EIA是競爭性試驗。因此，本發(fā)明提供用于檢測尿樣品中fMLP的競爭性酶免疫分析，其包括：(a)使尿樣品與其上為固定化fMLP的免疫分析表面(例如，通過綴合到表面上的白蛋白分子例如卵清蛋白)接觸(b)向樣品中加入與fMLP特異性結合的試劑(例如，抗體，如本文所限定，一個具體實例是CF1573)，所述試劑綴合到酶(例如堿性磷酸酶)(c)移除未結合到免疫分析表面的試劑(d)測量免疫分析表面酶活性的水平作為樣品中fMLP水平的指示。在樣品中缺乏fMLP的情況下，固定在免疫捕獲表面上的fMLP將與所述試劑結合并因此檢測酶活性。隨著樣品中的fMLP水平提高，這些分子將競爭與所述試劑結合并因此降低免疫捕獲表面的酶活性水平。一個優(yōu)選的試劑是綿羊抗-Ac-fMLP抗體CF1573。在一些實施方式中，試劑可以綴合到堿性磷酸酶。圖36中顯示了合適試驗方式的示意圖。圖37中顯示了這種試驗的代表性校準曲線。在一些實施方式中，可以以側向流方式檢測fMLP。炎癥期間彈性蛋白纖維的降解由被稱為彈性蛋白酶的酶引起。中性粒細胞彈性蛋白酶(由活化的中性粒細胞釋放)和MMP12(由肺巨噬細胞釋放)是兩種重要的炎性彈性蛋白酶。鎖鏈素從彈性蛋白上被切下，其是降解過程的分子信號，指示白細胞活性提高或上升。分泌在尿中的鎖鏈素的量與彈性蛋白降解程度直接相關，其繼而指示組織損傷水平。鎖鏈素小至足以穿過腎臟。過量中性粒細胞白細胞活性是加劇的關鍵驅(qū)動因素。發(fā)明人已研發(fā)了鎖鏈素片段試驗以及鎖鏈素試驗。本發(fā)明提供能夠測量鎖鏈素以及仍然附著于彈性蛋白纖維的鎖鏈素的試驗。這種形式依賴于使用針對不同大小的彈性蛋白片段建立的多種抗體，所述彈性蛋白片段來源于用人中性粒細胞彈性蛋白酶切割。根據(jù)本發(fā)明，可通過酶免疫分析法(EIA)檢測鎖鏈素片段。在某些實施方式中，EIA是競爭性試驗。因此，本發(fā)明提供用于檢測尿樣品中鎖鏈素片段的競爭性酶免疫分析，其包括：(a)使尿樣品與其上為固定化鎖鏈素片段的免疫分析表面(例如，通過綴合到表面上的白蛋白分子例如卵清蛋白)接觸(b)加入與樣品中的各鎖鏈素片段特異性結合的一系列試劑(例如，抗體組，如本文所限定，一種具體實例是CF1673、CF1674和CF1675)，每種所述試劑均綴合到酶(例如堿性磷酸酶)(c)移除未結合到免疫分析表面的試劑(d)測量免疫分析表面酶活性的水平作為樣品中鎖鏈素片段水平的指示。在樣品中缺乏鎖鏈素片段的情況下，固定在免疫捕獲表面上的鎖鏈素片段將與所述試劑結合并因此檢測酶活性。隨著樣品中的鎖鏈素片段水平提高，這些分子將競爭與所述試劑結合并因此降低免疫捕獲表面的酶活性水平。一個優(yōu)選的試劑系列是綿羊抗-鎖鏈素片段抗體CF1673、CF1674和CF1675。在一些實施方式中，試劑可各自綴合到堿性磷酸酶。圖38中顯示了合適試驗方式的示意圖。在一些實施方式中，在分開的單獨試驗中使用系列中的各試劑，這在本文中被稱為版本1、版本2和版本3。圖39中顯示了彈性蛋白降解產(chǎn)物的HPLC分析，所述降解產(chǎn)物可被用作免疫原以產(chǎn)生特異性抗體。彈性蛋白片段可以是小彈性蛋白片段。小彈性蛋白片段的分子量通常不大于30000Da，例如介于1000Da和30000Da之間。在一些實施方式中，可以還測量或者單獨測量未與鎖鏈素相連的小彈性蛋白片段。類似地，本發(fā)明提供用于測量大彈性蛋白片段(LEF)的試驗。大彈性蛋白片段表示分子量大于約30000Da的彈性蛋白片段。這種形式依賴于使用針對大彈性蛋白片段建立的多種抗體，所述大彈性蛋白片段來源于用人中性粒細胞彈性蛋白酶切割(也參見圖39)。根據(jù)本發(fā)明，可通過酶免疫分析法(EIA)檢測大彈性蛋白片段。在某些實施方式中，EIA是競爭性試驗。因此，本發(fā)明提供用于檢測尿樣品中大彈性蛋白片段的競爭性酶免疫分析，其包括：(a)使尿樣品與其上為固定化大彈性蛋白片段的免疫分析表面(例如，通過綴合到表面上的白蛋白分子例如卵清蛋白)接觸(b)加入與樣品中的各大彈性蛋白片段特異性結合的一系列試劑(例如，抗體組，如本文所限定，例如CF1669、CF1670和CF1673(均針對LEF純化))，每種所述試劑均綴合到酶(例如堿性磷酸酶)(c)移除未結合到免疫分析表面的試劑(d)測量免疫分析表面酶活性的水平作為樣品中大彈性蛋白片段水平的指示。在樣品中缺乏大彈性蛋白片段的情況下，固定在免疫捕獲表面上的大彈性蛋白片段將與所述試劑結合并因此檢測酶活性。隨著樣品中的大彈性蛋白片段水平提高，這些分子將競爭與所述試劑結合并因此降低免疫捕獲表面的酶活性水平。在一些實施方式中，試劑可各自綴合到堿性磷酸酶。在一些實施方式中，在分開的單獨試驗中使用系列中的各試劑，這在本文中被稱為版本1、版本2和版本3。本發(fā)明的方法依賴于確定尿樣品中至少一種標志物的水平變化。因此，對檢驗樣品和于更早時間點取自同一對象的至少一種尿樣品中的水平進行比較。比較允許確定相較于更早的一種或多種尿樣品，標志物水平是否提高、降低或者沒有變化。本發(fā)明的一個關鍵方面是使炎癥狀態(tài)監(jiān)測個體化以準確鑒定和/或預測加劇的能力。因此，根據(jù)本發(fā)明的所有方面，可參照針對對象調(diào)整的(或個體化的)的標志物閾值水平計算至少一種標志物的提高水平。因此，本發(fā)明可依賴于一種或多種相關標志物的個體化基線水平，閾值是針對該基線水平計算出的。計算可在持續(xù)進行以與檢驗一致。因此，閾值可以是源于波動基線的波動閾值。能夠輕松收集尿樣品極大促進了對逐個對象進行縱向測量的能力。通過利用易于收集的樣品來提供家庭監(jiān)測，預計依從性顯著提高。因此，本發(fā)明依賴于通過隨時間重復檢驗尿樣品來監(jiān)測個體的炎癥狀態(tài)。在該語境中，顯然一種或多種標志物的水平不是必需按絕對方式測定，其可以以絕對方式或相對方式來測量。標志物僅僅必須以允許在不同時間點獲取的尿樣品中比較標志物水平的方式測量。因此，除非另有說明，在說明書全文中應該相應地解釋“水平”。例如，可以相對于參照分析物來測量水平，其中無論加劇狀態(tài)如何，所述參照分析物在尿樣品中均以穩(wěn)定濃度存在。在一些實施方式中，通過測定在更早時間點取自對象的尿樣品中標志物的水平來設置標志物的閾值水平。在其最簡單的形式中，本發(fā)明可依賴于先前取得的尿樣品(即，單個更早時間點)中標志物的水平和檢驗樣品的簡單比較。然而，更早時間點通?？砂ㄔ谂R近(immediatelypreceding)測定目前的尿樣品中標志物水平時的至少兩次，以及還可以的3、4、5、6、7、8、9、10次等更早測量?？山?jīng)數(shù)天或數(shù)周(例如，1、2、3、4、5或6周或更長)取得這些更早測量?？稍诜€(wěn)定疾病期間設置基線以確定起始閾值，進一步的變化是針對所述起始閾值測量的。最初可通過常規(guī)方法鑒定穩(wěn)定疾病。替代性地或者額外地，可在加劇期間設置基線以確定起始閾值，進一步的變化是針對所述起始閾值測量的。最初可通過常規(guī)方法鑒定加劇。當在多個時間點測量標志物水平時，可取這些水平的平均值以提供檢驗樣品的閾值，高于該閾值便預測或鑒定加劇。在一些實施方式中，可參照滑動窗口設置閾值，在所述滑動窗口內(nèi)，標志物水平已被測量以提供基線。閾值水平因此被系統(tǒng)“得知”。其不是固定的閾值，而是針對對象進行調(diào)整，從而考慮到了不預測或指示加劇事件的標志物水平從基線的不顯著波動。因此，閾值可被設置在基線附近以指定允許的標志物水平范圍，超過該范圍即指示水平的統(tǒng)計學顯著提高(或降低)。在存在標志物基線水平漂移的情況下，可以將參數(shù)界限變窄以使得標志物水平的進一步變化被視為顯著。例如，如果基線標志物水平隨時間向上漂移，則被視為已超過閾值(即，是顯著的)可需要較小(相較于基線相對穩(wěn)定的情況)的測量的提高和基線之間的差異。這旨在防止漏掉“緩慢發(fā)病的”加劇。例如，與基線至少5％、10％、15％、20％或更多的差異通?？杀灰暈轱@著。在以下條件下可減小這種差異：已存在多次先前的測量展示出向上或向下的趨勢，但每種情況中向上或向下的量均小于閾值差異。在基線向上或向下漂移的事件中，差異(為了被視為顯著)可因此被減小至至少1％、2％、3％、4％、5％或酌情更多。在一些實施方式中，通過測定在更早時間點(此時對象沒有遭受炎癥加劇)取自對象的尿樣品中標志物的水平來設置標志物的閾值水平?？苫谟^察到統(tǒng)計學上顯著偏離參照非加劇水平設置的基線來預測或鑒定加劇。因此，可在個體基礎上測量穩(wěn)定狀態(tài)水平以提供未來監(jiān)測中用于檢測有意義變化的標準。在另一些實施方式中，至少每周兩次測定至少一種標志物的水平。在一些實施方式中，可至少每周1、2、3、4、5、6次或每天測定標志物水平。為免生疑問，在每種情況下，可在新收集的尿樣品中檢測標志物水平。閾值旨在允許檢測朝向加劇的“漂移”或逐漸移動以及朝向加劇的更突然的狀況衰退二者(通過提高水平的一種或多種標志物反映)。因此，閾值可以是針對對象個體化的波動閾值。對于待檢測的一種或多種標志物的水平，所述閾值允許與基線的任何顯著(即，統(tǒng)計學顯著)偏差，從而指示或預測加劇事件?？舍槍ν粚ο笾霸馐艿募觿∈录{(diào)整或訓練基線和計算出的閾值。可針對由對象獲取的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10次等先前測量設置基線和由其計算出的閾值。如本領域技術人員所充分理解的，可針對更近期的測量來加權閾值。如本文中所詳細討論的，可針對多種標志物設置閾值。因此，可基于與基線的偏差來確定加劇的預測或鑒定，所述基線是根據(jù)測量的多種標志物累加的基線。然而，通常參照標志物特異性基線并針對標志物特異性閾值單獨測量每種標志物。本文顯示：使用多種單獨標志物提高預測或鑒定加劇的能力。這看起來是因為，在不同個體中，利用不同標志物可更準確地預測或鑒定加劇。因此，取決于所應用的單獨標志物(通常是三種或者更多種)，本發(fā)明可依賴于多個波動基線/閾值。所述方法和系統(tǒng)可加權多種標志物的貢獻。因此，在預測或鑒定加劇方面，對于評估多于一種(為2、3、4、5種等)標志物，例如當在相同樣品中測量時，可給予額外的權重。因此，例如，評估2種標志物可預測或鑒定加劇，而評估1種標志物可導致提高的檢驗頻率以更密切地監(jiān)測是否發(fā)生或?qū)l(fā)生加劇。閾值還可用來指導取樣/檢驗頻率。例如，在一些實施方式中，如果檢測到至少一種標志物的水平提高，則提高測定取自對象的尿樣品中至少一種標志物的水平的頻率。這可用來提高預測或鑒定加劇的靈敏度或準確度。例如，頻率可由每周一次或每周兩次提高至每天一次或者從每天一次提高至每天兩次。在某些實施方式中，維持測定取自對象的尿樣品中至少一種標志物的水平的頻率(在提高的水平)直至檢測到至少一種標志物的水平降低。因此，可維持監(jiān)測頻率直至已鑒定或預測加劇。在治療期間也可以維持監(jiān)測頻率(在提高的水平)以監(jiān)測加劇事件的治療效果。在一些實施方式中，在治療期間可進一步提高監(jiān)測頻率(例如，每6小時、8小時或12小時檢測一次)。本發(fā)明可依賴于測定在多個時間點取自對象的尿樣品中多種，例如至少兩種或三種(或4、5、6、7、8、9、10個或更多種)標志物的水平。在一些特定實施方式中，尿樣品中至少一種標志物的水平提高(相對于個體化基線，超過閾值)指示或預測炎癥加劇。在一些實施方式中，尿樣品中至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。當測定多種標志物的水平時，可利用合適的算法來解釋數(shù)據(jù)并應用它來提供預測或鑒定。在一些實施方式中，標志物水平可以相互依賴，因此算法基于這種預測的關系(例如，效應物分子和效應物抑制劑分子之間)。在某些實施方式中，以預定順序分析至少兩種或三種(或更多種)標志物的測定水平以監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)。如本文中進一步解釋和圖中所顯示的，這可產(chǎn)生決策樹以指導進一步的取樣和對象的治療。例如，圖24顯示了合適的檢驗流程，其基于測定效應物抑制劑(TIMP2)、隨后是效應物(MMP活性)、接著是另外的效應物抑制劑標志物(A1AT)的水平。因此，在一些實施方式中，對于給定的樣品，可以依次分析標志物水平直到發(fā)現(xiàn)標志物的水平提高(或者所有標志物已被檢查)。如果檢測到標志物的水平提高，則還可以評估或者可以不評估其他標志物以確定它們的水平是否也提高。在樣品中多種標志物增加的事件中，加劇的可能性可更高，且在給出的結果中算法可對此有體現(xiàn)，例如通過加權觀察結果。因此，可基于相較于閾值有多少標志物的水平提高來對樣品進行“分級”。例如，等級1可指示樣品中只有一種標志物增加，等級2可指示兩種標志物增加等等。等級3或更高等級可預測或鑒定加劇。在一些實施方式中，性別被包含在算法中。如本文中用實驗方法所顯示的，性別可影響使用的標志物和給定算法中應用的水平。在一些實施方式中，效應物分子增加而相應抑制劑分子沒有相應增加可指示加劇的早期預警信號。兩種分子的水平提高可指示早期加劇。抑制劑水平提高且效應物水平降低可指示加劇后期或預測恢復期(的開始)。如果多種標志物增加，則不需要例如進一步取樣即可預測或鑒定加劇(例如，等級3或更高等級)。一種標志物的水平提高可導致檢驗頻率提高，但未必導致立即轉診/治療。在一些實施方式中，至少兩種或三種標志物的測定水平被加權。加權是向多種標志物應用一定程度的相對顯著性的眾所周知的方法。算法可以是本文所述的基于閾值的算法。如已經(jīng)討論過的，在一些實施方式中，通過針對也在尿中測量的參照標志物的水平歸一化來確定至少一種標志物的水平。適用于本發(fā)明中的參照標志物可包括尿肌酸酐或纖維蛋白原。另一些標志物可包括尿體積、傳導率和白蛋白水平。比重和顏色可以是其他歸一化標志物或參照標志物。在一些示例性實施方式中，關于使用至少三種標志物，所述至少三種標志物中每種的水平均提高指示或預測炎癥加劇。如本領域技術人員所容易理解的，這些實施方式原則上可適用于測量尿樣品中2、4、5、6、7、8、9、10種等標志物的情況。在一些特定實施方式中，當指示或預測加劇時，治療對象的加劇。加劇的合適治療在本領域是已知的。它們包括使用吸入劑，所述吸入劑可以是(短效或長效)支氣管擴張劑吸入劑。短效支氣管擴張劑包括β-2激動劑吸入劑，例如柳丁氨醇和特布他林和抗毒蕈堿吸入劑，例如異丙托銨。長效支氣管擴張劑包括β-2激動劑吸入劑，例如沙美特羅和福莫特羅和抗毒蕈堿吸入劑，例如噻托溴銨。也可以使用類固醇或皮質(zhì)類固醇吸入劑。另一些有用的治療劑包括茶堿、粘液溶解劑例如羧甲司坦、抗體和類固醇。可以使用噴霧劑。當通過使用吸入劑不能控制或改善加劇時，可例如使用噴霧劑代替吸入劑。本發(fā)明包括這種監(jiān)測。也可以使用氧療法或無創(chuàng)通氣。也可以酌情采用包含體育鍛煉的康復程序。同樣，本發(fā)明允許監(jiān)測這種程序以確定它們是否在穩(wěn)定病情(對抗加劇)方面具有期望的效果。在一些實施方式中，如果測定到任何標志物的水平均沒有提高，則認為炎癥狀態(tài)穩(wěn)定。在這些情況下，可以維持檢驗頻率(例如，在基線水平)。因此，監(jiān)測包括檢測標志物水平?jīng)]有變化。類似地，一旦已鑒定或預測加劇，標志物水平?jīng)]有變化可指示持續(xù)加劇。進一步提高可指示加劇惡化。在某些實施方式中，如果測定到一種標志物的水平提高，但另外兩種標志物的水平?jīng)]有提高，則提高檢驗頻率。在一些特定實施方式中，除非在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)一種標志物的提高水平回復到非提高水平，否則提高檢驗頻率。所述設定數(shù)目可以是任何合適的數(shù)目。例如，其可以是1、2、3、4或5(或更多)。提高的頻率可以是例如每天一次或每天兩次。在另外的實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則將檢驗頻率回復到原始頻率。原始頻率可以是例如每周一到三次。在一些相關實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則進一步提高檢驗頻率。所述設定數(shù)目可以是任何合適數(shù)目。例如，其可以是1、2、3、4或5(或更多)。進一步提高的檢驗頻率可以例如基于6、8或12小時。在某些實施方式中，如果在頻率提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種(或更多種)標志物的水平維持在提高的水平，則指示或預測炎癥加劇。所述設定數(shù)目可以是任何合適的數(shù)目。例如，其可以是1、2、3、4或5(或更多)。在這些情況下，則可治療患者的加劇。在一些相關實施方式中，如果在頻率提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種(或更多種)標志物的水平回復到非提高水平，則將檢驗頻率回復到提高的(而不是進一步提高的)檢驗頻率。所述設定數(shù)目可以是任何合適的數(shù)目。例如，其可以是1、2、3、4或5(或更多)。因此，本發(fā)明可在一種或多種標志物的水平有翻轉的情況下使得能夠降低監(jiān)測頻率而不達到預測或鑒定加劇。更一般性來說，本發(fā)明允許根據(jù)針對單獨對象生成的數(shù)據(jù)提高和降低檢驗頻率以準確管理患者的炎癥狀態(tài)。在一些特定實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種(或多種)標志物的水平維持在非提高水平，則將檢驗頻率回復到原始頻率。因此，可存在第二次降低至原始檢驗的流程。根據(jù)所有這些示例性實施方式，如果測定到兩種標志物的水平提高，但另一種標志物(或者另外多種標志物，如果使用多于三種標志物的話)的水平?jīng)]有提高，則可提高檢驗頻率。在一些特定實施方式中，將檢驗頻率提高至高于僅檢測到一種標志物的水平提高的情況的頻率。因此，算法可將多種標志物的水平提高歸類為比一種標志物的水平提高潛在地更加危險并相應調(diào)整檢驗頻率。這可以是檢驗頻率的雙重提高。在一些實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，至少一種標志物的水平回復到非提高水平，則將檢驗頻率回復到指示一種標志物的水平測定為提高的檢驗頻率。因此，監(jiān)測可以是靈活的以允許頻率降低至適合評估一種標志物或者與評估一種標志物相稱的水平。然而，在一些實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗(其可以是1、2、3、4或5或更多)內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則再次提高檢驗頻率。這允許監(jiān)測一種標志物的持續(xù)升高。在一些特定實施方式中，如果在頻率提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則指示或預測炎癥加劇。在這些情況下，可治療患者的加劇?；蛘?，如果在頻率提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，兩種標志物的水平維持在提高的水平，則指示或預測炎癥加劇。所述設定數(shù)目可以是任何合適的數(shù)目。例如，其可以是1、2、3、4或5或更多。在這些情況下，可治療患者的加劇。在治療期間可繼續(xù)監(jiān)測對象以評價治療加劇和/或從加劇恢復的效果。這種監(jiān)測可以以提高的水平(例如，每6小時、8小時或12小時一次)繼續(xù)或者可回復到單降低水平(例如，每天兩次或每天一次)或雙重降低水平(例如，每周一次、兩次或三次)。如果觀察到對于所給予的治療沒有響應(即，沒有看到尿樣品中標志物水平降低)，那么可以探索替代治療。因此，本發(fā)明還涉及監(jiān)測加劇事件的治療。因此，本發(fā)明還提供監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自對象的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。該方法優(yōu)選地在家用監(jiān)測系統(tǒng)或工具套裝中實施。因此，本發(fā)明還提供用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包含：a.用于測定尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中是否存在至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高或降低；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。本發(fā)明還涉及用于所述系統(tǒng)或檢驗工具套裝中的相應計算機應用。發(fā)明人已確定了，可通過組合多種尿標志物來獲得特異且靈敏的結果以監(jiān)測或預測PEx事件。因此，本發(fā)明還提供監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自對象的尿樣品中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種標志物的水平，其中尿樣品中至少一種標志物的水平降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。類似地，本發(fā)明還提供用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包含：a.用于測定尿樣品中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中每種標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中是否存在至少一種標志物的水平提高或降低；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種標志物的水平降低指示或預測炎癥加劇。本發(fā)明還涉及用于所述系統(tǒng)或檢驗工具套裝中的相應計算機應用。本文所討論的所有實施方式也適用于本發(fā)明的治療監(jiān)測方面，其中降低指示加劇的成功治療或者從加劇恢復。因此，在這些實施方式中，得出個人閾值的基線可以是在加劇時測量的基線，包括在加劇期間取得的至少一種尿樣品中一種或多種標志物的水平測量。關于進一步的監(jiān)測，尿樣品中至少一種標志物的水平在提高后降低可指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。算法也可以體現(xiàn)本文所討論的效應物和效應物抑制劑分子之間的關系，其中最終通過所有兩種類型的標志物均回到基線水平來指示恢復，但抑制劑增加作為對象對效應物水平提高的響應的一部分是被預期的。在所有這些實施方式中，可以以預定順序分析多種(例如，至少三種)標志物的測定水平以監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)?？梢约訖嘀辽賰煞N或三種(或更多種)標志物的測定水平。在一些特定的本發(fā)明實施方式中，例如上文所概述那些，第一標志物可以是TIMP2(水平/活性)，第二標志物可以是MMP(水平/活性)且第三標志物可以A1AT(水平/活性)。本文關于這三種標志物更詳細描述了合適的算法，但顯然可針對任何標志物組合來調(diào)整算法。本發(fā)明的方法、系統(tǒng)和檢驗工具套裝可以與監(jiān)測炎癥加劇的其他指示物聯(lián)合使用。在一些特定實施方式中，炎癥加劇的另一些指示物包含或選自下述一種或多種：呼吸短促、喘息增加、脈搏率增加、呼吸困難、痰膿增多、痰色加深、咽喉痛、咳嗽增加、感冒和發(fā)燒。類似地，可關于這些額外指示物監(jiān)測治療。可監(jiān)測的另一種指示物是一秒內(nèi)的用力呼氣量(FEV1)。由前所述，顯然本發(fā)明方法的個體化性質(zhì)需要大量計算輸入以相對于基線在連續(xù)或半連續(xù)基礎上限定相關閾值，和針對這些閾值解釋標志物水平。因此，本發(fā)明的方法通常包含合適的軟件以進行相關技術步驟。因此，可使用系統(tǒng)或檢驗工具套裝進行本發(fā)明的方法。特別地，本發(fā)明提供用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包含：a.用于測定尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中是否存在至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高或降低；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。類似地，本發(fā)明提供用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包含：a.用于測定尿樣品中至少三種標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中每種標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中是否存在至少一種標志物的水平提高或降低；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。本發(fā)明還涉及系統(tǒng)和檢驗工具套裝中使用的計算機應用。因此，在某些實施方式中，例如在計算機的語境中，計算機實現(xiàn)的方法、系統(tǒng)和計算機程序產(chǎn)品可具體實現(xiàn)于例如在處理器上操作和執(zhí)行的計算機應用中。當執(zhí)行應用時，其進行相關分析以輸出對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。在本文中使用時，處理器可包含在任何計算機、服務器、嵌入式系統(tǒng)或計算系統(tǒng)內(nèi)。計算機可包括多種內(nèi)部組件或附接的組件例如系統(tǒng)總線、系統(tǒng)內(nèi)存、存儲介質(zhì)、輸入/輸出接口，和用于與網(wǎng)絡通信的網(wǎng)絡接口。計算機可被實現(xiàn)為常規(guī)計算機系統(tǒng)、嵌入式控制器、筆記本電腦、服務器、定制化機器、任何其他硬件平臺(例如，實驗室計算機或裝置)或者其任意組合。例如，計算機器可以是被配置為使用經(jīng)由數(shù)據(jù)網(wǎng)絡或總線系統(tǒng)互連的多個計算機器來工作的分布式系統(tǒng)。處理器可被配置為執(zhí)行代碼或指令以進行本文所描述的操作和功能，管理請求流和地址映射，以及進行計算和生成命令。處理器可被配置為監(jiān)測和控制計算機器中組件的操作。處理器可以是通用處理器、處理器核、多處理器、可重配置處理器、微控制器、數(shù)字信號處理器(“DSP”)、專用集成電路(“ASIC")、圖形處理單元(“GPU”)、現(xiàn)場可編程門陣列(“FPGA”)、可編程邏輯器件(“PLD”)、控制器、狀態(tài)機、門控邏輯、分立的硬件組件、任何其他處理單元或者其任意組合或重復。處理器可以是單個處理單元、多個處理單元、單個處理核、多個處理核、專用處理核、協(xié)同處理器或其任意組合。根據(jù)某些示例性實施方式，處理器連同計算機器的其他組件一起可以是在一個或多個其他計算機器內(nèi)執(zhí)行的虛擬化計算機器。存儲介質(zhì)可選自硬盤、軟盤、壓縮盤只讀存儲器(“CD-ROM”)、數(shù)字多功能盤(“DVD”)、藍光盤、磁帶、閃存、其他非易失性存儲器裝置、固態(tài)驅(qū)動器(“SSD”)、任何磁存儲裝置、任何光學存儲裝置、任何電存儲裝置、任何半導體存儲裝置、任何基于物理的存儲裝置、任何其他數(shù)據(jù)存儲裝置或者其任意組合或重復。存儲介質(zhì)可存儲一個或多個操作系統(tǒng)、應用程序和例如模塊的程序模塊、數(shù)據(jù)或任何其他信息。存儲介質(zhì)可以是計算機器的一部分或者連接到計算機器。存儲介質(zhì)還可以是與計算機器通信的例如服務器、數(shù)據(jù)庫服務器、云存儲、聯(lián)網(wǎng)存儲等的一個或多個其他計算機器的一部分。因此存儲介質(zhì)可為在其上可存儲用于處理器執(zhí)行的指令或代碼的機器或計算機可讀介質(zhì)的實例。機器或計算機可讀介質(zhì)通常可涉及用于向處理器提供指令的任何介質(zhì)或媒體。與模塊關聯(lián)的這種機器或計算機可讀介質(zhì)可包括計算機軟件產(chǎn)品。輸入/輸出(“I/O”)接口可被配置為耦合至一個或多個外部裝置，以從一個或多個外部裝置接收數(shù)據(jù)以及向一個或多個外部裝置發(fā)送數(shù)據(jù)。這種外部裝置連同多種內(nèi)部裝置一起也可被稱為外圍裝置。I/O接口可包括用于在操作上將多種外圍裝置耦合至計算機器或處理器的電連接和物理連接二者。I/O接口可被配置為在外圍裝置、計算機器或處理器之間通信數(shù)據(jù)、地址和控制信號。I/O接口可被配置為實現(xiàn)任何標準接口，諸如小型計算機系統(tǒng)接口(“SCSI”)、串行附接SCSI(“SAS”)、光纖通道、外圍組件互連(“PCI”)、高速PCI(PCIe)、串行總線、并行總線、高級技術附件(“ΑΤΑ”)、串行ATA(“SATA”)、通用串行總線(“USB”)、雷電(Thunderbolt)、火線、多種視頻總線等。I/O接口可被配置為僅實現(xiàn)一個接口或總線技術。或者，I/O接口可被配置為實現(xiàn)多個接口或總線技術。I/O接口可被配置成系統(tǒng)總線的一部分、全部或者與其結合操作。I/O接口可包括一個或多個緩沖器，該緩沖器用于緩沖一個或多個外部裝置、內(nèi)部裝置、計算機器或處理器之間的傳輸。I/O接口可將計算機器耦合至多種輸入裝置，包括鼠標、觸摸屏、掃描儀、電子數(shù)字化儀器、傳感器、接收機、觸摸板、軌跡球、相機、麥克風、鍵盤、任何其他指向裝置或者其任意組合。I/O接口可將計算機器耦合至多種輸出裝置，包括視頻顯示器、揚聲器、打印機、投影儀、觸覺反饋裝置、自動控制、機器人組件、致動器、電機、風扇、螺線管、閥、泵、發(fā)送機、信號發(fā)射器、燈等?？稍诼?lián)網(wǎng)環(huán)境下使用通過網(wǎng)絡接口至橫跨網(wǎng)絡的一個或多個其他系統(tǒng)或計算機器的邏輯連接操作計算機器。網(wǎng)絡可包括廣域網(wǎng)(WAN)、局域網(wǎng)(LAN)、內(nèi)聯(lián)網(wǎng)、互聯(lián)網(wǎng)、無線接入網(wǎng)絡、有線網(wǎng)絡、移動網(wǎng)絡、電話網(wǎng)絡、光網(wǎng)絡或其組合。網(wǎng)絡可以是任何拓撲結構的分組交換、電路交換，并且可使用任何通信協(xié)議。網(wǎng)絡內(nèi)的通信鏈路可涉及多種數(shù)字或模擬通信介質(zhì)，諸如光纖線纜、自由空間光學器件、波導、導電體、無線鏈路、天線、射頻通信等。處理器可通過系統(tǒng)總線連接至本文所討論的計算機器的其他元件或者多種外設。應該理解，系統(tǒng)總線可在處理器之內(nèi)、在處理器之外或者這二者。根據(jù)一些實施方式，本文所討論的處理器、計算機器的其他元件或者多種外設中的任一個可被集成到諸如片上系統(tǒng)(“SOC”)、封裝上系統(tǒng)(“SOP”)或ASIC裝置的單個裝置中。一些實施方式可包括具體實現(xiàn)了本文所描述和示出的功能的計算機程序，其中，計算機程序被實現(xiàn)于計算機系統(tǒng)中，該計算機系統(tǒng)包括存儲在機器可讀介質(zhì)中的指令以及執(zhí)行所述指令的處理器。然而，應顯而易見的是，可存在以計算機編程來實現(xiàn)實施方式的許多不同的方式，并且實施方式不應被解釋為限于任何一種計算機程序指令集合。另外，有經(jīng)驗的程序員將能夠編寫這種計算機程序以實現(xiàn)本文所述的公開的實施方式中的一種或多種。因此，對具體程序代碼指令集合的公開不被認為是對充分理解如何做出和使用實施方式所必須的。另外，本領域技術人員將理解，本文所述實施方式的一個或多個方面可由如可具體實現(xiàn)于一個或多個計算系統(tǒng)中的那樣，通過硬件、軟件或其組合來執(zhí)行。此外，任何提及由計算機執(zhí)行的行為不應被解釋為將由單個計算機來執(zhí)行，因為多于一個的計算機可執(zhí)行該行為。本文所述的一些示例性實施方式能夠與執(zhí)行先前所述方法和處理功能的計算機硬件和軟件一起使用。本文所述系統(tǒng)、方法和過程能夠被具體實現(xiàn)于可編程計算機、計算機可執(zhí)行軟件或數(shù)字電路中。軟件能夠被存儲在計算機可讀介質(zhì)上。例如，計算機可讀介質(zhì)可包括軟盤、RAM、ROM、硬盤、可移除介質(zhì)、閃存、記憶棒、光學介質(zhì)、磁光介質(zhì)、CD-ROM等。數(shù)字電路可包括集成電路、門陣列、邏輯模塊、現(xiàn)場可編程門陣列(FPGA)等。所述方法、系統(tǒng)和檢驗工具套裝可包含用于自動識別和數(shù)據(jù)捕獲(AIDC)的工具，例如射頻識別標簽或卡(RIF)。為免生疑問，上文的本發(fā)明討論適用于本發(fā)明的系統(tǒng)和檢驗工具套裝且可相應地適用于所有實施方式。然而，為了清楚起見和舉例說明上述討論如何直接適用于系統(tǒng)和檢驗工具套裝，以下概述了另外的具體實施方式。系統(tǒng)或檢驗工具套裝可適合對象(尤其是本文所限定的需要監(jiān)測的對象)家用。在一些實施方式中，檢驗系統(tǒng)或工具套裝的形式為便攜式系統(tǒng)。本發(fā)明的系統(tǒng)可基于其的一個示例性系統(tǒng)是AlereTM2可移動檢驗系統(tǒng)。該系統(tǒng)包含分析儀，檢驗盒(testcartidge)被插入所述分析儀中。然后使用者還將樣品收集裝置插入所述分析儀中。分析儀包含全色屏幕以讀取結果。因此，分析儀涵蓋處理器和允許試驗運行的存儲介質(zhì)。檢驗盒代表用于測定尿標志物水平的一個或多個檢驗裝置。本發(fā)明的系統(tǒng)或檢驗工具套裝可包含單獨的樣品收集裝置或者其可被整合到一個或多個檢驗裝置中。在一些特定實施方式中，所述系統(tǒng)或檢驗工具套裝進一步包含處理器輸出顯示器。這旨在給出針對尿樣品進行的試驗的簡單視覺和/或聽覺讀出。顯示器可與運行計算機應用的處理器可操作地連接。在一些實施方式中，輸出或讀出可以是對對象的指示。取決于所應用的算法，合適的讀出可選自“提高/降低檢驗頻率”，其可以達到例如指定的水平或頻率或“訪問專業(yè)人員”或等價用語。輸出可以是由顏色編碼的或用數(shù)字表示的以反映本文所討論的監(jiān)測的多種可能結果。顯示器可提供在樣品中測定的標志物水平并提供合適的訓練和/或文件以輔助使用者解釋數(shù)據(jù)。然而，由于對容易有人為誤差的明顯原因，這不是優(yōu)選的。然而，在一些實施方式中，可存在兩種類型信息的組合。因此，在一些實施方式中，顯示器可呈現(xiàn)定量讀出和定性讀出二者。在一些實施方式中，與預測和鑒定結果有關的概率值也可以作為輸出。一個或多個檢驗裝置可以具有適合家用的任何形式。本文討論了檢測標志物的多種方法且從這種討論中，本領域技術人員將完全能夠確定合適的相應家用裝置的形式。在一些特定實施方式中，一個或多個檢驗裝置包括一次性使用裝置，尿樣品被施加到所述一次性使用裝置上。一個或多個檢驗裝置通常可包含樣品施加區(qū)，樣品被添加在所述樣品施加區(qū)上。一般而言，樣品施加區(qū)可接受相對大的樣品體積，例如，10ml、20ml、30ml、40ml或50ml或更多。裝置通常還包含固體支持物，所述固體支持物限定施加到樣品施加區(qū)的樣品的液體/毛細流動路徑。樣品施加區(qū)可以是固體支持物不可分割的部分。在一些實施方式中，固體支持物可包含色譜介質(zhì)，例如膜材料(例如，硝化纖維素)。施加到樣品施加區(qū)的尿樣品通常使必需試劑再水化以檢測標志物。所述試劑可包括與標志物特異性相互作用的結合試劑或測量活性的效應物分子的底物。另外的試劑可進一步沿著流動路徑被固定化。該試劑可與標志物和結合試劑的復合體結合。結合試劑通常被標記以在標志物和結合試劑的復合體的固定化位點提供信號(通過與另外的試劑結合)。如本領域技術人員所容易理解的，合適的標簽包括熒光標簽、磁性標簽、乳膠或金。結合試劑和另外的試劑通常是(如本文所述的)抗體。因此，在一些特定實施方式中，一個或多個檢驗裝置可包含側流檢驗條。在一些實施方式中，使用單個側流檢驗條以允許檢測試驗樣品中待測定的所有標志物。在另一些實施方式中，對于測定的每種標志物，提供單獨的側流檢驗條。所述裝置還可包括對照區(qū)以確認樣品已令人滿意地穿過裝置。如果情況并非如此，則系統(tǒng)或檢驗工具套裝可例如通過顯示器向使用者指示無效結果。如本文所討論，裝置可充當競爭性試驗或夾心試驗。ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)是可包含在本發(fā)明中所使用的檢驗裝置中的合適試驗方式的一個實例。同樣，用于檢測一種或多種標志物的水平的所有試劑通常被預加載在檢驗裝置上以使得它們能夠與添加到裝置的尿樣品相互作用。這使得干預最小化，因此使得由對象造成的誤差最小化。因此，事實上，裝置可僅需要使用者施加樣品并隨后觀察試驗輸出。所述系統(tǒng)和檢驗工具套裝需要定量讀出以允許隨時間監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)。因此，系統(tǒng)或檢驗工具套裝可包含合適的讀取器以提供定量輸出(連同處理器和存儲介質(zhì))。如已經(jīng)提到的那樣，這種輸出可以是絕對輸出或相對輸出。合適的讀取器可包含照明器以將裝置暴露于特定的一種或多種波長的光；和適合反射光和發(fā)射光的檢測器。裝置還包含合適的處理器和計算機應用以基于檢測的信號輸出對象目前的炎癥狀態(tài)。因此，運行計算機應用的處理器與讀取器可操作地連接?！翱刹僮鞯剡B接”表示允許元件之間的信號或信息交換的功能連接。檢驗裝置可包含一種或多種特異性結合試劑以結合標志物，所述標志物的水平在尿樣品中被檢測。如上文所討論的，當測量蛋白水平時，試劑可包含抗體(包括衍生物、片段和適配子)。當測量RNA水平時，合適的試劑可包含核酸擴增試劑例如引物、探針、dNTP、聚合酶等以允許擴增反應運行和由檢驗裝置報告結果。一個或多個檢驗裝置可包括如上文較詳細討論的酶檢測裝置。這些裝置對于研究(例如效應物分子例如MMP、組織蛋白酶G和HNE的)酶活性可特別有用。一個或多個檢驗裝置可包括用于測量作為蛋白酶活性指示物的肽底物的切割的檢驗裝置。在一些特定實施方式中，檢驗裝置包含：a.用于加入到尿樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含i.包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述蛋白酶活性，若存在的話，切割；和ii.捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；b.用于接收尿樣品的捕獲區(qū)，其中所述捕獲區(qū)包含能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子以固定包含所述新結合位點的指示物分子；和c.能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。當測定樣品中的多個標志物時，所述系統(tǒng)或檢驗工具套裝可包括合適數(shù)量的檢測裝置以使得能夠測定每種標志物。使用不同的平臺檢測標志物時尤其如此。因此，在一些實施方案中，用于測定效應物分子水平的一個或更多個檢測裝置包括一個或更多個側向流活性試驗、ELISAs、熒光底物試驗等等。在一些實施方式中，用于測定效應物抑制劑分子水平的一個或更多個檢測裝置包括一個或更多個側向流活性試驗、ELISAs或競爭性試驗。在一些實施方式中，用于測定信號分子水平的所述一個或更多個檢測裝置包括一個或更多個側向流活性試驗和ELISAs。如上文所討論的，本發(fā)明依賴于個體化的對象閾值，所述閾值可針對對象的基線(例如，基于標志物的對一個標志物的基線)進行計算。因此，在一些實施方式中，計算機應用導致處理器參照針對對象進行調(diào)整的標志物閾值水平計算至少一種標志物的水平。同樣如上文所討論的，基于在更早時間點取自對象的尿樣品中標志物的測定水平來設置標志物閾值水平。這些更早時間點可包含靠近測定目前的尿樣品中標志物水平之前的至少兩次更早測量。因此，可參照滑動窗口設置閾值，在所述滑動窗口內(nèi)，標志物水平已被測量以提供基線。閾值水平因此被系統(tǒng)“得知”。其不是固定的閾值，而是針對對象進行調(diào)整，從而考慮不預測或指示加劇事件的標志物水平偏離基線的不顯著波動。因此，閾值可被設置在基線附近以指定允許的標志物水平范圍，超過該范圍即指示水平的統(tǒng)計學顯著提高(或降低)。在存在標志物基線水平漂移的情況下，可以將參數(shù)界限變窄以使得標志物水平的進一步變化被視為顯著。例如，如果基線標志物水平隨時間向上漂移，則被視為已超過閾值(即，是顯著的)可需要較小的測量的提高和基線之間的差異。這旨在防止漏掉“緩慢發(fā)病的”加劇。可基于在更早時間點(此時對象沒有遭受炎癥加劇)取自對象的尿樣品中標志物的測定水平來設置標志物的閾值水平。這種分析可采用的合適方法在本領域是已知的，其包括波動分析，例如去趨勢波動分析(DFA)或其他形式的線擬合。在某些實施方式中，計算機應用導致處理器指示對象需要測定至少一種標志物的水平。在另一些實施方式中，計算機應用被進一步配置為：當計算出至少一種標志物的水平提高時，從處理器輸出以下要求，所述要求是提高測定取自對象的尿樣品中至少一種標志物的水平的頻率。計算機應用可被進一步配置為：通過處理器輸出以下要求，所述要求是維持提高的測定至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的頻率直到計算出至少一種標志物的水平降低。在一些特定實施方式中，系統(tǒng)或檢驗工具套裝包含一個或多個檢驗裝置，所述檢驗裝置用于測定在多個時間點取自對象的尿樣品中至少兩種或三種標志物的水平。在一些實施方式中，計算機應用被配置為計算至少一種標志物的水平提高和通過處理器提供以下輸出：計算出的至少一種標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。計算機應用可被配置為計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平降低和由處理器提供以下輸出：計算出的至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。在另外的實施方式中，計算機應用可被配置為以預定順序分析至少兩種或三種標志物的計算水平以監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)。正如上文所討論的，可加權標志物。因此，計算機應用可被配置為酌情向至少兩種或三種標志物的測定水平應用和/或計算權重。在一些特定實施方式中，計算機應用被配置為通過針對參照標志物水平(通常也在同一尿樣品中測量)歸一化來計算至少一種標志物的水平。本文討論了合適的參照標志物，其包括尿肌酸酐或纖維蛋白原。另一些標志物可包括例如通過葡糖苷酸睪酮測量的尿體積。比重和顏色可以是其他歸一化標志物或參照標志物。在某些實施方式中，計算機應用被進一步配置為將來自炎癥加劇的另一些指示物的輸入并入對象目前炎癥狀態(tài)的計算中。這些炎癥加劇的另一些指示物可包括呼吸短促、喘息增加、脈搏率增加、呼吸困難、痰膿增多、痰色加深、咽喉痛、咳嗽增加、感冒和發(fā)燒。可監(jiān)測的另一種指示物是一秒內(nèi)的用力呼氣量(FEV1)。因此，計算機應用運行相關算法以能夠監(jiān)測個體，特別是相對于個體化的“波動”閾值。在某些實施方式中，計算機應用被配置為：如果計算出至少2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種標志物中每種的水平均提高，則從處理器輸出炎癥加劇的指示或預測。在一些特定實施方式中，輸出指示對象應該接受治療。在另一些實施方式中，計算機應用被配置為：如果測定到任何標志物的水平均未提高，則從處理器輸出以下指示：炎癥狀態(tài)被視為穩(wěn)定和/或維持檢驗頻率。在一些實施方式中，計算機應用被配置為：如果計算出一種標志物的水平提高，但另外兩種標志物的水平?jīng)]有提高，則從處理器輸出提高檢驗頻率的指示。計算機應用可被配置為：除非在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的提高水平回復到非提高水平，否則從處理器輸出提高檢驗頻率的指示。計算機應用可計算出：在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平是否回復到非提高水平。在一些特定實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到原始頻率。在另外的實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：進一步提高檢驗頻率。在另外的實施方式中，如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：指示或預測炎癥加劇和/或應該治療對象。在一些實施方式中，如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到提高的(而不是進一步提高的)檢驗頻率。在另外的實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到原始頻率(即，檢驗的基線水平)。在一些特定實施方式中，如果測定到兩種標志物的水平提高，但另一種標志物的水平?jīng)]有提高，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：提高檢驗頻率。在這類實施方式中，可將檢驗頻率提高至高于僅檢測到一種標志物的水平提高的情況的頻率。在某些實施方式中，如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，至少一種標志物的水平回復到非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到指示一種標志物的水平測定為提高的檢驗頻率。如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用可產(chǎn)生以下處理器輸出：再次提高檢驗頻率。如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用可產(chǎn)生以下處理器輸出：指示或預測炎癥加劇和/或應該治療對象。在另一些實施方式中，如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，兩種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：指示或預測炎癥加劇和/或應該治療對象。在本發(fā)明中，計算機應用可被配置為：計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平降低和提供以下處理器輸出：計算出至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。為免生疑問，可通過合適的顯示模塊顯示所述所有輸出，所述顯示模塊與處理器/計算機應用可操作地連接。一般而言，計算機應用可被配置為：以預定順序分析至少三種標志物的計算水平以監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)。計算機應用可被配置為：向至少三種標志物的測定水平應用權重。在一些特定實施方式中，第一標志物是TIMP2，第二標志物是MMP活性且第三標志物是A1AT。上文描述了另一些優(yōu)選標志物和活性。附圖描述現(xiàn)在將參照附圖通過例子來描述本發(fā)明，其中：圖1是可用于本發(fā)明中的試驗的四種不同方式的示意圖。每種方式均依賴于相同的基本組分：固體支持物(1)、捕獲分子(2)、含捕獲位點(3)和切割位點(4)的指示物分子以及結合分子(5)，其中僅在切割(6)發(fā)生后，結合分子(5)才能與指示物分子結合。圖2是可用于本發(fā)明中的酶檢測裝置的示意圖，其顯示了在缺乏(圖2A)或存在(圖2B)酶切割活性的情況下裝置的操作。圖3顯示了作為檢驗樣品中MMP活性水平的(圖2中所示的)試驗的視覺讀出提高。圖4是可用于本發(fā)明中的一種酶檢測裝置的示意圖。該圖示出了每個卡組件的準確縱向維度和位置。圖5顯示了合成結構受限的指示物分子的實例。在圖5A中，首先，使用例如固相Fmoc化學方法合成線性肽(1)。該肽可例如通過高效液相色譜法(HPLC)被純化。然后通過支架分子(3)和肽(2)上的巰基之間的反應限制所述肽或使其環(huán)化。該反應產(chǎn)生結構受限的“夾緊的(clipped)”肽(4)。在圖5B中，通過例如在預加載的生物素-PEG樹脂上合成線性肽來合成包括捕獲位點(1)的指示物分子。圖6示意性顯示了本發(fā)明中所使用的結合分子專門與經(jīng)切割的指示物分子結合的能力。在缺乏酶切割活性的情況下，結構受限的指示物分子(1)不與抗體結合分子(2)結合。這種抗體是使用經(jīng)切割的指示物分子(3)作為抗原而生成的，因此其僅與分子的這種“開放”形式結合。圖7(圖7A和7B)展示了：當利用添加了MMP-9的緩沖樣品運行時，用于本發(fā)明中的試驗的靈敏度。利用75μl樣品體積時，MMP-9的檢測極限為約4ng/ml。圖7A顯示了跨越MMP-9的整個濃度范圍的讀取器值，而圖7B是MMP-9濃度在0-15ng/ml之間時的展開圖。圖8展示了：可用于本發(fā)明中的一個試驗的特定版本使用偏向MMP13、MMP12、MMP9、MMP8和MMP2的可切割序列。根據(jù)所需要的應用，本發(fā)明試驗的其他版本可使用具有不同靶標的序列。圖9展示了：在尿樣品中能夠發(fā)現(xiàn)可測量量的活性蛋白酶(尤其是MMP，包括MMP-9)且獲自患呼吸疾病的患者的樣品中存在較高水平。相較于從健康對照收集的樣品，利用COPD樣品(P＝0.03)觀察到顯著差異，CF樣品相對于健康對照觀察到顯著差異(P＝0.01)。圖10是這樣的圖表，其比較了存在或不存在EDTA時，所述試驗檢測MMP活性的能力。該圖表顯示了向傷口樣品中加入EDTA抑制讀出，從而驗證了樣品中MMP的存在并且還驗證了該試驗特異性測量活性MMP。圖11含有這樣的圖表(圖11A和11B)，所述圖表比較了市售活性MMP-9檢驗試劑盒和本發(fā)明所述試驗檢測MMP9活性的能力。圖11A顯示了跨越MMP-9的整個濃度范圍的讀取器值，而圖11B是MMP-9濃度在0-50ng/ml之間時的展開圖。這兩個圖表均展示了本發(fā)明的方法產(chǎn)生更陡的曲線。根據(jù)這兩個試驗，如通過吸光度值所示，在4ng/mlMMP9(所檢測的最低標準)時看到顯色。圖12顯示了使用本發(fā)明的側向流實施方式和ELISA時的MMP9標準曲線。圖13顯示了可用于本文所述指示物分子中的一些支架分子。圖14顯示了可用于本文所述指示物分子中的一些支架分子以及建議的命名。圖15顯示了支架分子到指示物分子的一些連接選項。圖15A顯示了在單個切割位點切割的產(chǎn)物且圖15B顯示了在兩個分離的切割位點切割的產(chǎn)物。圖16顯示了MOL386肽的分析HPLC。圖17是MOL386肽的質(zhì)譜。圖18是用PEG-生物素修飾的MOL386肽的質(zhì)譜。圖19是環(huán)化MOL386肽的質(zhì)譜分析。圖20是用PEG-生物素修飾的環(huán)化MOL386肽的質(zhì)譜分析。圖21顯示了圖1中所示所有組合的MMP9標準曲線。圖22展示了來源于圖21中所示結果的最佳組合的性能。圖23–可用于本發(fā)明中的炎癥生物標志物(包括組合)的指示。標志物根據(jù)炎癥通路被歸類，其反映了表征肺加劇的中性粒細胞活化過程。圖24–基于標志物的MMP/TIMP/A1AT簇，對COPD患者管理而言可行算法。圖25–顯示了在鑒定COPD加劇發(fā)病方面MMP/TIMP/A1AT簇的性能。圖26–顯示了在鑒定從COPD加劇恢復方面MMP/TIMP/A1AT簇的性能。圖27–顯示了在鑒定COPD加劇發(fā)病方面MMP/TIMP/A1AT簇的性能。圖28–顯示了一些個人譜圖的實例。將每個樣品用曲線圖表示為與第一基線(BL)樣品的百分比差異(無標度)。圖29–顯示了用于鑒定肺加劇的多種標志物組合的性能。如通過百分比值所示，額外標志物提高檢測靈敏度。圖30–顯示了用于鑒定肺加劇的多種標志物組合的性能。如通過百分比值所示，額外標志物提高檢測靈敏度。圖31–顯示了用于鑒定肺加劇的多種標志物組合的性能。如通過百分比值所示，額外標志物提高檢測靈敏度。圖32–顯示了當針對肌酸酐水平歸一化從而給出比例時，用于鑒定肺加劇的多種標志物組合的性能。如通過百分比值所示，額外標志物提高檢測靈敏度。圖33–顯示了某些尿標志物在囊性纖維化中的重要性。加劇的特征為MMP和TIMP2水平之間的不平衡。圖34顯示了一種Ac-PGP競爭性EIA試驗的示意圖。圖35展示了利用從1000ng/ml下至15.625ng/ml的標準品，使用Ac-PGP競爭性EIA試驗結合方式獲得的校準曲線。圖36顯示了fMLP競爭性EIA試驗方式的示意圖。圖37展示了利用從50ng/ml下至0.78ng/ml的標準品，使用fMLP競爭性結合方式獲得的校準曲線。圖38是鎖鏈素片段競爭性EIA試驗的示意圖。圖39展示了HPLC分析以顯示通過提高濃度的酶(HNE)分解的整個彈性蛋白(右側峰)的譜圖。圖40顯示了穩(wěn)定樣品相對于加劇樣品中的尿CRP水平。圖41A顯示了CRP、鎖鏈素和IL1β的組合在PEx預測中的性能。圖41B顯示了CRP、鎖鏈素和纖維蛋白原在PEx恢復中的性能。圖42顯示了模型1a的邏輯回歸和ROC曲線。圖43顯示了模型1b的邏輯回歸和ROC曲線。圖44顯示了模型2a的邏輯回歸圖。圖45顯示了模型2b的邏輯回歸圖。圖46顯示了模型2c的邏輯回歸圖。圖47顯示了模型2a、2b和2c的ROC曲線。圖48顯示了組合1的決策樹。圖49顯示了組合2的決策樹。圖50顯示了組合3的決策樹。圖51顯示了組合4的決策樹。圖52顯示了組合5的決策樹。圖53顯示了組合6的決策樹。圖54顯示了組合7的決策樹。圖55顯示了組合8的決策樹。詳細描述和實施例圖1是對于本發(fā)明的性能，特別是測定尿樣品中的效應物分子(尤其是蛋白酶例如MMP)，有用的試驗的四種不同方式的示意圖。每種方式均依賴于相同的基本組分：固體支持物(1)、捕獲分子(2)、含捕獲位點(3)和切割位點(4)的指示物分子以及結合分子(5)，其中僅在切割(6)發(fā)生后，結合分子(5)才能與指示物分子結合。在方式1和4中，捕獲分子(2)是鏈霉親和素。此時，捕獲分子(2)與指示物分子內(nèi)的生物素捕獲位點(3)結合。在方式2和3中，捕獲分子(2)是抗體。此時，捕獲分子(2)與指示物分子內(nèi)的表位捕獲位點(3)結合。表位發(fā)現(xiàn)于源自人絨毛膜促性腺激素(hCG)的替代長肽(ALP)中。一旦將指示物分子加入到檢驗樣品中，存在的特異性識別切割位點(4)的任何酶均可切割指示物分子(6)。該切割事件(6)產(chǎn)生特異性抗體結合分子(5)的結合位點。直到切割(6)發(fā)生，結合分子(5)才能與指示物分子結合。因此，在方式1和3中，抗體結合分子(5)與作為切割GPQGIFGQ序列的結果產(chǎn)生的氨基酸序列GPQG結合。在方式2和4中，另一方面，抗體結合分子(5)與同樣作為切割GPQGIFGQ序列的結果產(chǎn)生的氨基酸序列QGFI結合。在每種方式中，抗體結合分子(5)都不與切割前的GPQGIFGQ序列結合(未示出)。圖2是本發(fā)明中使用的酶檢測裝置的示意圖，其顯示了在尿樣品中缺乏(圖2A)或存在(圖2B)酶切割活性的情況下裝置的操作。檢驗條包括粘合襯墊(1)，裝置的另一些組件組裝在粘合襯墊(1)上。從右至左，樣品施加區(qū)(2)呈吸收墊的形式。其被放置為與綴合物墊(3)部分重疊，綴合物墊(3)浸有標記的結合分子(7)。在一些替代性實施方式中，標記的結合分子可被浸在樣品施加區(qū)中，這消除了對單獨綴合物墊的需要。綴合物墊(3)與硝化纖維素膜(4)處于流動連接。硝化纖維素膜(4)含有限定捕獲區(qū)的固定化的鏈霉親和素分子(5)。膜(4)還包含在捕獲區(qū)下游的固定化的另外的結合分子(6)，其與和樣品一起穿過裝置的另外的標記分子(11)結合從而形成單獨的對照區(qū)。或者，固定化的另外的結合分子可以與標記的結合分子(7)結合。裝置任選地還包含吸收墊(8)以吸收到達裝置末端的任何檢驗樣品和試劑。在使用中，在檢驗樣品與裝置的樣品施加區(qū)(8)接觸之前，將指示物分子(9)加入檢驗樣品中。如圖2A中所示，在檢驗樣品中缺乏酶切割活性時，指示物分子(9)保持切割位點不被切割。樣品流到綴合物墊(3)之后，結合分子(7)不能與指示物分子(9)結合，因為未發(fā)生切割位點的切割。指示物分子通過鏈霉親和素(5)和指示物分子(9)的生物素捕獲位點(10)之間的相互作用結合在捕獲區(qū)。標記的結合分子(7)未被固定在捕獲區(qū)，因為它們不能與指示物分子(9)結合。因此，標記的結合分子穿過對照區(qū)流動并流出。另外的標記分子(11)也穿過裝置達到對照區(qū)，在這里，它們通過與固定化的另外的結合分子(6)結合而被固定。因此，缺乏酶切割活性被展示為僅在對照區(qū)有信號，但在捕獲區(qū)沒有信號?？赡芎袠擞浀慕Y合分子(7)的過量樣品流到吸收墊(8)中。如圖2B中所示，在檢驗樣品中存在酶切割活性時，指示物分子(9)在切割位點被切割。樣品流到綴合物墊(3)之后，結合分子(7)能夠與指示物分子(9)結合，因為已發(fā)生切割位點的切割。指示物分子通過鏈霉親和素(5)和指示物分子(9)的生物素捕獲位點(10)之間的相互作用結合在捕獲區(qū)。標記的結合分子(7)由于在切割位點與指示物分子(9)結合而被固定在捕獲區(qū)。由于標記的結合分子(7)相對于捕獲區(qū)的結合位點相對過量，所以一些標記的結合分子(7)仍然穿過對照區(qū)流動并流出。另外的標記的分子(11)也穿過裝置達到對照區(qū)，在這里，它們通過與固定化的另外的結合分子(6)結合而被固定。因此，可通過在捕獲區(qū)的信號來測量酶切割活性水平(且對照區(qū)將也存在信號)。過量樣品流到吸收墊(8)中，所述過量樣品可能含有不含生物素捕獲位點(10)的指示物分子的切割產(chǎn)物。應該注意的是，對照區(qū)是任選的。尿樣品中的酶切割活性水平可基于在捕獲區(qū)的相應信號的測量來監(jiān)測。圖3顯示了作為檢驗樣品中MMP活性水平的(圖2中所示的)試驗的視覺讀出提高。容易看出，隨著MMP量增加，在對照區(qū)(1)的信號不變。相反，隨著MMP量增加，在捕獲區(qū)(2)的信號也增加。這是由于通過MMP活性在切割位點切割指示物分子。這露出了結合位點，從而使得在捕獲區(qū)(2)檢測的結合分子能夠通過限定捕獲區(qū)的捕獲分子和指示物分子的捕獲位點之間的相互作用而結合。可以測量在捕獲區(qū)的信號強度以提供尿樣品中效應物分子的水平。這可利用合適的讀取器。圖4是可用于本發(fā)明中的一種特定酶檢測裝置的示意圖。下表提供了所述圖的圖例并指定了該特定實施方式中每個卡組件的縱向維度和位置。當然，如本領域技術人員所容易理解的，可以改變縱向維度和位置。圖5顯示了合成結構受限的指示物分子的實例。應該注意的是，額外的連接子或間隔子區(qū)域可包含在切割區(qū)域和連接支架分子的位點之間。在圖5A中，首先，使用例如固相Fmoc化學方法合成線性肽(1)。該肽可例如通過高效液相色譜法(HPLC)被純化。然后通過支架分子(3)和肽(2)上的巰基之間的反應限制所述肽或使其環(huán)化。該反應產(chǎn)生結構受限的“夾緊的”肽(4)。在圖5B中，通過例如在預加載的生物素-PEG樹脂上合成線性肽來合成包括捕獲位點(1)的指示物分子。圖6示意性顯示了本發(fā)明的一些實施方式中所使用的結合分子專門與經(jīng)切割的指示物分子結合的能力。在缺乏酶切割活性的情況下，結構受限的指示物分子(1)不與抗體結合分子(2)結合。這種抗體是使用經(jīng)切割的指示物分子(3)作為抗原而生成的，因此其僅與分子的這種“開放”形式結合。圖13和14顯示了適用于本發(fā)明中的一些支架分子。圖15以示意圖的形式顯示了支架分子到指示物分子的一些連接選項。圖15A顯示了在單個切割位點切割的產(chǎn)物且圖15B顯示了在兩個分離的切割位點切割的產(chǎn)物。圖24展示了本發(fā)明中可使用的算法。這種特定的算法是基于在穩(wěn)定疾病期間和加劇期間取得的尿樣品中觀察到的TIMP-2濃度、MMP活性和A1AT濃度而設計的。該算法還基于在加劇之前、期間和之后觀察到的生物標志物譜和模式的變化。這種特定算法被設計用于理解中性粒細胞衍生蛋白酶和蛋白酶抑制劑保護物(shield)之間平衡的關鍵變化。然而，和這種算法一起應用和開發(fā)的原理明顯適用于本文所述的其他尿標志物和組合。所述算法勝過簡單、有順序地搜索在加劇時分別提高的替代性生物標志物值的原始數(shù)據(jù)分析方法。這種簡單程序是確定何種生物標志物適合被包含在算法中的有用方法，因為在絕大多數(shù)情況下，它們明顯能被組合以通過它們中的一種或另一些在特定檢驗事件中提高來鑒定加劇。在用作加劇指示物時，算法考慮其他一些重要因素，例如：--取樣頻率-當多于一種生物標志物增加時，觀察值的額外加權-由單獨標志物升高引發(fā)的取樣頻率提高-波動的個人生物標志物閾值-當某些限定條件占優(yōu)勢時，接入恰當?shù)淖映绦?。圖24中所示算法考慮了所有這些因素，以提供解釋朝向引發(fā)治療性干預的生物標志物變化的合理工具。算法包含通過穩(wěn)定疾病狀態(tài)下重復檢驗的個人閾值建立，以提供檢測有意義的生物標志物譜變化的堅固標準?？稍谙铝芯幪栱椉现羞M一步限定本發(fā)明：1.監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自所述對象的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇和/或其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。2.根據(jù)項1所述的方法，其中至少一種中性粒細胞活化標志物選自信號分子或效應物/效應物抑制劑分子。3.根據(jù)項2所述的方法，其中所述效應物分子選自蛋白酶活性、中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)(游離的或在復合體中)、鈣網(wǎng)蛋白或髓過氧化物酶(MPO)。4.根據(jù)項3所述的方法，其中所述蛋白酶活性選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性、HNE活性和組織蛋白酶G活性。5.根據(jù)項4所述的方法，其中MMP活性包括MMP9和/或MMP8活性。6.根據(jù)項3-5中任一項所述的方法，其中通過測量肽底物的切割來測定蛋白酶活性。7.根據(jù)項3-6中任一項所述的方法，其中通過下述方法測定蛋白酶活性，所述方法包括：a.使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含i.包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述蛋白酶，若存在的話，切割；和ii.捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；b.向所述檢驗樣品中加入能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；c.在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有所述新結合位點的指示物分子部分；和d.通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的所述指示物分子的新結合位點的結合來檢測所述至少一個切割位點的切割。8.根據(jù)項2-4中任一項所述的方法，其中所述效應物抑制劑分子是蛋白酶抑制劑分子。9.根據(jù)項5所述的方法，其中所述蛋白酶抑制劑分子選自金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)、胱抑素C和α-1抗胰蛋白酶(A1AT)。10.根據(jù)項2所述的方法，其中所述信號分子選自ICAM-1、IL-6、IL-1β、IL-8、N-甲?；?Met-Leu-Phe(fMLP)、IL-6誘導的纖維蛋白原和細胞因子誘導的β-2-微球蛋白(B2M)。11.根據(jù)任何前項所述的方法，其中至少一種中性粒細胞活化標志物包括或進一步包括由于炎癥而產(chǎn)生的分子。12.根據(jù)項5所述的方法，其中所述由于炎癥而產(chǎn)生的分子包括蛋白酶活性的降解產(chǎn)物，例如細胞外基質(zhì)分解產(chǎn)物(例如，Ac-PGP、彈性蛋白片段/肽、鎖鏈素)和/或氧化損傷的產(chǎn)物例如氯化肽和/或代謝物例如乳酸和游離脂肪酸。13.根據(jù)任何前項所述的方法，其中所述炎癥狀態(tài)是肺炎癥狀態(tài)。14.根據(jù)任何前項所述的方法，其中所述炎癥加劇是肺加劇。15.根據(jù)任何前項所述的方法，其中所述對象患有呼吸疾病。16.根據(jù)項15所述的方法，其中所述呼吸疾病是慢性阻塞性肺病(COPD)或囊性纖維化(CF)。17.根據(jù)任何前項所述的方法，其中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高或降低是參照針對所述對象調(diào)整的所述標志物的閾值水平計算的。18.根據(jù)項19所述的方法，其中所述標志物的閾值水平是通過測定在更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的水平來設置的。19.根據(jù)項19所述的方法，其中所述更早時間點包括臨近測定目前的尿樣品中所述標志物水平時的至少兩次更早測量。20.根據(jù)項19或20所述的方法，其中所述標志物的閾值水平是通過測定在所述對象沒有遭受炎癥加劇的更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的水平來設置的，且提高到超過閾值預測或鑒定加劇。21.根據(jù)項19或20所述的方法，其中所述標志物的閾值水平是通過測定在所述對象正遭受炎癥加劇的更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的水平來設置的，且降低到低于閾值預測或鑒定從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。22.根據(jù)任何前項所述的方法，其中至少每周兩次測定至少一種中性粒細胞活化標志物的水平。23.根據(jù)任何前項所述的方法，其中如果檢測到至少一種標志物的水平提高，則提高測定取自所述對象的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的頻率。24.根據(jù)項23所述的方法，其中維持測定取自所述對象的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的頻率直至檢測到至少一種標志物的水平降低。25.根據(jù)任何前項所述的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自所述對象的尿樣品中至少兩種或三種中性粒細胞活化標志物的水平。26.根據(jù)項25所述的方法，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。27.根據(jù)項25或26所述的方法，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。28.根據(jù)項25-27中任一項所述的方法，其中以預定順序分析所述至少兩種或三種標志物的測定水平以監(jiān)測所述對象的炎癥狀態(tài)。29.根據(jù)項25-27中任一項所述的方法，其中加權所述至少兩種或三種標志物的測定水平。30.根據(jù)任何前項所述的方法，其中通過針對參照標志物的水平歸一化來確定至少一種中性粒細胞活化標志物的水平。31.根據(jù)項31所述的方法，其中所述參照標志物包括尿肌酸酐或纖維蛋白原。32.根據(jù)任何前項所述的方法，所述方法還包括監(jiān)測炎癥加劇的其他指示物。33.根據(jù)項32所述的方法，其中所述炎癥加劇的其他指示物包括呼吸短促、喘息增加、脈搏率增加、呼吸困難、痰膿增多、痰色加深、咽喉痛、咳嗽增加、感冒和發(fā)燒。34.用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包括：a.用于測定尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中是否存在至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高或降低；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇和/或其中尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。35.項34所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其還包括處理器輸出顯示器。36.項34或35所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述一個或多個檢驗裝置是一次性使用裝置。37.項34-36中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述一個或多個檢驗裝置包括側向流檢驗條。38.項37所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包括用于所測定的每種標志物的側向流檢驗條。39.項34-38中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中至少一種中性粒細胞活化標志物選自信號分子或效應物/效應物抑制劑分子。40.項39所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述效應物分子選自蛋白酶活性、中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)(游離的或在復合體中)、鈣網(wǎng)蛋白或髓過氧化物酶(MPO)。41.項40所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述蛋白酶活性選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性、HNE活性和組織蛋白酶G活性。42.項41所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中MMP活性包括MMP9和/或MMP8活性。43.項40-42中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述一個或多個檢驗裝置包括測量作為蛋白酶活性指示物的肽底物的切割的檢驗裝置。44.項43所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述檢驗裝置包括：a.用于加入到尿樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含i.包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述蛋白酶活性(若存在的話)切割；和ii.捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；b.用于接收尿樣品的捕獲區(qū)，其中所述捕獲區(qū)包含能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子以固定包含所述新結合位點的指示物分子；和c.能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。45.項39-44中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述效應物抑制劑分子是蛋白酶抑制劑分子。46.項45所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述蛋白酶抑制劑分子選自金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)、胱抑素C和α-1抗胰蛋白酶(A1AT)。47.項39所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述信號分子選自ICAM-1、IL-6、IL-1β、IL-8、N-甲?；?Met-Leu-Phe(fMLP)、IL-6誘導的纖維蛋白原和細胞因子誘導的β-2-微球蛋白(B2M)。48.項34-47中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中至少一種中性粒細胞活化標志物包括或進一步包括由于炎癥而產(chǎn)生的分子。49.項48所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述由于炎癥而產(chǎn)生的分子包括蛋白酶活性的降解產(chǎn)物，例如細胞外基質(zhì)分解產(chǎn)物(例如，Ac-PGP、彈性蛋白片段/肽、鎖鏈素)和/或氧化損傷的產(chǎn)物例如氯化肽和/或代謝物例如乳酸和游離脂肪酸。50.項34-49中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述炎癥狀態(tài)是肺炎癥狀態(tài)。51.項34-50中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述炎癥加劇是肺加劇。52.項34-51中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述對象患有呼吸疾病。53.項34-52中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述呼吸疾病是慢性阻塞性肺病(COPD)或囊性纖維化(CF)。54.項34-52中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用導致所述處理器參照針對所述對象進行調(diào)整的標志物閾值水平計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平。55.項54所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述標志物的閾值水平是基于在更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的測定水平來設置的。56.項55所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述更早時間點包括臨近測定目前的尿樣品中所述標志物水平時的至少兩次更早測量。57.項55或56所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述標志物的閾值水平是基于在所述對象沒有遭受炎癥加劇時的更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的測定水平來設置的，且提高到超過閾值預測或鑒定加劇。58.項55或56所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述標志物的閾值水平是基于在所述對象正遭受炎癥加劇時的更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的測定水平來設置的，且降低到低于閾值預測或鑒定從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。59.項34-58中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用導致所述處理器指示所述對象需要測定至少一種中性粒細胞活化標志物的水平。60.項34-59中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被進一步配置為：當計算出至少一種標志物的水平提高時，從處理器輸出以下要求，所述要求是提高測定取自所述對象的尿樣品中至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的頻率。61.項60所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被進一步配置為：從處理器輸出以下要求，所述要求是維持提高的測定至少一種中性粒細胞活化標志物的水平的頻率直到計算出至少一種標志物的水平降低。62.項34-61中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包括用于測定在多個時間點取自所述對象的尿樣品中至少兩種或三種中性粒細胞活化標志物的水平的一個或多個檢驗裝置。63.項62所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平提高和由處理器提供以下輸出：計算出的至少一種標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇。64.項62或63所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平降低和由處理器提供以下輸出：計算出的至少一種標志物的水平增加后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。65.項62-64中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為以預定順序分析至少兩種或三種標志物的計算水平以監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)。66.項62-65中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為向至少兩種或三種標志物的測定水平應用加權。67.項34-66中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為通過針對參照標志物水平歸一化來計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平。68.項67所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述參照標志物包括尿肌酸酐或纖維蛋白原。69.項34-67中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被進一步配置為將來自炎癥加劇的其他指示物的輸入并入對象目前炎癥狀態(tài)的計算中。70.項69所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述炎癥加劇的其他指示物包括呼吸短促、喘息增加、脈搏率增加、呼吸困難、痰膿增多、痰色加深、咽喉痛、咳嗽增加、感冒和發(fā)燒。71.如項34-70中任一項所限定的計算機應用。72.檢測對象的炎癥狀態(tài)的方法，所述方法包括：測定在多個時間點取自所述對象的尿樣品中至少三種標志物的水平，其中尿樣品中至少一種標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇和/或其中尿樣品中至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。73.根據(jù)項71或72所述的方法，其中至少一種標志物選自信號分子或效應物/效應物抑制劑分子。74.根據(jù)項73所述的方法，其中所述效應物分子選自蛋白酶活性、中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)(游離的或在復合體中)、鈣網(wǎng)蛋白或髓過氧化物酶(MPO)。75.根據(jù)項74所述的方法，其中所述蛋白酶活性選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性、HNE活性和組織蛋白酶G活性。76.根據(jù)項75所述的方法，其中MMP活性包括MMP9和/或MMP8活性。77.根據(jù)項74-76中任一項所述的方法，其中通過測量肽底物的切割來測定蛋白酶活性。78.根據(jù)項74-77中任一項所述的方法，其中通過下述方法測定蛋白酶活性，所述方法包括：a.使指示物分子與檢驗樣品接觸，所述指示物分子包含i.包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述蛋白酶，若存在的話，切割；和ii.捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；b.向所述檢驗樣品中加入能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合；c.在捕獲區(qū)通過所述捕獲區(qū)中的捕獲分子與所述捕獲位點的結合來捕獲含有所述新結合位點的指示物分子部分；和d.通過測定所述結合分子與在所述捕獲區(qū)中捕獲的所述指示物分子的新結合位點的結合來檢測所述至少一個切割位點的切割。79.根據(jù)項73-78中任一項所述的方法，其中所述效應物抑制劑分子是蛋白酶抑制劑分子。80.根據(jù)項79所述的方法，其中所述蛋白酶抑制劑分子選自金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)、胱抑素C和α-1抗胰蛋白酶(A1AT)。81.根據(jù)項73所述的方法，其中所述信號分子選自ICAM-1、IL-6、IL-1β、IL-8、N-甲?；?Met-Leu-Phe(fMLP)、IL-6誘導的纖維蛋白原和細胞因子誘導的β-2-微球蛋白(B2M)。82.根據(jù)項72-81中任一項所述的方法，其中至少一種標志物包括或進一步包括由于炎癥而產(chǎn)生的分子。83.根據(jù)項82所述的方法，其中所述由于炎癥而產(chǎn)生的分子包括蛋白酶活性的降解產(chǎn)物，例如細胞外基質(zhì)分解產(chǎn)物(例如，Ac-PGP、彈性蛋白片段/肽、鎖鏈素)和/或氧化損傷的產(chǎn)物例如氯化肽和/或代謝物例如乳酸和游離脂肪酸。84.根據(jù)項72-83中任一項所述的方法，其中所述炎癥狀態(tài)是肺炎癥狀態(tài)。85.根據(jù)項72-84中任一項所述的方法，其中所述炎癥加劇是肺加劇。86.根據(jù)項72-85中任一項所述的方法，其中所述對象患有呼吸疾病。87.根據(jù)項86所述的方法，其中所述呼吸疾病是慢性阻塞性肺病(COPD)或囊性纖維化(CF)。88.根據(jù)項72-87中任一項所述的方法，其中所述標志物的水平提高或降低是參照針對所述對象調(diào)整的每種標志物的閾值水平計算的。89.根據(jù)項89所述的方法，其中每種標志物的閾值水平均是通過測定在更早時間點取自所述對象的尿樣品中每種標志物的水平來設置的。90.根據(jù)項90所述的方法，其中所述更早時間點包括臨近測定目前的尿樣品中所述標志物水平時的至少兩次更早測量。91.根據(jù)項90或91所述的方法，其中每種標志物的閾值水平均是通過測定在更早時間點(此時所述對象沒有遭受炎癥加劇)取自所述對象的尿樣品中所述標志物的水平來設置的，且提高到超過閾值預測或鑒定加劇。92.根據(jù)項90或91所述的方法，其中所述標志物的閾值水平是通過測定在更早時間點(此時所述對象正遭受炎癥加劇)取自所述對象的尿樣品中所述標志物的水平來設置的，且降低到低于閾值預測或鑒定從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。93.根據(jù)項72-92中任一項所述的方法，其中至少每周兩次測定所述標志物的水平。94.根據(jù)項72-93中任一項所述的方法，其中如果檢測到至少一種標志物的水平提高，則提高測定標志物水平的頻率。95.根據(jù)項94所述的方法，其中維持測定標志物水平的頻率直至檢測到至少一種標志物的水平降低。96.根據(jù)項72-93中任一項所述的方法，其中如果檢測到所述至少三種標志物中每種的水平均提高，則指示或預測所述對象炎癥加劇。97.根據(jù)項96所述的方法，其中治療所述對象的加劇。98.根據(jù)項72-97中任一項所述的方法，其中如果測定到任何標志物的水平均沒有提高，則炎癥狀態(tài)被視為穩(wěn)定和/或維持檢驗頻率。99.根據(jù)項72-98中任一項所述的方法，其中如果測定到一種標志物的水平提高，但另外兩種標志物的水平?jīng)]有提高，則提高檢驗頻率。100.根據(jù)項99所述的方法，其中除非在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的提高水平回復到非提高水平，否則提高檢驗頻率。101.根據(jù)項100所述的方法，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則將檢驗頻率回復到原始頻率。102.根據(jù)項100所述的方法，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則進一步提高檢驗頻率。103.根據(jù)項102所述的方法，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則指示或預測炎癥加劇。104.根據(jù)項103所述的方法，其中治療患者的加劇。105.根據(jù)項102所述的方法，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則將檢驗頻率回復到提高的(而不是進一步提高的)檢驗頻率。106.根據(jù)項105所述的方法，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在非提高水平，則將檢驗頻率回復到原始頻率。107.根據(jù)項72-106中任一項所述的方法，其中如果測定到兩種標志物的水平提高，但另一種標志物的水平?jīng)]有提高，則提高檢驗頻率。108.根據(jù)項107所述的方法，其中將檢驗頻率提高至比僅檢測到一種標志物的水平提高的情況更高的頻率。109.根據(jù)項108所述的方法，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，至少一種標志物的水平回復到非提高水平，則將檢驗頻率回復到指示一種標志物的水平測定為提高的檢驗頻率。110.根據(jù)項109所述的方法，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則再次提高檢驗頻率。111.根據(jù)項110所述的方法，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則指示或預測炎癥加劇。112.根據(jù)項111所述的方法，其中治療患者的加劇。113.根據(jù)項107或108所述的方法，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，兩種標志物的水平維持在提高的水平，則指示或預測炎癥加劇。114.根據(jù)項113所述的方法，其中治療患者的加劇。115.根據(jù)項72-114中任一項所述的方法，其中尿樣品中至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。116.根據(jù)項72-115中任一項所述的方法，其中以預定順序分析至少三種標志物的測定水平以監(jiān)測所述對象的炎癥狀態(tài)。117.根據(jù)項72-116中任一項所述的方法，其中加權至少兩種或三種標志物的測定水平。118.根據(jù)項72-117中任一項所述的方法，其中第一標志物是TIMP2，第二標志物是MMP活性且第三標志物是A1AT。119.根據(jù)任何前項所述的方法，其中通過針對參照標志物的水平歸一化來確定至少一種標志物的水平。120.根據(jù)項119所述的方法，其中所述參照標志物包括尿肌酸酐或纖維蛋白原。121.根據(jù)項72-120中任一項所述的方法，所述方法還包括監(jiān)測炎癥加劇的其他指示物。122.根據(jù)項121所述的方法，其中所述炎癥加劇的其他指示物包括呼吸短促、喘息增加、脈搏率增加、呼吸困難、痰膿增多、痰色加深、咽喉痛、咳嗽增加、感冒和發(fā)燒。123.用于監(jiān)測對象的炎癥狀態(tài)的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包括：a.用于測定尿樣品中至少三種標志物的水平的一個或多個檢驗裝置；b.處理器；和c.包含計算機應用的存儲介質(zhì)，當所述處理器執(zhí)行所述計算機應用時，所述計算機應用被配置為：i.取得和/或計算在一個或多個檢驗裝置上的尿樣品中每種標志物的測定水平；ii.計算尿樣品中是否存在至少一種標志物的水平提高或降低；和iii.從所述處理器輸出所述對象目前的炎癥狀態(tài)，其中尿樣品中至少一種標志物的水平提高指示或預測炎癥加劇和/或其中尿樣品中至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。124.項123所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其還包括處理器輸出顯示器。125.項123或124所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述一個或多個檢驗裝置是一次性使用裝置。126.項123-125中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述一個或多個檢驗裝置包括側向流檢驗條。127.項126所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其包括用于測定的每種標志物的側向流檢驗條。128.項123-127中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中至少一種標志物選自信號分子或效應物/效應物抑制劑分子。129.項128所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述效應物分子選自蛋白酶活性、中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)(游離的或在復合體中)、鈣網(wǎng)蛋白或髓過氧化物酶(MPO)。130.項129所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述蛋白酶活性選自基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性、HNE活性和組織蛋白酶G活性。131.項130所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中MMP活性包括MMP9和/或MMP8活性。132.項129-131中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述一個或多個檢驗裝置包括測量作為蛋白酶活性指示物的肽底物的切割的檢驗裝置。133.項132所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述檢驗裝置包括：a.用于加入到尿樣品中的指示物分子，所述指示物分子包含i.包含至少一個切割位點的切割區(qū)域，所述切割位點能夠被所述蛋白酶活性，若存在的話，切割；和ii.捕獲位點；其中至少一個切割位點的切割產(chǎn)生新結合位點；b.用于接收尿樣品的捕獲區(qū)，其中所述捕獲區(qū)包含能夠與所述指示物分子的捕獲位點結合的捕獲分子以固定包含所述新結合位點的指示物分子；和c.能夠結合到所述新結合位點的結合分子，其中直到切割發(fā)生，所述結合分子才能與所述指示物分子結合。134.項128-133中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述效應物抑制劑分子是蛋白酶抑制劑分子。135.項134所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述蛋白酶抑制劑分子選自金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)、胱抑素C和α-1抗胰蛋白酶(A1AT)。136.項128所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述信號分子選自ICAM-1、IL-6、IL-1β、IL-8、N-甲酰基-Met-Leu-Phe(fMLP)、IL-6誘導的纖維蛋白原和細胞因子誘導的β-2-微球蛋白(B2M)。137.項123-136中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述標志物包括或進一步包括由于炎癥而產(chǎn)生的分子。138.項137所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述由于炎癥而產(chǎn)生的分子包括蛋白酶活性的降解產(chǎn)物，例如細胞外基質(zhì)分解產(chǎn)物(例如，Ac-PGP、彈性蛋白片段/肽、鎖鏈素)和/或氧化損傷的產(chǎn)物例如氯化肽和/或代謝物例如乳酸和游離脂肪酸。139.項123-138中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述炎癥狀態(tài)是肺炎癥狀態(tài)。140.項123-139中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述炎癥加劇是肺加劇。141.項123-140中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述對象患有呼吸疾病。142.項123-141中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述呼吸疾病是慢性阻塞性肺病(COPD)或囊性纖維化(CF)。143.項123-142中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用導致所述處理器參照針對所述對象進行調(diào)整的每種標志物的閾值水平計算所述標志物的水平。144.項143所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中每種標志物的閾值水平均是基于在更早時間點取自所述對象的尿樣品中所述標志物的測定水平來設置的。145.項144所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述更早時間點包括臨近測定目前的尿樣品中所述標志物水平時的至少兩次更早測量。146.項144或145所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中每種標志物的閾值水平均是基于在更早時間點(此時所述對象沒有遭受炎癥加劇)取自所述對象的尿樣品中所述標志物的測定水平來設置的。147.項123-146中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用導致所述處理器指示所述對象需要測定所述標志物的水平，且提高到超過閾值預測或鑒定加劇。148.項123-146所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述標志物的閾值水平是基于在更早時間點(此時所述對象正遭受炎癥加劇)取自所述對象的尿樣品中所述標志物的測定水平來設置的，且降低到低于閾值預測或鑒定從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。149.項123-148中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被進一步配置為：當計算出至少一種標志物的水平提高時，從處理器輸出以下要求，所述要求是提高測定所述標志物水平的頻率。150.項149所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被進一步配置為：從處理器輸出以下要求，所述要求是維持提高的測定所述標志物水平的頻率直到計算出至少一種標志物的水平降低。151.項123-150中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：如果計算出所述至少三種標志物中每種的水平均提高，則從處理器輸出炎癥加劇的指示或預測。152.項151所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述輸出是所述對象應該接受治療的指示。153.項123-150中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：如果測定到任何標志物的水平均未提高，則從處理器輸出以下指示：炎癥狀態(tài)被視為穩(wěn)定和/或維持檢驗頻率。154.項123-153中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：如果計算出一種標志物的水平提高，但另外兩種標志物的水平?jīng)]有提高，則從處理器輸出提高檢驗頻率的指示。155.項154所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：除非在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)一種標志物的提高水平回復到非提高水平，否則從處理器輸出提高檢驗頻率的指示。156.項154所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用計算在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)一種標志物的水平是否回復到非提高水平。157.項156所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到原始頻率。158.項154-157中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：進一步提高檢驗頻率。159.項158所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：指示或預測炎癥加劇和/或應該治療對象。160.項158或159所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平回復到非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到提高的(而不是進一步提高的)檢驗頻率。161.項160所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到原始頻率。162.項123-161中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果測定到兩種標志物的水平提高，但另一種標志物的水平?jīng)]有提高，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：提高檢驗頻率。163.項162所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中將檢驗頻率提高至高于僅檢測到一種標志物的水平提高的情況下的頻率。164.項163所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，至少一種標志物的水平回復到非提高水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：將檢驗頻率回復到指示一種標志物的水平測定為提高的檢驗頻率。165.項164所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用可產(chǎn)生以下處理器輸出：再次提高檢驗頻率。166.項165所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，一種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用可產(chǎn)生以下處理器輸出：指示或預測炎癥加劇和/或應該治療對象。167.項162或163所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中如果在頻率已提高的另外設定數(shù)目的重復檢驗內(nèi)，兩種標志物的水平維持在提高的水平，則計算機應用產(chǎn)生以下處理器輸出：指示或預測炎癥加劇和/或應該治療對象。168.項123-167中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：計算至少一種中性粒細胞活化標志物的水平降低和提供以下處理器輸出：計算出至少一種標志物的水平在提高后降低指示或預測從炎癥加劇恢復或者炎癥加劇的成功治療。169.項123-168中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：以預定順序分析至少三種標志物的計算水平以監(jiān)測所述對象的炎癥狀態(tài)。170.項123-169中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：向至少三種標志物的測定水平應用加權。171.項123-170中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中第一標志物是TIMP2，第二標志物是MMP活性且第三標志物是A1AT。172.項123-171中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被配置為：通過針對參照標志物的水平歸一化來計算至少一種標志物的水平。173.項172所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述參照標志物包括尿肌酸酐或纖維蛋白原。174.項123-173中任一項所述的系統(tǒng)或檢驗工具套裝，其中所述計算機應用被進一步配置為：將來自炎癥加劇的其他指示物的輸入并入對象目前炎癥狀態(tài)的計算中。175.根據(jù)項174所述的方法，其中所述炎癥加劇的其他指示物包括呼吸短促、喘息增加、脈搏率增加、呼吸困難、痰膿增多、痰色加深、咽喉痛、咳嗽增加、感冒和發(fā)燒。176.如項123-175中任一項所限定的計算機應用。這些項中所討論的本發(fā)明也可應用于另外的標志物。實例包括CRP、LEF和CC16，其可與本文所述的任何其他特異性標志物組合應用。參照以下實驗實施例能夠進一步理解本發(fā)明。實施例實施例1：本發(fā)明中用于檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的側向流平臺工具套裝包括以下組分：-1)用于尿樣品收集的裝置2)側向流檢驗條，其安裝在塑料盒中。檢驗條具有包含聚鏈霉親和素的捕獲區(qū)作為跨越檢驗條的流動路徑的第一檢驗線。作為跨越檢驗條的流動路徑的對照線，位于檢驗線下游的包含吸附的抗-雞抗體的第二捕獲區(qū)可作為對照線被包括。塑料盒中存在觀察窗，通過所述觀察窗觀看檢驗線和對照線。在第一檢驗線上游還存在整合的樣品接收墊。此外，檢驗條含有攜帶綿羊抗體(CF1522)的金顆粒，所述金顆粒被干燥進入所述檢驗條中樣品接收墊的下游，其可通過添加樣品而被重建。3)管，其中可放置樣品收集裝置，和指示分子4)含可切割序列的指示物分子，在該實施例中，所述可切割序列是(GPQGIFGQ)，所述指示物分子帶有通過聚乙二醇間隔子/連接子連接的末端生物素基團，這允許其與捕獲線聚鏈霉親和素形成復合體。檢驗條如下文所述構建用于檢測樣品中蛋白酶活性的檢驗條。試驗基于：在存在多種MMP的情況下切割指示物分子以將表位暴露，其對綴合到金顆粒的綿羊抗體(CF1522)可見。使用的方法均依照本領域熟知的標準程序。A.制備CF1522:40nm金綴合物使親和純化的綿羊抗體CF1522(IgInnovations,CF1522)以一定濃度綴合到40nm金顆粒上，所述濃度在520nm下產(chǎn)生OD＝5(BBIInternational,GC40)。在pH＝7.8的20mMBES緩沖液中以15μg/ml的濃度裝載抗體。0.2％BSA(Sigma,A7906)被用作封閉液以使非特異性結合最小化。B.制備浸漬金的綴合物墊利用Isoflow分配器(噴射高度為15mm)以0.8μl/mm將于金干燥緩沖液(1MTris，150mM氯化鈉，20mM疊氮化鈉，3％BSA,5％蔗糖，1％Tween20，pH＝9.4)中稀釋的OD＝4的CF1522:40nm金綴合物(Mologic)噴在玻璃纖維綴合物墊(Millipore,G041,17mm×300mm)上。在60℃、速度為5mm/秒的隧道式干燥機中干燥經(jīng)處理的綴合物條帶。在室溫下，將經(jīng)干燥的浸漬金綴合物的綴合物墊干燥儲存在帶有干燥劑的密封箔袋中。C.制備浸漬抗體的硝化纖維素膜以0.1μl/mm的分配速率將所有試劑劃線(striped)在UnistartCN140膜(Sartorius,CN140,25mm×300mm)上。將濃度為1mg/ml的檢驗線聚鏈霉親和素(BBI,PolystrepN01041048K)置于距離膜基部7mm。在60℃、速度為10mm/秒的隧道式干燥機中干燥經(jīng)處理的膜。在室溫下，將經(jīng)干燥的浸漬抗體的硝化纖維素膜儲存在帶有干燥劑的密封箔袋中。D.卡組裝根據(jù)以下程序并依照圖4組裝檢驗卡，圖4指定了每個卡組件的準確縱向維度和位置?！?.將圖4中標示為1的帶有釋放襯里保護的粘合劑的60×300mm透明塑料膜(充當背部層壓材料)(G&LPrecisionDieCutting,GL-48077)放置在工作臺上。剝落釋放襯里以暴露粘合劑?！?.使反應膜(如在部分C中制備)附著在封底的粘合劑側之上，距離下端20mm。·3.使浸漬的綴合物墊(如在部分B中制備)附著在封底之上，在反應膜上重疊2mm?！?.將樣品墊(MDI,FR-1,10×300mm)放置在封底之上，在綴合物墊上重疊5mm?！?.將吸收墊(凝膠印跡紙,Ahlstrom,等級為222,22×300mm)放置在封底上側之上，在反應膜上重疊2mm。使用自動化模壓切割機(Kinematic,2360)將卡修剪成5mm寬的條并組裝到塑料罩(Forsite)中。使用在Mologic為裝置特別制造的氣動裝置夾具關閉這些裝置。下表列出了襯背卡上的條組件和各自的位置。組件尺寸從基準點的位置襯背卡(1)60mm0mm硝化纖維素膜(2)25mm20mm綴合物墊(3)17mm5mm樣品墊(4)10mm0mm吸收墊(5)22mm38mm制備含不同濃度(從1000ng/ml下至1ng/ml)的活性MMP-9(AlereSanDiego)的緩沖標準品。第一步：將每種標準品放置在含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的液體滴到樣品接收墊上，所述樣品接收墊隨后與綴合物墊接觸并使經(jīng)干燥的附著到金顆粒的CF1522抗體再水化。完整的指示物分子不被金綴合物識別并以未復合狀態(tài)朝向聚鏈霉親和素檢驗線遷移，在聚鏈霉親和素檢驗線中，其通過與指示物分子相連的生物素被固定化。樣品中存在的任何MMP-9在切割位點切割指示物分子，暴露可識別的表位，從而允許金綴合物與經(jīng)切割的殘余部分形成復合物。通過所形成線的相對強度來評估這些線。檢驗線的存在指示檢驗樣品中存在蛋白酶。無檢驗線指示蛋白酶的水平為0或者低于檢測極限的低蛋白酶水平。這些極端情況之間的級別指示檢驗樣品中不同水平的蛋白酶。通過視覺以及利用Forsite側向流裝置讀取器測量形成的有色線的強度。等級為0-10的半定量評分系統(tǒng)被用于視覺讀取，其中1是最低的可檢測顏色強度且10是最高的觀察的顏色強度。圖7(圖7A和7B)展示了：利用添加了MMP-9的緩沖樣品運行時試驗的靈敏度。利用75μl樣品體積時，MMP-9的檢測極限為約4ng/ml。圖7A顯示了跨越MMP-9的整個濃度范圍的讀取器值，而圖7B是MMP-9濃度在0-15ng/ml之間時的展開圖。讀取器單位展示于下表，其中高于400的值被視為陽性結果：實施例2：側向流方式的本發(fā)明中所用試驗的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)特異性如關于實施例1所述進行工具套裝和檢驗條合成。在緩沖液(pH＝8.0的50mMTris、150mM氯化鈉、20mM疊氮化鈉、1％體積/體積Tween20的水溶液)以0.5μg/ml制備多種MMP(Enzo)。第一步：將每種MMP溶液放置在含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的液體滴到樣品接收墊上，所述樣品接收墊隨后與綴合物墊接觸并使經(jīng)干燥的附著到金顆粒的CF1522抗體再水化。完整的指示物分子不被金綴合物識別并以未復合狀態(tài)朝向聚鏈霉親和素檢驗線遷移，在聚鏈霉親和素檢驗線中，其通過與指示物分子相連的生物素被固定化。樣品中存在的任何MMP-9在切割位點切割指示物分子，暴露可識別的表位，從而允許金綴合物與經(jīng)切割的殘余部分形成復合物。通過所形成線的相對強度來評估這些線。檢驗線的存在指示檢驗樣品中存在蛋白酶。無檢驗線指示蛋白酶的水平為0或者低于檢測極限的低蛋白酶水平。這些極端情況之間的級別指示檢驗樣品中不同水平的蛋白酶。通過視覺以及利用Forsite側向流裝置讀取器測量形成的有色線的強度。等級為0-10的半定量評分系統(tǒng)被用于視覺讀取，其中1是最低的可檢測顏色強度且10是最高的觀察的顏色強度。圖8展示了：本發(fā)明的這種版本使用偏向MMP13、MMP12、MMP9、MMP8和MMP2的可切割序列。根據(jù)所需要的應用，本發(fā)明的另一些版本可使用具有不同靶標的序列。下表顯示了每種所檢驗MMP的讀出值：實施例3：檢測尿中的酶活性如對實施例1所述進行工具套裝和檢驗條合成。從健康志愿者(9)和患有呼吸疾病的患者收集樣品。樣品由9個患囊性纖維化(CF)的患者和7個患慢性阻塞性肺病(COPD)的患者捐獻并儲存在-80℃下直至使用。第一步：將每種樣品放置在含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的液體滴到樣品接收墊上，所述樣品接收墊隨后與綴合物墊接觸并使經(jīng)干燥的附著到金顆粒的CF1522抗體再水化。完整的指示物分子不被金綴合物識別并以未復合狀態(tài)朝向聚鏈霉親和素檢驗線遷移，在聚鏈霉親和素檢驗線中，其通過與指示物分子相連的生物素被固定化。樣品中存在的任何MMP-9在切割位點切割指示物分子，暴露可識別的表位，從而允許金綴合物與經(jīng)切割的殘余部分形成復合物。通過所形成線的相對強度來評估這些線。檢驗線的存在指示檢驗樣品中存在蛋白酶。無檢驗線指示蛋白酶的水平為0或者低于檢測極限的低蛋白酶水平。這些極端情況之間的級別指示檢驗樣品中不同水平的蛋白酶。通過視覺以及利用Forsite側向流裝置讀取器測量形成的有色線的強度。等級為0-10的半定量評分系統(tǒng)被用于視覺讀取，其中1是最低的可檢測顏色強度且10是最高的觀察的顏色強度。圖9展示了：在尿樣品中能夠發(fā)現(xiàn)可測量量的活性蛋白酶(尤其是MMP，包括MMP-9)且獲自患呼吸疾病的患者的樣品中存在更高水平。相較于從健康對照收集的樣品，觀察到COPD樣品的顯著差異(P＝0.03)，以及CF樣品相對于健康對照的顯著差異(P＝0.02)。實施例4：檢測傷口流液中的酶活性如實施例1所述進行工具套裝和檢驗條合成。在最終ELTABA裝置上檢驗來自18個患者的傷口樣品以測量該生物基質(zhì)中的活性MMP。在MMP緩沖液(pH＝8.0的50mMTris、100mM氯化鈉、10mM氯化鈣、50μM20mM氯化鋅、0.025％Brij35、0.05％疊氮化鈉的水溶液)從棉簽(Copan,552C.US)提取樣品，然后冷凍在-20℃直至使用。螯合劑(5mMEDTA)的添加決定了裝置對鈣依賴型酶例如MMP的特異性。第一步：在MMP緩沖液中以1:20稀釋每種傷口樣品，然后取75μl置于含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的液體滴到樣品接收墊上，所述樣品接收墊隨后與綴合物墊接觸并使經(jīng)干燥的附著到金顆粒的生物素再水化。完整的指示物分子不被金綴合物識別并以未復合狀態(tài)朝向聚鏈霉親和素檢驗線遷移，在聚鏈霉親和素檢驗線中，其通過與指示物分子相連的生物素被固定化。樣品中存在的任何MMP-9在切割位點切割指示物分子，暴露可識別的表位，從而允許金綴合物與經(jīng)切割的殘余部分形成復合物。通過所形成線的相對強度來評估這些線。檢驗線的存在指示檢驗樣品中存在蛋白酶。無檢驗線指示蛋白酶的水平為0或者低于檢測極限的低蛋白酶水平。這些極端情況之間的級別指示檢驗樣品中不同水平的蛋白酶。通過視覺以及利用Forsite側向流裝置讀取器測量形成的有色線的強度。等級為0-10的半定量評分系統(tǒng)被用于視覺讀取，其中1是最低的可檢測顏色強度且10是最高的觀察的顏色強度。圖10顯示了：向傷口樣品中加入EDTA抑制讀出，從而驗證了樣品中MMP的存在并且還驗證了該試驗特異性測量活性MMP。實施例5：比較本發(fā)明的靈敏度與商業(yè)MMP-9活性試驗試劑盒的靈敏度商業(yè)試劑盒被設計用于特異性檢測生物樣品中的MMP-9，所述生物樣品例如培養(yǎng)基、血清、血漿、滑液和組織勻漿。首先使用單克隆抗-人MMP從混合物中拉下MMP的前形式和活性形式二者，然后利用熒光共振能量轉移(FRET)肽對MMP9的活性進行定量。使AMPA內(nèi)部活化的MMP-9標準品在試劑盒和側向流方式二者上在250ng/ml–4ng/ml的范圍中運行。對于商業(yè)試驗，在試劑盒中所提供的MMP緩沖液中稀釋MMP-9；對于側向流裝置，在Tris緩沖鹽水1％Tween20中稀釋MMP-9。如實施例1所述進行側向流工具套裝和檢驗條合成。在Tris緩沖鹽水1％Tween(pH＝8.0的50mMTris、150mM氯化鈉、20mM疊氮化鈉、1％體積/體積Tween20的水溶液)中制備含不同濃度(從250ng/ml下至4ng/ml)的活性MMP-9(AlereSanDiego)的緩沖標準品。第一步：將每種標準品放置在含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的液體滴到樣品接收墊上，所述樣品接收墊隨后與綴合物墊接觸并使經(jīng)干燥的附著到金顆粒的CF1522抗體再水化。完整的指示物分子不被金綴合物識別并以未復合狀態(tài)朝向聚鏈霉親和素檢驗線遷移，在聚鏈霉親和素檢驗線中，其通過與指示物分子相連的生物素被固定化。樣品中存在的任何MMP-9在切割位點切割指示物分子，暴露可識別的表位，從而允許金綴合物與經(jīng)切割的殘余部分形成復合物。通過所形成線的相對強度來評估這些線。檢驗線的存在指示檢驗樣品中存在蛋白酶。無檢驗線指示蛋白酶的水平為0或者低于檢測極限的低蛋白酶水平。這些極端情況之間的級別指示檢驗樣品中不同水平的蛋白酶。通過視覺以及利用Forsite側向流裝置讀取器測量形成的有色線的強度。等級為0-10的半定量評分系統(tǒng)被用于視覺讀取，其中1是最低的可檢測顏色強度且10是最高的觀察的顏色強度。圖11(圖11A和11B)是這樣的圖表，所述圖表比較了市售活性MMP-9檢驗試劑盒和本發(fā)明所述試驗檢測MMP9的能力。圖11A顯示了跨越MMP-9的整個濃度范圍的讀取器值，而圖11B是MMP-9濃度在0-50ng/ml之間時的展開圖。這兩個圖表均證實了本文所述的側向流試驗對根據(jù)本發(fā)明的尿檢驗特別有用且產(chǎn)生更陡的曲線。根據(jù)這兩個試驗，通過吸光度值所示，在4ng/mlMMP9(最低檢測標準)時看到顯色。下表顯示了每個試驗的數(shù)值讀出：實施例6：ELISA和LF兩種方式的底物檢驗ELISA方式1)樣品(例如，尿)收集裝置2)包被有聚鏈霉親和素的96孔板3)管，其中可放置樣品收集裝置，和指示分子4)含可切割序列的指示物分子，在該實施例中，所述可切割序列是(GPQGIFGQ)，所述指示物分子帶有通過聚乙二醇間隔子/連接子連接的末端生物素基團，這允許其與捕獲線聚鏈霉親和素形成復合體5)綴合到堿性磷酸酶(AP)的綿羊抗體CF15226)堿性磷酸酶底物對硝苯磷酸(pNPP)，其使得能夠產(chǎn)生可溶性黃色反應產(chǎn)物，所述反應產(chǎn)物可在405nm處讀取。從健康志愿者(9)和患有呼吸疾病的患者處收集樣品。樣品由9個患囊性纖維化(CF)的患者和7個患慢性阻塞性肺病(COPD)的患者捐獻并儲存在-80℃下直至使用。第一步：將每種樣品放置在含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的樣品添加到鏈霉親和素板(Nunc，442404)上并在環(huán)境溫度中孵育另外1小時，其中生物素標記的指示物分子通過結合到板上的鏈霉親和素被固定化。第三步：用洗滌緩沖液中100μlTris緩沖鹽水0.1％Tween(pH＝8.0的50mMTris、150mM氯化鈉、20mM疊氮化鈉、0.1％體積/體積Tween20的水溶液)洗滌板3次。第四步：在PBST中的1％BSA中，以1:500稀釋CF1522-AP(Mologic)，然后在周圍環(huán)境中在板上孵育1小時。抗體將與經(jīng)切割的殘余部分形成復合體，所述經(jīng)切割的殘余部分是通過樣品中所存在的任何MMP暴露的；當不存在經(jīng)切割的殘余部分時，將不存在抗體的結合。第五步：用洗滌緩沖液中100μlTris緩沖鹽水0.1％Tween(pH＝8.0的50mMTris、150mM氯化鈉、20mM疊氮化鈉、0.1％體積/體積Tween20的水溶液)洗滌板3次。第六步：將板與pNPP底物一起孵育，在37℃下孵育30分鐘后，在405nm下讀取。MMP9標準曲線被示于圖14b中用作參照?？椎念伾甘緳z驗樣品中蛋白酶的不同水平，所述水平由圖14b中的OD405nm表示。側向流方式如實施例1所述進行工具套裝和檢驗條合成。對于ELISA和側向流裝置，分別制備含不同濃度(從50ng/ml下至0.39ng/ml以及從62.5ng/ml下至0.97ng/ml)的活性MMP-9(AlereSanDiego)的緩沖標準品。第一步：將每種樣品放置在含有確定量肽(25ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，10分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的液體滴到樣品接收墊上，所述樣品接收墊隨后與綴合物墊接觸并使經(jīng)干燥的附著到金顆粒的CF1522抗體再水化。完整的指示物分子不被金綴合物識別并以未復合狀態(tài)朝向聚鏈霉親和素檢驗線遷移，在聚鏈霉親和素檢驗線中，其通過與指示物分子相連的生物素被固定化。樣品中存在的任何MMP-9在切割位點切割指示物分子，暴露可識別的表位，從而允許金綴合物與經(jīng)切割的殘余部分形成復合物。通過所形成線的相對強度來評估這些線。檢驗線的存在指示檢驗樣品中存在蛋白酶。無檢驗線指示蛋白酶的水平為0或者低于檢測極限的低蛋白酶水平。這些極端情況之間的級別指示檢驗樣品中不同水平的蛋白酶。通過視覺以及利用NES側向流裝置讀取器測量形成的有色線的強度。在圖12中可看到MMP9標準曲線的結果。圖12證明了：通過ELISA和側向流產(chǎn)生的兩種MMP9標準曲線相似，靈敏度下及4ng/ml。下表顯示了來自兩個試驗的數(shù)值讀出：實施例7：合成示例性指示物分子使用Fmoc化學方法在固相上合成稱為MOL386的肽(氨基酸序列CGPQGIFGQC)。簡而言之，在微波輔助自動化合成儀(CEMLiberty)上進行合成。在DMF溶劑中，利用五倍過量的氨基酸結構單元、HBTU活化劑和十倍過量的DIPEA堿，在預裝載Fmoc-Cys(Trt)的PEG-聚苯乙烯樹脂上進行偶聯(lián)步驟。在5％的哌嗪/DMF中進行去保護步驟。干燥完成的肽樹脂，然后使用95％TFA、2.5％TIPS和2.5％水切割其2小時。將TFA液劑在真空中干燥并在醚中沉淀以提供無色的肽固體。將回收的肽從50％乙腈冷凍干燥并使用C18反相柱和從5％乙腈/水(0.1％TFA)到100％乙腈(0.1％TFA)的梯度通過HPLC(圖16)純化。將分離的級分合并并冷凍干燥，然后通過電噴霧質(zhì)譜(圖17)分析以鑒定靶標肽(預期MH+為1010.17，測量到1010.3)。從預裝載的生物素-PEG-Nova標簽樹脂(Merck)合成生物素化形式(CGPQGIFGQC-PEG-生物素)(預期MH+為1438.76，測量到1439.7，圖18)。生物素為指示物分子的固定化提供捕獲位點。連接支架分子(合成環(huán)化肽)將肽(1mg)和1mg1,3-二溴甲苯溶解在250ulPBS中并溫和攪動過夜。然后將反應用1ml水稀釋并直接注射到HPLC上用于純化，其中使用C18反相柱和從5％乙腈/水(0.1％TFA)到100％乙腈(0.1％TFA)的梯度。將產(chǎn)物峰分離并冷凍干燥以提供無色固體(預期MH+為1112.30，測量到1112.8，圖19)。對于生物素化的肽(預期MH+為1540.89，測量到1539.8，圖20)，使用相同程序。實施例8–生成檢驗方式生成抗體以識別經(jīng)切割的肽序列。在該實施方式中，在免疫分析中使用MMP消化的靶標(GPQGIFGQ)以測量臨床樣品中的酶活性。使用本領域技術人員已知的方法針對肽KLH綴合物建立抗體。生成綿羊抗體CF1522和CF1523以識別經(jīng)切割的殘余部分‘IFGQ’，生成綿羊抗體CF1524和CF1525以識別經(jīng)切割的殘余部分‘GPQG’。使用特異性肽親和純化抗體，其中抗體是針對所述特異性肽建立的，然后通過ELISA分析以確定給出最佳靈敏度的最合適試驗方式。利用附著在C-末端(分別為MOL038和PCL008-A2)或N-末端(分別為MOL310和MOL378)的聚乙二醇化生物素或生物素合成含可切割序列(GPQGIFGQ)的肽。肽可通過生物素錨定到鏈霉親和素捕獲物或者通過ALP序列錨定到綿羊抗體CF1060捕獲物。評估了圖1中圖示的建議方式。ELISA方式1)尿樣品收集裝置2)96孔板，其用聚鏈霉親和素(Nunc,442404)或CF1060包被并在周圍環(huán)境中過夜(Nunc,Maxisorb)3)管，其中可放置樣品收集裝置，和指示分子4)含可切割序列的指示物分子，在該實施例中，所述可切割序列是(GPQGIFGQ)，所述指示物分子帶有可通過聚乙二醇間隔子/連接子連接在N-末端或C-末端的末端生物素基團5)綴合到堿性磷酸酶(AP)的綿羊抗體CF1522、CF1523、CF1524和CF15256)堿性磷酸酶底物對硝苯磷酸(pNPP)，其使得能夠產(chǎn)生可溶性黃色反應產(chǎn)物，所述反應產(chǎn)物可在405nm處讀取。在MMP緩沖液(pH＝8.0的50mMTris、100mM氯化鈉、10mM氯化鈣、50μM20mM氯化鋅、0.025％Brij35、0.05％疊氮化鈉的水溶液)中，將活性MMP9(AlereSanDiego)稀釋至2μg/ml、0.25μg/ml、0.062μg/ml、0.0156μg/ml和0.039μg/ml。第一步：將每種MMP9標準品放置在含有確定量的每種肽(20ng/檢驗)的收集裝置中。劇烈旋轉收集裝置以使樣品與底物溶液充分混合。在環(huán)境溫度下孵育這種反應混合物持續(xù)確定的時間段(例如，30分鐘)。第二步：在孵育期結束時，將確定體積的樣品添加到鏈霉親和素板和CF1060敏化板上并在周圍環(huán)境中孵育另外1小時，其肽通過結合到板上的鏈霉親和素或CF1060被固定化。第三步：用洗滌緩沖液中100μlTris緩沖鹽水0.1％Tween(pH＝8.0的50mMTris、150mM氯化鈉、20mM疊氮化鈉、0.1％體積/體積Tween20的水溶液)洗滌板3次。第四步：在PBST中的1％BSA中，以1:500稀釋綴合到堿性磷酸酶的綿羊抗體(Mologic)，然后在周圍環(huán)境中在板上孵育1小時?？贵w將與經(jīng)切割的殘余部分形成復合體，所述經(jīng)切割的殘余部分是通過樣品中所存在的任何MMP9暴露的；當不存在經(jīng)切割的殘余部分時，將不存在抗體的結合。第五步：用洗滌緩沖液中100μlTris緩沖鹽水0.1％Tween(pH＝8.0的50mMTris、150mM氯化鈉、20mM疊氮化鈉、0.1％體積/體積Tween20的水溶液)洗滌板3次。第六步：將板與pNPP底物一起孵育，在37℃下孵育30分鐘后，在405nm下讀取。所有組合的MMP9標準曲線被示于圖21中。孔顏色差異指示檢驗樣品中蛋白酶的不同水平，所述水平由OD405nm表示。圖21顯示了檢驗每種方式的結果。對于鏈霉親和素捕獲線，正如預測的那樣，利用綿羊抗體CF1522時選擇的肽是MOL378，利用綿羊抗體CF1525時選擇的肽是PCL008-A2。這兩種肽均含有減少任何空間位阻所需的PEG-Asp-AEEAc-AEEAc。對于CF1060捕獲線，正如預測的那樣，利用綿羊抗體CF1522時選擇的肽是MOL038或PCL008-A2，利用綿羊抗體CF1525時選擇的肽是MOL378。圖22中顯示了最佳組合的性能。此處，使用綿羊抗體CF1522和肽MOL378的方式4顯示出最有潛力。實施例9基本原理慢性阻塞性肺病急性加劇(AECOPD)涉及蛋白水解的肺泡破壞和全身炎癥二者。炎性蛋白、蛋白酶及其分解產(chǎn)物已作為AECOPD的全身標志物被廣泛研究，其中一些以可檢測狀態(tài)排放在尿中，從而提供了開發(fā)AECOPD的侵入性最小化的生物標志物檢驗的機會。另一些小組已發(fā)現(xiàn)：相較于患有穩(wěn)定COPD的患者，AECOPD患者中彈性蛋白酶分解產(chǎn)物的尿排放水平更高，但僅有很少小組群的研究調(diào)查了連續(xù)經(jīng)歷AECOPD和穩(wěn)定期COPD二者的患者中的腎臟生物標志物排放。我們旨在鑒定AECOPD的尿生物標志物。目標是：1)鑒定物學上可信的尿生物標志物和2)在收治的AECOPD患者的縱向研究中，比較加劇期和穩(wěn)定期的生物標志物排放。方法因AECOPD收治的73位COPD患者被邀請參與研究并給出書面知情同意參與。在加劇時(第0天)和患者在臨床上良好的第56天進行病史、檢查和尿取樣?；谘装Y生物化學和細胞學的示性分析以及最近的出版物選擇AECOPD的候選尿生物標志物組。候選物包括蛋白酶、蛋白酶抑制劑和白介素。使用一系列ELISA和內(nèi)部試驗設計對第0天和第56天的生物標志物水平進行定量。分析時，34位患者的第0天和第56天的數(shù)據(jù)可用。對于正常數(shù)據(jù)和非正常數(shù)據(jù)，分別利用配對t檢驗和Wilcoxon檢驗比較加劇和穩(wěn)定狀態(tài)的生物標志物水平。對所有顯著性截止值均應用多重假設檢驗校正。結果相較于穩(wěn)定狀態(tài)，在加劇期間，TIMP1(金屬蛋白酶組織抑制劑)和胱抑素c(溶酶體蛋白酶抑制劑)以顯著更高水平分泌在尿中(n＝34,對于TIMP1和胱抑素c，Wilcoxo符號秩次檢驗分別為p＝0.005和p＝0.013)。結論AECOPD期間尿TIMP1和胱抑素c的水平超過在隨后的穩(wěn)定COPD期間觀察到的水平的顯著提高可反映對提高的肺蛋白酶活性的響應。這些發(fā)現(xiàn)保證了進一步研究作為AECOPD的生物標志物的這些蛋白。實施例10–慢性阻塞性肺病加劇時的尿生物標志物引言存在未滿足的對COPD加劇的可靠生物標志物的需要，所述生物標志物在臨床試驗期間能夠警告患者尋求醫(yī)療護理、指導治療性干預和驗證這些事件。任何生物標志物的最低要求均是加劇時的變化。該研究的目的是確定一組在加劇時響應的候選尿生物標志物。方法從倫敦COPD組群招募50位患者(35位女性)。他們的年齡為73.2歲(SD7.1)且具有預測為49.0％(SD17.6)的FEV1(作為％)且FEV1/FVC比例＝47.7(13.7)。在加劇癥狀發(fā)作的3天內(nèi)(IQR2-5)收集65個尿樣品。每一加劇具有單獨的基線樣品，其取的是發(fā)作前91天的中值(IQR＝39-132)。在每次臨床訪問時獲取肺功能和血樣品。在內(nèi)部試驗(MologicLtd,Thurleigh,香港)和商業(yè)試驗試劑盒的組合中測量尿生物標志物。試驗系統(tǒng)、ELISA、側向流、底物試驗和酶譜法均被優(yōu)化以保證高精度和準確度，同時還提供檢測尿中每種生物標志物的生物學水平所需的靈敏度和特異性。結果在65個加劇中：45個用抗生素和口服皮質(zhì)類固醇治療；9個用單獨的抗生素治療；6個用單獨的皮質(zhì)類固醇治療；4個用增加的皮質(zhì)類固醇和/或β-2激動劑吸入劑使用治療。在基線和發(fā)作之間，F(xiàn)EV1從1.27l降至1.22l(t-檢驗p＝0.027；n＝57)且血漿中的c-反應蛋白從3mg/dl(1-7)升至5mg/dl(3-28)(p<0.001；n＝60)。紅細胞壓積沒有變化(0.42相對于0.41；p＝0.337)，這暗示血漿體積沒有變化。表1顯示了23種尿生物標志物，其中12種在加劇時顯著變化(wilcoxon符號秩次檢驗；p<0.05)。結論尿是能夠檢測COPD加劇并且還可評價其嚴重性的生物標志物的潛在來源。這種方法可直接應用于家庭監(jiān)測并控制COPD加劇。表1.基線和加劇時的尿生物標志物圖25闡釋了來自由28位COPD患者(來自倫敦COPD組群)捐獻的尿樣品的生物標志物檢驗結果的初步分析(或臨時算法)。該表中包括三種生物標志物的結果，所述生物標志物與中性粒細胞衍生蛋白酶和蛋白酶抑制劑保護物(shield)之間的平衡有關–TIMP2、MMP底物(活性)和A1AT。結果是被用作圖24中所示算法的基礎的生物標志物選擇過程的一部分。每個患者在穩(wěn)定疾病期捐獻第一樣品并在他們經(jīng)歷臨床上確認的肺加劇發(fā)作時的較晚日期捐獻第二樣品。表中的第一列以加劇發(fā)作開始前過去的天數(shù)來指示“穩(wěn)定”樣品的時間。對于三種生物標志物中的每種，均存在三列。標題為“BL”(基線)的第一列顯示了在穩(wěn)定疾病期間捐獻的樣品中該生物標志物的值。標題為“發(fā)作”的第二列顯示了在加劇期間捐獻的樣品中該生物標志物的值。第三列顯示了被表達為BL值的百分比的發(fā)作值。這種臨時算法的目的是回答以下問題：“28位患者中有多少是伴隨三種生物標志物中至少一種的值上升的加??？”。接下來的過程是繼續(xù)搜索在加劇時各自提高的替代性生物標志物值。這鑒定哪種生物標志物適合包括在用于對象監(jiān)測的算法中。參照表格和在左手側的三重組分流程圖中的三個系列問題，每個患者可遵循該過程。以患者356為例，讀取器能夠跨越9個數(shù)值開始掃描，尋找第一個問題–“TIMP2提高了嗎？”的答案。在第三列，以“是”回答該問題，就該臨時算法而言，此時對患者356的搜索完成(即便MMP底物和A1AT二者也提高亦是如此)。在更復雜的算法中，檢驗結果將還考慮額外標志物的水平提高(例如，以參照圖24所述的方式)。對患者29重復該過程，關于TIMP2的答案是“否”，但關于MMP底物的答案為“是”。對于患者91，TIMP2和MMP底物二者均返回答案“否”，但A1AT返回“是”。只有三位患者(編號為24、92和192)對所有三種生物標志物均返回答案“否”，從而總體結果為：89％的樣品中三種生物標志物中的至少一種在加劇中提高。這被視為包括某些附加因素(如關于圖24所述)的完全算法的合適基礎。圖26闡釋了一種臨時算法，其與圖25中所示的算法非常相似。在這種情況下，兩種樣品覆蓋相反臨床事件-從加劇恢復以及回到穩(wěn)定疾病狀態(tài)。因此，應用于圖25的推理和過程在此處同樣適用，例外是：問題關于生物標志物值的降低而非提高?；A問題是：“28位患者中有多少是伴隨三種生物標志物中至少一種的值降低的從加劇恢復？”。這被視為要回答的重要問題，因為其對生物標志物選擇的可信度有主要影響。如果大部分患者樣品在從加劇恢復時不顯示三種生物標志物中的一種或多種減少，那么將不能確認它們與加劇的基本關聯(lián)。圖26中所示結果確認了三種生物標志物的有效性，其中只有兩位患者對所有三種生物標志物均返回答案“否”。這可被確定為總體93％的靈敏度。圖27基于的基本原理與圖25的基本原理相同，但通過僅顯示生物標志物值的百分比變化而不是包括百分比所源自的兩個絕對值來簡化數(shù)據(jù)。與圖25一樣：差異在一方面在穩(wěn)定疾病期間獲取的樣品和另一方面在加劇時獲取的樣品之間。該圖的目的是進一步闡釋組合的三重(蛋白酶相關)生物標志物集合充當與加劇相關的診斷指標的堅固性。28位患者中在圖25中追蹤到其加劇事件的16位患者還提供了第二“穩(wěn)定”和“加劇”樣品對。這些第二樣品是在出現(xiàn)在圖25中的加劇發(fā)作之前或之后捐獻的。在表中，標題為“自恢復以后的天數(shù)”的列中列出了先前研究的發(fā)作和該發(fā)作之間的時間間隔。負值指示樣品是在圖25中的發(fā)作之前獲取的，且之后獲取的樣品沒有負值。每次加劇發(fā)作的數(shù)據(jù)均被成行包括，從樣品對的識別號碼開始。接下來3列列出了在圖25中所報告的數(shù)據(jù)集合中先前觀察到的百分比差異值。例如，在“ID1”行，前三個百分比值與圖25第一行中的那些(-51、116和22)相同，這表示這些值來自同一患者。在下一列中，值140表示恢復后140天，該患者發(fā)生下一次加劇。行的最后三列表示第二次加劇發(fā)作中穩(wěn)定值和加劇值之間的百分比差異。對于ID25的數(shù)據(jù)，能夠看出，(在最后3列)分析的第二樣品對是在圖25中所報告的樣品對之前320天捐獻的(如通過負號所示)。這些結果確認了組合的三重(蛋白酶相關)生物標志物集合的堅固性，因為在相同患者中的16位中的這組獨立、重復的加劇事件中，計算出的靈敏度為94％。圖28顯示了以不同方式展示的在圖27中所示值背后的一些數(shù)據(jù)趨勢，以通過重復加劇闡釋生物標志物濃度曲線。該圖的目的是強調(diào)個體化閾值和患者特異性基線值。展示了四種實例，其中每種均關于三種生物標志物中的每種顯示5個數(shù)據(jù)點。為了清楚和簡明，沒有縱軸，因為沒有具體的絕對值時能夠最佳地提供關鍵點。該圖表展示了波動和趨勢。每個曲線中的值均針對(在基線1(BL)的)第一值進行歸一化。橫軸上顯示了以下縮略語，從而限定了獲取尿樣品的點(以這種次序)：--BL(基線1)-OS(第一次發(fā)作)-R(恢復)-BL(基線2)-ON(第二次發(fā)作)。請注意，橫軸沒有在經(jīng)過的時間方面校準，因為每次取樣事件均給出距下一次取樣事件相同的間隔，而不管它們之間的間距大小是多少。然而，間距由在橫軸下方的數(shù)集限定。每個數(shù)字均限定了其位置和其之前的位置之間的天數(shù)。因此，在標題678下方的圖集中，能夠看出，第一BL下方是數(shù)字0，因為沒有在前事件。OS(第一次發(fā)作)取樣事件發(fā)生在第一BL取樣事件后29天，如通過其下方的數(shù)字所示。R(恢復)樣品是在7天后獲取的，以此類推。2023圖集的軸略微不同，體現(xiàn)在：第二BL下方的天數(shù)是負值(-499)。這表示：所謂的“第二次加劇”BL樣品實際上是在第一BL前499天收集的。加劇樣品“ON”是在-499天BL樣品后24天收集的。雖然這可能看起來不必要地令人迷惑，但之所以以這種方式展示是因為這是生成數(shù)據(jù)的順序，因此做出發(fā)現(xiàn)的順序。在每個圖集中的曲線中，能夠看出，對于患者678，最密切追蹤加劇歷史的生物標志物是MMP活性(MMP底物)，因為在兩次加劇時均存在水平明顯提高。對于患者2023同樣如此。對于患者2097，全身性蛋白酶抑制劑A1AT能夠顯著有效地追蹤加劇。對于患者2505，TIMP2是追蹤加劇的最有效生物標志物。這些結果合起來表明：-在特定患者中，這三種生物標志物中的每種都能作為加劇追蹤生物標志物單獨起作用-這三種生物標志物是包含到整合算法中的良好選擇。為了使該方法對所有對象的靈敏度最大化，有利的是，應用更頻繁的取樣以測定對象特異性基線(BL)值并利用這些值計算波動基線和閾值，由其確定加劇時離開基線的有意義趨勢。本文中更詳細討論了這些方法。盡管如此，所觀察到的趨勢提供了采取該方法和選擇特定標志物的理由。圖29闡釋了可形成的多種生物標志物簇以獲得最佳靈敏度。分析來自50位患者的65個匹配的基線和加劇發(fā)作樣品并利用隨后的方法來鑒定那些標志物能夠被組合以鑒定多于90％的處于加劇的患者(假設加劇時生物標志物值提高)?；驹砼c圖25中的基本原理基本相同。起始焦點在B2M，其在45個發(fā)作中濃度提高(從基線到加劇發(fā)作，水平提高)，從而給出69％的靈敏度。對于“漏掉的”20次發(fā)作，如圖表上所示，可采取兩種途徑。1.10次B2M陰性發(fā)作具有提高的鈣網(wǎng)蛋白水平，從而將靈敏度提高至85％。在剩下的10次發(fā)作中，4次發(fā)作具有提高的活性HNE水平，從而使靈敏度達到91％。最后，另外的3位患者被鑒定為具有提高的A1AT水平。2.10次B2M陰性發(fā)作具有提高的IL-6水平，從而將靈敏度提高至85％。在剩下的10次發(fā)作中，5次發(fā)作具有提高的活性MMP水平(如通過最終ELTABA所測量的)，從而使靈敏度達到92％。最后，另外的3位患者被鑒定為具有提高的鎖鏈素水平或提高的活性HNE水平。B2M、鈣網(wǎng)蛋白、活性HNE和A1AT的組合給出95％的總靈敏度?；蛘撸谕緩?中鑒定的生物標志物組合給出97％的靈敏度。圖30以起始焦點在fMLP鑒定了形成的多種生物標志物簇以獲得最佳靈敏度。該基本原理與圖29中的基本原理基本相同。1.通過鑒定從基線到加劇發(fā)作具有提高的fMLP濃度的42次發(fā)作，單獨的fMLP給出65％的靈敏度。通過順序添加A1AT、鎖鏈素和IL-6，靈敏度可提高至97％。2.通過鑒定從基線到加劇發(fā)作具有提高的fMLP濃度的42次發(fā)作，單獨的fMLP給出65％的靈敏度。通過順序添加A1AT、鎖鏈素和IL-8，靈敏度可提高至97％。圖31以起始焦點在TIMP2鑒定了形成的多種生物標志物簇以獲得最佳靈敏度。該基本原理與圖29中的基本原理相同。通過鑒定從基線到加劇發(fā)作具有提高的TIMP2濃度的47次發(fā)作，單獨的TIMP2給出72％的靈敏度。如圖表所示，可采取以下途徑。1.通過順序添加IL-6、鎖鏈素(如通過ELISA所測量的)和活性MMP(如通過最終ELTABA所測量的)，靈敏度可提高至98％。2.通過順序添加鎖鏈素(如通過側向流所測量的)、IL-6和活性MMP(如通過最終ELTABA所測量的)，靈敏度可提高至93％。3.通過順序添加IL-1β、IL-6和鎖鏈素(如通過ELISA所測量的)，靈敏度可提高至97％。4.通過順序添加IL-1β、IL-6和活性MMP(如通過最終ELTABA所測量的)，靈敏度可提高至97％。5.通過順序添加活性MMP(如通過底物試驗所測量的)、IL-6和鎖鏈素，靈敏度可提高至95％。6.通過順序添加活性MMP(如通過底物試驗所測量的)、A1AT和鎖鏈素(如通過ELISA所測量的)，靈敏度可提高至94％。圖32以起始焦點在TIMP2鑒定了形成的多種生物標志物簇以獲得最佳靈敏度。此處的差別是：標志物基于肌酸酐比例。該基本原理與圖29中的基本原理相同。通過鑒定從基線到加劇發(fā)作具有提高的TIMP2濃度的42次發(fā)作，單獨的TIMP2給出65％的靈敏度。如圖表所示，可采取以下途徑。1.通過順序添加fMLP、鎖鏈素(如通過ELISA所測量的)和活性MMP(如通過最終ELTABA所測量的)，靈敏度可提高至95％。2.通過順序添加fMLP、IL-6和鎖鏈素(如通過側向流所測量的)，靈敏度可提高至94％。3.通過順序添加fMLP、IL-6和HSA，靈敏度可提高至95％。4.通過順序添加IL-6、活性MMP(如通過最終ELTABA所測量的)和活性HNE等，靈敏度可提高至95％。5.通過順序添加活性MMP(如通過最終ELTABA和底物試驗所測量的)和鎖鏈素(如通過ELISA所測量的)，靈敏度可提高至95％。6.通過順序添加活性MMP(如通過最終ELTABA所測量的)、IL-6和活性HNE等，靈敏度可提高至95％。7.通過順序添加鎖鏈素(如通過側向流所測量的)、活性MMP(如通過底物試驗所測量的)和活性HNE，靈敏度可提高至95％。8.通過順序添加鎖鏈素(如通過側向流所測量的)、A1AT和活性HNE，靈敏度可提高至95％。這些數(shù)據(jù)顯示：多種標志物可被有用地用于提供以高靈敏度水平鑒定加劇的算法。本領域技術人員基于本文所含的信息能夠容易得到其他起始點和組合。本文中還提到，當標志物組合同時增加(或?qū)嶋H上減少時)，還可以給予額外加權，以指導未來的檢驗和預測或鑒定加劇和從其恢復或其治療。實施例9和10中分析標志物水平的方法總MMP9、MMP8、NGAL、TIMP1、TIMP2、HSA、胱抑素C、RBP4、IL-6、IL-8、IL-1β和TNFα全部均使用商業(yè)ELISA試劑盒(R&D系統(tǒng))測量。檢驗之前，利用尿驗證這些DuoSetELISA開發(fā)系統(tǒng)，所述系統(tǒng)含有開展用于測量生物流體中的分析物的夾心免疫分析所需的基本組分。將板過夜敏化并根據(jù)制造商指示運行。使用基于夾心原理的即用型固相ELISA(HycultHK325)測量鈣網(wǎng)蛋白。分析物被夾在固定化的抗體和被鏈霉親和素過氧化物酶綴合物識別的生物素化追蹤抗體之間。洗掉所有未結合的物質(zhì)，然后加入過氧化物酶底物，隨后在450nm下測量顏色。使用即用型固相ELISA測量纖維蛋白原(B2Mab108841)和β-2-微球蛋白(Abcamab108885)，所述固相ELISA應用定量夾心免疫分析技術。分析物被夾在固定化的多克隆抗體和被鏈霉親和素過氧化物酶綴合物識別的生物素化多克隆抗體之間。洗掉所有未結合的物質(zhì)，然后加入過氧化物酶底物，隨后在450nm下測量顏色。利用肌酸酐參數(shù)試驗(R&D系統(tǒng)KGE005)實現(xiàn)肌酸酐測量。將經(jīng)稀釋的樣品加入微孔板中，隨后加入堿性苦味酸鹽試劑以引發(fā)Jaffe反應。30分鐘孵育期后，在490nm下讀取板。對于蛋白酶測量，使用三種不同方法，包括酶譜法(MMPs)、熒光底物試驗(MMP’s和HNE)和最終ELTABA(MMPs)：-使用來自Invitrogen的預制明膠凝膠進行酶譜法，使樣品在變性條件下運行并在復性、顯影和染色流程后顯示為相對暗背景清晰的條帶。使用圖像J軟件進行圖像分析。在所有凝膠上運行已知濃度的活性MMP9以將樣品數(shù)據(jù)歸一化。-對于底物試驗，將10μmMMP熒光底物(R&D系統(tǒng)ES010)或20μmHNE熒光底物(EnzoP-224)加入5μl樣品中，然后在BMG板讀取器上讀取熒光。讀取條件正如制造商的指示：以1分鐘的間隔持續(xù)30分鐘。-對于最終ELTABA(Mologic內(nèi)部側向流試驗)，將12.5μlMMP底物(MologicMOL378)加入75μl樣品中并孵育10分鐘，然后加入盒(cassette)中。15分鐘后，使用來自Forsite診斷的免疫色譜分析讀取器讀取裝置。使用基于夾心原理的內(nèi)部開發(fā)的ELISA測量A1AT和HNE。分析物被夾在固定化的小鼠Fab和用堿性磷酸酶(AP)直接標記的小鼠Fab之間。洗滌后，加入堿性磷酸酶底物并隨后在405nm下測量顏色。使用基于競爭原理的內(nèi)部開發(fā)的ELISA側向流試驗測量鎖鏈素，其中樣品中的游離鎖鏈素與固相上的結合鎖鏈素競爭綴合到堿性磷酸酶的綿羊多克隆抗體。洗滌后，加入堿性磷酸酶底物并隨后在405nm下測量顏色。使用基于競爭原理的內(nèi)部開發(fā)的ELISA測量fMLP，其中樣品中的游離fMLP與固相上的結合fMLP競爭綴合到堿性磷酸酶的綿羊多克隆抗體。洗滌后，加入堿性磷酸酶底物并隨后在405nm下測量顏色。實施例11-囊性纖維化患者中的加劇圖33從由囊性纖維化患者捐獻的尿樣品闡釋了與收集時間有關的算法的一個重要方面。兩種樣品由患者在穩(wěn)定疾病期間以及經(jīng)歷肺加劇(PEx)時捐獻。每位患者的取樣時間次序不同，一些具有在住院前收集的之前的“穩(wěn)定”樣品，而一些是首先住院并在不久之后收集“穩(wěn)定”樣品。預測TIMP2水平高時，MMP活性(如通過側向流所測量的)應該低。這在除了患者4之外的所有患者中得到了證明。還預測MMP活性在加劇時應該提高，如5位患者(3、5、6、7、8)所觀察到的那樣。然而，對于2位患者(2、9)，活性MMP在PEx時比穩(wěn)定狀態(tài)更低，這表明樣品是在蛋白酶保護物插入后捐獻的，即，活性MMP9的存在將觸發(fā)TIMP2響應。這具有極大的預測意義并強調(diào)了基于規(guī)律取樣使用這些指示物追蹤加劇發(fā)作的重要性。實施例12-COPD患者中的加劇1.引言加劇的頻繁發(fā)生是COPD的重要特征。從COPD對象亞組收集尿樣品集合。對于35位患者，在研究的前12個月期間，由每次有計劃的每月一次的臨床訪問提供尿樣品。此外，提供對于COPD加劇，在每次計劃外的臨床訪問時收集的尿樣品。2.生物標志物和試驗2.1.生物標志物選擇基于發(fā)明人在先前的肺部炎癥研究(COPD和CF)中的工作，選擇表2.1a中的生物標志物作為研究的檢驗菜單。使用內(nèi)部試驗和商業(yè)試驗試劑盒的組合來測量生物標志物。在開始該項目中的檢驗之前，借助于來自其他項目的COPD樣品對試驗進行評價、選擇和驗證。表2.1a：生物標志物和檢驗程序2針對該研究開發(fā)的內(nèi)部試驗2.2.1Ac-PGP試驗N-乙酰基Pro-Gly-Pro(Ac-PGP)是中性粒細胞趨化因子，其來源于細胞外基質(zhì)(ECM)的分解且在氣道炎癥期間生成。AcPGP被選作生物標志物，因為在炎癥疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)中，其通過中性白細胞的蛋白水解作用從膠原上被切下。開發(fā)了三種Ac-PGP競爭性EIA試驗。圖34中顯示了一種Ac-PGP競爭性EIA試驗的示意圖。圖35展示了利用從1000ng/ml下至15.625ng/ml的標準品，使用這種競爭性結合方式獲得的校準曲線。2.2.2fMLP試驗中性粒細胞通過產(chǎn)生和釋放殺滅細菌的活性氧類和表達吸引其他免疫細胞至感染位點的趨化因子來響應細菌感染。N-甲?；娜鏵MLP(N-甲?；?L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-苯丙氨酸)作為有效的化學引誘物起著重要作用。fMLP源于多種細菌(作為細菌的蛋白加工機制的結果)和/或源于降解的細菌(PAMP)。fMLP也可以在真核細胞線粒體蛋白(例如，“DAMP”)中產(chǎn)生。N-甲酰基肽受體與G-蛋白偶聯(lián)的并引發(fā)/傳播人中性粒細胞和另一些細胞中的吞噬作用和促炎癥反應，例如用fMLP刺激后產(chǎn)生活性氧中間體(例如，超氧化物；O2-·)。開發(fā)了競爭性EIA試驗。圖36中顯示了fMLP競爭性EIA試驗的示意圖。圖37展示了利用從50ng/ml下至0.78ng/ml的標準品，使用這種競爭性結合方式獲得的校準曲線。2.2.3鎖鏈素片段試驗炎癥期間彈性蛋白纖維的降解由被稱為彈性蛋白酶的酶引起。中性粒細胞彈性蛋白酶(由活化的中性粒細胞釋放)和MMP12(由肺巨噬細胞釋放)是兩種最重要的炎性彈性蛋白酶。鎖鏈素從彈性蛋白上被切下，其是降解過程的分子信號，指示白細胞活性提高或上升。分泌在尿中的鎖鏈素的量與彈性蛋白降解程度直接相關，其繼而指示組織損傷水平。鎖鏈素小至足以穿過腎臟。過量中性白細胞活性是加劇的關鍵驅(qū)動因素。鎖鏈素片段試驗是我們已經(jīng)研發(fā)和驗證的鎖鏈素試驗的補充。這些試驗被專門設計為能夠測量鎖鏈素以及仍然附著于彈性蛋白纖維的鎖鏈素，這是通過生成針對不同大小的彈性蛋白片段建立的多種抗體實現(xiàn)的，所述彈性蛋白片段來源于用人中性粒細胞彈性蛋白酶切割。圖39展示了HPLC分析以顯示通過提高濃度的酶(HNE)分解的整個彈性蛋白(右側峰)的譜圖。產(chǎn)生的不同片段被用于使綿羊免疫以產(chǎn)生特異性抗體。圖38是鎖鏈素片段競爭性EIA試驗的示意圖。2.2.4MMP活性試驗(最終ELTABA)通過添加專門設計的底物，所述底物能夠被MMP切割然后被特異性標記的綿羊抗體CF1522識別，(在本文中更詳細描述的)這種獨特的試驗能夠測量某些基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的活性。3樣品分析選擇71個加劇事件，每一事件具有穩(wěn)定前樣品和穩(wěn)定后樣品·在加劇前3-66天之間收集加劇前的樣品·在加劇事件后6-73天之間收集加劇后的樣品。使用配對t檢驗分析，計算在加劇和加劇前和加劇后之間顯著不同的標志物。還利用肌酸酐使標志物歸一化。P值顯示在下表中，其中<0.05的顯著值被突出顯示。CRP不受歸一化影響。在加劇之前和之后存在增加和降低。其他標志物因歸一化而不同，特別地，6種額外標志物從穩(wěn)定到加劇顯著變化，膠原和彈性蛋白降解標志物Ac-PGP和鎖鏈素樣標志物中有4種降回到恢復。信號分子IL-1β、IL-6和fMLP在加劇前到加劇沒有增加，但在恢復時降低，這表明在正確時間點捕捉樣品的重要性。利用未歸一化的樣品時，MMP活性(最終ELTABA版本1和版本2)、鈣網(wǎng)蛋白和CC16的降低顯示為顯著。因為基線值因患者而異，所以個體閾值很重要。當考慮這一點時，三種標志物的組合能夠共同將加劇事件的94％分組到不同于穩(wěn)定的加劇組并將93％分組到加劇后的恢復組，即在PEx時增加且在恢復時降低。尿CRP和鎖鏈素是常見的標志物。聚焦于“預測加劇事件”，單獨的CRP從基線到加劇在71個事件中有48個增加(等于68％)；與鎖鏈素組合時，這增加至82％；添加IL1β時，增加至96％。這顯示于圖41A中。聚焦于“預測恢復事件”，單獨的CRP從加劇到恢復在71個事件中有46個增加(等于65％)；與鎖鏈素組合時，這增加至89％；添加纖維蛋白原時，增加至93％。這顯示于圖41B中。實施例13：加劇時尿生物標志物的變化從與以上相同的組群中，基于血CRP測量選擇樣品子集?；谘狢RP測量的穩(wěn)定/Pex血生物標志物被用于使組分層(stratify)以確認樣品的狀態(tài)。血CRP測量對一些患者可獲得。從穩(wěn)定組中選擇血CRP<10的樣品；從PEx組中選擇血CRP>10的樣品，從而產(chǎn)生88個穩(wěn)定樣品和59個PEx樣品。模型1a和1b對濃度值進行的邏輯回歸分析將CRP、Ac-PGPv3、fMLP、TIMP1、HSA和CC16鑒定為能夠區(qū)分兩組的期望組合(模型1a)：這使用截止值0.5，如果將截止值調(diào)整為0.38，則可提高靈敏度，其中穩(wěn)定組中具有可接受的特異性91％。圖42顯示了邏輯回歸和ROC曲線。對濃度值進行的邏輯回歸分析將CRP、Ac-PGPv3、fMLP、TIMP1和A1AT鑒定為能夠區(qū)分兩組的期望組合(模型1b)。這使用截止值0.5，如果將截止值調(diào)整為0.3146，則可提高靈敏度，其中穩(wěn)定組中具有可接受的特異性86％和良好的靈敏度。圖43顯示了邏輯回歸和ROC曲線。限定了另外一組，該組僅包含那年具有多于1次加劇的那些患者。PEx組由59個樣品和47個穩(wěn)定樣品組成。生成的以下三個模型如下：模型2a、2b和2c對濃度值進行的邏輯回歸分析將CRP、fMLP、Ac-PGP版本3、A1AT和TIMP1鑒定為能夠區(qū)分兩組的期望組合(模型2a)。圖44顯示了邏輯回歸圖。對濃度值進行的邏輯回歸分析將CRP、fMLP、鎖鏈素片段V4、鎖鏈素側向流試驗V2、A1AT、TIMP1和GENDER鑒定為能夠區(qū)分兩組的期望組合(模型2b)。圖45顯示了邏輯回歸圖。對濃度值進行的邏輯回歸分析將CRP、fMLP、Ac-PGP版本3、A1AT和CC16鑒定為能夠區(qū)分兩組的期望組合(模型2c)。圖46顯示了邏輯回歸圖。圖47展示了模型2a、2b和2c中每一個的ROC曲線(分別為A、B和C)。所有三個模型的共同標志物均為CRP和A1AT。所有模型均能檢測大部分加劇。實施例14：加劇時尿生物標志物的變化決策樹分析使用由其得到算法21-2c的有限樣品集合，利用決策樹分析數(shù)據(jù)。決策樹可被用作預測模型以基于自(預測物)變量的值預測因(靶標)變量的值。這種方法被用作例如邏輯回歸的方法的替代物。存在利于靈敏度或特異性的許多標志物組合，其中有8個組合是基于獲得至少75％的靈敏度和特異性二者選擇的。組合1TIMP2、CRP和鎖鏈素(6:TIMP2LF45:CRP21:鎖鏈素EIAV2)類別生長方法:CRT因變量:VAR00001決策樹顯示于圖48中。組合2TIMP1、CRP和CC16(7:TIMP1ELISA45:CRP46:CC16ELISA)類別決策樹顯示于圖49中。組合3B2M、CRP、Ac-PGP(17:B2M(Mologic)45:CRP38:Ac-PGPEIAV3)類別決策樹顯示于圖50中。組合4MMP活性、CRP和LEF(25:最終ELTABAV145:CRP43:大彈性蛋白片段試驗(LEF)V2)類別決策樹顯示于圖51中。組合5MMP活性、CRP和HSA(26:最終ELTABAV245:CRP15:人血清白蛋白ELISA)類別決策樹顯示于圖52中。組合6肌酸酐、CRP、Ac-PGP(29:肌酸酐45:CRP38:Ac-PGPV3)類別決策樹顯示于圖53中。組合7fMLP、CRP和TIMP2(34:fMLPEIA45:CRP8:TIMP2ELISA)類別決策樹顯示于圖54中。組合8Ac-PGP、CRP、替代性Ac-PGP試驗(36:Ac-PGPEIAV145:CRP38:Ac-PGPEIAV3)類別決策樹顯示于圖55中。實施例15：加劇時尿生物標志物的變化49位患者提供在穩(wěn)定和加劇時的樣品。尿CRP中值從60.7pg/ml增加至317.3pg/ml(p＝0.0015)。穩(wěn)定狀態(tài)的四分間距為0-143.9；加劇狀態(tài)的四分間距為23.6-2584。結果顯示于圖40中。該組群中顯著不同的另一些生物標志物是MMP底物(p＝0.0466)、TIMP2(p＝0.0095)、A1AT(p＝0.0035)、HSA(p＝0.0424)和RBP4(p＝0.0478)。本發(fā)明的范圍并不限于本文所述的具體實施方式。事實上，根據(jù)前面的描述和附圖，除了本文所述那些以外，本發(fā)明的多種修改對本領域技術人員來說是顯而易見的。這樣的修改都將落入所附權利要求書的范圍內(nèi)。此外，本文所描述的本發(fā)明的所有方面和實施方式都被認為是廣泛適用的，并可與任何且所有另一些兼容的實施方式合并，包括酌情取自本發(fā)明的其他方面(包括分離)的實施方案。本文引用了多種出版物，其公開內(nèi)容通過引用整體并入。當前第1頁1 2 3