1.量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物的制備方法及其應(yīng)用,其特征在于按照下述步驟進(jìn)行:
(1)量子點(diǎn)偶聯(lián)β-HCG單抗
偶聯(lián)時(shí),加入磷酸鹽調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH,在巰基丙酸修飾的CdTe量子點(diǎn)中先加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDC)溶液活化反應(yīng)10-15 min,再加入NHS溶液反應(yīng)10-15 min,最后加入β-HCG單抗于37℃反應(yīng)2-4 h;
反應(yīng)結(jié)束后,將得到的偶聯(lián)物離心去沉淀,上清液經(jīng)超濾離心管離心,并用磷酸緩沖液洗滌,最后濃縮后4℃保存;
(2)基于量子點(diǎn)的免疫印跡法
蛋白樣品經(jīng)過SDS-PAGE電泳按分子量大小分離,轉(zhuǎn)至PVDF膜后并封閉,用量子點(diǎn)標(biāo)記的β-HCG單抗做為一抗孵育,膜上目的蛋白即能與之進(jìn)行特異性結(jié)合,最后采用紫外凝膠系統(tǒng)檢測成像;
蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳按分子量大小分離,再將PVDF膜于甲醇中激活,采用濕法轉(zhuǎn)膜;
將轉(zhuǎn)好的膜放入5%脫脂牛奶中,震蕩封閉1 h;
用TBS溶液稀釋成一系列濃度的量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物,室溫下孵育2 h;
反應(yīng)后直接將膜置于紫外凝膠系統(tǒng)中檢測成像;
觀察熒光條帶,并檢測各條帶熒光強(qiáng)度,得出線性關(guān)系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物的制備方法,其特征在于其中所述的的量子點(diǎn),其表面帶有羧基的CdTe量子點(diǎn),發(fā)射波長為520 nm - 600 nm中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物的制備方法,其特征在于其中步驟(1)中加入的量子點(diǎn)與EDC質(zhì)量比為1:0.4 - 1:1,EDC與NHS質(zhì)量比為1: 0.1 - 1: 0.3;
調(diào)節(jié)反應(yīng)pH為7.0 – 8.0,每步反應(yīng)10-15 min;
最后加入的量子點(diǎn)與β-HCG單抗質(zhì)量比為1: 0.1-1: 0.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物的制備方法的應(yīng)用,其特征在于其中所述的量子點(diǎn)-β-HCG單抗偶聯(lián)物的應(yīng)用,檢測的目的蛋白條帶可針對(duì)HCG和β-HCG進(jìn)行特征檢測,并根據(jù)其熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量測定。