本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法。
背景技術(shù)：
：體外診斷試劑作為醫(yī)療器械的一個(gè)分支，對(duì)于各組分的純度、雜質(zhì)種類均有非常嚴(yán)格的要求，為了避免在生產(chǎn)過程中對(duì)液體試劑的污染，以及避免不同產(chǎn)品或同一產(chǎn)品不同批次共用生產(chǎn)設(shè)備時(shí)可能產(chǎn)生的交叉污染，各液體分裝設(shè)備與溶液試劑接觸的部分均會(huì)進(jìn)行鈍化處理，或使用易于清潔的疏水性材料制作的零部件，但這兩種方法均會(huì)導(dǎo)致因部件表面的高疏水性而在管路內(nèi)形成氣泡，同時(shí)在加液管道嘴尖部會(huì)形成一段不含液體的空腔。在以壓力為驅(qū)動(dòng)力的加液設(shè)備中，由于氣泡在壓力的作用下體積和位置不恒定，且管道嘴尖部的空腔體積不確定，均會(huì)對(duì)加液精度產(chǎn)生一定的誤差。舉例來說：在酶聯(lián)免疫法試劑所必須的微孔反應(yīng)板制備的過程中，包被液需精確分裝至每一微孔中，且每一微孔中分裝的包被液體積不超過200微升(即1/5毫升)，且在此過程中分裝體積的誤差會(huì)導(dǎo)致最終產(chǎn)品檢測(cè)性能的差異，進(jìn)一步可能導(dǎo)致對(duì)臨床樣本檢測(cè)結(jié)果的偏差和對(duì)臨床醫(yī)生診斷及處方的誤導(dǎo)。該風(fēng)險(xiǎn)是在體外診斷試劑生產(chǎn)過程中需極力避免的問題。目前常見且有效的解決的辦法是人為增大加液體積，以達(dá)到可以將誤差忽略的目的。但該方法在提高生產(chǎn)成本的同時(shí)，也并不能解決小體積液體分裝時(shí)面臨的問題。綜上所述，提供一種加液精度高的包被液的制備方法是目前我們亟需解決的問題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，使得包被液的加液精度大大提高，從而降低產(chǎn)品的批內(nèi)差異。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的實(shí)施方式提供了一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，該方法包含以下步驟：將酸液加入至預(yù)設(shè)濃度的緩沖溶液中，調(diào)整緩沖溶液的pH；將非離子型表面活性劑按預(yù)設(shè)的體積百分?jǐn)?shù)加入至pH調(diào)整后的緩沖溶液中，混合均勻后加入生物活性物質(zhì)，再次混合均勻后靜止即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。本發(fā)明實(shí)施方式相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)而言，通過在溶液配方中加入非離子型表面活性劑，降低液體表面張力，消除因管材疏水性而導(dǎo)致管道內(nèi)留存氣泡和管道嘴尖部留存空腔的可能性，從根本上消除了因此產(chǎn)生的分裝液體體積不精確的情況，從而提高了包被液的加液精度。另外，該方法工藝成本低廉、易于操作，涉及的物料均對(duì)環(huán)境無害。另外，緩沖溶液的預(yù)設(shè)濃度為:10～50mM，緩沖液的濃度涉及到該溶液的緩沖能力，如果濃度過低，會(huì)導(dǎo)致緩沖能力不足，在生產(chǎn)過程中空氣中的二氧化碳溶解在溶液中會(huì)引起明顯的pH降低；如果濃度過高，則會(huì)導(dǎo)致調(diào)整pH的時(shí)候需加入更多的鹽酸。另外，緩沖溶液的pH調(diào)整至8.5～10.5。另外，緩沖溶液為三羥甲基氨基甲烷(簡(jiǎn)稱：Tris)緩沖溶液，Tris緩沖溶液的表面張力較小，可顯著降低所配制溶液的表面張力。另外，預(yù)設(shè)的體積百分?jǐn)?shù)為：0.01～0.70％。另外，預(yù)設(shè)的體積百分?jǐn)?shù)為：0.02～0.50％，由于使用的非離子型表面活性劑均是粘稠液體，如果加入的體積過小，那么會(huì)在分裝的過程中產(chǎn)生較大的偏差，從而導(dǎo)致生產(chǎn)過程中存在不可控的風(fēng)險(xiǎn)，如果加入的體積過大，非離子型表面活性劑會(huì)產(chǎn)生泡沫較多，進(jìn)而造成加液體積的不準(zhǔn)確。另外，酸液為鹽酸溶液，鹽酸溶液氧化性較弱，能夠?yàn)樯锘钚晕镔|(zhì)提供一個(gè)比較溫和的反應(yīng)環(huán)境。另外，非離子型表面活性劑為以下之一或其組合：聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚，上述非離子型表面活性劑即對(duì)生物活性物質(zhì)本身結(jié)構(gòu)不會(huì)產(chǎn)生影響，還能有效降低溶液的表面張力。另外，生物活性物質(zhì)為蛋白質(zhì)。另外，蛋白質(zhì)為抗體或抗原。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面對(duì)本發(fā)明的各實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)的闡述。然而，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解，在本發(fā)明各實(shí)施方式中，為了使讀者更好地理解本申請(qǐng)而提出了許多技術(shù)細(xì)節(jié)。但是，即使沒有這些技術(shù)細(xì)節(jié)和基于以下各實(shí)施方式的種種變化和修改，也可以實(shí)現(xiàn)本申請(qǐng)所要求保護(hù)的技術(shù)方案。本發(fā)明的第一實(shí)施方式涉及一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，該方法包含以下步驟：將酸液加入至預(yù)設(shè)濃度的緩沖溶液中，調(diào)整緩沖溶液的pH；將非離子型表面活性劑按預(yù)設(shè)的體積百分?jǐn)?shù)加入至pH調(diào)整后的緩沖溶液中，混合均勻后加入生物活性物質(zhì)，再次混合均勻后靜止即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。具體地，在本實(shí)施方式中，緩沖溶液的預(yù)設(shè)濃度可以為:10～50mM，緩沖溶液的pH可以調(diào)整至8.5～10.5。值得注意的是，在本實(shí)施方式中，緩沖溶液可以為三羥甲基氨基甲烷(簡(jiǎn)稱：Tris)緩沖溶液，Tris緩沖溶液的表面張力較小，可顯著降低所配制溶液的表面張力，但是本實(shí)施方式不應(yīng)以此為限，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以根據(jù)需要靈活選擇緩沖溶液，只要該緩沖溶液的表面張力較小均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。另外，預(yù)設(shè)的體積百分?jǐn)?shù)為：0.01～0.70％。更具體地，預(yù)設(shè)的體積百分?jǐn)?shù)可以為：0.02～0.50％。值得一提的是，酸液可以為鹽酸溶液，當(dāng)然也可以是其他酸液。另外，非離子型表面活性劑為以下之一或其組合：聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(簡(jiǎn)稱：Tween-20)、聚乙二醇辛基苯基醚(簡(jiǎn)稱：TritonX-100)，上述非離子型表面活性劑即對(duì)生物活性物質(zhì)本身結(jié)構(gòu)不會(huì)產(chǎn)生影響，還能有效降低溶液的表面張力。在實(shí)際制備過程中，生物活性物質(zhì)可以優(yōu)選蛋白質(zhì)，具體地，蛋白質(zhì)可以為抗體或抗原。舉例來說，該方法具體包含以下步驟：使用三羥甲基氨基甲烷(Tris)配制成為終濃度為10mM的Tris緩沖溶液，使用稀鹽酸溶液調(diào)整pH至8.5，按體積百分?jǐn)?shù)為0.02％加入Tween-20，混合均勻后加入包被用的抗原，再次混勻后靜置至液體中不含氣泡即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。下面通過實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)不同緩沖液配制得到的包被液的表面張力，具體的是使用毛細(xì)管上升法測(cè)量相關(guān)溶液表面張力，計(jì)算公式為：σ＝[(ρ1-ρg)ghr]/(2cosθ)式中：σ—液體表面張力；ρ1—液體密度；ρg—空氣密度；g—重力加速度；h—液柱高度；r—毛細(xì)管直徑。待測(cè)三種液體(溶液1：純化水；溶液2：當(dāng)緩沖液為碳酸緩沖液時(shí)配制的包被液；溶液3：按照本發(fā)明實(shí)施方式制備得到的包被液)的密度均為1000kg/m3；空氣密度約為1.293kg/m3；重力加速度g為9.8m/s；使用的毛細(xì)管直徑為0.7mm；由于使用的毛細(xì)管被完全浸潤(rùn)，因此認(rèn)為θ近似于0，cosθ＝1。使用實(shí)驗(yàn)室自制裝置測(cè)量溶液1爬高21.67mm(三次測(cè)量分別為21mm、22mm、22mm，取均值)，經(jīng)公式計(jì)算的表面張力為7.42x10-2(N/m)，與文獻(xiàn)記載純化水表面張力接近，據(jù)此認(rèn)為該裝置可用于測(cè)量液體表面張力。使用自制裝置測(cè)量得常規(guī)方法的溶液2爬高22mm(三次測(cè)量分別21mm、22mm、23mm，取均值)，計(jì)算得表面張力為7.54x10-2(N/m)。使用自制裝置測(cè)量得溶液3爬高3.67mm(三次測(cè)量分別為3.5mm、4.5mm、3.0mm)，計(jì)算得表面張力為1.26x10-2(N/m)。對(duì)比上述三種液體的的液體表面張力，由此結(jié)果可見，本發(fā)明實(shí)施方式的方法配制的溶液其表面張力較常規(guī)方法有大幅度下降。另外，在本實(shí)施方式中，為了驗(yàn)證本發(fā)明實(shí)施方式配制的液體分裝精度，下面通過實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證，具體實(shí)驗(yàn)過程如下：首先準(zhǔn)備2組溶液，第一組溶液是常規(guī)方法配制的包被液，第二組溶液是本發(fā)明實(shí)施方式制備得到的包被液。使用稱重法測(cè)量微孔反應(yīng)板中加液質(zhì)量，按照1000kg/m3的密度計(jì)算得體積，對(duì)加樣體積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算離散系數(shù)，并據(jù)此比較液體分裝精度。比較試驗(yàn)使用可拆卸微孔反應(yīng)板，整塊微孔反應(yīng)板可拆為12條，每條有8個(gè)微孔。在液體分裝前對(duì)每一條微孔反應(yīng)板進(jìn)行標(biāo)記并稱重記錄，在每一微孔中加入120微升第一組包被液或第二組包被液，分裝液體后對(duì)每一條微孔反應(yīng)板進(jìn)行稱重測(cè)量，扣除分裝前空板的重量后，對(duì)液體凈重體積進(jìn)行匯總統(tǒng)計(jì)。值得注意的是，實(shí)驗(yàn)過程使用全自動(dòng)加樣設(shè)備對(duì)兩種緩沖液均連續(xù)分裝10塊微孔反應(yīng)板，因此每種緩沖液均可得120個(gè)測(cè)量數(shù)據(jù)，第一組包被液、第二組包被液數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果如表1、表2所示：表1(單位：毫升)：上述數(shù)據(jù)計(jì)算得平均值為870.43(毫升)，離散系數(shù)(CV％)為18.01％。表2(單位：毫升)：8701045816888950964833933104586988589592079988790498683810338418319508589008458278427849088338839651014102210149351036829103589286998190098791399693792797989280610321027983103798591010341048830814879928777785786915827102310261033875937100084579878492096710321032101380497398390890977496479377477210161043930876881945869820933104184590992998195391010188728908028299271039852814949998954上述數(shù)據(jù)計(jì)算得平均值為916.27(毫升)，離散系數(shù)(CV％)為8.89％。通過上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，不難發(fā)現(xiàn)，按照每孔分裝120微升，8孔理論分裝量應(yīng)為960微升。與傳統(tǒng)方法相比較，本發(fā)明實(shí)施方式中的方法配制所得溶液在相同的分裝體系下，分裝準(zhǔn)確性和精確性均有一定程度提高。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)施方式中，通過對(duì)在配方中加入非離子型表面活性劑，降低液體表面張力，消除因管材疏水性而導(dǎo)致管道內(nèi)留存氣泡和管道嘴尖部留存空腔的可能性，從根本上消除了因此產(chǎn)生的分裝液體體積不精確的情況，從而提高了包被液的加液精度。另外，該方法工藝成本低廉、易于操作，涉及的物料均對(duì)環(huán)境無害。本發(fā)明的第二實(shí)施方式涉及一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，第二實(shí)施方式與第一實(shí)施方式大致相同，只是對(duì)其中各反應(yīng)物的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了調(diào)整，該方法包含以下步驟：使用三羥甲基氨基甲烷(Tris)配制成為終濃度為50mM的Tris緩沖溶液，使用稀鹽酸溶液調(diào)整pH至10.5，按體積百分?jǐn)?shù)為0.5％加入Tween-20，混合均勻后加入包被用的抗體，再次混勻后靜置至液體中不含氣泡即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。本發(fā)明的第三實(shí)施方式涉及一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，第三實(shí)施方式與第一實(shí)施方式大致相同，只是對(duì)其中各反應(yīng)物的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了調(diào)整，該方法包含以下步驟：使用三羥甲基氨基甲烷(Tris)配制成為終濃度為50mM的Tris緩沖溶液，使用稀鹽酸溶液調(diào)整pH至10.5，按體積百分?jǐn)?shù)為0.5％加入TritonX-100，混合均勻后加入包被用的抗體，再次混勻后靜置至液體中不含氣泡即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。本發(fā)明的第四實(shí)施方式涉及一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，第四實(shí)施方式與第一實(shí)施方式大致相同，只是對(duì)其中各反應(yīng)物的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了調(diào)整，該方法包含以下步驟：使用三羥甲基氨基甲烷(Tris)配制成為終濃度為30mM的Tris緩沖溶液，使用稀鹽酸溶液調(diào)整pH至9，按體積百分?jǐn)?shù)為0.7％加入TritonX-100，混合均勻后加入包被用的抗體，再次混勻后靜置至液體中不含氣泡即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。本發(fā)明的第五實(shí)施方式涉及一種用于蛋白質(zhì)固相化的包被液制備方法，第五實(shí)施方式與第一實(shí)施方式大致相同，只是對(duì)其中各反應(yīng)物的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了調(diào)整，該方法包含以下步驟：使用三羥甲基氨基甲烷(Tris)配制成為終濃度為20mM的Tris緩沖溶液，使用稀鹽酸溶液調(diào)整pH至10，按體積百分?jǐn)?shù)為0.01％加入Tween-20，混合均勻后加入包被用的抗原，再次混勻后靜置至液體中不含氣泡即得用于蛋白質(zhì)固相化的包被液。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解，上述各實(shí)施方式是實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的具體實(shí)施例，而在實(shí)際應(yīng)用中，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作各種改變，而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3