本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體為延胡索定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、操作規(guī)程與制造工藝。
背景技術(shù)：
延胡索(學(xué)名：Corydalis yanhusuo W.T.Wang ex Z.Y.Su et C.Y.Wu)，又名：延胡、玄胡索、元胡索、元胡等，為罌粟科、紫堇屬多年生草本植物，其藥用部位為干燥塊莖，主產(chǎn)浙江省東陽(yáng)、磐安一帶。元胡史載于《開(kāi)寶本草》，性溫，味辛苦，入心、脾、肝、肺，是活血化瘀、行氣止痛之妙品，尤以止痛之功效而著稱于世。李時(shí)珍在《本草綱目》中歸納元胡有“活血，利氣，止痛，通小便”四大功效，并推崇元胡“能行血中氣滯，氣中血滯，故專治一身上下諸痛”。正因?yàn)檠雍餍Ч@著，臨床應(yīng)用廣泛，在《中國(guó)藥典》2005年版中，接近30％的復(fù)方制劑中使用了延胡索，其市場(chǎng)前景廣闊。
胡索含20多種生物堿，據(jù)現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》中記載，延胡索的功能與主治為：活血，行氣，止痛。用于胸脅、脘腹疼痛，胸痹心痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀阻，跌撲腫痛。延賀凱、高建莉、趙光樹(shù)的《延胡索化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量控制研究進(jìn)展》對(duì)延胡索的功效綜述為：延胡索中的生物堿具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、降壓和抗心律失常作用，目前，很多新研究表明，延胡索還具有其他廣泛的生理活性，如抗心肌缺血、抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍、抗腫瘤、抗氧化、保肝等，延胡索乙素是其中多數(shù)藥理作用的主要活性成分。延胡索乙素為鎮(zhèn)痛的主要成分，其功能與主治具有活血，行氣，止痛的功效。20世紀(jì)中葉，中國(guó)科學(xué)家成功地從延胡索中分離出鎮(zhèn)痛效果明顯的延胡索乙素，它的鎮(zhèn)痛作用較解熱鎮(zhèn)痛藥強(qiáng)，又沒(méi)有杜冷丁等鎮(zhèn)痛藥物的成癮性，口服吸收良好，適用于內(nèi)科疾病引起的鈍痛，如頭痛、月經(jīng)痛及分娩痛等。
延胡索作為應(yīng)用廣泛的中藥材，為滿足市場(chǎng)需求，現(xiàn)多采用人工種植的方式，因此也不可避免的會(huì)產(chǎn)生農(nóng)藥殘留導(dǎo)致重金屬超標(biāo)等質(zhì)量問(wèn)題，黃衛(wèi)平等的《“浙八味”藥材中重金屬鉛、鎘、銅含量分析》中指出由于環(huán)境的影響以及植物可能對(duì)重金屬的富集，中藥材中重金屬普遍存在，“由于國(guó)際國(guó)內(nèi)對(duì)中藥材中的有害重金屬十分重視并有逐年提高限量要求的趨勢(shì)，加強(qiáng)對(duì)藥材重金屬的檢測(cè)和控制，制訂相應(yīng)的限量指標(biāo)尤為必要?！?/p>
附圖說(shuō)明
附圖1是延胡索定性定量中藥飲片生產(chǎn)工藝流程圖。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供的延胡索定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與制造工藝，增加藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素B1、二氧化硫殘留量、含量測(cè)定，并將含量測(cè)定中的延胡索乙素的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.040％(延胡索中藥材標(biāo)準(zhǔn))提高至0.044％。并通過(guò)特定的工序生產(chǎn)出片厚0.3～1mm的延胡索中藥飲片，確保中藥飲片符合高標(biāo)準(zhǔn)高品質(zhì)的要求。
本發(fā)明提供的延胡索定性定量中藥飲片的制造工藝，包括以下步驟：
A10、凈制：清除混在延胡索中的雜質(zhì)、灰塵及霉變品等，以便達(dá)到潔凈或進(jìn)一步加工處理。
A20、切碎：碎粒，按粗碎機(jī)操作規(guī)程操作，用孔徑3mm的篩網(wǎng)將延胡索進(jìn)行切碎操作。切碎后崗位人員需填寫(xiě)中間產(chǎn)品請(qǐng)檢單，交質(zhì)管部由QA取樣進(jìn)行中間產(chǎn)品檢查。
A30、包裝：根據(jù)本品包裝規(guī)格要求進(jìn)行包裝。包括前需對(duì)包裝間進(jìn)行檢查，確認(rèn)包裝生產(chǎn)線的清場(chǎng)已經(jīng)完成，并核對(duì)包裝材料是否符合要求。
A40、內(nèi)包裝：在設(shè)備上調(diào)整好需要印制的生產(chǎn)日期、批號(hào)，QA監(jiān)控，稱取規(guī)定重量的藥材放入料斗中，用封口機(jī)封口，要求做到封口嚴(yán)密、平整、美觀。操作過(guò)程中每隔30min抽樣檢測(cè)裝量、封口及生產(chǎn)日期印制是否清晰等情況。
A50、外包裝：在設(shè)備上調(diào)整好需印制的生產(chǎn)日期及批號(hào)，QA監(jiān)控，在外包裝盒子上打印批號(hào)、生產(chǎn)日期，打印過(guò)程中需注意批號(hào)及生產(chǎn)日期是否清晰。將內(nèi)包裝完成后的飲片及檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)放入外包盒中，4袋/盒。將每10盒飲片，套入1個(gè)熱縮膜中，進(jìn)行熱收縮；熱收縮后裝入大紙箱中，240盒/箱。操作過(guò)程中，QA隨時(shí)抽檢。
A60、包裝后崗位人員需填寫(xiě)成品請(qǐng)檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行產(chǎn)品檢查。
增加藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素B1、二氧化硫殘留量、含量測(cè)定，并將含量測(cè)定中的延胡索乙素的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.040％(延胡索中藥材標(biāo)準(zhǔn))提高至0.044％。修訂后的延胡索定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下所示：
延胡索飲片
拼音名稱：Yanhusuo Yinpian
包裝：純鋁復(fù)合膜包裝。
【性狀】取本品適量，在日光下觀察，本品呈不規(guī)則的碎塊。外表皮黃色或黃褐色，有不規(guī)則細(xì)皺紋。斷面黃色，角質(zhì)樣，具蠟樣光澤。嗅之，氣微，嘗之，味苦。
【鑒別】
顯微鑒別
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、藥典篩、顯微鏡、酒精燈
試劑及試液：水合氯醛試液、甘油醋酸試液、甘油乙醇試液、稀甘油(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
測(cè)定及結(jié)果判定：取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)適量，挑取少許置載玻片上，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他試液1～2滴，蓋上蓋玻片。必要時(shí)滴加水合氯醛試液后，在酒精燈上加熱透化，并滴加甘油乙醇試液或稀甘油，蓋上蓋玻片，于顯微鏡下觀察：本品粉末綠黃色。糊化淀粉粒團(tuán)塊淡黃色或近無(wú)色。下皮厚壁細(xì)胞綠黃色，細(xì)胞多角形、類方形或長(zhǎng)條形，壁稍彎曲，木化，有的成連珠狀增厚，紋孔細(xì)密。螺紋導(dǎo)管直徑16～32μm。
薄層鑒別
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、超聲波清洗機(jī)、恒溫水浴鍋、點(diǎn)樣器、展開(kāi)缸、薄層板、三用紫外儀
試劑及試液：乙醚、乙醇、正己烷、乙酸乙酯、碳酸氫鈉、甲醇、環(huán)己烷、二氯甲烷、甲酸、稀鹽酸(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照藥材及對(duì)照品：延胡索對(duì)照藥材、阿魏酸對(duì)照品、藁本內(nèi)酯對(duì)照品
取本品粉末1g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡素對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2～3μl分別點(diǎn)于同一用1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(9∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置碘缸中約3分鐘后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查
藥屑、雜質(zhì)
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩
測(cè)定及結(jié)果判定：照雜質(zhì)檢查法(通則2301)測(cè)定。取供試品約100g(精確到0.1g)，攤開(kāi)，揀出雜質(zhì)，用6號(hào)篩篩出藥屑，合并，稱重，計(jì)算其在供試品中的量(％)。結(jié)果判定：本品藥屑、雜質(zhì)不得過(guò)3％。
水分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、稱量瓶
測(cè)定及結(jié)果判定：照水分測(cè)定法(通則0832第二法)測(cè)定。取供試品適量(約相當(dāng)于含水量1～4ml)，精密稱定，置500ml的短頸圓底燒瓶中，加甲苯約200ml，必要時(shí)加入干燥、潔凈的無(wú)釉小瓷片數(shù)片或玻璃珠數(shù)粒，連接儀器，自冷凝管頂端加入甲苯至充滿水分測(cè)定管的狹細(xì)部分。將圓底燒瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開(kāi)始沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度，使每秒餾出2滴。待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長(zhǎng)刷或其他適宜方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在水分測(cè)定管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色，以便分離觀察)。檢讀水量，并計(jì)算成供試品的含水量(％)。結(jié)果判定：本品水分不得過(guò)15.0％。
總灰分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、馬弗爐、電爐、坩堝
測(cè)定及結(jié)果判定：照灰分測(cè)定法(通則2302)測(cè)定。取供試品2～3g(如須測(cè)定酸不溶性灰分，可取供試品3～5g)，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量(％)。結(jié)果判定：本品總灰分不得過(guò)4.0％。
重金屬及有害元素
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、微波消解儀、原子吸收分光光度計(jì)
試劑及試液：硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂、碘化鉀、抗壞血酸、鹽酸、硼氫化鈉、氫氧化鈉、硫酸、高錳酸鉀、鹽酸羥胺(其中硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂為優(yōu)級(jí)純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
標(biāo)準(zhǔn)樣品：鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、砷單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、汞單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品
方法：照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法(通則2321)測(cè)定
鉛的測(cè)定(石墨爐法)
測(cè)定條件參考條件：波長(zhǎng)283.3nm，干燥溫度100～120℃，持續(xù)20秒；灰化溫度400～750℃，持續(xù)20～25秒；原子化溫度1700～～2100℃，持續(xù)4～5秒。
鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鉛(Pb)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液制成每1ml分別含鉛0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分別精密量取1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取20μl注入石墨爐原子化器，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氯乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過(guò)夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)，進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)緩緩濃縮至2～3ml，放冷，用水轉(zhuǎn)入25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測(cè)定法精密量取空白溶液與供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取10～20μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鉛(Pb)的含量，計(jì)算，即得。
鎘的測(cè)定(石墨爐法)
測(cè)定條件參考條件：波長(zhǎng)228.8nm，干燥溫度100～120℃，持續(xù)20秒；灰化溫度300～500℃，持續(xù)20～25秒；原子化溫度1500～1900℃，持續(xù)4～5秒。
鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鎘(Cd)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含鎘0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。分別精密吸取10μl，注入石墨爐原子化器，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10～20μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度(若供試品有干擾，可分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白溶液和供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，依法測(cè)定)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鎘(Cd)的含量，計(jì)算，即得。
砷的測(cè)定(氫化物法)
測(cè)定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含硼氫化鈉和0.3％氫氧化鈉溶液(臨用前配制)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮?dú)鉃檩d氣，檢測(cè)波長(zhǎng)為193.7nm。
砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含砷(As)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含砷0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分別精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25％碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml，搖勻，加10％抗壞血酸溶液(臨用前配制)1ml，搖勻，用鹽酸溶液(20→100)稀釋至刻度，搖勻，密塞，置80℃水浴中加熱3分鐘，取出，放冷。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測(cè)定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備中的A法制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下，自“加25％碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml”起，依法測(cè)定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中砷(As)的含量，計(jì)算，即得。
汞的測(cè)定(冷蒸氣吸收法)
測(cè)定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含0.5％硼氫化鈉和0.1％氫氧化鈉的溶液(臨用前配制)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮?dú)鉃檩d氣，檢測(cè)波長(zhǎng)為253.6nm。
汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含汞(Hg)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用水稀釋至刻度，搖勻。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測(cè)定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過(guò)夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上，于120℃緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)濃縮至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，必要時(shí)離心，取上清液，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測(cè)定從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中汞(Hg)的含量，計(jì)算，即得。
銅的測(cè)定(火焰法)
測(cè)定條件檢測(cè)波長(zhǎng)為324.7nm，采用空氣-乙炔火焰，必要時(shí)進(jìn)行背景校正。
銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含銅(Cu)10μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液制成每1ml分別含銅0μg、0.05μg、0.2μg、0.4μg、0.6μg、0.8μg的溶液。依次噴入火焰，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法測(cè)定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中銅(Cu)的含量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品含鉛不得過(guò)8mg/kg；鎘不得過(guò)0.8mg/kg；砷不得過(guò)4mg/kg；汞不得過(guò)0.8mg/kg；銅不得過(guò)20mg/kg。
有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗機(jī)、氣相色譜儀
試劑及試液：石油醚(60～90℃)、丙酮、氯化鈉、二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉(其中石油醚(60～90℃)為色譜純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC、pp′-DDE，pp′-DDD，op′-DDT，pp′-DDT、PCNB農(nóng)藥對(duì)照品
方法：照農(nóng)藥殘留量測(cè)定法(通則0512第一法)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以(14％-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，63Ni-ECD電子捕獲檢測(cè)器。進(jìn)樣口溫度230℃，檢測(cè)器溫度300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘。理論板數(shù)按α-BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1×106，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
對(duì)照品貯備溶液的制備精密稱取六六六(BHC)(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)、滴滴涕(DDT)(pp′-DDE，pp′-DDD，op′-DDT，pp′-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)農(nóng)藥對(duì)照品適量，用石油醚(60～90℃)分別制成每1ml約含4～5μg的溶液，即得。
混合對(duì)照品貯備溶液的制備精密量取上述各對(duì)照品貯備液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60～90℃)稀釋至刻度，搖勻，即得。
混合對(duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品貯備液，用石油醚(60～90℃)制成每1L分別含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取供試品，粉碎成粉末(過(guò)三號(hào)篩)，取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過(guò)夜，精密加丙酮40ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30ml，稱定重量，超聲15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置(使分層)，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無(wú)水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反復(fù)操作至二氯 甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀釋至5ml，小心加入硫酸1ml，振搖1分鐘，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，精密量取上清液2ml，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40℃下(或用氮?dú)?將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1ml，即得。
測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。
結(jié)果判定：本品含總六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和)不得過(guò)0.2mg/kg；總滴滴涕(pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT之和)不得過(guò)0.2mg/kg；五氯硝基苯不得過(guò)0.1mg/kg。
二氧化硫殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱套
試劑及試液：過(guò)氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/L氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/L)(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法：照二氧化硫殘留量測(cè)定法(通則2331)測(cè)定。
取藥材或飲片細(xì)粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300～400ml。打開(kāi)回流冷凝管開(kāi)關(guān)給水，將冷凝管的上端E口處連接一橡膠導(dǎo)氣管置于100ml錐形瓶底部。錐形瓶?jī)?nèi)加入3％過(guò)氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導(dǎo)氣管的末端應(yīng)在吸收液液面以下)。使用前，在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml)，并用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點(diǎn)；如果超過(guò)終點(diǎn)，則應(yīng)舍棄該吸收溶液)。開(kāi)通氮?dú)?，使用流量?jì)調(diào)節(jié)氣體流量至約0.2L/min；打開(kāi)分液漏斗C的活塞，使鹽酸溶液(6mol/L)10ml流入蒸餾瓶，立即加熱兩頸燒瓶?jī)?nèi)的溶液至沸，并保持微沸；燒瓶?jī)?nèi)的水沸騰1.5小時(shí)后，停止加熱。吸收液放冷后，置于磁力攪拌器上不斷攪拌，用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定，至黃色持續(xù)時(shí)間20秒不褪，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。
結(jié)果判定：本品二氧化硫殘留量不得過(guò)150mg/kg。
浸出物
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱
試劑及試液：70％乙醇(試劑使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法：照醇溶性浸出物測(cè)定法(通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用70％乙醇作溶劑。
取供試品約2～4g，精密稱定，置100～250ml的錐形瓶中，精密加70％乙醇50～100ml，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(％)。
結(jié)果判定：本品醇溶性浸出物不得少于50.0％。
黃曲霉毒素B1
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、均質(zhì)瓶、離心機(jī)、高效液相色譜儀(配置熒光檢測(cè)器及衍生化泵、衍生化保溫箱)
試劑及試液：甲醇、乙腈、碘、氯化鈉、免疫親合柱(其中乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：黃曲霉毒素B1對(duì)照品
方法：照黃曲霉毒素測(cè)定法(通則2351)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)為流動(dòng)相；采用柱后衍生法檢測(cè)，碘衍生法：衍生溶液為0.05％的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀釋至1000ml制成)，衍生化泵流速每分鐘0.3ml，衍生化溫度70℃以熒光檢測(cè)器檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)λex＝360nm(或365nm)，發(fā)射波長(zhǎng)λex＝450nm。兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
混合對(duì)照品溶液的制備精密量取黃曲霉毒素B1對(duì)照品溶液(標(biāo)示濃度為1.0μg/ml)0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。
供試品溶液的制備取供試品粉末約15g(過(guò)二號(hào)篩)，精密稱定，置于均質(zhì)瓶中，加入氯化鈉3g，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘)，離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，量取續(xù)濾液20.0ml，通過(guò)免疫親合柱，流速每分鐘3ml，用水20ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進(jìn)入柱子，將水?dāng)D出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液5μl、10μl、15μl、20l、25μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密吸取上述供試品溶液20～25μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1的量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品每1000g含黃曲霉毒素B1不得過(guò)5μg。
二氧化硫殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱套
試劑及試液：過(guò)氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/L氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/L)(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法：照二氧化硫殘留量測(cè)定法(通則2331)測(cè)定。取藥材或飲片細(xì)粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300～400ml。打開(kāi)回流冷凝管開(kāi)關(guān)給水，將冷凝管的上端E口處連接一橡膠導(dǎo)氣管置于100ml錐形瓶底部。錐形瓶?jī)?nèi)加入3％過(guò)氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導(dǎo)氣管的末端應(yīng)在吸收液液面以下)。使用前，在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml)，并用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點(diǎn)；如果超過(guò)終點(diǎn)，則應(yīng)舍棄該吸收溶液)。開(kāi)通氮?dú)猓褂昧髁坑?jì)調(diào)節(jié)氣體流量至約0.2L/min；打開(kāi)分液漏斗C的活塞，使鹽酸溶液(6mol/L)10ml流入蒸餾瓶，立即加熱兩頸燒瓶?jī)?nèi)的溶液至沸，并保持微沸；燒瓶?jī)?nèi)的水沸騰1.5小時(shí)后，停止加熱。吸收液放冷后，置于磁力攪 拌器上不斷攪拌，用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定，至黃色持續(xù)時(shí)間20秒不褪，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。
結(jié)果判定：本品二氧化硫殘留量不得過(guò)150mg/kg。
含量測(cè)定
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、高效液相色譜儀
試劑及試液：甲醇、氨水、磷酸、三乙胺(其中甲醇為色譜純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：延胡索乙素對(duì)照品
方法：照高效液相色譜法(通則0512)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1％磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH值至6.0)(55∶45)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280mn。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備取延胡索乙素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含46ug溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液50ml，稱定重量，冷浸1小時(shí)后加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果判定：本品按干燥品計(jì)算，含延胡索乙(C21H25NO4)不得少于0.044％
微生物限度
沙門菌取本品10g，以無(wú)菌接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性實(shí)驗(yàn)確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，按非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定：沙門菌不得檢出(10g)。
耐膽鹽革蘭陰性菌取本品，以無(wú)菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基為稀釋劑，制成1∶10的供試液，混勻，按非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定：耐膽鹽革蘭陰性菌應(yīng)小于104cfu(1g)。