本發(fā)明涉及體外診斷檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種檢測艾滋病病毒的試劑盒。

背景技術(shù)：

艾滋病(AIDS，Acquired Immune Deficiency Syndrome)也被稱為獲得性免疫缺陷綜合征，是一種危害性極大的傳染病，由艾滋病病毒(HIV，Human Immunodeficiency Virus)。初次感染后，一個人可能沒有任何癥狀或可能會經(jīng)歷一個短暫時期的流感樣疾病。隨著感染的進(jìn)展，它會干擾人體免疫系統(tǒng)，并增加感染的風(fēng)險，常見的如肺結(jié)核以及其他機會性感染，最終可能導(dǎo)致患者死于與艾滋病相關(guān)的并發(fā)癥。截止到2014年，全球大約有3690萬人感染過艾滋病病毒，并且1200萬死于艾滋病并發(fā)癥，因此艾滋病病毒的檢測對控制、治療艾滋病具有重大意義。

但是現(xiàn)有技術(shù)中，艾滋病病毒的試劑盒對艾滋病病毒的檢測都存在成本較高、不夠方便的問題。鑒于此，克服該現(xiàn)有技術(shù)所存在的缺陷是本技術(shù)領(lǐng)域亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡便、價格低廉的檢測艾滋病病毒的試劑盒。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種檢測艾滋病病毒的試劑盒，其特征在于，該檢測艾滋病病毒的試劑盒包括：

包被的微孔反應(yīng)板、銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原、分析緩沖液、熒光增強液、清洗液，陰陽性對照品。

優(yōu)選地，包被的微孔反應(yīng)板的制作過程為：

用包被液將基因工程重組HIV抗原稀釋，獲得稀釋液；

將稀釋液加入微孔反應(yīng)板中，靜置24小時；

按照包被抗原還原劑與基因工程重組HIV抗原按體積比9:1，將包被抗原還原劑與稀釋液混合，在4℃處理30分鐘；

去除多余的包被液，用清洗液洗滌，加入封閉液，靜置24小時；

去除多余的封閉液真空抽干后冷藏。

優(yōu)選地，包被液包括0.015mol/L Na₂CO₃，0.035mol/L NaHCO₃，0.1％聚乙二醇辛基苯基醚，0.05％聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯。

優(yōu)選地，封閉液為50ml/L Tris-HCl緩沖體系中加入0.1％BSA、3％海藻糖過濾后調(diào)PH值至7.2而獲得。

優(yōu)選地，包被抗原還原劑為1％β-疏基乙醇。

優(yōu)選地，銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原的制備方法為：

將HIV抗原加入的離心管；

在離心管內(nèi)加入標(biāo)記緩沖液，離心后，去除濾液；

重復(fù)上一步驟兩次以上，獲得濃縮的抗原原料；

按照質(zhì)量比HIV抗原/標(biāo)記試劑＝2:1向離心管加入的銪標(biāo)記試劑，密封后，4℃低溫靜置保存，獲得銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原；

將離心管內(nèi)的銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原純化，加入保護(hù)液后冷藏。

優(yōu)選地，標(biāo)記緩沖液為將Na₂CO₃溶液過濾并調(diào)整PH值至9.5獲得。

優(yōu)選地，保護(hù)液為0.1％的BSA溶液。

優(yōu)選地，分析緩沖液是由0.01％Tween-20、0.9％NaCl、0.5％BSA加入Tris-HCl緩沖液中溶解、過濾獲得的。

優(yōu)選地，清洗液為0.9％NaCl，0.02％NaN₃，0.03％聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯加入50mmol/L Tris-HCl緩沖液中制備而成。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明中，檢測艾滋病病毒的試劑盒其重復(fù)性好、精密度高、特異性好，而且操作快速簡便、價格相對較低、具有易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。

【附圖說明】

圖1為本發(fā)明一種檢測艾滋病病毒的試劑盒的一個實施例的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實施方式】

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不限定本發(fā)明。

此外，下面所描述的本發(fā)明各個實施方式中所涉及到的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。

實施例1:

本發(fā)明實施例1提供了一種檢測艾滋病病毒的試劑盒。圖1為本發(fā)明一種檢測艾滋病病毒的試劑盒的一個實施例的結(jié)構(gòu)示意圖，如圖1所示，檢測艾滋病病毒的試劑盒包括：包被的微孔反應(yīng)板、銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原、分析緩沖液、熒光增強液、清洗液，陰陽性對照品。

微孔反應(yīng)板是一種事先包被而專用于放置待測樣本的透明塑料板，透明塑料板上有多排大小均勻一致的小孔，每個小孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的HIV抗體，從而形成包被的微孔反應(yīng)板。微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液，其常見規(guī)格有96孔板，48孔板，32孔板等多種。優(yōu)選地，微孔反應(yīng)板可以是聚苯乙烯等材料構(gòu)成，其具有透明性好，無毒無味等優(yōu)點。

有研究結(jié)果表明，HIV感染后前期(4至6周)抗體檢測可為陰性，因此HIV抗體檢測能夠較早的發(fā)現(xiàn)HIV感染，對控制HIV感染的傳播起到了重要作用。

具體地，在本發(fā)明實施例中，包被的微孔反應(yīng)板的制作過程包括以下5步：

用包被液將基因工程重組HIV抗原稀釋，獲得稀釋液。這里可以按照基因工程重組HIV抗原與包被液的體積比為1:100、1:200、1:300等比例稀釋。優(yōu)選地，包被液由0.015mol/L Na₂CO₃，0.035mol/L NaHCO₃，0.1％聚乙二醇辛基苯基醚，0.05％聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯組成，經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)該包被液的包被效果較好。

基因工程抗原分為原核表達(dá)和真核表達(dá)，一般是將想要表達(dá)的抗原插入表達(dá)載體中，導(dǎo)入工程菌如大腸桿菌BL21等，通過大量的表達(dá)可以獲得非常大量的抗原蛋白，具有可控制，易提純，易檢測的優(yōu)點，因此這里采用的是基因工程重組HIV抗原。

2)將稀釋液加入微孔反應(yīng)板中，靜置24小時。

3)按照包被抗原還原劑與基因工程重組HIV抗原按體積比9:1的關(guān)系，將包被抗原還原劑與稀釋液混合，在4℃處理30分鐘。包被抗原還原劑可以在基因工程重組HIV抗原的處理過程防止基因工程重組HIV抗原被氧化，優(yōu)選地，包被抗原還原劑為1％β-疏基乙醇，β-疏基乙醇能夠溶解于水中，同時降低自身的揮發(fā)性，且具有較低的蒸汽壓。

4)去除多余的包被液，用清洗液洗滌，加入封閉液，靜置24小時。為了實現(xiàn)較好的洗滌效果，優(yōu)選地，清洗液為將0.9％NaCl，0.02％NaN₃，0.03％聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯加入50mmol/L Tris-HCl(三羥甲基氨基甲烷)緩沖液中制備而成。

由于抗體和抗原之間的結(jié)合是有一定的識別位點的，不是隨便結(jié)合的，這就是所謂的特異性。但是也可能因為一些特殊的原因而導(dǎo)致本來不應(yīng)該結(jié)合的一對抗體與抗原相互結(jié)合了，那么這就是非特異性的結(jié)合，因此，沒有結(jié)合蛋白質(zhì)的空白位置需要用封閉液加以封閉，以避免非特異性結(jié)合。封閉液應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的表位、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應(yīng)。最常見的封閉液是BSA(Bull Serum Albumi，牛血清蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠。優(yōu)選地，本實施例中，封閉液為50ml/L Tris-HCl緩沖體系中加入0.1％BSA、3％海藻糖過濾后調(diào)PH值至7.2獲得，將其在4℃保存，經(jīng)實驗驗證具有良好的效果。

5)去除多余封閉液真空抽干后冷藏。

本實施例中，檢測艾滋病病毒的試劑盒包括銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原，其制備方法為：

1)將HIV抗原加入離心管。

2)在離心管內(nèi)加入標(biāo)記緩沖液，離心后，去除濾液。優(yōu)選地，標(biāo)記緩沖液為將Na₂CO₃溶液過濾并調(diào)整PH值至9.5獲得。

3)重復(fù)上一步驟兩次以上，獲得濃縮的抗原原料。由于保存抗體的緩沖液中常含有疊氮鈉或一級胺，需要去除此類物質(zhì)，另外抗體要達(dá)到一定的濃度才有良好的標(biāo)記效果，故需對抗體進(jìn)行濃縮、去除雜質(zhì)處理。

4)按照質(zhì)量比HIV抗原/銪標(biāo)記試劑＝2:1向離心管加入一定量的銪標(biāo)記試劑，密封后，4℃低溫靜置保存，獲得銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原。

5)將離心管內(nèi)的銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原純化，加入保護(hù)液后冷藏。這里的純化方法可以采用層析分離純化技術(shù)等方式。這里的保護(hù)液可以對銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原具有保護(hù)作用，優(yōu)選地，保護(hù)液為0.1％的BSA溶液。

另外，分析緩沖液可以模擬生物體內(nèi)環(huán)境，有保證的結(jié)果穩(wěn)定性。本實施例中，分析緩沖液是由0.01％聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯、0.9％NaCl、0.5％BSA加入Tris-HCl緩沖液中溶解、過濾獲得的。

以HIV檢測為陽性的血清作為陽性對照品，經(jīng)HIV檢測均為陰性的血清為陰性對照品。陰陽性對照品的作用在于作為檢測待測血清的對照組。

使用時，將包被的微孔反應(yīng)板置于室溫下平衡。將分析緩沖液，陰、陽性對照品或待測樣品依次加入包被的微孔反應(yīng)板上的小孔中。在室溫振動孵育1小時，這樣待測樣品中的抗體與已包被的HIV重組抗原結(jié)合成抗原-抗體復(fù)合物。再加入銪標(biāo)記的HIV標(biāo)記抗原，形成抗原-HIV抗體-Eu標(biāo)記抗原免疫復(fù)合物。再加入熒光增強液，振蕩孵育幾分鐘，銪在熒光增強液中從免疫復(fù)合物上解離后發(fā)出強的熒光，熒光強度與樣品中的抗體濃度成正比，在熒光檢測儀上可以檢測出熒光值。經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明實施例中檢測艾滋病病毒的試劑盒重復(fù)性好、精密度高、特異性好，而且操作快速簡便、價格相對較低、具有易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。