本發(fā)明屬于分析檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種分析茶類含氮化合物的方法，特別是大紅袍茶中含氮化合物的檢測方法。
背景技術(shù)：
：烏龍茶屬于半發(fā)酵茶，在我國六大茶類中獨(dú)具特色，主產(chǎn)于福建、廣東和臺灣。烏龍茶的加工工藝是采摘具有一定成熟度新鮮茶樹葉，經(jīng)曬青萎凋后多次搖青，然后高溫殺青、揉捻(或包揉)、干燥而成。其工藝綜合了綠茶和紅茶的制法，因此品質(zhì)也介于綠茶和紅茶之間，既有紅茶的甜醇味，又有綠茶的清花香，葉底素有綠葉紅鑲邊的美譽(yù)，香氣馥郁芬芳，花香明顯，滋味醇厚爽口。大紅袍，產(chǎn)于福建武夷山，屬烏龍茶，品質(zhì)優(yōu)異。中國特種名茶。其外形條索緊結(jié)，色澤綠褐鮮潤，沖泡后湯色橙黃明亮，葉片紅綠相間。品質(zhì)最突出之處是香氣馥郁有蘭花香，香高而持久，"巖韻"明顯。大紅袍很耐沖泡，沖泡七、八次仍有香味，注重活、甘、清、香。大紅袍茶中的含氮化合物與其他物質(zhì)一樣是構(gòu)成大紅袍茶的重要因素，決定大紅袍茶的風(fēng)味和典型性。國內(nèi)外研究者采用定性定量的辦法已經(jīng)鑒定出許多種決定成品大紅袍茶風(fēng)味的物質(zhì)。近些年對大紅袍茶風(fēng)味物質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)雖然含氮化合物在大紅袍茶中含量甚微，然該類化合物風(fēng)味閾值低，具有堅(jiān)果香和焙烤香等怡人風(fēng)味，并對其他香味物質(zhì)有明顯的烘托疊加作用，是大紅袍茶中一類重要的風(fēng)味化合物，但目前國內(nèi)外對大紅袍茶中的含氮化合物的研究仍處于起步階段，應(yīng)用常規(guī)的氣相色譜法(FID檢測器)直接進(jìn)樣分析存在一定困難。本發(fā)明旨在采用頂空固相微萃取結(jié)合氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對市面上大紅袍茶茶樣中的含氮化合物進(jìn)行分析研究，建立一種大紅袍茶中含氮化合物的定性定量分析方法，操作簡單、易行，適用性廣泛。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種大紅袍茶中含氮化合物的鑒定方法，所述的這種方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中測定大紅袍茶中的含氮化合物不準(zhǔn)確的技術(shù)問題。本發(fā)明一種大紅袍茶中含氮化合物的鑒定方法，包括下列步驟：1)一個提取大紅袍茶中含氮化合物的步驟：將去離子水加熱至80℃?zhèn)溆?；稱取大紅袍茶，將大紅袍茶加入準(zhǔn)備的去離子水中，所述的大紅袍茶和去離子水的質(zhì)量比為1：10，搖勻浸泡10～15min；浸泡完成后，經(jīng)篩網(wǎng)過濾，再將過濾所得茶湯迅速冷卻至室溫；取5g冷卻后茶湯，加入1g氯化鈉、20μL2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL頂空瓶中，頂空瓶用硅膠墊皮密封，用于頂空固相微萃取，頂空固相微萃取條件為：將萃取頭插入到頂空瓶中，并使萃取頭處于樣品之上2cm，恒溫水浴溫度45～55℃下，萃取40～50min；萃取完成后，迅速將萃取頭插入氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣口，于250℃下解吸4～6min；2)一個利用氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測分析分析步驟1)所得到的大紅袍茶中的含氮化合物的步驟：氣相色譜條件：HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，其參數(shù)為60m×0.25mm,0.25μm；手動不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250℃；程序升溫：初始溫度40℃，保留6min，以3℃/min的速率升至100℃，以5℃/min的速率升至230℃，保留20min；NPD溫度：250℃；氫氣流速：2.0mL/min；空氣流速：60mL/min；載氣He，流速30mL/min；MS條件：EI電離源，電子能量70eV，掃描范圍30～550amu，離子源溫度230℃；傳輸線溫度280℃；四極桿溫度150℃；3)在對檢出的含氮化合物進(jìn)行定性分析的過程中，未知化合物的質(zhì)譜通過與wiley7nDatabase，NIST11及標(biāo)準(zhǔn)品對比進(jìn)行定性；4)在對檢出的含氮化合物進(jìn)行定量分析的過程中，稱取一定量標(biāo)準(zhǔn)品，配制于去離子水中作為單標(biāo)貯備液，準(zhǔn)確吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)貯備液用去離子水配制成一系列濃度的混合標(biāo)樣；其中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為2-甲氧基-3-甲基吡嗪。進(jìn)一步的，所述的分析檢測儀器為氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用儀。進(jìn)一步的，所述的定量方法為內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。本發(fā)明采用了頂空固相微萃取結(jié)合氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對大紅袍茶中的含氮化合物進(jìn)行分析研究，建立一種適用于大紅袍茶中含氮化合物的有效定性定量分析方法。本發(fā)明操作簡單、易行，達(dá)到了滿足生產(chǎn)快速檢測需求的目的，適用性廣泛。附圖說明圖1為市售大紅袍茶中的含氮化合物色譜圖。具體實(shí)施方式為進(jìn)一步闡釋采用頂空固相微萃取結(jié)合氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)快速檢測并定性定量大紅袍茶中含氮化合物的方法，下面結(jié)合實(shí)例作更詳盡的說明。實(shí)施例1本方法主要采用頂空固相微萃取結(jié)合氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對大紅袍茶中含氮化合物進(jìn)行快速檢測及定性定量，具體步驟如下：1)提取大紅袍茶中含氮化合物：1)稱量80g去離子水于250ml錐形瓶中，將去離子水加熱至80℃?zhèn)溆茫?)準(zhǔn)確稱取8g市售大紅袍茶，將茶樣倒入步驟1)準(zhǔn)備的去離子水中，搖勻浸泡。3)浸泡共需10min，過程中需每隔2min搖晃錐形瓶一次，目的在于搖勻茶葉。4)浸泡完成后，經(jīng)篩網(wǎng)過濾，再將過濾所得茶湯迅速冷卻至室溫。5)取5g冷卻后茶湯，加入1g氯化鈉、20μL2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL頂空瓶中，頂空瓶用硅膠墊皮密封，用于頂空固相微萃取(SPME)。SPME條件為：將萃取頭插入到頂空瓶中，并使萃取頭處于樣品之上2cm，恒溫水浴溫度50℃下，萃取45min；萃取完成后，迅速將萃取頭插入氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣口，于250℃下解吸5min；2)用氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測分析步驟1)所得到的大紅袍茶中的含氮化合物、并對其含氮化合物進(jìn)行定性定量分析：氣相色譜條件：HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，其參數(shù)為60m×0.25mm,0.25μm；手動不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250℃；程序升溫：初始溫度40℃，保留6min，以3℃/min的速率升至100℃，以5℃/min的速率升至230℃，保留20min；NPD溫度：250℃；氫氣流速：2.0mL/min；空氣流速：60mL/min；載氣He，流速30mL/min；MS條件：EI電離源，電子能量70eV，掃描范圍30～550amu，離子源溫度230℃；傳輸線溫度280℃；四極桿溫度150℃；3)檢出物質(zhì)的定性：未知化合物的質(zhì)譜通過與wiley7nDatabase，NIST11及標(biāo)準(zhǔn)品對比進(jìn)行定性；4)定量分析：準(zhǔn)確吸取一定量標(biāo)準(zhǔn)品，用去離子水配制成一系列濃度的混合標(biāo)樣；其中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為2-甲氧基-3-甲基吡嗪。表1本發(fā)明方法大紅袍茶中的含氮化合物檢測結(jié)果序號物質(zhì)名稱保留指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)品保留指數(shù)物質(zhì)含量μg/kg14-甲基噻唑81181229.6522-甲基吡嗪82381913.0432,6-二甲基吡嗪90990927.0842,5-二甲基吡嗪91491659.9652,4,5-三甲基噻唑9969968.9362,3,5-三甲基吡嗪100110015.4672-乙基-3-甲基吡嗪100210036.5882-乙氧基-3-甲基吡嗪10551048506.4192-乙?；量?07010686.01102-乙酰基-1-甲基吡咯10811081121.20112,3,5,6-四甲基吡嗪1088108860.24122-異丁基-4-甲基噻唑11151111666.71132-異丁基-3-甲基吡嗪1138114015.27142,3-二乙基-5-甲基吡嗪1161116353.63152-乙?；?3-乙基吡嗪1166117043.71162-仲丁基-3-甲氧基吡嗪118111799.73172-異丁基-3-甲氧基吡嗪11881188159.5018苯并吡咯129912925.07由表1可知，利用氣相色譜-氮磷檢測器-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)共檢測出大紅袍茶中18種含氮化合物，其中噻唑3種、吡嗪類12種、吡咯類3種。該方法能快速定性出多種含氮化合物，準(zhǔn)確測定出大紅袍茶中含氮化合物的含量。當(dāng)前第1頁1 2 3