本發(fā)明涉及中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種補(bǔ)脾益腎方的質(zhì)量控制方法及其指紋圖譜。
背景技術(shù)：
慢性腎臟病chronickidneydisease(ckd)是指腎臟損傷或腎小球?yàn)V過率(gfr)<60ml/(min·1.73m2)持續(xù)3個(gè)月或以上；腎損傷的定義是指腎臟病理學(xué)異?；蜓?、尿液、影像學(xué)的檢查異常。ckd是各種原發(fā)和繼發(fā)腎臟病的總稱，為一組進(jìn)行性發(fā)展的慢性非感染性疾病，在我國(guó)的患病率呈逐年上升趨勢(shì)，成為全世界國(guó)家必須面臨的嚴(yán)重挑戰(zhàn)。ckd從腎功能正常至腎功能衰竭的整個(gè)過程分為5期，相當(dāng)于慢性腎炎與慢性腎衰2個(gè)階段，其中慢性腎臟病四期為符合慢性腎臟病的診斷。
補(bǔ)脾益腎方是廣東省中醫(yī)院腎內(nèi)科劉旭生教授在本領(lǐng)域的研究基礎(chǔ)上，集成行業(yè)精華并進(jìn)行多次論證與優(yōu)化后形成(一種治療慢性腎臟病的中藥制劑及其制備方法，專利公開號(hào)：cn102579894a)。該組方包括黃芪、生黨參、菟絲子等九味藥物，具有補(bǔ)脾益腎的功效，對(duì)慢性腎臟病療效顯著，臨床療效顯示該組方能延緩慢性腎臟病四期患者egfr的下降，延緩了本病的進(jìn)展，優(yōu)于國(guó)際上運(yùn)用的有效藥物acei。
中醫(yī)藥療效長(zhǎng)期以來由于缺乏可靠的臨床研究證據(jù)支持，不能廣泛獲得國(guó)際社會(huì)的認(rèn)同。應(yīng)用國(guó)際上公認(rèn)的評(píng)價(jià)干預(yù)措施效果的標(biāo)準(zhǔn)方案――隨機(jī)雙盲臨床研究試驗(yàn)(randomizedcontrolledtrials,rtc)，把中醫(yī)藥治療的臨床經(jīng)驗(yàn)以科學(xué)研究的證據(jù)形式呈現(xiàn)出來，是中醫(yī)藥與國(guó)際接軌的一個(gè)突破點(diǎn)。而中藥復(fù)方質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)化是rtc質(zhì)量控制的源頭。因此，中醫(yī)藥臨床療效欲被國(guó)際認(rèn)可，首先應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)化的中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
中藥復(fù)方具有的整體作用特點(diǎn)不能僅針對(duì)某幾個(gè)化學(xué)成分，因此應(yīng)建立從整體上綜合反映中藥質(zhì)量的方法，以指紋圖譜作為中成藥、草藥提取物這類含有混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法，已經(jīng)成為目前國(guó)際共識(shí)。中藥指紋圖譜是對(duì)中藥及其復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)整體特征的一種量化表達(dá)和解析手段，是指某種中藥材或中成藥經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段提取其化學(xué)信息，得到能夠標(biāo)志其特性的共有峰的圖譜。中藥及其復(fù)方內(nèi)在質(zhì)量的保證亦是中藥現(xiàn)代化基本的要求，中藥復(fù)方成分復(fù)雜，有效成分絕大多數(shù)沒有明確，亟需建立內(nèi)在的中藥質(zhì)量評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。補(bǔ)脾益腎方是包括黃芪、生黨參、菟絲子等九味藥物在內(nèi)的中藥復(fù)方，臨床上用于治療慢性腎臟病，其療效已經(jīng)得到臨床的驗(yàn)證，而是否能夠保證藥物的質(zhì)量是決定補(bǔ)脾益腎方臨床療效的基礎(chǔ)。如果僅用一、兩種活性成分來說明組方的內(nèi)在質(zhì)量具有一定的片面性，且不能保證所選取指標(biāo)成分是否具有活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，為了克服現(xiàn)有技術(shù)中缺乏能控制補(bǔ)脾益腎方內(nèi)在質(zhì)量的質(zhì)量控制方法，提供一種補(bǔ)脾益腎方的質(zhì)量控制方法。該方法能夠同時(shí)測(cè)定補(bǔ)脾益腎方中黃芪、黨參、丹參、制何首烏、菟絲子等多味藥中多類活性成分的指紋圖譜測(cè)定方法，通過此測(cè)定方法，可控制補(bǔ)脾益腎方的內(nèi)在質(zhì)量。
本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題，通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
一種補(bǔ)脾益腎方的質(zhì)量控制方法，包含如下步驟：
s1.制備補(bǔ)脾益腎方供試品溶液；
s2.吸取供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；
s3.將步驟s2得到的色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)；選擇不同批次補(bǔ)脾益腎方的色譜圖中均存在的色譜峰作為共有峰；用平均值計(jì)算法生成補(bǔ)脾益腎方的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積；
s4.建立待檢測(cè)補(bǔ)脾益腎方的指紋圖譜；然后與步驟s3所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，最后判斷待檢測(cè)的補(bǔ)脾益腎方質(zhì)量是否合格。
本發(fā)明發(fā)明人首先制備了補(bǔ)脾益腎方的干燥噴霧粉末，通過對(duì)組方的制備方法，色譜條件的選擇及色譜條件方法學(xué)研究，確立了補(bǔ)脾益腎方指紋圖譜。該指紋圖譜可滿足補(bǔ)脾益腎方九味藥中多類活性成分的同時(shí)檢測(cè)與分析，并將此指紋圖譜用于該組方的質(zhì)量控制。
優(yōu)選地，步驟s1中所述的供試品溶液通過如下方法制備得到：
s11.取粉碎的黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓、淮山、何首烏、菟絲子、薏苡仁以及丹參九味中藥，混合后加水，浸泡20～50min，煮沸后再煎煮0.5～3小時(shí)，過濾后，濾液，減壓回收，噴霧干燥，得干燥粉末；
s12.稱取補(bǔ)脾益腎方干燥粉末，溶于乙腈水溶液或甲醇水溶液，超聲溶解，定容于容量瓶，過濾膜，備用。
優(yōu)選地，步驟s11的具體操作為：取粉碎的黃芪25～33份、黨參15～20份、白術(shù)10～18份、茯苓15～20份、淮山13～20份、何首烏15～20份、菟絲子12～20份、薏苡仁15～25份、丹參10～20份，混合后加水，浸泡30min，煮沸后再煎煮2小時(shí)，過濾后，濾渣同法再煎煮一次，合并兩次濾液，減壓回收，噴霧干燥，得干燥粉末。
最優(yōu)選地，步驟s12的具體操作為：稱取補(bǔ)脾益腎方干燥粉末56mg，溶于2ml60％乙腈溶液，超聲溶解，定容于5ml容量瓶，過0.22μm濾膜，備用。
更優(yōu)選地，步驟s2中液相色譜儀的色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相a為0.1％-0.5％甲酸水溶液，流動(dòng)相b為乙腈，采用梯度洗脫；柱溫為25～35℃；流速為200～400μl/min；進(jìn)樣量為1～10μl。
更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的梯度洗脫條件為：流動(dòng)相a為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相b為乙腈；0分鐘時(shí)，88％流動(dòng)相a，12％流動(dòng)相b；22分鐘時(shí)，75％流動(dòng)相a，25％流動(dòng)相b；35分鐘時(shí)，65％流動(dòng)相a，35％流動(dòng)相b；45分鐘時(shí)，50％流動(dòng)相a，50％流動(dòng)相b；52分鐘時(shí)，45％流動(dòng)相a，55％流動(dòng)相b；流動(dòng)相a及流動(dòng)相b配制比例均按體積比配制。
最優(yōu)選地，柱溫為25℃；流速為250μl/min；進(jìn)樣量為2μl；色譜柱選用kinetexc18分析柱，規(guī)格為2.1mm×100mm,1.7μm。
優(yōu)選地，在步驟s2所述的液相色譜儀后還連接有質(zhì)譜儀，用于檢測(cè)共有峰的分子量；所述的質(zhì)譜儀采用電噴霧離子源(esi)，鞘氣為45單位，輔助氣為6單位，噴霧電壓為-2.5～-3.5kv，毛細(xì)管溫度為300～375℃，樣品先采用高分辨進(jìn)行全掃描，二級(jí)質(zhì)譜采用動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)依賴性掃描，碰撞能量設(shè)為20～45％。
一種補(bǔ)脾益腎方的指紋圖譜，由上述建立方法建立得到，包含如下共有峰：
1號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為10.87min，rsd為2.31％，峰面積為6049.49，rsd為2.74％；
3號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.92min，rsd為1.43％，峰面積為15269.97，rsd為3.56％；
11號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為21.42min，rsd為1.17％，峰面積為14171.91，rsd為18.94％；
12號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.17min，rsd為1.17％，峰面積為8738.37，rsd為2.67％；
25號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.62min，rsd為1.91％，峰面積為9546.48，rsd為1.93％。
優(yōu)選地，所述的指紋圖譜，包含如下特征峰：
1號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為10.87min，rsd為2.31％，峰面積為6049.49，rsd為2.74％；
3號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.92min，rsd為1.43％，峰面積為15269.97，rsd為3.56％；
5號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為15.62min，rsd為1.48％，峰面積為5049.76，rsd為3.72％；
11號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為21.42min，rsd為1.17％，峰面積為14171.91，rsd為18.94％；
12號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.17min，rsd為1.17％，峰面積為8738.37，rsd為2.67％；
15號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為23.50min，rsd為1.15％，峰面積為3759.06，rsd為8.75％；
14號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.66min，rsd為3.39％，峰面積為3415.56，rsd為24.4％；
15號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為23.50min，rsd為1.15％，峰面積為3759.06，rsd為8.75％；
17號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為30.95min，rsd為1.63％，峰面積為4498.02，rsd為5.54％；
18號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為31.85min，rsd為1.89％，峰面積為4870.13，rsd為2.16％；
21號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為34.14min，rsd為1.90％，峰面積為4582.24，rsd為17.46％；
23號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.08min，rsd為1.94％，峰面積為3040.11，rsd為8.13％；
25號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.62min，rsd為1.91％，峰面積為9546.48，rsd為1.93％；
27號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為41.28min，rsd為2.03％，峰面積為5646.33，rsd為2.16％；
28號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為43.07min，rsd為2.23％，峰面積為3629.00，rsd為13.16％。
最優(yōu)選地，所述的指紋圖譜，包含如下特征峰：
1號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為10.87min，rsd為2.31％，峰面積為6049.49，rsd為2.74％；
2號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.28min，rsd為0.52％，峰面積為1095.05，rsd為3.49％；
3號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.92min，rsd為1.43％，峰面積為15269.97，rsd為3.56％；
4號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為15.17min，rsd為2.80％，峰面積為1158.83，rsd為15.83％；
5號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為15.62min，rsd為1.48％，峰面積為5049.76，rsd為3.72％；
6號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為16.28min，rsd為2.11％，峰面積為582.55，rsd為16.58％；
7號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為17.09min，rsd為3.44％，峰面積為1532.83，rsd為18.40％；
8號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為18.72min，rsd為3.12％，峰面積為2777.4，rsd為3.27％；
9號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為19.45min，rsd為3.32％，峰面積為941.96，rsd為17.72％；
10號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為20.99min，rsd為1.35％，峰面積為2708.15，rsd為1.38％；
11號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為21.42min，rsd為1.17％，峰面積為14171.91，rsd為18.94％；
12號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.17min，rsd為1.17％，峰面積為8738.37，rsd為2.67％；
13號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.81min，rsd為1.04％，峰面積為1122.84，rsd為18.86％；
14號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.66min，rsd為3.39％，峰面積為3415.56，rsd為24.4％；
15號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為23.50min，rsd為1.15％，峰面積為3759.06，rsd為8.75％；
16號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為25.13，rsd為1.56％，峰面積為2253.63，rsd為16.97％；
17號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為30.95min，rsd為1.63％，峰面積為4498.02，rsd為5.54％；
18號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為31.85min，rsd為1.89％，峰面積為4870.13，rsd為2.16％；
19號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為32.82min，rsd為1.88％，峰面積為1216.68，rsd為13.19％；
20號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為33.96min，rsd為1.89％，峰面積為1549.99，rsd為10.15％；
21號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為34.14min，rsd為1.90％，峰面積為4582.24，rsd為17.46％；
22號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為34.48min，rsd為1.96％，峰面積為1521.18，rsd為3.76％；
23號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.08min，rsd為1.94％，峰面積為3040.11，rsd為8.13％；
24號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.35min，rsd為1.90％，峰面積為2944.64，rsd為2.12％；
25號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.62min，rsd為1.91％，峰面積為9546.48，rsd為1.93％；
26號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為37.11，rsd為1.67％，峰面積為718.58，rsd為8.92％；
27號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為41.28min，rsd為2.03％，峰面積為5646.33，rsd為2.16％；
28號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為43.07min，rsd為2.23％，峰面積為3629.00，rsd為13.16％；
29號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為43.30min，rsd為1.96％，峰面積為2900.10，rsd為5.12％。
有益效果：(1)本發(fā)明以補(bǔ)脾益腎方中主要成分為指標(biāo)建立色譜指紋圖譜，實(shí)現(xiàn)其最大可能的化學(xué)成分檢測(cè)，避免了常規(guī)的只測(cè)定一、兩個(gè)化學(xué)成分而判定補(bǔ)脾益腎方質(zhì)量的片面性。該色譜指紋圖譜代表了補(bǔ)脾益腎方大部分藥理活性，能有效表征補(bǔ)脾益腎組方的質(zhì)量，有利于對(duì)中藥復(fù)方質(zhì)量的全面控制。(2)本發(fā)明提供一種補(bǔ)脾益腎組方的檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)切實(shí)可行，具有重復(fù)性。方法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、精密度高、易于掌握。可同時(shí)適用于補(bǔ)脾益腎方提取液的指紋圖譜測(cè)定及補(bǔ)脾益腎方制劑的指紋圖譜測(cè)定。
附圖說明
圖1為本發(fā)明所述的補(bǔ)脾益腎方指紋圖譜。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例對(duì)本發(fā)明不做任何形式的限定。
實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。其中，所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
實(shí)施例1
一種補(bǔ)脾益腎方的質(zhì)量控制方法，包含如下步驟：
s1.制備補(bǔ)脾益腎方供試品溶液；
s2.吸取供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖；
s3.將步驟s2得到的色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)；選擇不同批次補(bǔ)脾益腎方的色譜圖中均存在的色譜峰作為共有峰；用平均值計(jì)算法生成補(bǔ)脾益腎方的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積；
s4.建立待檢測(cè)補(bǔ)脾益腎方的指紋圖譜；然后與步驟s3所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，最后判斷待檢測(cè)的補(bǔ)脾益腎方質(zhì)量是否合格；
步驟s1中所述的供試品溶液通過如下方法制備得到：
取粉碎的黃芪28份、黨參20份、白術(shù)15份、茯苓18份、淮山15份、何首烏18份、菟絲子15份、薏苡仁22份、丹參18份，混合后加水，浸泡30min，煮沸后再煎煮2小時(shí)，過濾后，濾渣同法再煎煮一次，合并兩次濾液，減壓回收，噴霧干燥，得干燥粉末；
s12.稱取補(bǔ)脾益腎方干燥粉末56mg，溶于2ml60％乙腈溶液，超聲溶解，定容于5ml容量瓶，過0.22μm濾膜，備用；
步驟s2中液相色譜儀的色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動(dòng)相a為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相b為乙腈，采用梯度洗脫；柱溫為25℃；流速為250μl/min；進(jìn)樣量為2μl；色譜柱選用kinetexc18分析柱，規(guī)格為2.1mm×100mm,1.7μm；
所述的梯度洗脫條件為：流動(dòng)相a為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相b為乙腈；0分鐘時(shí)，88％流動(dòng)相a，12％流動(dòng)相b；22分鐘時(shí)，75％流動(dòng)相a，25％流動(dòng)相b；35分鐘時(shí)，65％流動(dòng)相a，35％流動(dòng)相b；45分鐘時(shí)，50％流動(dòng)相a，50％流動(dòng)相b；52分鐘時(shí)，45％流動(dòng)相a，55％流動(dòng)相b；流動(dòng)相a及流動(dòng)相b配制比例均按體積比配制。
通過本實(shí)施例所述方法獲得的指紋圖譜，對(duì)共計(jì)10批的補(bǔ)脾益腎方進(jìn)行指紋圖譜分析，其相似度均在90％以上。其中單峰相對(duì)響應(yīng)值超過2％的共有峰有29個(gè)，分別為：
1號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為10.87min，rsd為2.31％，峰面積為6049.49，rsd為2.74％；
2號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.28min，rsd為0.52％，峰面積為1095.05，rsd為3.49％；
3號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.92min，rsd為1.43％，峰面積為15269.97，rsd為3.56％；
4號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為15.17min，rsd為2.80％，峰面積為1158.83，rsd為15.83％；
5號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為15.62min，rsd為1.48％，峰面積為5049.76，rsd為3.72％；
6號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為16.28min，rsd為2.11％，峰面積為582.55，rsd為16.58％；
7號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為17.09min，rsd為3.44％，峰面積為1532.83，rsd為18.40％；
8號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為18.72min，rsd為3.12％，峰面積為2777.4，rsd為3.27％；
9號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為19.45min，rsd為3.32％，峰面積為941.96，rsd為17.72％；
10號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為20.99min，rsd為1.35％，峰面積為2708.15，rsd為1.38％；
11號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為21.42min，rsd為1.17％，峰面積為14171.91，rsd為18.94％；
12號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.17min，rsd為1.17％，峰面積為8738.37，rsd為2.67％；
13號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.81min，rsd為1.04％，峰面積為1122.84，rsd為18.86％；
14號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.66min，rsd為3.39％，峰面積為3415.56，rsd為24.4％；
15號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為23.50min，rsd為1.15％，峰面積為3759.06，rsd為8.75％；
16號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為25.13，rsd為1.56％，峰面積為2253.63，rsd為16.97％；
17號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為30.95min，rsd為1.63％，峰面積為4498.02，rsd為5.54％；
18號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為31.85min，rsd為1.89％，峰面積為4870.13，rsd為2.16％；
19號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為32.82min，rsd為1.88％，峰面積為1216.68，rsd為13.19％；
20號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為33.96min，rsd為1.89％，峰面積為1549.99，rsd為10.15％；
21號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為34.14min，rsd為1.90％，峰面積為4582.24，rsd為17.46％；
22號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為34.48min，rsd為1.96％，峰面積為1521.18，rsd為3.76％；
23號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.08min，rsd為1.94％，峰面積為3040.11，rsd為8.13％；
24號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.35min，rsd為1.90％，峰面積為2944.64，rsd為2.12％；
25號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.62min，rsd為1.91％，峰面積為9546.48，rsd為1.93％；
26號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為37.11，rsd為1.67％，峰面積為718.58，rsd為8.92％；
27號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為41.28min，rsd為2.03％，峰面積為5646.33，rsd為2.16％；
28號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為43.07min，rsd為2.23％，峰面積為3629.00，rsd為13.16％；
29號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為43.30min，rsd為1.96％，峰面積為2900.10，rsd為5.12％.
其中單峰相對(duì)響應(yīng)值超過10％的共有峰有15個(gè)，分別為：
1號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為10.87min，rsd為2.31％，峰面積為6049.49，rsd為2.74％；
3號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.92min，rsd為1.43％，峰面積為15269.97，rsd為3.56％；
5號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為15.62min，rsd為1.48％，峰面積為5049.76，rsd為3.72％；
11號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為21.42min，rsd為1.17％，峰面積為14171.91，rsd為18.94％；
12號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.17min，rsd為1.17％，峰面積為8738.37，rsd為2.67％；
15號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為23.50min，rsd為1.15％，峰面積為3759.06，rsd為8.75％；
14號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.66min，rsd為3.39％，峰面積為3415.56，rsd為24.4％；
15號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為23.50min，rsd為1.15％，峰面積為3759.06，rsd為8.75％；
17號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為30.95min，rsd為1.63％，峰面積為4498.02，rsd為5.54％；
18號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為31.85min，rsd為1.89％，峰面積為4870.13，rsd為2.16％；
21號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為34.14min，rsd為1.90％，峰面積為4582.24，rsd為17.46％；
23號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.08min，rsd為1.94％，峰面積為3040.11，rsd為8.13％；
25號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.62min，rsd為1.91％，峰面積為9546.48，rsd為1.93％；
27號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為41.28min，rsd為2.03％，峰面積為5646.33，rsd為2.16％；
28號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為43.07min，rsd為2.23％，峰面積為3629.00，rsd為13.16％；
其中單峰相對(duì)響應(yīng)值超過20％的共有峰有5個(gè)，分別為：
1號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為10.87min，rsd為2.31％，峰面積為6049.49，rsd為2.74％；
3號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為11.92min，rsd為1.43％，峰面積為15269.97，rsd為3.56％；
11號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為21.42min，rsd為1.17％，峰面積為14171.91，rsd為18.94％；
12號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為22.17min，rsd為1.17％，峰面積為8738.37，rsd為2.67％；
25號(hào)峰，平均保留時(shí)間rt為35.62min，rsd為1.91％，峰面積為9546.48，rsd為1.93％；
實(shí)施例2
進(jìn)一步地，在實(shí)施例1步驟s2所述的液相色譜儀后還連接有質(zhì)譜儀，用于檢測(cè)共有峰的分子量；所述的質(zhì)譜儀采用電噴霧離子源(esi)，鞘氣為45單位，輔助氣為6單位，噴霧電壓為-2.5～-3.5kv，毛細(xì)管溫度為300～375℃，樣品先采用高分辨進(jìn)行全掃描，二級(jí)質(zhì)譜采用動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)依賴性掃描，碰撞能量設(shè)為20～45％。
進(jìn)一步地，在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上還采用毛蕊異黃酮-7-o-β-d-葡萄糖苷，芒柄花苷，毛蕊異黃酮，二苯乙烯苷，迷迭香酸，紫草酸，丹酚酸a，丹酚酸b，紫云英苷，黨參炔苷，芒柄花素，黃芪甲苷，黃芪皂苷i，黃芪皂苷ii等為參照物，精密稱定適量，用20％乙腈溶解，制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液，hplc進(jìn)樣分析(參照實(shí)施例1的hplc條件)，根據(jù)保留時(shí)間及紫外特征吸收，對(duì)共有峰進(jìn)行歸屬。
本實(shí)施例通過對(duì)共有峰進(jìn)行分子量檢測(cè)以及歸屬，可以通過指紋圖譜進(jìn)一步判定待檢測(cè)的補(bǔ)脾益腎方質(zhì)量是否合格。
補(bǔ)脾益腎方中各共有峰的歸屬見表1，共有峰的指紋圖譜保留時(shí)間、峰面積的平均值、rsd值以及各共有峰的分子量見表2。
表1.補(bǔ)脾益腎方中各共有峰的歸屬表
表2.共有峰的指紋圖譜保留時(shí)間、峰面積的平均值、rsd值以及分子量表