發(fā)明
技術領域：
本發(fā)明涉及進行用于快速和精確試驗大量樣品的高通量試驗(htt)高效液相色譜(hplc)的方法。在一個實施方案中，htthplc用于研發(fā)連續(xù)制造藥物組合物的過程分析技術(pat)。在另一個實施方案中，藥物組合物用于治療cftr介導疾病(例如，囊性纖維化)，且包含一種或多種活性藥物成分(api)。背景關于由fda批準藥物的常見挑戰(zhàn)是有時缺乏用于需要的患者的藥物利用率。因此，一個顯著的未滿足需要是與更常規(guī)分批制備相反以連續(xù)和控制方式制備藥物的公開方法。為了實現(xiàn)連續(xù)制造，必須研發(fā)精確監(jiān)測藥物組合物性質而不中斷過程連續(xù)性的pat。然而，pat為光譜性質，并且必須與任何使用的參比相關。這種與參比的相關需要用本文公開的htthplc技術以適時方式運行很多樣品。作為pat的備份或在pat不可用時，也可設想用htthplc試驗最終組合物中的api濃度。概述在一個實施方案中，本發(fā)明的特征為一種進行高通量hplc的方法，所述方法包括：a)使預稱重樣品的容器(例如，小瓶)落入塑料瓶(例如，hdpe瓶)；b)將溶液通過瓶頂分配器加到各組容器和瓶；c)搖動各組塑料瓶、容器和溶液，直至樣品溶解；d)將各組塑料瓶、容器和溶液離心；e)將來自離心步驟的上清液的等分試樣裝到hplc柱上；和f)用流動相運行柱。在另一個實施方案中，用該方法對用于連續(xù)制造的pat測量提供相關值。在另一個實施方案中，用該方法測量最終藥物組合物中api的濃度。在另一個實施方案中，藥物組合物為片劑。在另一個實施方案中，片劑用于治療cftr介導疾病，例如囊性纖維化(cf)。在另一個實施方案中，片劑包含兩種api。在另一個實施方案中，一種api為cf校正劑。在另一個實施方案中，一種api為cf增效劑。在另一個實施方案中，一種api為cf校正劑，另一種api為cf增效劑。在另一個實施方案中，一種api為3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)環(huán)丙烷甲酰氨基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸(化合物1)，它具有以下結構：化合物1在另一個實施方案中，一種api為n-(5-羥基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1h-喹啉-3-甲酰胺(化合物2)，它具有以下結構：化合物2.在另一個實施方案中，一種api為化合物1，另一種api為化合物2。在另一個實施方案中，化合物1為i型，化合物2為實質非晶化合物2的固體分散體形式。附圖簡述圖1為連續(xù)制造i型化合物1和實質非晶化合物2的固體分散體的片劑的流程圖。圖2為能夠用于連續(xù)制造過程的過程分析技術(pat)的示意圖，其中在步驟1)進料器/共混器1，pat1nir在原料過篩期間測量材料性質；在步驟2)雙螺桿制粒機，pat2nir測量組成和bu；在步驟3)流化床干燥器，pat3anir測量顆粒的顆粒均勻性、lod、固態(tài)形式和物理性質，pat3b激光衍射測量粒徑分布；在步驟4)研磨，pat4nir測量組成和bu；在步驟5)進料器/共混器2，pat5a拉曼測量分析(assay)和cu，pat5b測量重量、硬度、厚度；在步驟6)壓縮，pat6拉曼測量涂層厚度；和步驟7)涂布。圖3為顯示位于共混器1、磨粒機和額外顆粒共混器后的pat在線sentronicsnir的示意圖。各探測器具有7個點，這些點依次循環(huán)，以利用復用器-nir使取樣和nir達到最大限度，從而保證通過跨探測器光學元件控制粉末流的穩(wěn)健和全面取樣。圖4為流動粉末中nir的描繪。圖5為在壓片后所取的i型化合物1和ii型化合物1(ii型化合物1是us201131588中公開的不同多晶型，所述專利全文通過引用結合到本文中)的凱撒拉曼(kaiserraman)光譜。凱撒拉曼光譜儀安裝在kraemeruts片劑試驗儀上。圖6為顯示化合物2顆粒的預測和參比離線nir取樣之間的良好關系的圖表。圖7為測量化合物1顆粒樣品中水含量的nir光譜系列。圖8為在左側測量包含不同比率的i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的一定范圍組合物的nir光譜系列，和在右側描繪用于確定i型化合物1的范圍a和用于確定非晶化合物2的范圍b的預處理光譜。圖9描繪使用偏最小二乘法(pls)技術關于預測i型化合物1含量與參比(實際)i型化合物1含量的校準曲線。圖10描繪包含不同i型化合物1含量(y參比)的未知樣品與使用從圖19計算的校準曲線預測含量(y預測)的實際結果。圖11描繪關于包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的組合物響應線速率(流速)變化的激光衍射測量的百分透射率，顯示隨線速率增加預料百分透射率減小。圖12描繪在不同線速率下包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的顆粒的激光衍射測量，顯示平均粒徑(dv(50)不受線速率影響。圖13描繪在不同加工參數(shù)下包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的顆粒的激光衍射測量，顯示粒徑測量對這些變化敏感。圖14描繪使用拉曼光譜(不連續(xù)和連續(xù)二者)關于監(jiān)測片劑中化合物1固體形式同一性的過程分析技術模型的預測能力。圖15描繪使用拉曼光譜(不連續(xù)和連續(xù)二者)關于監(jiān)測片劑中化合物2固體形式同一性的過程分析技術模型的預測能力。發(fā)明詳述定義本文所用“htt”表示高通量試驗，“hplc”表示高效液相色譜。二者一起作為htthplc指可用于快速和精確試驗高體積量樣品的高效液相色譜方法。本文所用術語“活性藥物成分”或“api”指生物活性化合物。本文所用術語“pat”表示過程分析技術。本文所用術語“cu”表示含量均勻性。本文所用“cftr”表示囊性纖維化跨膜傳導調節(jié)物。本文所用“δf508突變”或“f508-del突變”為cftr蛋白內的特異突變。這種突變是在第508位置包含氨基酸苯丙氨酸的密碼子的三個核苷酸的刪除，產(chǎn)生缺乏這種苯丙氨酸殘基的cftr蛋白。如本文所用，對特定突變(例如δf508)“純合”的患者在各等位基因上具有相同突變。如本文所用，對特定突變(例如δf508)“雜合”的患者在一個等位基因上具有此突變，在其它等位基因上具有不同突變。本文所用術語“cftr校正劑”指使到細胞表面的功能cftr蛋白的量增加，引起增強離子轉運的化合物。本文所用術語“cftr增效劑”指使位于細胞表面的cftr蛋白的通道活性增加，引起增強離子轉運的化合物。本文所用術語“一種固體形式”、“多種固體形式”和相關術語指特定固體形式的化合物1或化合物2，例如，結晶、非晶態(tài)等。本文所用術語“實質非晶”指在其分子位置有很少或沒有長范圍次序的固體材料。例如，實質非晶材料具有小于約15%結晶度(例如，小于約10%結晶度或小于約5%結晶度)。也應注意到，術語“實質非晶”包括描述詞“非晶”，指具有零(0%)結晶度的材料。本文所用術語“實質結晶”(如短語實質結晶i型化合物1)指在其分子位置具有主要長范圍次序的固體材料。例如，實質結晶材料具有大于約85%結晶度(例如，大于約90%結晶度或大于約95%結晶度)。也應注意到，術語“實質結晶”包括描述詞“結晶”，指具有100%結晶度的材料。在用于描述物質、組分、產(chǎn)物或形式時，本文所用術語“結晶”和相關術語指如通過x-射線衍射確定，該物質、組分或產(chǎn)物為實質結晶。(參見，例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy,21sted.,lippincottwilliams&wilkins,baltimore,md.(2003);theunitedstatespharmacopeia,23rded.,1843-1844(1995))。本文所用術語“片劑”指適合要治療患者的試劑的物理離散單元。一般，壓實的混合物具有大于壓實前混合物的密度。本發(fā)明的劑量片劑可具有幾乎任何形狀，包括凹面和/或凸面、圓形或角形邊角和圓形至直線形狀。在一些實施方案中，本發(fā)明的壓制片劑包括具有平坦面的圓形片劑。通過形成壓制固體藥物劑型領域的技術人員已知的任何壓實和壓制方法，可制備本發(fā)明的片劑。在具體實施方案中，使用藥物制劑領域的技術人員已知的常規(guī)方法，可制備本文提供的制劑，如相關教科書中所述。參見，例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy,21sted.,lippincottwilliams&wilkins,baltimore,md.(2003);anseletal.,pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems,7thedition,lippincottwilliams&wilkins,(1999);thehandbookofpharmaceuticalexcipients,4thedition,roweetal.,eds.,americanpharmaceuticalsassociation(2003);gibson,pharmaceuticalpreformulationandformulation,crcpress(2001)，這些參考文獻全文通過引用結合到本文中。本文所用“賦形劑”包括藥物組合物中的功能和非功能成分。本發(fā)明化合物的“有效量”或“治療有效量”可根據(jù)多種因素變化，例如受試者的疾病狀態(tài)、年齡和體重及本發(fā)明化合物引起受試者中所需響應的能力。可調節(jié)劑量方案，以提供最佳治療響應。有效量也是其中本發(fā)明化合物的任何毒性或有害作用(例如，副作用)被治療有利作用超過的量。如本文所用且除非另外說明，術語化合物的“治療有效量”和“有效量”指足以在治療或控制疾病或病癥中提供治療益處或延遲一種或多種與疾病或病癥相關的癥狀或使其最大限度減輕的量?；衔锏摹爸委熡行Я俊焙汀坝行Я俊敝竼为毣蚺c一種或多種在治療或控制疾病或病癥中提供治療益處的其它試劑組合的治療劑的量。術語“治療有效量”和“有效量”可包括改善總體治療、減輕或避免疾病或病癥的癥狀或病因或提高另一種治療劑的治療效力的量。在短語“實質純i型化合物1”中使用的“實質純”指大于約90%純度。在另一個實施方案中，實質純指大于約95%純度。在另一個實施方案中，實質純指大于約98%純度。在另一個實施方案中，實質純指大于約99%純度。關于i型化合物1或含實質非晶化合物2的固體分散體，在結合一種組合物或劑型的成分的劑量、量或重量百分數(shù)使用時，詞語“約”和“大約”指本領域的技術人員認識提供相當于從規(guī)定劑量、量或重量百分數(shù)得到的藥理作用的劑量、量或重量百分數(shù)。具體地講，詞語“約”或“大約”指由本領域的技術人員測定的特定值的可接受誤差，它部分取決于如何測量或測定該數(shù)值。在某些實施方案中，詞語“約”或“大約”指在1、2、3或4標準偏差內。在某些實施方案中，詞語“約”或“大約”指在給定值或范圍的30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%或0.05%內。i型化合物1通過美國專利號8,507,534中公開的方法制備，所述專利全文通過引用結合到本文中。實質非晶化合物2的固體分散體通過國際公開專利申請?zhí)杦o2010/019239中公開的方法制備，所述申請全文通過引用結合到本文中?？筛鶕?jù)圖1流程圖連續(xù)制備包含化合物1和化合物2的片劑。組合物的治療用途在一個方面，本發(fā)明也提供一種治療、減輕患者疾病的嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的用pat以連續(xù)方式制備的藥物組合物或片劑，其中疾病選自囊性纖維化、哮喘、抽煙引起的copd、慢性支氣管炎、鼻竇炎、便秘、胰腺炎、胰腺機能不全、由先天性雙側輸精管缺失引起的男性不育(cbavd)、輕度肺病、特發(fā)性胰腺炎、過敏性支氣管肺曲霉病(abpa)、肝病、遺傳性肺氣腫、遺傳性血色病、凝血纖溶不足(例如，蛋白c不足)、1型遺傳性血管水腫、脂處理缺陷(例如，家族性高膽固醇血癥)、1型乳糜微粒血、無β脂蛋白血癥、溶酶體貯積病(例如，i-細胞病/假-hurler)、粘多糖病、sandhof/tay-sachs、crigler-najjarii型、多內分泌病/高胰島素血癥、糖尿病、拉倫侏儒癥、髓過氧化物酶不足、原發(fā)性甲狀旁腺功能減退、黑素瘤、多發(fā)性糖尿病(glycanosis)cdg1型、先天性甲狀腺功能亢進、成骨不全、遺傳性血纖維蛋白原過少、act不足、尿崩癥(di)、神經(jīng)垂體性di、腎原性di、charcot-marie牙綜合征、perlizaeus-merzbacher病、神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默病、帕金森病、肌萎縮性側索硬化癥、進行性核上性麻痹、皮克病、數(shù)種多聚谷氨酰胺神經(jīng)障礙(例如，亨廷頓病、脊髓小腦共濟失調i型、脊髓延髓肌肉萎縮癥、齒狀紅核蒼白球呂伊斯體萎縮癥和肌強直性營養(yǎng)不良及海綿樣腦病(例如，遺傳性克雅氏病(由于朊病毒蛋白加工缺陷))、法布萊病、straussler-scheinker綜合征、copd、干眼病或sjogren病、骨質疏松癥、骨質減少、骨愈合和骨生長(包括骨修補、骨再生、骨再吸收減少和骨沉積增加)、gorham綜合征、氯離子通道病(例如，先天性肌強直(thomson和becker型)、巴特氏綜合征iii型、dent病、過度驚嚇癥、癲癇病、溶酶體貯積病、angelman綜合征和原發(fā)性纖毛運動障礙(pcd)(纖毛結構和/或功能遺傳疾病的術語，包括有逆位的pcd(也稱為kartagener綜合征)、沒有逆位的pcd和纖毛發(fā)育不全)。在一個方面，本發(fā)明也提供一種治療、減輕患者疾病的嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中疾病選自全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥(gefs+)、全面性癲癇伴熱性和非熱性驚厥附加癥、肌強直、先天性副肌強直、鉀加重肌強直、高鉀血周期性麻痹、lqts、lqts/布魯格達綜合癥、伴有耳聾的常染色體顯性lqts、常染色體隱性lqts、有異常形態(tài)特征的lqts、先天性和獲得性lqts、提摩西綜合癥、幼年期的持久性高胰島素血低血糖、擴張性心肌病、常染色體顯性lqts、dent病、骨硬化病、巴特氏綜合征iii型、中央軸空病、惡性高熱和兒茶酚胺能多型性心動過速。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有cftr基因突變n1303k、δi507或r560t。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有cftr基因突變g551d。在另一個實施方案中，患者在g551d中是純合的。在另一個實施方案中，患者在g551d中是雜合的，其中其它cftr基因突變?yōu)棣膄508、g542x、n1303k、w1282x、r117h、r553x、1717-1g->a、621+1g->t、2789+5g->a、3849+10kbc->t、r1162x、g85e、3120+1g->a、δi507、1898+1g->a、3659delc、r347p、r560t、r334w、a455e、2184dela或711+1g->t中的任何一個。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有cftr基因突變δf508。在另一個實施方案中，患者在δf508中是純合的。在另一個實施方案中，患者在δf508中是雜合的，其中其它cftr基因突變?yōu)間551d、g542x、n1303k、w1282x、r117h、r553x、1717-1g->a、621+1g->t、2789+5g->a、3849+10kbc->t、r1162x、g85e、3120+1g->a、δi507、1898+1g->a、3659delc、r347p、r560t、r334w、a455e、2184dela或711+1g->t中的任何一個。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v、g1069r、r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n、d1152h、1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變。在此方面的一個實施方案中，本發(fā)明提供治療cftr的方法，所述方法包括給予具有人cftr突變的患者的化合物1，所述突變選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r和s1251n。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變。在此方面的一些實施方案中，所述方法使氯化物轉運相對于基線氯化物轉運增加大于10倍。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n和d1152h的cftr基因突變。在此方面的一個實施方案中，所述方法使氯化物轉運增加，比基線氯化物轉運高大于或等于10%。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、1811+1.6kba->g、2789+5g->a、3272-26a->g和3849+10kbc->t的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自2789+5g->a和3272-26a->g的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v、g1069r、r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n、d1152h、1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r和s1251n的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在此方面的一些實施方案中，所述方法使氯化物轉運相對于基線氯化物轉運增加大于10倍。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n和d1152h的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在此方面的一個實施方案中，所述方法使氯化物轉運增加，比基線氯化物轉運高大于或等于10%。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、1811+1.6kba->g、2789+5g->a、3272-26a->g和3849+10kbc->t的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自2789+5g->a和3272-26a->g的cftr基因突變和選自△f508和r117h的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v、g1069r、r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n、d1152h、1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r和s1251n的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變。在此方面的一些實施方案中，所述方法使氯化物轉運相對于基線氯化物轉運增加大于10倍。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n和d1152h的cftr基因突變。在此方面的一個實施方案中，所述方法使氯化物轉運增加，比基線氯化物轉運高大于或等于10%。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、1811+1.6kba->g、2789+5g->a、3272-26a->g和3849+10kbc->t的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自2789+5g->a和3272-26a->g的cftr基因突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v、g1069r、r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n、d1152h、1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變和選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變及一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r、s1251n、e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自g178r、g551s、g970r、g1244e、s1255p、g1349d、s549n、s549r和s1251n的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自e193k、f1052v和g1069r的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在此方面的一些實施方案中，所述方法使氯化物轉運相對于基線氯化物轉運增加大于10倍。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自r117c、d110h、r347h、r352q、e56k、p67l、l206w、a455e、d579g、s1235r、s945l、r1070w、f1074l、d110e、d1270n和d1152h的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在此方面的一個實施方案中，所述方法使氯化物轉運增加，比基線氯化物轉運高大于或等于10%。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、621+1g->t、3120+1g->a、1898+1g->a、711+1g->t、2622+1g->a、405+1g->a、406-1g->a、4005+1g->a、1812-1g->a、1525-1g->a、712-1g->t、1248+1g->a、1341+1g->a、3121-1g->a、4374+1g->t、3850-1g->a、2789+5g->a、3849+10kbc->t、3272-26a->g、711+5g->a、3120g->a、1811+1.6kba->g、711+3a->g、1898+3a->g、1717-8g->a、1342-2a->c、405+3a->c、1716g/a、1811+1g->c、1898+5g->t、3850-3t->g、ivs14b+5g->a、1898+1g->t、4005+2t->c和621+3a->g的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自1717-1g->a、1811+1.6kba->g、2789+5g->a、3272-26a->g和3849+10kbc->t的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在一個方面，本發(fā)明涉及一種治療患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療的方法，所述方法包括給予患者(優(yōu)選哺乳動物)有效量的本發(fā)明的藥物組合物或片劑，其中患者具有選自2789+5g->a和3272-26a->g的cftr基因突變和一種或多種選自△f508、r117h和g551d的人cftr突變。在某些實施方案中，包含i型化合物1和實質非晶化合物2的固體分散體的本發(fā)明的藥學上可接受的組合物或片劑用于治療在呼吸和非呼吸上皮頂端膜中顯示殘余cftr活性的患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療。在上皮表面存在殘余cftr活性可容易用在本領域已知的方法檢測，例如標準電生理學、生物化學或組織化學技術。這些方法用體內或體外電生理學技術、汗或唾液cl-濃度測量或體外生物化學或組織化學技術監(jiān)測細胞表面密度確定cftr活性。使用這些方法，可容易檢測對多種不同突變雜合或純合的患者的殘余cftr活性，包括對最常見突變△f508和其它突變(例如，g551d突變或r117h突變)雜合或純合的患者。在某些實施方案中，包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的藥學上可接受的組合物或片劑用于治療顯示很小至沒有殘余cftr活性患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療。在某些實施方案中，包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的藥學上可接受的組合物或片劑用于治療在呼吸上皮頂端膜中顯示很小至沒有殘余cftr活性患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物用于治療具有用藥理學方法誘導或增強的殘余cftr活性的患者的囊性纖維化或減輕其嚴重性。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物用于治療具有使用或基因療法誘導或增強的殘余cftr活性的患者的囊性纖維化或減輕其嚴重性。這種方法提高在細胞表面存在的cftr的量，從而誘導患者的至今不存在cftr的活性，或者增強患者的現(xiàn)有殘余cftr活性水平。在一個實施方案中，如本文所述，包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的本發(fā)明的藥物組合物和片劑用于治療顯示殘余cftr活性的某些基因型內患者的囊性纖維化或減輕其嚴重性，例如i類突變(非合成)、ii類突變(錯折疊)、iii類突變(調節(jié)或門控受損)、iv類突變(改變傳導)或v類突變(減少合成)。在一個實施方案中，如本文所述，包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的本發(fā)明的藥物組合物和片劑用于治療某些臨床表型內患者的囊性纖維化、減輕其嚴重性或對癥治療，例如，一般與上皮頂端膜中一定量殘余cftr活性相關的中度至輕度臨床表型。這些表型包括顯示胰腺功能不全的患者。在一個實施方案中，如本文所述，包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的本發(fā)明的藥物組合物和片劑用于治療診斷有其中患者顯示殘余cftr活性的胰腺功能不全、特發(fā)性胰腺炎和先天性雙側輸精管缺失或輕度肺病的患者、減輕其嚴重性或對癥治療。在一個實施方案中，如本文所述，包含i型化合物1和含實質非晶化合物2的固體分散體的本發(fā)明的藥物組合物和片劑用于治療診斷有其中患者具有野生型cftr的胰腺功能不全、特發(fā)性胰腺炎和先天性雙側輸精管缺失或輕度肺病的患者、減輕其嚴重性或對癥治療。除了囊性纖維化外，調節(jié)cftr活性也可有利用于不直接由cftr突變引起的其它疾病(例如分泌疾病)和由cftr介導的其它蛋白折疊疾病。這些包括但不限于慢性阻塞性肺病(copd)、干眼病和sj?gren綜合征。copd特征為漸進性且不完全可逆的氣流限制。氣流限制是由于粘液分泌過多、肺氣腫和細支氣管炎。突變體或野生型cftr的活化劑給予在copd中常見的粘液分泌過多和受損粘膜纖毛清除的潛在治療。具體地講，增加跨cftr陰離子分泌可促進流體輸入呼吸道表面液體，以水合粘液，和優(yōu)化纖周(periciliary)流體粘度。這會提高粘膜纖毛清除率和減輕與copd相關的癥狀。干眼病特征為淚水產(chǎn)生減少和異常淚膜脂質、蛋白和粘蛋白分布。有很多干眼原因，其中一些包括年齡、lasik眼部手術、關節(jié)炎、藥物、化學/熱燒傷、過敏和疾病(例如，囊性纖維化和斯耶格倫綜合征)。通過cftr增加陰離子分泌促進從角膜內皮細胞和眼周圍的分泌腺輸送流體，以增加角膜水合。這有助于減輕與干眼病相關的癥狀。斯耶格倫綜合征是自身免疫病，其中免疫系統(tǒng)進攻遍布身體的水分產(chǎn)生腺，包括眼、口、皮膚、呼吸組織、肝、陰道和腸。癥狀包括眼干、口干、陰道干及肺病。該病也與類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥和多肌炎/皮肌炎相關。相信缺陷蛋白運輸引起治療選項受限的疾病。cftr活性的增強劑或誘導劑可水合患病的各種器官，并幫助改善相關癥狀。在化合物名稱未正確描述化合物結構的本申請中的任何地方，結構代替名稱且以結構為準。實施例從完全連續(xù)濕制粒法形成片劑設備/過程設備完全連續(xù)研發(fā)和運行平臺(developmentandlaunchrig，dlr)或類似類型設備過篩在單獨中間斗式(bin)容器(ibcs)中分配i型化合物1、含實質非晶化合物2的固體分散體和賦形劑。可用“斗-斗”篩分操作將這些材料過篩。合適篩大小為20目、40目或60目。共混可將包含經(jīng)過篩i型化合物1、含實質非晶化合物2的固體分散體和賦形劑的ibcs對接到進料器系統(tǒng)，該系統(tǒng)可將這些材料以控制方式例如使用容量或重力失重進料器送入連續(xù)共混器。單獨組分的進料速率由制劑組合物和總線速率限定。線速率可以為8kg/hr至30kg/hr。連續(xù)共混器可具有不同葉片結構，以允許適當共混，且這些葉片的旋轉速度可在80rpm和300rpm之間。濕制粒使用具有700rpm攪拌速度的架空攪拌器，通過在不銹鋼容器在1,626g水中溶解48g月桂基硫酸鈉和159g聚乙烯吡咯烷酮，制備制粒溶液?？蓪⒅屏Ｈ芤悍湃胍环N容器，使用適合過程的流速，利用具有質量流量計和控制的蠕動泵，可將溶液從容器泵送入雙螺桿制粒機。使用雙螺桿制粒機，例如，為dlr的部分的制粒機，可將共混物制粒?？捎檬е剡M料器例如在dlr上的k-tron進料器以8kg/hr至24kg/hr進料速率將共混物加到雙螺桿制粒機。雙螺桿制粒機可以25℃筒溫和200至950rpm螺桿速度下操作?？蓪π∨窟M行制粒過程3分鐘，或對大批量進行數(shù)小時。干燥可將濕顆粒直接送入流化床干燥器，例如在dlr上的分段流化床干燥器?？稍?0至55℃排料期間的產(chǎn)物溫度下選擇干燥終點(在此點，顆粒的水含量可以為2.1%w/w(“干燥損失，lod”)或更小。干燥時間可以為12分鐘或更短或更長，以達到所需干燥終點。研磨可研磨經(jīng)干燥顆粒，以減小顆粒大小?？蔀榇耸褂缅F形磨物，例如整合式quadrou10comil。共混顆?？捎檬е剡M料器和連續(xù)共混器與額外顆粒賦形劑(例如，填料和潤滑劑)共混。共混速度可以為80–300rpm。壓片使用單站或旋轉壓片機，例如courtoymodulp壓片機，dlr系統(tǒng)的部分，用適合大小的工具將壓片共混物壓成片。200mg劑量i型化合物1和125mg實質非晶化合物2的片重量可以為約500或600mg。涂膜片劑可用創(chuàng)新型omega涂膜機涂膜，涂布機為dlr系統(tǒng)的部分。該涂布機能夠快速涂膜1至4kg的亞批次，以允許連續(xù)制造。印刷利用例如ackleyramp印刷機，可用花押字在一個或兩個片劑面上印刷涂膜片劑。pat以上在一個實施方案中所述的連續(xù)過程用表1中所述的pat技術增強。有6個pat位置，各包括手工取樣口?？筛鶕?jù)需要得到用于研究原因的過程中樣品以及用于pat模型維護、轉移和驗證的樣品。pat系統(tǒng)可用于實時釋放試驗(rtrt)，也可用于過程中控制(ipc)和反饋/前饋控制。表1可通過rtrt滿足規(guī)格，如表2中所述。表2存在檢測不符合的材料的高概率。例如，如果模型分類標準設定在最低95%置信，且在批制造期間試驗800片，則每3分鐘1片取樣速率運行40小時等于800片。那么，通過不符合的批的概率極低：<(0.05)n-，其中n=樣品#，因此，概率<1.5x10-1041。由于短期事件(≥3分鐘)不檢測不符合的片劑的概率如下：1片(3分鐘事件)→<0.05(檢測概率>0.95)；2片(6分鐘事件)→<0.0025(檢測概率>0.9975)。pat測量可作為直接通過組合測量常規(guī)最終試驗來常規(guī)表達性質(即，作為分析、cu、溶解等)的替代。可用ichq2作為指導進行驗證。依次離線-線上方法研發(fā)允許以材料節(jié)省方式評價cqas。最終，rtrt將導向以比常規(guī)試驗更高的置信水平保證產(chǎn)品品質。htthplc在一個實施方案中，本發(fā)明的制造的連續(xù)過程用高通量試驗(htt)hplc方法驗證樣品。通過改善樣品制備技術、增強一般分析方法、使用充分限定的樣品工作流程和自動數(shù)據(jù)處理，高通量試驗hplc方法對至少300個樣品得到24小時樣品周轉時間。樣品制備花費大部分fte時間，且為大多數(shù)誤差的來源。在方法研發(fā)期間通常被忽略。在一個實施方案中，改善的樣品制備技術包括使用一次性廣口瓶。在另一個實施方案中，改善樣品制備技術包括將整瓶樣品加到一次性瓶，加入稀釋劑，搖動過夜，并離心。可研發(fā)一般hplc方法，并針對多個項目進行驗證?？墒褂闷胀╤plc柱和市售流動相。另外的分析改善包括杠桿作用標準穩(wěn)定性和利用注射重疊。在另一個實施方案中，htthplc用于研發(fā)過程分析技術，作為從過程分析技術收集的光譜數(shù)據(jù)與絕對值相關的方式。在一個實施方案中，本發(fā)明的特征為一種進行高通量hplc的方法，所述方法包括：a)使預稱重樣品的容器(例如，小瓶)落入塑料瓶(例如，hdpe瓶)；b)將溶液通過瓶頂分配器加到各組容器和瓶；c)搖動各組塑料瓶、小瓶和溶液，直至樣品溶解；d)將各組塑料瓶、小瓶和溶液離心；e)將來自離心步驟的上清液的等分試樣裝到hplc柱上；和f)用流動相運行柱。htthplc的優(yōu)點是它可以適時、精確和成本有效的方式測量高體積樣品。樣品制備用塑料瓶作為主容器，它們可大量放置在搖動器上，然后直接轉移到離心機。這避免過濾樣品溶液的更多時間消耗步驟。另外，塑料瓶的大小允許直接通過樣品的容器(例如小瓶)落入塑料瓶加入樣品。隨后可用市售分配器加入固定量溶液，因而避免將溶液移液的另一個時間消耗步驟。表3概括與常規(guī)hplc試驗方法相比高通量試驗hplc的益處。表3常規(guī)方法htt法樣品加到容量瓶樣品加到一次性hdpe瓶預混稀釋劑離架溶劑混入樣品瓶(不必稀釋劑制備)加入稀釋劑并qs’d至線經(jīng)校準瓶頂分配器分配溶劑對于bu：定量轉移對于bu：在瓶中沖洗樣品瓶超聲處理和搖動樣品只搖動二次稀釋和qs無稀釋(注射體積推進)樣品過濾樣品離心hplc為項目特定(可變mp和柱組合)hplc為一般性(使用固定柱，固定流動相a和b和商業(yè)制造的流動相)其它實施方案在本公開中提到的所有公布和專利均在明確和單獨指定各單獨公布或專利申請通過引用結合到本文的相同程度通過引用結合到本文中。要是在通過引用結合的任何專利或公布中術語的意義與本公開中所用術語的意義沖突，應以本公開中術語的意義為準。另外，前面討論只公開和描述本發(fā)明的示例性實施方案。本領域的技術人員應容易地從這些討論和附圖及權利要求認識到，可在不脫離以下權利要求限定的本發(fā)明的精神和范圍下作出修改和變化。當前第1頁12