本發(fā)明涉及一種新型的綜合化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素檢測試劑。

背景技術(shù)：

血清中的膽紅素大部分是由衰老紅細(xì)胞被破壞后產(chǎn)生出來的血紅蛋白衍化而成，在肝內(nèi)經(jīng)過葡萄糖醛酸化的叫做直接膽紅素，未在肝內(nèi)經(jīng)過葡萄糖醛酸化的叫做間接膽紅素，二者的和就是總膽紅素；總膽紅素在臨床中應(yīng)用非常的廣泛，臨床上主要用于診斷肝臟疾病和膽道梗阻，當(dāng)血清總膽紅素有很大增高時(shí)，人的皮膚、眼睛鞏膜、尿液和血清呈現(xiàn)黃色，故稱黃疸；當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、壞死、中毒等損害時(shí)均可以引起黃疸，膽道疾病及溶血性疾病也可以引起黃疸；以直接膽紅素升高為主常見于原發(fā)性膽汁型肝硬化、膽道梗阻等；以間接膽紅素升高為主常見于溶血性疾病、新生兒黃疸或者輸血錯(cuò)誤等；肝炎與肝硬化病人的直接膽紅素與間接膽紅素都可以升高；總膽紅素增高，見于中毒性或病毒性肝炎、溶血性黃疸、惡性貧血、陣發(fā)性血紅蛋白尿癥；紅細(xì)胞增多癥、新生兒黃疸、內(nèi)出血、輸血后溶血性黃疸、急性黃色肝萎縮等疾病。

目前檢測血液總膽紅素的方法有重氮試劑法、HPLC法、直接法、ELISA免疫法、多層干片法、酶法和化學(xué)氧化法，其中目前最常見的三種方法為重氮試劑法、酶法和化學(xué)氧化法，重氮法是公認(rèn)的檢測方法，但是他的缺點(diǎn)也非常的明顯，其重氮試劑不穩(wěn)定，后來經(jīng)過多方的優(yōu)化，結(jié)果一直不是很理想；酶法具有準(zhǔn)確度高、線性寬，分析靈敏度高等優(yōu)勢，但是由于試劑中使用的膽紅素氧化酶多為進(jìn)口，價(jià)格昂貴，增加了使用的費(fèi)用；化學(xué)法從上世紀(jì)90年代進(jìn)入我國，近年來國內(nèi)對化學(xué)氧化法研究也較多，多采用釩酸鹽氧化法或者亞硝酸鹽氧化法，但是這兩種方法準(zhǔn)確性和特異性等性能存在很大爭議，往往導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，并且試劑多不能抵抗肝素樣本的干擾，因此針對這些問題發(fā)明了一種新型的化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種新型的綜合化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種新型的綜合化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素檢測試劑，其特征在于，包括試劑R1和試劑R2，

試劑1（R1）：

緩沖液 100mmol/L

加速劑 20-40mmol/L

表面活性劑1 3-6ml/L

表面活性劑 3-5ml/L

防腐劑 0.5-1ml/L

離子平衡劑 5-10g/L

試劑2（R2）：

緩沖液 10mmol/L

過苯甲酸鈉 4-8mmol/L

過硫酸鈉 2-5mmol/L

掩蔽劑 20-40g/L

防腐劑 0.5-1ml/L

表面活性劑 3-5ml/L。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述試劑R1中緩沖液為25℃，pH為5.0的100mmol/L的鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述試劑R2中緩沖液為25℃，pH為7.0的10mmol/L的磷酸鹽緩沖液。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述防腐劑為pc-300。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述試劑R1中加速劑為十二烷基三甲基溴化銨。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述表面活性劑為曲拉通-405。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述試劑R1中表面活性劑1為烷基糖苷（阿匹斯）。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述試劑R1中離子平衡劑為硫酸鈉。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述試劑R2中掩蔽劑為乙二胺四乙酸二鈉。

一種新型的綜合化學(xué)氧化法血總膽紅素檢測試劑，所述的同型半胱氨酸檢測試劑來檢測血總膽紅素的檢測方法，使用全自動(dòng)生化分析儀利用兩點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行測定，檢測主波長為450nm。

所述的檢測方法，R1試劑和R2試劑的比例為4:1。

本發(fā)明的有益效果：

1）本發(fā)明在試劑R1中使用了加速劑十二烷基三甲基溴化銨，并且配合表面活性劑烷基糖苷和曲拉通-405促進(jìn)總膽紅素中非游離部分的充分分解；

2）本發(fā)明R1中采用鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液，能夠?qū)δ懠t素的氧化起到促進(jìn)作用；

3）采用了離子平衡劑硫酸鈉和表面活性劑烷基糖苷，能有效的去除肝素等干擾物質(zhì)的干擾，提高化學(xué)氧化法的特異性；

4）在試劑R2中采用了過苯甲酸鈉作為主要的化學(xué)氧化劑，過硫酸鈉作為輔助氧化劑，能夠使被測物中的膽紅素充分的氧化，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性；

5）在試劑中加入了掩蔽劑乙二胺四乙酸二鈉，從而有效的去除其他物質(zhì)的干擾，保證結(jié)果的準(zhǔn)確度。

附圖說明

圖1為實(shí)施例2與實(shí)施例1的相關(guān)性圖；

圖2為實(shí)施例3與實(shí)施例1的相關(guān)性圖；

圖3為實(shí)施例1試劑檢測方法；

圖4為實(shí)施例2試劑檢測方法；

圖5為實(shí)施例3試劑檢測方法；

圖6為實(shí)施例2、3試劑與實(shí)施例1檢測結(jié)果；

圖7為實(shí)施例試劑抗干擾性能比較；

圖8為實(shí)施例1-3線性相關(guān)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

一種公認(rèn)的酶法檢測血總膽紅素的檢測試劑方案：

1）試劑R1：

Tris –HCL PH=8.2 100mmol/L

膽酸鈉 4mmol/L

SDS 15mmol/L

試劑R2：

TRIS-HCL PH=8.2 100mmol/L

牛血清白蛋白 1g/L

膽紅素氧化酶 4KU/L。

本實(shí)施例試劑的使用方法：

本實(shí)施例描述的氧化酶法總膽紅素檢測試劑，在使用時(shí)采用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化分析儀，如日立7180全自動(dòng)分析儀等，利用兩點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行測定；將R1和R2按照3:1的比例放置到對應(yīng)的試劑位上，在樣品盤的對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如圖3。

實(shí)施例2

一種新型的綜合化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素檢測試劑，其特征在于，包括試劑R1和試劑R2，

試劑R1：

鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液 100mmol/L

十二烷基三甲基溴化銨 20mmol/L

烷基糖苷 3ml/L

曲拉通-405 3ml/L

PC-300 0.5ml/L

硫酸鈉 5g/L

試劑R2：

磷酸鹽緩沖液 10mmol/L

過苯甲酸鈉 4mmol/L

過硫酸鈉 2mmol/L

乙二胺四乙酸二鈉 20g/L

PC-300 0.5ml/L

曲拉通-405 3ml/L。

本實(shí)施例試劑的使用方法：

本實(shí)施例描述的HCY檢測試劑，在使用時(shí)采用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化分析儀，如日立7180全自動(dòng)分析儀等，利用兩點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行測定；將R1和R2按照4:1的比例放置到對應(yīng)的試劑位上，在樣品盤的對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如圖4。

實(shí)施例3

本實(shí)施例描述的是一種關(guān)鍵原材料增加后的新型的綜合化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素的方案

試劑R1:

鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液 100mmol/L

十二烷基三甲基溴化銨 40mmol/L

烷基糖苷 6ml/L

曲拉通-405 5ml/L

PC-300 1ml/L

硫酸鈉 10g/L

試劑R2:

磷酸鹽緩沖液 10mmol/L

過苯甲酸鈉 8mmol/L

過硫酸鈉 5mmol/L

乙二胺四乙酸二鈉 40g/L

PC-300 1ml/L

曲拉通-405 5ml/L。

2）本實(shí)施例試劑的使用方法：

本實(shí)施例描述的HCY檢測試劑，在使用時(shí)采用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化分析儀，如日立7180全自動(dòng)分析儀等，利用兩點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行測定；將R1和R2按照4:1的比例放置到對應(yīng)的試劑位上，在樣品盤的對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如圖5。

相關(guān)性實(shí)驗(yàn)：利用實(shí)施例2、3中的配方配制試劑，與實(shí)施例1中酶法檢測血清總膽紅素同時(shí)檢測了20個(gè)臨床血清樣本，檢測結(jié)果如圖6所示；并獲得了兩種試劑的相關(guān)性曲線（如圖1和圖2所示），檢測結(jié)果顯示，實(shí)施例2、實(shí)施例3與實(shí)施例1檢測結(jié)果的相關(guān)性分別為0.9995和0.9997，說明了新型的綜合化學(xué)氧化法與氧化酶法檢測血膽紅素有極大的相關(guān)性。

干擾性試驗(yàn)：

取新鮮混合血清，分成2等份，然后將每等份再分成5等份，加入不同的干擾物質(zhì)，使其在血清中的濃度達(dá)到圖7的要求；然后分別用實(shí)施例2和實(shí)施例3中所得試劑，與酶法檢測血總膽紅素的試劑同時(shí)對比測定血清或血漿中的總膽紅素的含量，對照組測定結(jié)果與加入不同干擾物質(zhì)后各組的測定結(jié)果見圖7；相對偏差(%)=(干擾樣本的測定均值－對照樣本的測定均值)/對照樣本的測定均值×100%。

由圖7可以看出，實(shí)施例2和3試劑使用肝素管采血、甘油三酯≤3000mg/dL、血紅蛋白≤800mg/dL、抗壞血酸≤220mg/dL時(shí)對測試結(jié)果沒有明顯干擾，與自身抗干擾能力強(qiáng)的酶法總膽紅素檢測試劑檢測結(jié)果相近，說明本發(fā)明的新型的綜合化學(xué)氧化法檢測血總膽紅素具有良好的抗干擾能力。

線性相關(guān)性驗(yàn)證：

找出總膽紅素濃度為684umol/L的高值樣本，找一個(gè)總膽紅素濃度接近于0 umol/L的低值樣本，使用低值樣本對高值樣本進(jìn)行系列稀釋，配制6個(gè)不同濃度的樣本，依次為684umol/L、547.2umol/L、410.4umol/L、273.6umol/L、136.8umol/L、0umol/L，每個(gè)濃度水平樣本分別測定三次，分別取其平均值。分別利用實(shí)施例1、2、3的試劑進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果如圖8所示。

通過驗(yàn)證，本試劑與酶法檢測血總膽紅素相比相關(guān)性好，臨床檢測樣本結(jié)果一致，抗干擾能力強(qiáng)，線性范圍寬，能夠達(dá)到市場對產(chǎn)品的應(yīng)用要求，是一種準(zhǔn)確廉價(jià)的總膽紅素檢測試劑。