1.一種治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述治療糖尿病腎病的中藥組合物的有效成分主要由重量份比為0.5~1.5:1.5~2.5:0.5~1.5的黃芪、葛根和桑白皮制備而成,所述質(zhì)量檢測方法包括鑒別,所述鑒別包括采用薄層色譜法對(duì)所述桑白皮進(jìn)行鑒別,鑒別步驟為:
取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,研碎,加入體積濃度為69~71%的乙醇水溶液回流提取,過濾,濾液蒸干,殘?jiān)尤塍w積濃度為0.4~0.6%的硫酸水溶液回流,過濾,濾液用氯仿萃取2~6次,合并氯仿液,蒸干,殘?jiān)蛹状际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤海?/p>
另取桑白皮對(duì)照藥材適量,與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液;
再取東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素對(duì)照品適量,加入甲醇制成東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素的混合溶液,作為對(duì)照品溶液;
吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以體積比為6~7:3~4:0.04~0.06的沸點(diǎn)為60℃~90℃的石油醚、乙酸乙酯和乙酸為展開劑,展開,取出晾干,置于紫外光下觀察。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述鑒別還包括采用薄層色譜法對(duì)所述黃芪進(jìn)行鑒別,鑒別步驟為:
取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,研碎,加甲醇超聲提取,過濾,濾液蒸干,殘?jiān)铀柡驼〈既芙獾谜〈家海〈家河觅|(zhì)量百分比為0.1~3%的氫氧化鈉溶液洗滌2~7次,棄去所述氫氧化鈉溶液,正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗至中性,棄去水層,正丁醇液水浴蒸干,殘?jiān)蛹状际谷芙?,作為供試品溶液?/p>
另取黃芪對(duì)照藥材適量,與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液;
再取黃芪甲苷對(duì)照品適量,加甲醇制成溶液,作為對(duì)照品溶液;
分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以體積比為12~14:6~8:2~4的三氯甲烷、甲醇和水的下層溶液為展開劑,展開,取出晾干,噴以硫酸乙醇溶液,加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,分別置可見光下以及紫外光燈下檢視。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述鑒別還包括采用薄層色譜法對(duì)所述葛根進(jìn)行鑒別,鑒別步驟為:
取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,研碎,加入甲醇超聲提取,過濾,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状既芙?,作為供試品溶液?/p>
另取葛根對(duì)照藥材,與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液;
再取葛根素對(duì)照品適量,加入甲醇制備成溶液,作為對(duì)照品溶液;
分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以體積比為6~8:2~3:0.2~0.4的三氯甲烷、甲醇和水作為展開劑,展開,取出晾干,置于紫外光下觀察。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述鑒別中對(duì)黃芪的鑒別方法為:
取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物2g,研碎,加甲醇50mL超聲提取29~31min,過濾,濾液蒸干,殘?jiān)铀柡驼〈?0mL溶解得正丁醇液,正丁醇液用質(zhì)量百分比為0.1~3%的氫氧化鈉溶液洗滌2~7次,每次20mL,棄去所述氫氧化鈉溶液,正丁醇液再用正丁醇飽和的水洗至中性,棄去水層,正丁醇液水浴蒸干,殘?jiān)蛹状?mL使溶解,作為供試品溶液;
另取黃芪對(duì)照藥材2g,與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液;
再取黃芪甲苷對(duì)照品,加甲醇制成每1mL含1mg所述黃芪甲苷對(duì)照品的溶液,作為對(duì)照品溶液;
分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液各5μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以體積比為12~14:6~8:2~4的三氯甲烷、甲醇和水的下層溶液為展開劑,展開,取出晾干,噴以體積濃度為10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,分別置可見光及波長為365nm的紫外光燈下檢視;
所述鑒別中對(duì)葛根的鑒別方法為:
取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物0.1g,研碎,加入甲醇20mL超聲提取29~31min,過濾,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?mL溶解,作為供試品溶液;
另取葛根對(duì)照藥材0.25g,與所述供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液;
再取葛根素對(duì)照品適量,加入甲醇制備成濃度為1.5mg/mL溶液,作為對(duì)照品溶液;
分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液各2μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以體積比為6~8:2~3:0.2~0.4的三氯甲烷、甲醇和水作為展開劑,展開,取出晾干,置于波長為365nm的紫外光下觀察;
所述鑒別中的對(duì)桑白皮的鑒別方法為:
取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物1g,研碎,加入體積濃度為69~71%的乙醇水溶液100mL回流提取4~6h,過濾,濾液蒸干,殘?jiān)尤塍w積濃度為0.4~0.6%的硫酸水溶液50mL回流2.5~3.5h,過濾,濾液用氯仿萃取3~5次,每次30mL,合并氯仿液,蒸干,殘?jiān)蛹状?mL使溶解,作為供試品溶液;
另取桑白皮對(duì)照藥材1.5g,與供試品溶液同法制得對(duì)照藥材溶液;
再取東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素對(duì)照品適量,加入甲醇制成東莨菪內(nèi)酯和7-羥基香豆素濃度均為0.1mg/mL的混合溶液,作為對(duì)照品溶液;
分別吸取所述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及對(duì)照品溶液各2μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以體積比為6~7:3~4:0.04~0.06的沸點(diǎn)為60~90℃的石油醚、乙酸乙酯和乙酸為展開劑,展開,取出晾干,置于波長為365nm的紫外光下觀察。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述質(zhì)量檢測方法還包括含量測定,所述含量測定包括采用高效液相色譜法測定所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的葛根素的含量,具體測定方法為:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以體積比為13.5:86.5的乙腈和體積濃度為0.2%的甲酸水溶液作為流動(dòng)相;檢測波長為250nm,理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;
對(duì)照品溶液的制備:取葛根素對(duì)照品適量,精密稱定,加體積濃度為30%的乙醇水溶液制成溶液,即得;
供試品溶液的制備:取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,粉碎,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入體積濃度為30%的乙醇水溶液,密塞,稱重,超聲處理,放冷,再稱重,用體積濃度為30%的乙醇水溶液補(bǔ)足減少的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即可;
測定方法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀,測定,即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的葛根素的含量測定方法為:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,色譜柱為Phenomenex C18;柱溫為25~40℃;以體積比為13.5:86.5的乙腈和體積濃度為0.2%的甲酸水溶液作為流動(dòng)相;檢測波長為250nm,理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;
對(duì)照品溶液的制備:取葛根素對(duì)照品適量,精密稱定,加體積濃度為30%的乙醇水溶液制成每1mL含有36~44μg所述葛根素對(duì)照品的溶液,即得;
供試品溶液的制備:取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,粉碎,取粉末0.125g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入體積濃度為30%的乙醇水溶液100mL,密塞,稱重,超聲處理20min,放冷,再稱重,用體積濃度為30%的乙醇水溶液補(bǔ)足減少的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即可;所述超聲處理中的功率為120W,頻率為40kHz;
測定方法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀,測定,即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述含量測定還包括采用高效液相色譜法測定所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的黃芪甲苷的含量,具體測定方法為:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以體積比為32:68的乙腈和水作為流動(dòng)相;蒸發(fā)光散射檢測器檢測,理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;
對(duì)照品溶液的制備:取黃芪甲苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成溶液,即得;
供試品溶液的制備:取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,研碎,精密稱定,置錐形瓶中,加甲醇,超聲處理,放冷,過濾得濾液,蒸干,殘?jiān)铀芙?,再用水飽和正丁醇萃?次,合并正丁醇液;再用稀氨水洗滌,取正丁醇液蒸干,殘?jiān)舆m量甲醇溶解,定容,搖勻,過濾,即得;
測定方法:分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、20μL,供試品溶液10μL,注入高效液相色譜儀,測定,用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中的黃芪甲苷的含量測定方法為:色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;柱溫為25~40℃;以體積比為32:68的乙腈和水作為流動(dòng)相;蒸發(fā)光散射檢測器檢測,所述蒸發(fā)光散射檢測器的參數(shù)為N2流速為2.8mL/min,溫度為105℃,理論塔板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000;
對(duì)照品溶液的制備:取黃芪甲苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1mL含有0.225~0.275mg所述黃芪甲苷對(duì)照品的溶液,即得;
供試品溶液的制備:取所述治療糖尿病腎病的中藥組合物適量,研碎,取2.5g,精密稱定,置100mL錐形瓶中,加甲醇100mL,超聲處理30min,放冷,過濾得濾液,蒸干,殘?jiān)?0mL水溶解,再用水飽和正丁醇萃取4次,每次50mL,合并正丁醇液;再用稀氨水洗滌2次,每次50mL,取正丁醇液蒸干,殘?jiān)舆m量甲醇溶解,定容至5mL,搖勻,0.45μm微孔濾膜過濾,即得;所述超聲處理中的功率為120W,頻率為40KHz;
測定方法:分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL、20μL,供試品溶液10μL,注入高效液相色譜儀,測定,用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述治療糖尿病腎病的中藥組合物中含葛根以葛根素計(jì),不少于20mg/g;含黃芪以黃芪甲苷計(jì),不少于0.4mg/g。
10.根據(jù)權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的治療糖尿病腎病的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法,其特征在于,所述質(zhì)量檢測方法還包括有性狀檢測,所述性狀檢測為采用目測、鼻嗅及口嘗檢測所述治療糖尿病腎病的中藥組合物是否符合咖啡色包衣微丸,丸心黃褐色或褐色,氣微。