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一種新的代謝物輪廓分析全二維液質(zhì)聯(lián)用方法及其檢測試劑盒與流程

文檔序號:12466581閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種新的代謝物輪廓分析全二維液質(zhì)聯(lián)用方法,其特征在于采用全二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),在特定的色譜-質(zhì)譜條件下進行多種生物類樣品的全二維代謝輪廓譜分析方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:其所述的多種生物類樣品包括非轉(zhuǎn)基因大豆、轉(zhuǎn)基因大豆、茶葉和銀杏葉。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:其所述的全二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具體為:第一維色譜柱為親和色譜柱,第二維色譜柱為反相色譜柱,正、負(fù)離子模式下均可采集全二維代謝輪廓譜。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:其所述的特定的液相色譜-質(zhì)譜條件為:第一維流動相A和B均為含有甲酸氨的乙腈水溶液;流速0.01mL/min,進樣量20μL,分析時間250分鐘,第二維流動相A為0.1%甲酸水溶液,流動相B為乙腈。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:其所述的全二維代謝輪廓譜分析方法具體為:經(jīng)第一維親和色譜柱分離后與流動相共流出的代謝物直接流入十通閥的20微升定量環(huán)中,隨后在2分鐘后經(jīng)十通閥切換,被第二維液相色譜的流動相沖入第二維反相色譜柱進行分離,色譜流出物通過分流后進入質(zhì)譜進行檢測。于此同時,在第二維液相色譜進行分析時,第一維在2分鐘后共流出的代謝物進行十通閥的另一個20微升定量環(huán)中,隨后在下一個2分鐘后經(jīng)十通閥切換,被第二維液相色譜的流動相沖入第二維反相色譜柱進行分離。通過這種每隔2分鐘切換一次十通閥流路的方法,達到將第一維共流出的代謝物不停注入十通閥上的兩個定量環(huán)中,從而在每隔2分鐘的閥切換中依次進入第二維液相色譜進行反向色譜分析的目的。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于:

其所述的第一維色譜柱具體為:色譜柱為Waters ACQUITY UPLCTMBEH Amide親和色譜柱,流動相A為含10mM甲酸氨的40%乙腈水溶液,B為含10mM甲酸氨的95%乙腈水溶液;梯度洗脫條件為:0~5min為100%B相,5~200min線性變化至0%B相,保持10min,210~210.01min升至100%B相并保持39.99min;流速0.01mL/min,柱溫30℃,進樣量20μL;

其所述的第二維色譜柱具體為:色譜柱為Agilent C18反向色譜柱,流動相A為0.1%甲酸水溶液,B為乙腈;其液相分析條件分為三個階段,第一階段為0-75min,梯度洗脫條件為:初始流動相為80%A相,0~1.5min為30%A相,1.5~1.51min升至80%A相并保持0.49min;流速0.7mL/min,柱溫60℃;第二階段為75-165min,梯度洗脫條件為:初始流動相為95%A相,0~1.5min為60%A相,1.5~1.51min升至95%A相并保持0.49min;流速0.7mL/min,柱溫60℃;第三階段為165-200min,梯度洗脫條件為:初始流動相為99%A相,0~1.5min為90%A相,1.5~1.51min升至99%A相并保持0.49min;流速0.7mL/min,柱溫60℃;柱后流出液經(jīng)分流后進入質(zhì)譜檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,其所述的質(zhì)譜檢測具體為:采用電噴霧離子源正離子模式檢測;脫溶劑氣為高純氮氣,流量氣為600L/h;脫溶劑氣溫度均為300℃;毛細(xì)管電壓和裂解電壓分別為3500V和130V,霧化器壓力為25psi;質(zhì)量掃描范圍為80~1200m/z;每0.97秒采集一次數(shù)據(jù)以獲得全二維代謝輪廓譜。

8.一種新的代謝物輪廓分析全二維液質(zhì)聯(lián)用檢測試劑盒,其特征在于:該試劑盒由二部分構(gòu)成:緩沖液和洗脫液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒,其特征在于:

其所述的緩沖液為含醋酸銨、甲酸銨、碳酸氫銨的乙腈或甲醇水緩沖溶液;

其所述的洗脫液為乙腈或甲醇。

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