本發(fā)明涉及十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，具體屬于中藥檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

十全大補酒是由黨參、白術(shù)(炒)、茯苓、甘草(蜜炙)、當(dāng)歸、川芎、白芍(炒)、熟地黃、黃芪(蜜炙)和肉桂制成。輔料為白酒、蔗糖。本品的功能是溫補氣血。方中熟地黃補血滋陰，填精生髓；黨參補脾健中，益氣生血，陽生陰長，共為君藥。白術(shù)健脾益氣；茯苓健脾利濕；黃芪健脾益氣升陽，合以助君藥開氣血生化之源，黃芪補氣健中；當(dāng)歸、白芍補養(yǎng)陰血，以陰配陽；肉桂補火助陽，鼓舞氣血生長，共為臣藥。川芎行氣活血，使補而不滯，為佐藥。甘草益氣，調(diào)和諸藥，為使藥。十藥相合，共奏溫補氣血之功?，F(xiàn)有的十全大補酒質(zhì)量標(biāo)準中，未涉及到炒白芍的鑒別，因此，研究一種操作方便，能夠高效、迅速鑒別十全大補酒中炒白芍的方法，有利于提升十全大補酒的質(zhì)量檢測標(biāo)準，顯得尤為必要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，該鑒別方法準確性好，分離度高。

本發(fā)明的十全大補酒，是由黨參80g、茯苓80g、麩炒白術(shù)80g、炙甘草40g、熟地黃120g、白芍(炒)80g、當(dāng)歸120g、川芎40g、炙黃芪80g和肉桂20g制成的。以上十味，粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項下的的滲漉法(《中國藥典》2015年版通則0189)，用白酒17200mL作溶劑，浸漬48小時后，以每分鐘1～3mL的速度緩緩滲漉，收集漉液，加入蔗糖1720g，攪勻，靜置，濾過，即得。

為了實現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，是以芍藥苷對照品為對照，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝35～45︰3～8︰8～15︰0.1～0.3為展開劑的薄層色譜法。

前述十全大補酒中白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品加正丁醇振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液、供試品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝35～45︰3～8︰8～15︰0.1～0.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。

具體地，前述十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品20mL～35mL，加正丁醇25mL～45mL振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加1mL～3mL甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液9～12μL、供試品溶液9～12μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝35～45︰3～8︰8～15︰0.1～0.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。

優(yōu)選地，前述十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品20mL，加正丁醇30mL振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加1mL甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液10μL、供試品溶液10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝40︰5︰10︰0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。

為了確保本發(fā)明鑒別方法科學(xué)、合理、可行，對本發(fā)明的鑒別方法進行了研究和考察。

方中當(dāng)歸、白芍補養(yǎng)陰血，以陰配陽；肉桂補火助陽，鼓舞氣血生長，共為臣藥。方中炒白芍具有補血養(yǎng)血、平抑肝陽、柔肝止痛的作用，炒白芍中的芍藥苷有保肝、抗炎、改善心肌營養(yǎng)血流、擴張血管、增加冠狀動脈流量、對抗急性心肌缺血、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛等多重作用，是制劑中的主要活性成分。因此，本實驗選取芍藥苷對照品為對照，通過正丁醇提取本品中芍藥苷成分，對炒白芍進行薄層鑒別，并考察不同點樣量、不同廠家薄層板、不同溫度、不同濕度對本品中炒白芍藥材薄層色譜的影響。試驗結(jié)果表明：以芍藥苷對照品為對照，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝35～45︰3～8︰8～15︰0.1～0.3為展開劑的薄層色譜法特征明顯，專屬性強，可作為本品中炒白芍的鑒別方法。

1、儀器與試劑

MS304s/01電子天平(METTLER TOLEDO(梅特勒-托利多))、硅膠G薄層板(青島海洋化工有限公司)、P-1型薄層色譜展開缸(上海信誼儀器廠有限公司)、5ul薄層點樣毛細管(天津市思利達科技有限公司)。

十全大補酒(130901，130902，140201，江蘇信邦制藥有限公司)、芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)、正丁醇(西隴化工股份有限公司，分析純)、甲醇(西隴化工股份有限公司，分析純)、三氯甲烷(西隴化工股份有限公司，分析純)、乙酸乙酯(西隴化工股份有限公司，分析純)、甲酸(成都金山化學(xué)試劑有限公司，分析純)、香草醛(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純)、硫酸(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純)。

2、鑒別方法的考察

2.1、供試品溶液的制備方法

現(xiàn)有技術(shù)中，炒白芍鑒別時供試品溶液是通過先加乙醇振搖處理，過濾，濾渣加乙醇溶解得到的。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明中采用正丁醇作為提取溶劑，提取時間短，提取效果好。使用兩種方法分別制備供試品溶液，在同等條件下進行鑒別，采用現(xiàn)有技術(shù)的一組分離度較差，而采用本發(fā)明方法的一組分離度高，重現(xiàn)性好。

2.2、最佳點樣量的考察

分別吸取步驟(1)和步驟(2)中供試品溶液和對照品溶液6、7、8、9、10、12、14μL，分別點于不同硅膠G薄層板上，進行考察，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝40︰5︰10︰0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。其中，供試品10μL點樣量效果最佳，當(dāng)點樣量大于12μL時，供試品溶液位置斑點出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，點樣量低于9μL時，供試品溶液位置斑點不明顯；對照品溶液點樣量9～12μL時效果好，尤其是在10μL時效果最佳，故選擇供試品溶液點樣量為9～12μL，最佳點樣量10μL；對照品溶液點樣量9～12μL，最佳點樣量10μL。

3、專屬性考察

吸取步驟(1)中供試品溶液10μL、步驟(2)中對照品溶液10μL、炒白芍陰性對照溶液10μL，按供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝40︰5︰10︰0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。如圖1所示。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點，陰性對照色譜中相應(yīng)位置上無斑點，表明該方法的專屬性良好。

4、耐用性考察

4.1不同廠家薄層板

吸取步驟(1)中供試品溶液10μL、步驟(2)中對照品溶液10μL、炒白芍陰性對照溶液10μL，按供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液分別點樣，更換不同廠家的薄層板，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝40︰5︰10︰0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍紫色斑點，炒白芍陰性對照色譜中相應(yīng)位置上無斑點，且更換不同廠家薄層板后，各薄層板之間無顯著差異，表明更換不同廠家薄層板對炒白芍的薄層鑒別無影響。如圖2所示。

4.2溫濕度

吸取步驟(1)中供試品溶液10μL、步驟(2)中對照品溶液10μL、炒白芍陰性對照溶液10μL，按供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液分別點樣，變換不同溫濕度條件，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍紫色斑點，炒白芍陰性對照色譜中相應(yīng)位置上無斑點，且變換不同溫濕度條件后，各薄層板之間無顯著差異，表明變換不同溫濕度對炒白芍的薄層鑒別無影響。如圖3所示。

本發(fā)明的有益之處在于：本發(fā)明提供的十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，能夠高效、準確地鑒別十全大補酒中炒白芍成分。本發(fā)明的方法，簡單易操作，可控性、專屬性強，分離度高，靈敏度高，重現(xiàn)性好，并且陰性對照無干擾，不同廠家薄層板和溫度、濕度條件均不影響。本發(fā)明鑒別方法能夠?qū)峭此幘浦谐窗咨殖煞诌M行準確、全面、科學(xué)有效的鑒別，提升了質(zhì)量檢測標(biāo)準，進一步確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定、安全、有效。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的十全大補酒中炒白芍的專屬性鑒別色譜圖；

圖2是十全大補酒中炒白芍鑒別時采用不同薄層板的色譜圖；

圖3是十全大補酒中炒白芍鑒別時不同溫濕度條件下的色譜圖；

圖中附圖標(biāo)記的含義：圖1～圖3:1-供試品批號130901，2-供試品批號130902,3-供試品批號140201,4-芍藥苷對照品，5-炒白芍陰性對照；圖2：A-青島海洋硅膠G薄層板(規(guī)格：100×200mm),B-煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所硅膠G薄層板(規(guī)格：100×200mm)；圖3：A-溫度28.7℃、濕度32％，B-溫度3.6℃、濕度72％。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的介紹。

實施例1

十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品25mL，加正丁醇25mL振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加2mL甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液9μL、供試品溶液9μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝35︰3︰8︰0.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。

實施例2

十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品35mL，加正丁醇45mL振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加3mL甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液12μL、供試品溶液12μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝45︰8︰15︰0.3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。

實施例3

十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品20mL，加正丁醇30mL振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加1mL甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液10μL、供試品溶液10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝40︰5︰10︰0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。

實施例4

十全大補酒中炒白芍的鑒別方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品30mL，加正丁醇40mL振搖提取，得正丁醇液，蒸干，殘渣加2mL甲醇使其溶解，作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL中含有1mg芍藥苷對照品的溶液，作為對照品溶液；

(3)鑒別：照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液11μL、供試品溶液10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝38︰6︰12︰0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的藍紫色斑點。