本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種超臨界流體色譜(SFC)-氣相色譜(GC)-質(zhì)譜(MS)聯(lián)用來測定煙草中醛酮類化合物的方法。

背景技術(shù)：

隨著人們對吸煙與健康問題的普遍關(guān)注，卷煙降焦減害已成為煙草行業(yè)的必然選擇，低焦油卷煙的研發(fā)也成為卷煙生產(chǎn)企業(yè)的一個重要課題。然而由于降焦減害技術(shù)的開展使得煙草制品的香吃味大大降低，因此，補香、增香、減少卷煙煙氣香氣損失已成為行業(yè)關(guān)注和研究的重要方向。補香的一個重要前提要充分了解煙葉原料中香氣成分的組成、性質(zhì)等。因此，分析和研究煙草中的香氣成分具有十分重要的意義。

醛酮類羰基化合物是卷煙加香中的一類重要香原料，目前煙草科技工作者對醛酮類羰基化合物的分析也進行了很多研究。常用的分析方法包括頂空-氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)法、氣相色譜/氮-磷檢測器法、PLC/二極管陣列檢測器法、2,4-二硝基苯肼(DNPH)衍生-高效液相色譜/質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。然而這些方法測定醛酮類化合物都很少，主要是由于煙草中化學(xué)成分非常復(fù)雜、種類繁多，超出了單柱色譜的分離能力，許多化合物無法完全分離，影響了檢索結(jié)果的可靠性。因此要實現(xiàn)煙草中的醛酮類化合物準(zhǔn)確分析，必須另辟蹊徑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種煙草中醛酮類化合物的測定方法，處理溫度低，在分離過程中揮發(fā)性成分不會損失；經(jīng)SFC分離后的各段餾分用GC-MS分析，各段之間化合物基本不重疊，同時解決了GC-MS的峰容量有限的問題。結(jié)果令人滿意，分離出的醛酮類化合物數(shù)量遠遠多于直接進樣分析，為煙草中醛酮類化合物的測定提供了新方法，對評價吸煙對健康的危害、促進低危害卷煙的研發(fā)具有重要意義。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種煙草中醛酮類化合物的測定方法，用超臨界流體萃取煙草得供分析樣品；用超臨界流體色譜先對供分析樣品進行劃段，分離后的各段餾分再用氣相色譜-質(zhì)譜分析，具體如下：

(A)超臨界流體萃?。簩煵萑~片置于超臨界流體萃取裝置中，經(jīng)超臨界流體萃取后，將萃取液濃縮、過濾得供分析樣品；

(B)超臨界流體色譜劃段：將步驟A得到的供分析樣品進入到超臨界流體色譜(簡稱為SFC)，由泵輸送流動相經(jīng)超臨界流體色譜分離，按保留時間連續(xù)切割分成3-5段餾分，每段餾分自動收集到氣相色譜瓶中；

(C)氣相色譜-質(zhì)譜分析(簡稱為GC-MS)：將步驟B得到的各段餾分分別進入到氣相色譜系統(tǒng)，質(zhì)譜檢測。

其中所述術(shù)語“劃段”和“分段”是同義詞，均是指收集特定保留時間范圍內(nèi)的餾分，并與其它保留時間范圍內(nèi)的餾分分別進入后續(xù)分析裝置。

本發(fā)明技術(shù)方案中步驟A所述的超臨界流體萃取條件如下：

超臨界流體萃取的萃取釜溫度為30～65℃，萃取壓力為200～400bar，靜態(tài)萃取20～40min，動態(tài)萃取30～60min，夾帶劑為無水乙醇，流速0.01～0.2mL/min。

本發(fā)明技術(shù)方案中步驟B所述的SFC條件如下：

超臨界流體色譜采用10mm×150mm，5μm的Silica 2-EP色譜柱，流動相為質(zhì)量比為50～90/10～50的二氧化碳/甲醇，流動相流速為20～30mL/min，每次進樣200～500μL。

本發(fā)明技術(shù)方案中步驟C所述的GC-MS條件如下：

毛細管柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；進樣口溫度為250℃；載氣：高純氦(純度≥99.999％)，流速1.0mL/min；進樣方式：分流進樣，進樣量為2μL，分流比30:1；程序升溫條件：初始溫度50℃，保持5min，然后2℃/min升至80℃，再3℃/min升至230℃，保持16min，最后12℃/min升至250℃，保持20min。

質(zhì)譜條件：電離方式：EI+；離子化電壓：70ev；掃描范圍：35-450amu；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度：260℃。

譜圖檢索：WILEY、NIST08譜庫進行檢索。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為：

1、由于SFC的流動相主要是CO₂，只含有少量的有機溶劑(一般小于10％)經(jīng)SFC分離純化后的樣品，CO₂從排除口排出，各段餾分不需濃縮，可直接進入GC-MS分析。

2、對于低含量的樣品，可讓經(jīng)SFC分離的各段餾分多次累加，積累到理想分析量后再進入氣相色譜分析，在實現(xiàn)樣品高效凈化的同時大大提高了分析靈敏度

3、處理溫度低，在分離過程中揮發(fā)性成分不會損失；經(jīng)SFC分離后的各段餾分用GC-MS分析，各段之間化合物基本不重疊，同時解決了GC-MS的峰容量有限的問題，能夠鑒定出更多種類的醛酮類化合物。

附圖說明

圖1為本發(fā)明一種煙草中醛酮類化合物的測定方法中煙草樣品的SFC圖。

圖2為本發(fā)明一種煙草中醛酮類化合物的測定方法中煙草樣品不經(jīng)超臨界流體色譜分段直接用GC-MS分析氣相色譜圖。

圖3為本發(fā)明一種煙草中醛酮類化合物的測定方法中煙草樣品經(jīng)超臨界流體色譜分段后第一段餾分(a)、第二段餾分(b)、第三段餾分(c)、第四段餾分(d)用GC-MS分析氣相色譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明要求所作的任何變換或替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。

實施例1

一種煙草中醛酮類化合物的測定方法，包括以下步驟：

(A)超臨界流體萃?。簩煵萑~片置于超臨界流體萃取裝置中，超臨界流體萃取的萃取釜溫度為55℃，萃取壓力為300bar，靜態(tài)萃取20min，動態(tài)萃取40min，夾帶劑為無水乙醇，流速0.01mL/min，經(jīng)超臨界流體萃取后得樣品；

(B)SFC分段：將步驟A得到的萃取液進入到SFC分離系統(tǒng)，超臨界流體色譜采用10mm×150mm，5μm的Silica 2-EP色譜柱，流動相為質(zhì)量比為90/10的二氧化碳/甲醇，流動相流速為30mL/min，每次進樣500μL。按保留時間連續(xù)切割分成4段餾分，每段餾分自動收集到氣相色譜瓶中；

(C)GC-MS分析：將步驟C得到的各段餾分分別進入到氣相色譜系統(tǒng)，質(zhì)譜檢測。毛細管柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；進樣口溫度為250℃；載氣：高純氦(純度≥99.999％)，流速1.0mL/min；進樣方式：分流進樣，進樣量為2μL，分流比30:1；程序升溫條件：初始溫度50℃，保持5min，然后2℃/min升至80℃，再3℃/min升至230℃，保持16min，最后12℃/min升至250℃，保持20min。

質(zhì)譜條件：電離方式：EI+；離子化電壓：70ev；掃描范圍：35-450amu；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度：260℃；譜圖檢索：WILEY、NIST08譜庫進行檢索。

對于某烤煙煙葉，樣品直接進樣用GC-MS分析共鑒定出了26種醛酮類化合物，包括7種醛類和19種酮類化合物；而樣品經(jīng)SFC分段后再用GC-MS分析共鑒定出了38種醛酮類化合物，包括13種醛類和25種酮類化合物。

實施例2

一種煙草中醛酮類化合物的測定方法，包括以下步驟：

(A)超臨界流體萃?。簩煵萑~片置于超臨界流體萃取裝置中，超臨界流體萃取的萃取釜溫度為55℃，萃取壓力為300bar，靜態(tài)萃取30min，動態(tài)萃取45min，夾帶劑為無水乙醇，流速0.01mL/min，經(jīng)超臨界流體萃取后得樣品；

(B)SFC分段：將步驟A得到的萃取液進入到SFC分離系統(tǒng)，超臨界流體色譜采用10mm×150mm，5μm的Silica 2-EP色譜柱，流動相為質(zhì)量比為90/10的二氧化碳/甲醇，流動相流速為30mL/min，每次進樣300μL。按保留時間連續(xù)切割分成4段餾分，每段餾分自動收集到氣相色譜瓶中；

(C)GC-MS分析：將步驟C得到的各段餾分分別進入到氣相色譜系統(tǒng)，質(zhì)譜檢測。毛細管柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；進樣口溫度為250℃；載氣：高純氦(純度≥99.999％)，流速1.0mL/min；進樣方式：分流進樣，進樣量為2μL，分流比30:1；程序升溫條件：初始溫度50℃，保持5min，然后2℃/min升至80℃，再3℃/min升至230℃，保持16min，最后12℃/min升至250℃，保持20min。

質(zhì)譜條件：電離方式：EI+；離子化電壓：70ev；掃描范圍：35-450amu；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度：260℃；譜圖檢索：WILEY、NIST08譜庫進行檢索。

對于另一烤煙煙葉，經(jīng)超臨界流體萃取后的樣品未經(jīng)SFC劃段處理，直接進樣用GC-MS分析，共鑒定出了28種醛酮類化合物，包括13種醛類和15種酮類化合物；而樣品經(jīng)SFC分段后再用GC-MS分析，共鑒定出了42種醛酮類化合物，包括18種醛類和24種酮類化合物。

實施例3

與實施例1相同，在相同條件下平行測定7次(同批次處理)，主要考察保留時間和總峰面積值，試驗結(jié)果表明RSD均小于5％。同時選取了其中3種化合物進行了加標(biāo)回收率實驗，傳統(tǒng)方法的回收率在85-110％之間，本方法的回收率在91-103％之間，本方法的回收率明顯高。