本發(fā)明涉及一種使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量的方法，屬于分析檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：壬基酚聚氧乙烯醚是一種重要的非離子型表面活性劑，由于其有效性和經(jīng)濟(jì)性，容易合成，廣泛用于洗滌劑、乳化劑和潤濕劑等，特別是用于羊毛的洗滌，可以有效地除去羊毛上的油脂。壬基酚聚氧乙烯醚隨廢水排放進(jìn)入環(huán)境后，不僅會(huì)對(duì)動(dòng)物的內(nèi)分泌系統(tǒng)造成影響，還會(huì)降解產(chǎn)生具有毒性和累積性的壬基酚等物質(zhì)。因此，2000年的歐洲水框架指令將壬基酚聚氧乙烯醚列為需要在水環(huán)境中監(jiān)控的化學(xué)物質(zhì)。2016年1月14日，歐盟委員會(huì)通過的法案(EU)2016/26中規(guī)定，若紡織品或者紡織產(chǎn)品的某個(gè)組件中含有壬基酚聚氧乙烯醚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于或等于0.01％，且可預(yù)見該產(chǎn)品在正常生命周期中會(huì)被水洗，則此類紡織產(chǎn)品在2021年2月3日之后將不被允許投入市場。目前，國內(nèi)外對(duì)于壬基酚聚氧乙烯醚的分析，主要采用高效液相色譜法，包括正相液相色譜法和反相液相色譜法。在正相色譜法中，壬基酚聚氧乙烯醚按照聚合度從小到大在色譜柱上先后流出，由于正相色譜常用的流動(dòng)相為正己烷等溶劑，較難以與質(zhì)譜相連，因此并不能和其他的烷基酚聚氧乙烯醚，如辛基酚聚氧乙烯醚等分離；在反相色譜柱上，聚合度不同的壬基酚聚氧乙烯醚作為一個(gè)峰流出，必須借助質(zhì)譜對(duì)不同聚合度的低聚物進(jìn)行鑒別，但這些復(fù)雜的聚合物組成可能會(huì)發(fā)生離子抑制等作用，對(duì)定量結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生一定影響，同時(shí)，采用紫外或熒光檢測器進(jìn)行測定時(shí)，無法對(duì)單一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚進(jìn)行定量分析。因此，建立一種使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚的方法，可以滿足分離單個(gè)聚合度的低聚物的要求，同時(shí)可與質(zhì)譜聯(lián)用，減少離子抑制效應(yīng)，準(zhǔn)確地測定不同聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚，能夠有效地對(duì)羊毛進(jìn)行檢驗(yàn)，從而評(píng)估其合規(guī)性，減少環(huán)境污染，保護(hù)人們的健康安全。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明解決的技術(shù)問題是：提出一種準(zhǔn)確、誤差小的使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案是：一種使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量的方法，包括以下步驟：步驟1：取質(zhì)量為m的羊毛，加入體積為V的溶劑提取過濾后，為測試液，，采用液相色譜-質(zhì)譜對(duì)測試液進(jìn)行分析，得到其定量離子峰面積As；步驟2：取質(zhì)量為m的不含壬基酚聚氧乙烯醚的羊毛，加入體積為V的溶劑提取過濾后，為空白液，采用HPLC或LC-MS對(duì)空白液進(jìn)行分析，得到其定量離子峰面積A0；步驟3：制備一定濃度的某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)需要稀釋成至少5個(gè)適用濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，然后對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行HPLC或LC-MS分析，以濃度x為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的測得的定量離子峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液回歸曲線，根據(jù)曲線得到的線性方程y＝ax+b，計(jì)算出回歸曲線的斜率a和截距b；步驟4：根據(jù)公式x＝(((As-A0)-b)/a)×V/m計(jì)算羊毛中某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚含量x，單位為mg/kg，羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量為所有聚合物的壬基酚聚氧乙烯醚含量的總和；其中，采用高效液相色譜儀(HPLC)的液相色譜條件：(1)色譜柱：親水作用色譜硅膠填料，100×4.6mmI.D.×2.7μm；(2)流動(dòng)相：A：乙腈,含50mM乙酸銨；B：去離子水,含50mM乙酸銨；梯度洗脫：99％A和1％B，在20分鐘內(nèi)線性變化至70％A和30％B；(3)流速：0.3-1.5mL/min；(4)進(jìn)樣量：2-50μL；(5)柱溫：20-50℃；(6)檢測器：熒光檢測器，激發(fā)波長220-240nm：發(fā)射波長：285-305nm；或紫外檢測器，測定波長：210-240nm；采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)液相色譜條件：(1)色譜柱：親水作用色譜硅膠填料，100×4.6mmI.D.×2.7μm；(2)流動(dòng)相：A：乙腈,含50mM乙酸銨；B：去離子水,含50mM乙酸銨；梯度洗脫：99％A和1％B，在20分鐘內(nèi)線性變化至70％A和30％B；(3)流速：0.3-1.5mL/min；(4)進(jìn)樣量：2-50μL；(5)柱溫：20-50℃；質(zhì)譜條件：(1)離子化模式：電噴霧電離ESI，正離子模式；(2)離子噴霧電壓：2000-4500V；(3)源內(nèi)裂解電壓：100-150V；(4)霧化氣壓力：20-80psi；(5)干燥氣溫度：200-450℃；(6)干燥氣流量：5-15L/min；(7)質(zhì)譜掃描方式：選擇離子檢測SIM或SCAN全掃描模式。優(yōu)選的，所述不同聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚定量離子如下：優(yōu)選的，所述步驟1羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚的提取：將羊毛剪碎至5mm以下的小段，混勻后稱取質(zhì)量為m的羊毛于加速溶劑萃取瓶中，加入體積為V的甲醇，在70℃溫度、10.4MPa壓力下加速溶劑提取10min，用0.2μm有機(jī)濾膜過濾后為測試液。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明建立了使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量的方法，可用于測定羊毛中某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚的含量及所有聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚總量，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精密度、穩(wěn)定性和自動(dòng)化程度高，檢出限低至0.10mg/kg。附圖說明下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的作進(jìn)一步說明。圖1平均聚合度為3的壬基酚聚氧乙烯醚的LC-MS色譜圖(SCAN全掃描模式)具體實(shí)施方式實(shí)施例1儀器和試劑：儀器：加速溶劑萃取儀；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。試劑：甲醇(色譜純)、壬基酚聚氧乙烯醚(單個(gè)聚合度，標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥98％)、乙腈(LC-MS級(jí)別)一種使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量的方法，包括以下步驟：步驟1、羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚的提?。簩⒀蛎羲橹?mm以下的小段，混勻后稱取質(zhì)量為m的羊毛于加速溶劑萃取瓶中，加入體積為V的甲醇，在70℃溫度、10.4MPa壓力下加速溶劑提取10min，用0.2μm有機(jī)濾膜過濾后為測試液。步驟2、空白液的制備：將不含壬基酚聚氧乙烯醚的羊毛剪碎至5mm以下的小段，混勻后稱取質(zhì)量為m的羊毛于加速溶劑萃取瓶中，加入體積為V的甲醇，在70℃溫度、10.4MPa壓力下加速溶劑提取10min，用0.2μm有機(jī)濾膜過濾后為測試液。步驟3：制備一定濃度的某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)需要稀釋成至少5個(gè)適用濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，然后對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行LC-MS分析。以濃度x為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的測得的定量離子峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液回歸曲線，根據(jù)曲線得到的線性方程y＝ax+b，計(jì)算出回歸曲線的斜率a和截距b。步驟4：采用LC-MS分別對(duì)步驟一和步驟二的測試液和空白液進(jìn)行分析，得到某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚的定量離子峰面積，分別為As和A0。根據(jù)公式x＝(((As-A0)-b)/a)×V/m計(jì)算羊毛中某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚含量x。羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量為所有聚合物的壬基酚聚氧乙烯醚含量的總和。設(shè)定的參數(shù)應(yīng)保證色譜測定時(shí)被測組分與其他組分能夠得到有效的分離，比如以下的參數(shù)：液相色譜條件：(1)色譜柱：親水作用色譜(硅膠)填料，100×4.6mmI.D.×2.7μm或相當(dāng)者；(2)流動(dòng)相：A：LC-MS級(jí)別乙腈(含50mM乙酸銨)；B：去離子水(含50mM乙酸銨)；梯度洗脫：99％A和1％B，在20分鐘內(nèi)線性變化至70％A和30％B；(3)流速：0.5mL/min；(4)進(jìn)樣量：5μL；(5)柱溫：30℃；質(zhì)譜條件：(1)離子化模式：電噴霧電離(ESI)，正離子模式；(2)離子噴霧電壓：3500V；(3)源內(nèi)裂解電壓：135V；(4)霧化氣壓力：45psi；(5)干燥氣溫度：350℃；(6)干燥氣流量：10L/min；(7)質(zhì)譜掃描方式：選擇離子檢測(SIM)；(8)定量離子，見下表1：表1不同聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚定量離子檢測物質(zhì)定量離子(m/z)壬基酚一氧乙烯醚282壬基酚二氧乙烯醚326壬基酚三氧乙烯醚370壬基酚四氧乙烯醚414壬基酚五氧乙烯醚458壬基酚六氧乙烯醚502壬基酚七氧乙烯醚546壬基酚八氧乙烯醚590壬基酚九氧乙烯醚634壬基酚十氧乙烯醚678壬基酚十一氧乙烯醚722壬基酚十二氧乙烯醚766壬基酚十三氧乙烯醚810壬基酚十四氧乙烯醚854壬基酚十五氧乙烯醚898壬基酚十六氧乙烯醚942壬基酚十七氧乙烯醚986壬基酚十八氧乙烯醚1030壬基酚十九氧乙烯醚1074壬基酚二十氧乙烯醚1118測試液液和空白試液均平行制備兩份，然后進(jìn)行步驟三和四，若兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過其算數(shù)平均值的20％，則測試準(zhǔn)確。后采用添加法來檢測本方法的精密度和回收率：采用添加法，在不含壬基酚聚氧乙烯醚的羊毛即空白羊毛中分別添加壬基酚二氧乙烯醚、壬基酚九氧乙烯醚、壬基酚二十氧乙烯醚和壬基酚聚氧乙烯醚，濃度分別為0.50mg/kg、5.00mg/kg、50.0mg/kg三個(gè)水平后按本發(fā)明的步驟進(jìn)行樣品前處理并測定，對(duì)每個(gè)水平重復(fù)添加并使用LC-MS測定6次，并進(jìn)行回收率和精密度計(jì)算，回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果詳見表2。表2壬基酚聚氧乙烯醚在空白樣品中添加回收率和精密度由表2可以看出，本方法的回收率和精密度良好。方法對(duì)羊毛測定的回收率達(dá)93.8％～96％；精密度小于7％，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精密度高。實(shí)施例2一種使用親水作用色譜測定羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量的方法，包括以下步驟：步驟1、羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚的提?。簩⒀蛎羲橹?mm以下的小段，混勻后稱取質(zhì)量為m的羊毛于加速溶劑萃取瓶中，加入體積為V的甲醇，在70℃溫度、10.4MPa壓力下加速溶劑提取10min，用0.2μm有機(jī)濾膜過濾后為測試液。步驟2、空白液的制備：將不含壬基酚聚氧乙烯醚的羊毛剪碎至5mm以下的小段，混勻后稱取質(zhì)量為m的羊毛于加速溶劑萃取瓶中，加入體積為V的甲醇，在70℃溫度、10.4MPa壓力下加速溶劑提取10min，用0.2μm有機(jī)濾膜過濾后為測試液。步驟3：制備一定濃度的某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，根據(jù)需要稀釋成至少5個(gè)適用濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，然后對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行HPLC分析。以濃度x為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的測得的定量離子峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液回歸曲線，根據(jù)曲線得到的線性方程y＝ax+b，計(jì)算出回歸曲線的斜率a和截距b。步驟4：采用HPLC分別對(duì)步驟一和步驟二的測試液和空白液進(jìn)行分析，得到某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚的定量離子峰面積，分別為As和A0。根據(jù)公式x＝(((As-A0)-b)/a)×V/m計(jì)算羊毛中某一聚合度的壬基酚聚氧乙烯醚含量x。羊毛中壬基酚聚氧乙烯醚含量為所有聚合物的壬基酚聚氧乙烯醚含量的總和。設(shè)定的參數(shù)應(yīng)保證色譜測定時(shí)被測組分與其他組分能夠得到有效的分離，比如以下的參數(shù)：液相色譜條件：(1)色譜柱：親水作用色譜(硅膠)填料，100×4.6mmI.D.×2.7μm或相當(dāng)者；(2)流動(dòng)相：A：LC-MS級(jí)別乙腈(含50mM乙酸銨)；B：去離子水(含50mM乙酸銨)；梯度洗脫：99％A和1％B，在20分鐘內(nèi)線性變化至70％A和30％B；(3)流速：0.5mL/min；(4)進(jìn)樣量：5μL；(5)柱溫：30℃；(6)熒光檢測器，激發(fā)波長：230nm，發(fā)射波長：296nm；或紫外檢測器，檢測波長：227nm。本發(fā)明的不局限于上述實(shí)施例所述的具體技術(shù)方案，凡采用等同替換形成的技術(shù)方案均為本發(fā)明要求的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3