本發(fā)明屬于水環(huán)境中抗菌藥物殘留檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
。具體涉及一種同時(shí)檢測(cè)水環(huán)境中92種抗菌藥物殘留的方法，與藥物殘留分析
技術(shù)領(lǐng)域：
相關(guān)。
背景技術(shù)：
：獸藥作為發(fā)展現(xiàn)代畜牧業(yè)的物質(zhì)基礎(chǔ)，在降低畜禽的發(fā)病率與死亡率、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、改善動(dòng)物產(chǎn)品品質(zhì)和提高飼料利用率方面起到了重要的作用?？刮⑸锼幬锸俏覈?guó)使用最廣泛的獸藥，包括抗生素如β-內(nèi)酰胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氯霉素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、林可胺類(lèi)、多肽類(lèi)及泰妙菌素等其他類(lèi)抗生素、化學(xué)合成抗菌藥如磺胺類(lèi)及其增效劑、喹諾酮類(lèi)、喹噁啉類(lèi)及硝基咪唑等其他藥物。這些抗菌類(lèi)藥物經(jīng)使用后，有可能以原形或代謝物形式隨糞便形式排出，可能進(jìn)入環(huán)境水體，污染水體，破壞水中的微生物環(huán)境，進(jìn)而可能對(duì)人類(lèi)健康帶來(lái)潛在危害。目前，檢測(cè)環(huán)境水環(huán)境中抗菌類(lèi)藥物的方法主要是液相色譜或液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。由于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，具有高靈敏度、分析范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于抗菌類(lèi)藥物的檢測(cè)。目前，測(cè)定水環(huán)境中抗菌類(lèi)藥物的方法，現(xiàn)有的檢測(cè)方法主要針對(duì)一種或一類(lèi)抗菌類(lèi)藥物的殘留檢測(cè)，做多類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法的報(bào)道較少，目前只有測(cè)定6類(lèi)35種化合物和測(cè)定4類(lèi)12種化合物殘留的報(bào)道。還沒(méi)有檢測(cè)8類(lèi)92種抗菌類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法的相關(guān)報(bào)道。同時(shí)現(xiàn)有的方法比較繁瑣，費(fèi)時(shí)，檢測(cè)成本還比較高。本發(fā)明同時(shí)檢測(cè)水環(huán)境中92種抗菌藥物殘留的方法，具有樣品前處理簡(jiǎn)便、快速、本發(fā)明的方法靈敏度高，檢測(cè)的藥物種類(lèi)多等特點(diǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種同時(shí)檢測(cè)水環(huán)境中92種抗菌藥物殘留的方法，本發(fā)明采用一針進(jìn)樣，可同時(shí)測(cè)定92種抗菌類(lèi)藥物，既降低了檢測(cè)成本，又提高了檢測(cè)效率，適用于高通量水環(huán)境中抗菌類(lèi)藥物殘留檢測(cè)。一種同時(shí)檢測(cè)水環(huán)境中92種抗菌藥物殘留的方法，其步驟包括固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定步驟，所述的步驟如下所述：(1)水樣前處理水樣采用0.45μm濾膜過(guò)濾，加入螯合劑na2edta，調(diào)節(jié)ph至8.0；(2)固相萃取富集凈化采用甲醇和水活化固相萃取柱，加入待富集的水樣，待富集的水樣的體積為200ml，控制流速為1.0ml/min，采用水淋洗固相萃取柱hlb，500mg，6cc，用洗脫溶劑洗脫，所述的洗脫溶劑為甲醇和水的溶液(以v/v計(jì)的甲醇：水為90：10)，洗脫體積為6ml，在40℃用氮?dú)獯蹈伞?3)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)以v/v計(jì)，用甲醇：水＝10：90的溶液溶解殘?jiān)?，并定容?ml，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。(4)以外標(biāo)法定量待測(cè)抗菌藥物濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確量取適量抗菌類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，按v/v計(jì)的甲醇：水＝10：90的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液，對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋?zhuān)渲瞥蓾舛葹?.5～100μg/l標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)行測(cè)定，以得到的峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)大于0.99。其中：步驟(3)中所述的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)條件為：色譜條件：高效液相色譜柱：c18色譜柱(150mm×2.1mm，5μm)；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：40℃；流速：0.2ml/min；hplc洗脫條件：a為乙腈，b為0.1％甲酸水溶液，t0′,a＝5％；t5′,a＝5％；t10′,a＝25％；t25′,a＝50％；t40′,a＝70％；t42′,a＝70％；t50′,a＝5％；質(zhì)譜條件：api5000三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：正負(fù)離子模式；電噴霧離子源；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；離子源溫度500℃；碰撞氣壓力0.021mpa；氣簾氣壓力0.24mpa。步驟(4)中所述的以外標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，抗菌藥物濃度范圍為0.5-100μg/l。hplc洗脫條件見(jiàn)表1。表1hplc洗脫條件質(zhì)譜條件：采用api5000三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：主要技術(shù)參數(shù)為：正負(fù)離子模式；電噴霧離子源；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；離子源溫度500℃；碰撞氣壓力0.021mpa；氣簾氣壓力0.24mpa。本發(fā)明所述92種抗菌類(lèi)藥物包括：氟喹諾酮類(lèi)藥物(惡喹酸、萘啶酸、氟甲喹、西諾沙星、吡哌酸、依諾沙星、左氧氟沙星、氟羅沙星、奧比沙星、司帕沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、二氟沙星、達(dá)氟沙星、洛美沙星、諾氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星、麻保沙星)；四環(huán)素類(lèi)(美他環(huán)素、四環(huán)素、多西環(huán)素、米諾環(huán)素、土霉素、金霉素、去甲基金霉素)；大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)(竹桃霉素、紅霉素、琥乙紅霉素、阿奇霉素、吉他霉素、麥迪霉素、羅紅霉素、螺旋霉素、替米考星、泰樂(lè)菌素、3-乙酰泰樂(lè)菌素、乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素)；β-內(nèi)酰胺類(lèi)(青霉素g、頭孢氨芐、阿莫西林、頭孢拉定、青霉素v、頭孢羥氨芐、頭孢克洛、羧芐西林、苯唑西林、氯唑西林、頭孢唑林、雙氯西林、頭孢噻呋、頭孢喹肟、頭孢曲松、頭孢呋辛、頭孢哌酮、頭孢西丁、頭孢噻吩、頭孢匹林、萘夫西林)；酰胺醇類(lèi)(氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考)；截短側(cè)耳素類(lèi)(泰妙菌素、沃尼妙林)；磺胺類(lèi)(氨苯磺胺、磺胺脒、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺噁唑、磺胺甲二唑、磺胺苯酰、磺胺異噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺氯吡嗪、甲氧芐啶、二甲氧芐啶、磺胺喹噁林、磺胺地索辛、磺胺苯唑、磺胺硝苯、磺胺甲氧嗪、磺胺二甲氧嘧啶)；林可胺類(lèi)(林可霉素、克林霉素、吡唎霉素)。本發(fā)明有益效果在于：(1)本發(fā)明建立了一種可以同時(shí)測(cè)定水環(huán)境樣品中92種抗菌類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)方法。(2)采用固相萃取柱富集凈化，凈化效果好，操作簡(jiǎn)便、快速、成本低，具有較高的靈敏度，準(zhǔn)確度和精密度好。(3)本發(fā)明采用一針進(jìn)樣，可同時(shí)測(cè)定92種抗菌類(lèi)藥物，降低了檢測(cè)成本，提高了檢測(cè)效率，適用于高通量水環(huán)境中抗菌類(lèi)藥物殘留檢測(cè)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體具體實(shí)施實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于實(shí)施例。實(shí)施例1：水環(huán)境中92種抗菌類(lèi)藥物含量的測(cè)定(1)水樣前處理水樣采用0.45μm濾膜過(guò)濾，取100ml水樣，加入螯合劑na2edta，調(diào)節(jié)ph至8.0。(2)固相萃取富集凈化采用3ml甲醇和3ml水活化固相萃取柱，加入待富集的水樣，控制水樣流速(1.0ml/min)，采用水淋洗固相萃取柱，以6ml的甲醇：水＝90：10,以v/v計(jì)的洗脫溶劑洗脫固相萃取柱，在40℃用氮?dú)獯蹈?。以v/v計(jì)，用甲醇：水＝10：90溶解殘?jiān)?，并定容?ml，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。(3)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)色譜條件：高效液相色譜柱：c18色譜柱(150mm×2.1mm，5μm)；進(jìn)樣量：10μl；柱溫：40℃；流速：0.2ml/min；hplc洗脫條件：a為乙腈，b為0.1％甲酸水溶液，t0′,a＝5％；t5′,a＝5％；t10′,a＝25％；t25′,a＝50％；t40′,a＝70％；t42′,a＝70％；t50′,a＝5％；表列的hplc洗脫條件見(jiàn)表2。表2hplc洗脫條件時(shí)間(min)0.1％甲酸水溶液(％)乙腈(％)0955595510752525755040307042307050955質(zhì)譜條件：采用api5000三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀。主要技術(shù)參數(shù)：正負(fù)離子模式；電噴霧離子源；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；離子源溫度500℃；碰撞氣壓力0.021mpa；氣簾氣壓力0.24mpa。(4)以外標(biāo)法定量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，準(zhǔn)確量取適量抗菌類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，按v/v計(jì)的甲醇：水＝10：90的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液，對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋?zhuān)渲瞥蓾舛葹?.5～100μg/l標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)行測(cè)定，以得到的峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)大于0.99。(5)準(zhǔn)確度和精密度測(cè)定在樣品中添加抗菌類(lèi)藥物，濃度分別為0.01μg/l，0.05μg/l，0.1μg/l，每個(gè)濃度樣品測(cè)定5次，重復(fù)5天，進(jìn)行準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)。樣品中抗菌類(lèi)藥物回收率為72.3％～102.3％，批間變異系數(shù)小于10.8％(按照標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法，在水中添加92種抗菌類(lèi)藥物都用儀器檢測(cè)過(guò)并得到質(zhì)量色譜圖(0.01μg/l)，限于篇幅和圖譜格式，說(shuō)明書(shū)附圖從略)。從以上數(shù)據(jù)可以看出，采用本發(fā)明的水環(huán)境中92種抗菌類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法，回收率和變異系數(shù)能滿足該殘留檢測(cè)要求。這表明本發(fā)明的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)便、可靠，完全可以滿足水環(huán)境中抗菌類(lèi)藥物的檢測(cè)需要。當(dāng)前第1頁(yè)12